CULTIVO DE HONGOS Y LEVADURASMeza Ortega Nataly Yisel, Melo Guerrero María Camila, Portilla Jaime, Williams Ramos

*maria.camy28@hotmail.com

Programa de Ingeniería AgroindustrialCuarto semestre

FACULTAD DE INGENIERIA AGROINDUSTRIALUniversidad de Nariño, San Juan de Pasto

Noviembre 16 de 2011

INTRODUCCIÓN.

El reino de los hongos perteneciente al grupo de las eucariotas esta constituido por dos grandes grupos que son hongos microscópicos y macroscópicos, al primer grupo pertenecen los unicelulares como las levaduras, y al segundo grupo aquellos que son pluricelulares como las setas, al igual que las bacterias estos organismos son causantes de enfermedades provocando grandes perjuicios en la vida del ser humano, los animales y plantas de la misma manera estos toman importancia en la industria farmacéutica ya que a partir de estos se fabrican antibióticos, drogas, tonificantes, entre otros. la complejidad que estos presentan dentro de estructura metabólica, reproductiva y otras características que son únicas de este reino proporcionan las características de las levaduras que son idóneas para los procesos de fermentación de bebidas, han sido de gran importancia para la industria alimentaria a la cual se vinculan la existencia de una gran variedad de hongos comestibles para los cuales se realizan estudios para la mejora de estas cepas que garanticen mayor eficiencia, la industria agrícola también a presentado interés por en estudio de este reino ya que presentan una relación biológica para el tratamiento de bacterias insectos, como también la producción de fertilizantes.

Normalmente se los considera como paracitos y causantes de determinadas enfermedades en las plantas provocando deterioros en cosechas. Aunque también pueden formar mecanismos simbióticos, entre estos el mutualismo que se presenta con las hifas del hongo y las raíces de las plantas (micorrizas), también son responsables de la desintegración de la materia orgánica, esto conlleva a pensar que los hongos se encuentran en constante relación con la vida del ser humano por ende su importancia.

La mayoría de los hongos tienen aspecto filamentoso, a los filamentos individuales se les denomina hifas y al conjunto de hifas micelio, el cual por su posición puede ser profundo y aéreo, el primero se encuentra sumergido en el sustrato desempeñando las funciones de absorción y sostén, también se le conoce como micelio vegetativo, el micelio aéreo emerge del sustrato donde se desarrolla siendo este el que da lugar alas hifas o cuerpos fructíferos formadores de esporas por lo que también se le conoce como micelio

reproductivo en cada especie de hongo las hifas vegetativas, crecen se ramifican y entretejen en forma mas o menos constante, lo que determina la formación de colonias con características típicas de la especie, las hifas reproductivas pueden permanecer diferenciadas ( esporangioforos, conidioforos ) al igual que las hifas vegetativas las reproductivas se pueden agrupar en una estructura especializada llamada cuerpo fructífero en estos la agrupación de hifas puede quedar directamente expuesta al medio ( coremio ) o protegida dentro de un contenedor ( picnidos esporodoquios ) o formar parte de un cuerpo altamente diferenciado( ascocarpos y basidio carpos ).este tipo de reproducción depende de cada especie de hongo puede tratarse de esporas asexuales como clamidosporas, conidiosporas o conidios y esporangiosporas, en la practica de laboratorio trabajamos con el género Penicillum spp presenta conidiosporas. estas se caracteriza por presentar una forma semejante a la de un pincel ramificado, termina en células conidiogenas llamadas fialides, Para determinar el tipo de estructura de que presenten los hongos se pueden realizar diferentes procesos que conlleva a la determinación de los cuerpos reproductivos de los hongos como la vista al microscopio de una muestra de la parte superior del micelio y observando la estructura completa que se puede rescatar de la siembra microscópica del hongo ya que esta se esparce por todo el portaobjetosMuchos de los hongos existentes en el ambiente son de gran poder patógenos los cuales causan terribles enfermedades al ser humano, en el caso del genero penicillium produce como metabolitos secundarios diferentes micotixinas como ácido ciclopiazónico, ácido penicílico, cicloclorotina, citroviridina, citrinina, griseofulvina, ocratoxina A, patulina, penitrem A. Todas estas substancias son originadas por los hongos para afianzarse en su ambiente natural inhibiendo a otros organismos que compiten por el substrato. Las micotoxinas tienen diversa estructura química, su peso molecular es relativamente bajo y se difunden en el medio. Algunas existen en cantidades significativas en el ambiente natural como para influir en la salud del hombre y otros animales, pero es prácticamente imposible inactivarlas por los tratamientos térmicos que se aplican corrientemente en la elaboración y conservación de los alimentos, por ende se debe de tener cierto grado de protección en el diario vivir para así evitar complicaciones en la calidad de vida.

