trabajo de laboratorio de microbiologÍa n° 1

8/18/2019 TRABAJO DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA N° 1

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UNIVERSIDAD SAN IGNACIO DE LOYOLA

FACULTAD DE INGENIERÍA

PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 1

NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE MICROORGANISMOS EN MUESTRAS

NATURALES

BLOQUE

FC-PREIAM05B1M

PROFESORA

GUTIERREZ MORENO, SUSANA MONICA

ALUMNO:

• MARTINEZ PEÑA, Juan Carlos

2016-01

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I. INTRODUCCION

Es muy importante recordar que el trabajo en los laboratorios de microbiología

constituye un riesgo, ya que pueden presentar riesgos de enfermedades

infecciosas para las personas que estén dentro de él. El trabajo en el

laboratorio implica un trabajo de grupo, en donde cada uno de los integrantes

va adquiriendo nuevos conocimientos y desarrollando las distintas técnicas de

trabajo ante las prácticas. Además estas determinan su propia seguridad, así

como la de sus compañeros y la de la colectividad en general.

Es por ello que antes de comenzar con las prácticas en el laboratorio, debemos

conocer cuáles son las normas de seguridad a seguir en el laboratorio y

seguirlas correctamente, de manera que el trabajo se realice con un riesgo

mínimo de eposici!n, tanto para las personas que lo ejecutan como para el

medio ambiente.

El objetivo de este informe, es ofrecerle al estudiante una guía que contribuya

a lograr un ambiente de trabajo adecuado y seguro, durante la ejecuci!n de las

actividades prácticas en el "aboratorio de #icrobiología.

Además en el presente informe se brindara conocimiento de los

microorganismos visibles en preparaci!n en fresco, ya que es muy importante

tener un conocimiento acerca de estos, que nos permita identificarlos en las

muestras observadas. Así finamente poder reconocerlas y ampliar nuestro

conocimiento sobre estos microorganismos. $e trabaj! con las muestras de

agua estancada y yogurt.

.

II. FUNDAMENTO TEORICO

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PRINCIPIOS BÁSICOS DE LA SEGURIDAD BIOLÓGICA.

C!"#$#%!%#&' () *" !+)')" #*&+#%*" */ +/*" () /#)"+*.

El %& ''()*+ clasifica los agentes biol!gicos en cuatro grupos en

funci!n del riesgo de infecci!n

!. Agente biol!gico del grupo - Aquel que resulta poco probable que

cause una enfermedad en el ombre.

. Agente biol!gico del grupo /. Aquél que puede causar una

enfermedad en el ombre y puede suponer un peligro para los

trabajadores, siendo poco probable que se propague a la

colectividad y eistiendo generalmente profilais o tratamiento eficaz.

%. Agente biol!gico del grupo 0. Aquél que puede causar una

enfermedad grave en el ombre y presenta un serio peligro para los

trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y

eistiendo frente a él generalmente profilais o tratamiento eficaz.

(. Agente biol!gico del grupo (. Aquél que causando una enfermedad

grave en el ombre supone un serio peligro para los trabajadores,

con mucas probabilidades de que se propague a la colectividad y

sin que eista generalmente frente a él profilais o tratamiento

eficaz.

T%'#%!" () !*/!*/#*.

El elemento más importante para contener los riesgos biol!gicos es el

seguimiento estricto de las prácticas y técnicas estándar microbiol!gicas.

E2#* () ")+/#(!( 3!//)/!" /#4!/#!".

$on los dispositivos o aparatos que garantizan la seguridad 1por

ejemplo, las cabinas de seguridad biol!gica2, como las prendas de

protecci!n personal 1guantes, mascarillas, batas, calzado...2.

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D#")6* 7 %*'"/%%#&' () ! #'"!!%#&' 3!//)/!" ")%'(!/#!"

$e incluyen la separaci!n de las zonas donde tiene acceso el

p3blico, la disponibilidad de sistemas de descontaminaci!n 1autoclaves2,

etc.

C!/!%)/8"#%!" () '#9) () %*')'%#&' .

&ebe utilizarse cuando se manipulan agentes biol!gicos del

grupo 0, microorganismos que cursan con patología grave, de

difícil y largo tratamiento, que pueden curar con secuelas y

ocasionalmente producir la muerte.

El mayor y más frecuente peligro que entañan estos es la infecci!n

adquirida a través de aerosoles y por fluidos biol!gicos. 4or ello, las

principales medidas a tomar en este caso son la correcta manipulaci!n y

la utilizaci!n de cabinas de seguridad.

