prácticas ftos. microbiología aplicada

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Alberto Fonte Polo 4º Biología (2009-2010)

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Prácticas de Fundamentos de Microbiología Aplicada (4º Biología UAH)* Detección de actividades bioquímicas en bacterias: hidrólisis de almidón, proteínas, lípidos, celulosa y xilano; utilización de hidratos de carbono.* Análisis microbiológico de agua de piscina.* Estudio de la sensibilidad de un microorganismo a un antibiótico “in vitro” por la técnica de macrodilución en caldo (C.M.I y C.M.B).* Búsqueda de Salmonella en carne picada.* Observación de las bacterias acéticas y de levaduras de la flor del vinagre.

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Page 1: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Alberto Fonte Polo 4º Biología (2009-2010)

Page 2: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Escherichia coli

Bacillus subtilis

Pseudomonasaeruginosa

Agar Almidón

Amilasas

Lugol

Page 3: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Staphylococcus aureus

Bacillus subtilis Pseudomonasaeruginosa

Agar Spirit Blue

Lipasas

Page 4: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Escherichia coli

Bacillus subtilis

Enterococcus faecalis

Agar Gelatina

Proteasas

Reactivo de Frazier

Page 5: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Proteus vulgaris

Tubos con caldo lactosado y caldo

con sacarosa con campana

Durham

Utilización de azúcares

AmarilloGas

Page 6: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

E. coli

Fermentativo

Medio de Hugh y Leifson

Oxidación/Fermentación de azúcares

vaselina

Page 7: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Enriquecimiento

Caldo Mc Conckey con

campana Durham

Caldo Rothe

Caldo GiolittiCantoni

E. coli

Enterococcus faecalis

Staphylococcus aureus

vaselina

TurbidezAmarillo

Gas

Turbidez

TurbidezEnnegrecimiento

Page 8: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Aislamiento

E. coli

Agar Levine

Enterococcus faecalis

Medio KAA Agar Cetrimida

Pseudomonas aeruginosa

Page 9: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Aislamiento Confirmación

Medio Baird-Parker PCA

Colonias negras y con halo de aclaramiento

Colonias doradas

Page 10: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Pruebas confirmativas

Tinción de Gram

E. coli Pseudomonas aeruginosa

Bacilo

Gram –

Bacilo

Gram –

Page 11: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Pruebas confirmativas

Tinción de Gram

Enterococcus faecalis Staphylococcus aureus

Diplococos

Gram +

Cocos

Gram +

Page 12: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Pruebas confirmativas

E. coli

Pseudomonasaeruginosa

Prueba de la oxidasa

Oxidasa +

Oxidasa –

Page 13: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Pruebas confirmativas

Prueba de la catalasa

Catalasa +Catalasa –Enterococcus faecalis Staphylococcus aureus

Burbujas

Page 14: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Pruebas confirmativas

Medio KIA

Ac/Ac; SH2 –; Gas +24 h

Producción de indol

positivo

Escherichia coli

Page 15: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Pruebas confirmativas

Medio KIA

Alk/N.C.; SH2 –; Gas –

Microorganismo Oxidativo

Pseudomonas aeruginosa

Medio de Hugh Leifson

vaselina

Prueba O/F de la glucosa

Page 16: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Pruebas confirmativas

Formación de pigmentos

Piocianina Pioverdina

Pseudomonas aeruginosa

Actividad ureasa

Medio King A Medio King B

Positivo

Tubo de agar-urea

Page 17: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Pruebas confirmativas Pseudomonas aeruginosa

Reducción de nitratos

¿negativo?

Reactivo A Reactivo B

Limaduras de zinc

PositivoTubo de caldo

nitratado

Page 18: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Pruebas confirmativas

Crecimiento en caldo BHI con

NaCl 6,5%

Turbidez en

ambos tubos:

Prueba positiva

Enterococcus faecalis

Crecimiento en caldo BHI a 42ºC

Page 19: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Pruebas confirmativas

Prueba positiva

Prueba de la DNAsa Prueba de la actividad proteolítica

Agar-gelatinaAgar-DNA

Prueba positiva

Page 20: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Control negativo

Control positivo

Turbidez No turbidez

0,25 0,5 1 2 μg/ml 4

CMI

Page 21: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

CMB=4 μg/ml

Page 22: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Enriquecimiento

Medio de Müller-Kauffmann

Page 23: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Aislamiento

Medio XLD

24 h 48 h

Proteus sp.Salmonella sp.

Salmonella sp.¿ ?

Page 24: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Aislamiento

Medio HEA

24 hProteus sp.Salmonella sp.¿ ?

Page 25: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Pruebas confirmativas

Prueba de la oxidasa

Oxidasa –

Prueba de la catalasa

Catalasa +

Page 26: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Pruebas confirmativas

Tinción de Gram Medio KIA

Alk/Ac; SH2 +; Gas +

24 h

Bacilo

Gram –

Page 27: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Pruebas confirmativas

Prueba de la lisina descarboxilasaPrueba de la ureasa

positivonegativo

Page 28: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Pruebas confirmativasPrueba de

Voges-Proskauer

IMViC

Producción de indol

Rojo de metilo

Prueba del citrato

IMViC–+–+

Tubo de agua de peptona

Reactivo de Kovacs

RMVP RMVP Medio de Simmons

Potasaα-naftol

Rojo de metilo

Page 29: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Vinagre añejoVinagre jovenVino

Tinción de Gram

Gluconobacter sp.Acetobacter sp.

Bacilos Gram +

Page 30: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Vinagre de vino joven

Agar-Etanol-Carbonato cálcico

Page 31: Prácticas Ftos. Microbiología Aplicada

Vinagre de cerveza añejo

Medio YEM

Saccharomyces cerevisiae