PROCEDIMIENTO

1) tomamos dos cajas Petri una para macrocultivo y la otra para microcultivo del hongo penicillium

2) para el macrocultivo se toma con el aza recta esterilizada una porción del cultivo y se pincho en el centro de la caja con agar sabouraud hasta el fondo 3) para el microcultivo se coloca papel absorbente en la caja Petri estéril se agrega unas gotas de agua estéril 4) se coloca un porta objetos estéril sobre dos palillos que se ubican dentro de la caja Petri5) colocamos un cuadrado del agar sabouraud sobre el porta objetos estéril6) con el aza de punta estéril se realiza pinchazos en las cuatro esquinas del agar

7) se coloca el cubre objetos sobre el cuadro de agar y posteriormente se tapa la caja 8) se deja encubar a temperatura ambiente9) se realiza la observación de las estructuras reproductivas al microscopio del macrocultivo y del microcultivo

RESULTADOS.

MACROCULTIVO.

PENICILLIUM.

1. DESCRIPCIÓN MACROSCOPICA.

Del hongo penicillium que se sembró en el agar sabouraud se observo:

En su parte frontal : - Forma: Rendondeada.- Aspecto superficial : Con Ondas en su interior. - Color: En el centro presento un color verde debido a las esporas. - Consistencia: polvoriento. - Elevacion: presento elevaciones. - Borde: Blanco y algodonoso debido a la presencia de hifas

En su parte trasera.- Forma: Redondeada. - Aspecto superficial: con ondas en su interior. - Color: Blanco. - Consistencia: seca.- Elevación: presento elevaciones. - Borde: redondo.

2. OBSERVACIÓN MICROSCOPICA.

Para la observación microscópica se tomo una muestra del macrocultivo del hongo penicillium y con la ayuda de azul de lactofenol donde el fenol destruye la flora acompañante y el ácido láctico conserva las estructuras fúngicas  al provocar un cambio de gradiente osmótico con relación al interior del fúngico generando una película, el Azul de algodón posee la capacidad de adherirse a la quitina presente en las hifas y conidios y de los hongos microscópicos.

Se observo en el microscopio a 40x que había la formación de hifas en forma de ramas alargadas las cuales se encontraban ramificadas y se identifico sus extremos FIALIDES O ESTERIGMAS donde se originaban CONIDIÓFOROS que es el lugar donde se desarrollan las esporas o también llamados CONIDIOS que poseen una forma ovalada y son las estructuras de reproducción asexual. Resultados observados:

MICROCULTIVO.

1. DESCRIPCIÓN MACROSCOPICA. Con la técnica de Ridell se observo la esporulación del hongo penicillium el cual creció alrededor del agar mirando así que poseían un color verde debido a sus esporas y en su alrededor un color blanco debido a la presencia de hifas donde su estructura y consistencia eran iguales a las observadas en el macrocultivo.

2. DESCRIPCIÓN MICROSCOPICA.

Para observar el desarrollo de la esporulación del penicillium se selecciono al cubreobjetos que contenía las esporas de manera más completa y perfecta que en el macrocultivo y al igual que en el macrocultivo se le adiciono unas gotas de azul de lactofenol y con ayuda de estos al observar al microscopio a 100x se identifico en el borde su estructura reproductiva (conidios o esporas) y que estos se encontraban en una estructura llamada fialides y estas a su vez se hallaban en los extremos de las hifas que eran parecidas a unas ramas.