En los "aboratorios de #icrobiología 5línica los ejemplos más

típicos de este tipo de microorganismos son #. 6uberculosis,

7rucella, 5oiella burneti, 8rancisella tularensis, etc. $!lo pueden ser

procesados apropiadas.

NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD BIOLÓGICA ENEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA.

N*/4!" +)')/!)".

"a peligrosidad de un agente está directamente relacionada con el

tipo de manipulaci!n a la que es sometido. 4or ello es básico

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1. 5onocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que

eisten en el laboratorio.

;. 5onocer la metodología de trabajo de cada secci!n del

laboratorio.

. 5onocer el equipamiento del laboratorio.


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6odas las superficies de trabajo se limpiarán y desinfectarán

diariamente y siempre que se produzca un derrame.

"os residuos y muestras peligrosas que van a ser

incinerados fuera del laboratorio deben ser transportados en

contenedores adecuados siguiendo las normas específicas para

cada tipo de residuo.

El laboratorio debe permanecer limpio y ordenado y no es

aconsejable utilizar los pasillos como almacén.

El transporte de las muestras dentro o entre laboratorios se

realizará de tal manera que, en caso de caída, no se produzcan

salpicaduras. "o recomendable es acerlo en cajas erméticas o

neveras transportables. 7ajo ning3n concepto se pueden

transportar las muestras a mano.

"a ropa protectora, fácilmente ajustable y confortable, así como

guantes, gafas, etc. debe estar disponible en todo momento. "a ropa

protectora de las áreas con nivel de contenci!n 0 1cubrebatas2 nunca

debe ser usada fuera del área de trabajo y si se quita debe de ser

desecada automáticamente en una bolsa de material

contaminado. :amás debe volver a ser usada.

6odo el personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto de

la piel con materiales potencialmente infecciosos. 5on este fin deben

usarse guantes cuando se manipulen muestras o cultivos que

contengan posibles pat!genos. "os guantes siempre serán

desecados antes de salir del área de trabajo. :amás se saldrá

de la misma con los guantes puestos, ni con ellos se cogerá el

teléfono, se tocarán los volantes, etc.

6ras quitarse los guantes, se realizará un lavado de manos.

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$e usarán gafas protectoras y mascarillas faciales si eiste riesgo de

salpicaduras y)o aerosoles.

$e pondrá etremo cuidado en minimizar el riesgo de auto

inoculaci!n y de generaci!n de aerosoles.

"os derrames y accidentes deben ser informados inmediatamente.

Está rigurosamente proibido pipetear con la boca.

9o deberán usarse lentes de contacto.

• N*/4!" () =#+#)')

El personal con el cabello largo debe llevarlo recogido.

5omer, beber, fumar y aplicarse cosméticos esta formalmente

proibido en el área de trabajo del laboratorio, así como el

almacenamiento de comida o bebida.

El personal debe lavarse las manos frecuentemente durante las

actividades rutinarias, tras acabar la jornada laboral y siempre

antes de abandonar el laboratorio 1almorzar2.

"as eridas y cortes en las manos, si se an producido en el

"aboratorio, serán comunicados al responsable.

"as eridas y cortes deben ser convenientemente vendados y

después es imprescindible ponerse guantes.

El personal debe aplicarse soluci!n idroalco!lica en las manos

después del lavado y con las manos secas, sobre todo cuando

vaya a abandonar el área de trabajo.

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M!')>* () *>)*" '?!')" 7 %*/!')".

El uso de agujas ipodérmicas y jeringas debe ser limitado.

9unca se debe volver a poner la capuca a las agujas y éstas

no deben ser torcidas ni separadas de la jeringa.

"as agujas y jeringas usadas, así como los bisturíes, deben ser

desecados s!lo en contenedores especiales rígidos diseñados para

este prop!sito.

MICROORGANISMO

"os microorganismos se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza.

$us abitas naturales etremadamente diversos. 4rácticamente los

encontramos en todas partes en el agua que bebemos, en el aire que

respiramos, en el suelo, en los alimentos que ingerimos, algunos pueden vivir

en el interior de plantas y animales, sobre nuestra piel, y en general sobre

cualquier material que les proporcione El %eino 4rotista, definido en el sistema

de clasificaci!n de ;aec


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protistas. "a mayoría mide entre >,>- y >,>? mm. Aunque la mayoría viven en

lugares 3medos algunos son parásitos que viven en organismos

multicelulares. $e dividen en varias categorías, las cuales incluyen

-. 4ylum $arcomastigopora, que incluye a las amibas, opalinidos y

flagelados.

/. 4ylum Esporozoa, estos organismos son parásitos que carecen de

estructuras locomotrices.

