laboratorio microbiología

Preparación-Dilución de Muestras. Numeración de Microorganismos aerobios mesófilos viables.

INFORME DE LABORATORIO N°3

Universidad Nacional de IngenieríaFacultad de Ingeniería AmbientalEscuela Profesional Ingeniería Sanitaria

MICROBIOLOGÍA SANITARIA I

Integrantes:

Barahona Chunga Carlos 20134166E Esp: Ing. SanitariaToribio Tapia Junior 20130360A Esp: Ing. Sanitaria

Profesor:

Martínez Vila, Álvaro Martín

Fecha:

Sábado, 24 de enero del 2015

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Universidad Nacional de IngenieríaMicrobiología Sanitaria I

Facultad de Ingeniería AmbientalINFORME DE LABORATORIO N°3

TITULO: Preparación-Dilución de Muestras. Numeración de Microorganismos aerobios mesófilos viables.

INTEGRANTES:

Barahona Chunga Carlos Toribio Tapia Junior

OBJETIVOS

Objetivos Generales:

Determinar la carga microbiana asociada a una muestra ambiental para evaluar su calidad higiénica sanitaria.

Objetivos específicos:

Valorar la importancia de la toma de muestras. Aplicar en la práctica las técnicas de preparación y dilución de muestras para

conseguir un adecuado recuento de microorganismos aerobios mesófilos. Aprender el procedimiento de numeración de microorganismos mediante los

métodos de Recuento en Placa por Siembra en profundidad y en superficie. Utilizar recipientes estériles de polietileno.

FUNDAMENTO TEORICO

TÉCNICAS DE RECUENTO BACTERIANO

Para el recuento de microorganismos presentes en una muestra de agua, suelo, aire, alimento, cultivos, entre otros, existen diferentes métodos o técnicas: Algunas técnicas son directas y permiten un recuento de todas las células, tanto las vivas como las muertas. Las medidas directas incluyen los recuentos directos al microscopio o recuento electrónico, el recuento en placa, o el cálculo del número más probable (NMP). Otras son medidas indirectas y miden una propiedad de la masa de las células como son la turbidez, el peso seco, o una actividad metabólica.

Recuento de colonias o recuento estándar en placa: Se basa en contar las colonias de microorganismos que se desarrollan después de inocular en un medio de cultivo adecuado e incubar a una temperatura y tiempo determinados un volumen determinado de muestra. Se utiliza para determinar el número de células aisladas o


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microorganismos unicelulares viables como bacterias, levaduras, también se utiliza para el conteo de esporas fúngicas presentes en la muestra.

La muestra a inocular debe ser homogénea y no contener conglomerados de células. Después de la incubación cada microorganismo o célula viable formará una masa visible de organismos, o sea una colonia. De esta manera el número de colonias permitirá a su vez determinar el número de organismos viables en la muestra sembrada. Se pueden utilizar sistemas de siembra en superficie, o en profundidad.

Generalmente la muestra original se diluye para que el número de colonias desarrolladas en la placa se encuentren entre 30 y 300 colonias y así permitir un óptimo crecimiento y facilitar la lectura. Cuando la muestra se diluye el cálculo del resultado se realiza contando las colonias en aquellas placas que tengan entre 30 y 300, se promedia y se multiplica por el factor de dilución. Los resultados se expresan en colonias por ml. Los resultados también pueden expresarse en unidades formadoras de colonias (UFC), el valor de UFC es un valor que expresa el número relativo de microorganismos de un taxón determinado en un volumen de un metro cúbico de muestra.

En el caso de alimentos el resultado se considera como un indicador de las características higiénicas generales del alimento.


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VI. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

-Materiales, medios de cultivo, equipos

Licuadora ( 20 000 RPM) Vaso Licuadora 1lt. Balanza Analítica Pinzas, Tijeras, Espátula, Cuchillo Pipetas Bacteriológicas 10ml y 1ml Refrigeradora 25°C Diluyente-Agua peptonada para diluciones

MÉTODO 1: Recuento Estándar en Placa o Recuento en Placa por Siembra en profundidad o incorporación (Difusión)

Materiales y Equipos:

Placas Petri Pipetas Bacteriológicas 1ml y 10ml Baño Agua (Baño María) regulado 14°C-46°c Incubadora: 28°-31°C Contador de colonias Agar Plate Count


Muestra (carne molida) 10 gr.

Homogenizar

Dilución 10-110-2 10-410-3 10-5

1ml 1ml 1ml

9 ml de diluyente

90 ml de Agua Peptonada

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Incorporar 15-18ml de APC licuado a 46°C y mezclar:

Control de Esterilidad (C.E.)

Incubar: 31°C x 2 días (placas invertidas)


10-2 10-410-3 10-510-1

1ml 1ml 1ml 1ml 1ml

Con APC (sin muestra)

Con APC + 1ml de AP

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MÉTODO 2: Recuento en Placa de Siembra por extensión en Superficie o Diseminación (se aplica a conteo>3000gr)

Materiales y Equipos:

Los indicados en el Método 1 Estufa: 50°C Espátula Drigalsky Pipetas de 1ml

Placas Petri con APC solidificado.

Sembramos por extensión, diseminación con espátula Drigalsky


10-2 10-410-3 10-510-1

0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml

Con APC (sin muestra)

Con APC + 0.1ml de AP

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Dejar secar la superficie de placa por 15 minutos. Incubar placas invertidas por 72 horas (3 días).

VII. RESULTADOS EXPERIMENTALES

MÉTODO 1: Recuento Estándar en Placa o Recuento en Placa por Siembra en profundidad o incorporación (Difusión)


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MÉTODO 2: Recuento en Placa de Siembra por extensión en Superficie o Diseminación (se aplica a conteo>3000gr)


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VIII. DISCUSION-OBSERVACIONES

Al tomar la muestra de carne molida de la licuadora con las pipetas, un pedazo de carne obstruyó la salida de líquido, para lo cual se tuvo que volver a tomar la muestra, ya que hubo líquido que no se recogió debido a la obstrucción.

IX. CONCLUSIONES

El recuento de colonias se realiza después de la inoculación del medio de cultivo y de una incubar a temperatura adecuada.

X. RECOMENDACIONES

Utilizar los guantes de asbesto para tomar las muestras calentadas y evitar quemaduras.Esterilizar las pipetas para tomar las muestras y así evitar contaminación por otros microorganismos que no se quieren analizar.

XI. BIBLIOGRAFIA

http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/12-metodos%20de%20recuento.htmhttp://datateca.unad.edu.co/contenidos/201504/contLinea/leccin_30_tcnicas_de_recuento_bacteriano.htmlBiología de los Microorganismos. Autor: Michael T. Madigan


http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201504/contLinea/leccin_30_tcnicas_de_recuento_bacteriano.html

http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201504/contLinea/leccin_30_tcnicas_de_recuento_bacteriano.html

http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/12-metodos%20de%20recuento.htm

http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/12-metodos%20de%20recuento.htm

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XII. ANEXOS (Fotos, Gráficos, Cuadros, Listas, Normas, Diagramas, Esquemas)


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