Resultados observados:

CUESTIONARIO

1. Los hongos son organismos muy eficientes y abundantes en la naturaleza. Existen en dos formas: levaduras e hifas. Algunas hifas se reproducen mediante esporas que se dispersan en el aire, el agua, insectos o animales. Estas esporas pueden actuar como alergenos, y al ser inhalados pueden producir fuertes síntomas alérgicos en personas predispuestas. Aunque la erradicación completa de los hongos es imposible, si se sigue algunas precauciones se puede ayudar a reducir la concentración de los hongos. Algunas precauciones son 7: - el uso de deshumidificadores y fungicidas.

-  Cualquier pared u objeto infectado con hongos debe ser reemplazado.

- Todos los cuartos especialmente laboratorios, sótanos, baños y cocinas, necesitan ventilación y limpieza constante para impedir el crecimiento de hongos, una solución de limpieza preparada con un 5% de blanqueador o vinagre y un poco de detergente, es eficaz para lograrlo. Cuando se utiliza estos limpiadores, ventile bien esas áreas.

- Reparar y sellar rápidamente los techos o tuberías con fugas, evita el crecimiento de hongos, ya que este es un ambiente propicio e ideal para su crecimiento.

- Usar pinturas antifúngicas o aerosol de fungicidas si hay zonas con tendencia a presentar humedad.

- Eliminar las bolsas de basura diariamente.

- Procurar que el lugar donde se quiera evitar contaminación con hongos del ambiente ya sea por evitar enfermedades o donde se realicen procesos

microbiológicos o industriales, sean lugares amplios para el numero de personas que se van a encontrar o trabajar en estos, a fin de reducir al mínimo los desplazamientos en el aire.

- Llevar puesta la bata de laboratorio en todo momento. La misma debe permanecer completamente cerrada.

- Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar la sesión práctica.

- Evitar desplazamientos innecesarios, movimientos bruscos. Hablar sólo lo indispensable, no comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios.

2. “el micelio es la masa de hifas que constituye el cuerpo vegetativo de un hongo. Dependiendo de su crecimiento se clasifican en reproductores (aéreos) o vegetativos.   Los   micelios reproductores  crecen hacia la superficie externa del medio y son los encargados de formar los   orgánulos reproductores ( endosporios ) para la formación de nuevos micelios y de dispersión de la especie mediante esporas.. Los   micelios vegetativos   se encargan de la absorción de nutrientes, crecen hacia abajo, para cumplir su función” 8 .

3. QUÉ SON LAS LEVADURAS?* Hongos microscópicos unicelulares* Importantes por su capacidad de fermentación* Produciendo distintas sustancias.* Las levaduras son abundantes en la naturaleza* Se encuentran en el suelo y sobre las plantas* Hongo perteneciente al phylum Ascomycota.* Su reproducción se da por gemación.

PARA QUE SIRVEN…* Producción de vino* Alimentos fermentados (pan, cerveza derivados lácteos)* La biotecnología, es decir, la utilización de organismos vivos o de sus partes en procesos industriales, es casi tan antigua como el hombre.

LEVADURAS EMPLEADAS EN LA INDUSTRIA…“La mayor parte de las levaduras empleadas en la industria Hemiascomycetales del género Saccharomyces”9.

4. Hongos del ambiente del laboratorio:- a mayoría de los hongos presentes en los ambientes internos son saprofiticos, porque ellos obtienen lo que necesitan para su metabolismo de materiales muerto,

materia orgánica o sustratos como la madera, papel, pintura, suelo, polvo, piel y alimentos-  HONGOS ( Eumycota ) Importancia económica y ambiental Son importantes

para los seres humanos por sus beneficios o perjuicios. Desempeñan un papel de primer orden en la descomposición de residuos orgánicos en el ambiente, poniendo a disposición: carbono, nitrógeno, fósforo y otros nutrientes esenciales.