0. 4ylum 5iliopora, son los organismos que presentan cilios.

E@AMEN EN FRESCO 3PREPARACIONES SIN TEIR

5onsiste en observar los microorganismos vivos que puede aber en el

producto eaminado, sin fijaci!n ni tinci!n, en suspensi!n acuosa, pudiendo

objetivar su cantidad, sus características morfol!gicas y su movilidad. Es una

técnica de fácil realizaci!n, en la que el producto a eaminar se sit3a entre

porta y cubre. $i el material procede de una toma en medio s!lido o de una

toma directa, se emulsionará en una gota de agua destilada o soluci!n salina.

$i el material es líquido se depositará directamente entre porta y cubre. El

volumen de la gota debe ser adecuado a las dimensiones del cubreobjetos ya

que, en caso contrario, un eceso de líquido se traducirá en un desbordamiento

de éste bajo los límites del cubre, o un cubre @flotante@ que dificultará nuestra

observaci!n por la formaci!n de corrientes líquidas. $i el producto va a

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permanecer muco tiempo en el portaobjetos, es conveniente prevenir la

desecaci!n mediante la aplicaci!n de parafina en los bordes inferiores del

cubreobjetos.

"a observaci!n se realiza, en general, con objetivo de (> en microscopio de

campo claro. "a microscopía de contraste de fases y de campo oscuro facilita

muco la visi!n en fresco. "os eámenes en fresco permiten, además,

observar la presencia de otros elementos formes, como leucocitos, cristales,

etc., que pueden ser de gran ayuda en la valoraci!n de las muestras

III. OBETIVOS MATERIALES

• 5onocer las normas de trabajo en el laboratorio de microbiología, el

acondicionamiento y manipulaci!n de materiales y el uso de los equipos

básicos.

• Eaminar comparativamente la morfología y movimiento de los

microorganismos presentes en algunas muestras naturales, así como

interiorizar el tamaño de las bacterias.

• uardapolvo blanco y limpio 1a cargo del alumno2.

• "áminas porta y cubre objetos.

• Asa y aguja de BClle.

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• 6ubos de prueba.

• 4lacas 4etri.

• #eceros 7unsen.

• Autoclave.

• Espectrofot!metro.

• Agitadores magnéticos.

• 7alanza analítica.

• #uestras de agua estancada.

• #uestras de lece fermentada 1de /(D(= oras2.

• oteros.

• Agua destilada.

• $oluci!n fisiol!gica 19a5l >.*2.

IV. PROCEDIMIENTO

1. $e procedi! a vaciar las muestras en los tubos de ensayo, para su

posterior análisis microsc!pico.

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;. "uego se prendi! el

mecero 7unsen para

esterilizar la asa en argolla.

. $e añadi! unas gotas de soluci!n fisiol!gica en el portaobjeto bien limpio.

"uego, con la asa en argolla

esterilizada se tom! unpoco de la muestras y se

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emulsion! perfectamente en la gota del portaobjeto y finalmente se

cubri! suavemente con el cubreobjeto sin formar burbujas.

y (>.

RESULTADOS

O")/9!%#*')":

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&escripci!n de las bacterias

"as bacterias son microorganismos u bacterias unicelulares

procari!ticos, los cuales normalmente, poseen una rígida pared celular que les

permite protegerse del eterior. Algunas segregan, eteriormente, una envuelta

denominada cápsula bacteriana.

$on de vida aut!trofa o bien eter!trofa. $e multiplican por divisi!n. $on de

muy pequeño tamaño, el cual oscila entre - y ->> u. y esto ace que solo sea

posible observarlas y estudiarlas con un microscopio electr!nico.

Fbservamos diferentes tipos de microorganismos como

D7A5G"F$ son pequeños bastones de forma alargada.

DHG7%GF$ curvados y aparentemente se asemejan a las comas.

DE$4G%G"F$ cuya forma es elicoidal.

D&G4"F5F5F$ asociados por parejas.

VI.CUESTIONARIO

-. C )" ! (#$)/)'%#! )'/) ! !")/#?!%#&' 7 !

#'(!#?!%#&'I

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PASTEURIZACIÓN TINDALIZACIÓN

• 4roceso de esterilizaci!n con

menor tiempo de duraci!n.

• Elimina microorganismos

pat!genos o no pat!genos, pero

no en su totalidad.

• 9o afecta sus propiedades

organolépticas como su física y

química.

• $u eficacia es menor, ya que no

elimina todos los

microorganismos, y por ende su

corto tiempo de vida 3til.

• 9o es muy usado en la Gndustria

comercial debido al corto tiempo

de vida 3til y proliferaci!n de

bacterias.