- el Aspergillus sp

- Rhizopus sp los cuales son en general los hongos más frecuentemente hallados en nuestro medio.

- Los hongos de los phyla: Zygomycota, Ascomycota y Basidiomycota, pueden crecer en las áreas menos pensadas, los únicos requisitos para ellas son: ambiente condiciones cálido, mojado y húmedo, además que éste presente sustratos.Dentro de estos phyla los hongos más comunes son:

 *Aspergillus sp.  * Penicillium sp.  * Cladosporium sp.  * Mucor sp.  * Alternaria sp.

CONCLUSIONES.

El desarrollo a decuado para el crecimiento de los hongos y levaduras parte de la correcta siembra, inoculación y pinchazo de la bacteria en los puntos específicos para evitar la contaminación ambiental y artificial.

La técnica de hacer estrías para crear una especie de dilución, que entre más la realicemos más limpio será nuestro cultivo, es de vital importancia para poder aislar un microorganismo, por lo tanto siempre y en todo momento, debemos tener la precisión para saber donde depositamos la primer estría, pues en esta práctica paso que la primer estría se realizo correctamente sin embargo, las siguientes al no tomar muestra de la primer estría, no crearon ninguna colonia.

El microcultivo presenta una esporulación y con la coloración de azul de lactofenol se evidencia la forma de los conidios típico en las levaduras

Con la adicion de KOH y lactofenol sobre un portaojetos nos ayuda a evidencar claramente los hongos que presentan septos y a diferenciarlos de acuerdo a sus estructuras, forma, color y tipo de colonia que presentan, al igual de manera analítica sus componentes nutricionales y forma de cultivo.

Las estructuras de un cultivo en hongo siempre depende de las concentraciones de agua, humedad relativa estimada, la temperatura de incubación y de lectura y de las concentraciones de acidez para el crecimiento optimo

A partir de un micelio, otras hifas buscan buscan la superficie donde forma esporas o conidios que son pigmentosos, que le permiten la dispersión del hongo en nuevos hábitats, además se concluyo que la presencia de conidios da a la masa micelial que es una apariencia de una capa en forma de polvo sobre el hongo cultivao

Las levaduras al ser hongos unicelulares presentan forma esférica o en forma cilíndrica.

Los hongos macroscópicos presentan setas y forman los cuerpos fructíferos. ANEXO IMAGEN

REFERENCIAS

1. Bansal R. K., R. K. Walia and D. S.Bathi Evaluation of some agroindusrial waste for mass propagatrion of the nematode parasitic fungus Pacilomyces lilacinus . Nematol Medit. 16:135-138, 1988

2. Cory J. SD. M. J. Balley and S. Highs in Enviromental Biopesticides Theory and Practices Ed. by Enstwiistle 250p. 1993

3. Chet. J. Trichoderma .Applications , mode of action and potential as biological control agents of soilborne pathogen fungi. Cap 6. Ed. Viley Interscience Pub. . p46. 1987

4. Beretta B et al. 2000. Patulin in apple-based foods: occurrence and sfety evaluation. Food Additives and Contaminants 17: 399 -406.

5. ß Betina V. Thin-layer chromatography of mycotoxins. Journal of Chromatography 334: 211 - 276, 1985

6. ß Bissessur J et al. 2001. Reduction of patulin during apple juice clarification. Journal of Food Protection 64: 1216-1219.

7. como evitar el contacto con ácaros y hongos, recuperado el 13 de Noviembre del 2012, a las 2:55 pm, de http://www.aire-puro.cl/como_evitar_el_contacto_con__acaros_y_hongos.html.

8. Introducción a la microbiología, recuperado el 13 de Noviembre del 2012, a las 3:34 pm, de http://www.monografias.com/trabajos16/microbiologia/microbiologia.shtml.

9. [PDF] Uso de  levaduras industriales , recuperado el 13 de Noviembre del 2012, a las 3:59 pm, de www.respyn.uanl.mx/especiales/2010/ee-10-2010/.../05.pdf