• 4roceso de esterilizaci!n con

mayor tiempo de duraci!n y divida

en tres etapas, una etapa diaria.

• Elimina microorganismos

pat!genos y no pat!genos en su

totalidad.

• Afecta sus propiedades

organolépticas y demás sustancias

propias de la materia prima.

• $u eficacia es mayor, ya que

elimina los microorganismos en su

totalidad y posee un largo tiempo

de vida 3til.

• Jsado mayormente en la Gndustria

comercial por tener mayor tiempo

de vida 3til y su aplicabilidad en

distintos productos para su

conservaci!n, y posterior venta sin

fronteras.

MTODOS UÍMICOSEstos métodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos.

C*' &H#(* () )#)'*:

Es un agente alquilante que se une a compuestos con idr!genos lábilescomo los que tienen grupos carboilos, amino, sulfidrilos, idroilos, etc.Es utilizado en la esterilizaci!n gaseosa, generalmente en la industriafarmacéutica. &estruye todos los microorganismos incluso virus. $irve paraesterilizar material termo sensibles como el descartable 1goma, plástico,papel, etc.2, equipos electr!nicos, bombas cardiorrespiratorias, metal, etc.Es muy peligroso por ser altamente inflamable y eplosivo, y ademáscancerígeno.

F*/4!()=8(*:

30

http://www.monografias.com/trabajos11/grupo/grupo.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos11/grupo/grupo.shtml


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$e utilizan las pastillas de para formaldeido, las cuales pueden disponerseen el fondo de una caja envueltas en gasa o algod!n, que después puedenser epuestos al calor para una rápida esterilizaci!n 1acci!n del gasformaldeído2. 6ambién pueden ser usadas en Estufas de 8ormol, que son

cajas de doble fondo, en donde se colocan las pastillas y se calienta astalos '>K 5 y pueden esterilizar materiales de láte, goma, plásticos, etc."as pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 0' s.Esterilizaci!n por gasDplasma de 4er!ido de ;idr!genoEs proceso de esterilizaci!n a baja temperatura la cual consta en latransmisi!n de per!ido de idr!geno en fase plasma 1estado entre líquidoy gas2, que ejerce la acci!n biosida.

P*")) %*4* 9)'!>!":

• 9o deja ning3n residuo t!ico.

• $e convierte en agua y oígeno al final del proceso.

• El material no precisa aireaci!n.

• El ciclo de esterilizaci!n dura entre ?( y +? minutos.

D)"9)'!>!":

• 9o se pueden esterilizar objetos que contengan celulosa, algod!n,

líquidos, umedad, madera o instrumental con l3menes largos yestrecos.

• Es el método de esterilizaci!n más caro de entre los descritos.

MTODO FÍSICO

C!*/: "a utilizaci!n de este método y su eficacia depende de dos factoresel tiempo de eposici!n y la temperatura.6odos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la acci!ndel calor. El calor provoca desnaturalizaci!n de proteínas, fusi!n ydesorganizaci!n de las membranas y)o proceso oidantes irreversibles enlos microorganismos.

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C!*/ J4)(*: El calor 3medo produce desnaturalizaci!n y coagulaci!nde proteínas. Estos efectos se debe principalmente a dos razonesLEl agua es una especie química muy reactiva y mucas estructurasbiol!gicas son producidas por reacciones que eliminan agua.LEl vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor muco

más elevado que el aire.

;. 4*(* () )")/##?!%#&' )" ) 4" !/*#!(* 7 */ 2

!/! *" 7 $/!"%*" 9!%8*" 7 !/! #)!"K

El método de esterilizaci!n más apropiado es el METODO FISICO.

Gncineraci!n por llama Este método se usa para esterilizar la boca de los

frascos y tubos, ansas, tijeras, pinzas, etc. "as pinzas y tijeras debensumergirse previamente en alcool *' sosteniéndolas acia abajo paraevitar que el alcool impregne los dedos y se incendie al flamear.Este tipo de rutina se utiliza cuando se trabaja cerca del mecero enmicrobiología, evitando cualquier contaminaci!n accidental.

0. #*" () 4#%/**/+!'#"4*" )()' )'%*'/!/") )' )

!+! )"!'%!(!K

PARAMECIO

"os paramecios 1género 4aramecium2 son protozoos ciliados con forma

ovalada, abituales en aguas dulces estancadas con abundante materia

orgánica, como carcos y estanques. $on probablemente los seres

unicelulares mejor conocidos y los protozoos ciliados más estudiados por la

5iencia. El tamaño ordinario de todas las especies de paramecios es de

apenas >.? milímetros.

$e trata de un protozoo muy com3n que se encuentra en estanques de agua

dulce, acequias, arroyos, ríos, lagos y embalses. En general su presencia es

abundante en aguas estancadas que contienen materia orgánica en

descomposici!n y que, por tanto, son ricas en sustancias nutritivas.

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AMEBA

Ameba 1o Amiba2 es un protista unicelular del género Amoeba. Es un protozoo

caracterizado por su forma cambiante, puesto que carece de pared celular, y

por su movimiento ameboide a base de pseud!podos, que también usa para

capturar alimentos a través del proceso llamado fagocitosis. "as especies de

este género viven libres en agua o tierra, mientras que las de otros géneros

relacionados parasitan el intestino del ombre o de los animales.

"a ameba se encuentra típicamente en vegetaci!n en descomposici!n. $in

embargo, debido a la facilidad con la que se obtienen, pueden guardarse en

laboratorios, ya que son objeto com3n de estudio.

NEMATODOS

5asi todos los nematodos son gusanos de cuerpo muy pequeño afilado yalargado, pero a pesar de su aparente delicadeza son muy resistentes pues,

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aunque no lo parezca, están vestidos con una coraza fleible, transparente y

casi siempre lisa.

"os nematodos de vida libre se encuentran tanto en agua dulce como salada y

pueden vivir prácticamente a cualquier profundidad, también son frecuentes en

los musgos o entre sustancias en descomposici!n. 5uando las condiciones se

vuelven desfavorables, fundamentalmente en tiempo de sequía, los nematodos

se pueden enquistar y sobrevivir durante largas temporadas asta que lleguen

mejores tiempos.

EUGLENA

"os euglénidos 1Euglenoidea o Euglenopyta2 son uno de los más conocidos

grupos de flagelados, com3nmente presentes en agua dulce, en especial

cuando ésta es rica en materia orgánica. $!lo unos pocos miembros abitan

aguas marinas o son endosimbiontes. #ucos euglénidos poseen cloroplastos

y producen energía mediante fotosíntesis, mientras que otros se alimentan por

fagocitosis o por pinocitosis. $e los ubica dentro de la fila Euglenozoa, y suestructura celular es típica de dico grupo.

AEOLOSOMA

$on pocas las especies de Aeolosoma y pueden vivir tanto en aguas

estancadas de carcos, lagunas... e incluso acuarios, como en las aguascorrientes de ríos y arroyos. "a coloraci!n de sus lunares, así como el n3mero

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de quetas que presenta cada penaco, constituyen dos de los caracteres que

mejor permiten diferenciar a las distintas especies, así, mientras Aeolosoma

empreci presenta estos lunares Dque corresponden a gotas de aceite de

color anaranjado o rojizo, en otra especie muy com3n, Aelosoma variegatum

suelen ser amarillas o azuladas.

(. %'#%!" ") /)!#?!' !/! ) %*'/* () %!#(!( () '!

!*%!9)K

AUTOCLAVE:

PROCEDIMIENTO POR CORRIDA:

1. Eamine récord de 6emperatura y 4resi!n ;. Jtilice Gndicadores de Esterilizaci!n. %écord de uso, feca, temperaturas, presi!n


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• El vapor será saturado y libre de impurezas utilizando agua tratada.

"a pureza del vapor, saturaci!n y la disponibilidad del vapor son

importantes variables del proceso.

•

&e la calidad del vapor depende que la esterilizaci!n sea efectiva ono.

• Estas impurezas pueden oidar el instrumental

;. TIEMPO DE ESTERILIZACIÓN.

• 6iempo de eposici!n del producto o de la cámara a la temperatura

de esterilizaci!n. Es la duraci!n de la fase de esterilizaci!n.

. TEMPERATURA DE ESTERILIZACION

• 6emperatura a la que se mantiene la cámara durante la fase de

esterilizaci!n.

VII. CONCLUSION:

Esta práctica nos permiti! conocer y aplicar de manera favorable, los procesos

básicos para el estudio de microorganismos en el laboratorio, tales como

preparaciones en fresco, análisis microsc!pico e identificaci!n de

microorganismos, etc. "os cuales son la base para realizar los pasos prácticos

posteriores.

6ambién es necesario destacar que pudimos aprender sobre la seguridad en el

laboratorio y las medidas necesarias para evitar riesgos, los cuales son muy

importantes cuando se trabaja en éste, especialmente con microorganismos

pat!genos, ya que una incorrecta manipulaci!n puede llevar a un contagio del

manipulador o de quienes le rodean.

BIBLIOGRAFÍA:

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