diagÓstico de hiv

DIAGÓSTICO DE HIV

LIC. RICARDO SALDAÑA

Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt

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PRUEBAS DE LABORATORIO

• Métodos Directos: Evidencian/cuantifican la presencia de antígenos en la muestra. – PCR cualitativa, – PCR cuantificada– cultivo y aislamiento

viral, – antigenemia P-24)


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PRUEBAS DE LABORATORIO

• Métodos Indirectos: – Evidencian la

presencia o ausencia de anticuerpos totales en la muestra.

– Son los más utilizados.• Pruebas rápidas• ELISA


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Diagnóstico de VIH

Se usan dos niveles de pruebaserológicas: Pruebas de Tamizaje:

Ensayos inmunoenzimáticos Test de aglutinación Test de detección rápida

Tienen alta sensibilidad. La posibilidad de tener falsos negativos es bajo.


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Uni-Gold Recombigen

Multispot HIV-1/HIV-2

Reveal G2

OraQuick Advance

Pruebas rápidas disponibles en el mercado


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PRUEBAS DE ELISA:• Primera Generación: Los antígenos

utilizados provienen del lisado viral de un cultivo

• Segunda Generación: Los antígenos corresponden a proteínas recombinantes o Péptidos sintéticos.

• Tercera Generación: Péptidos recombinantes sintéticos de VIH-1, 2, 0.

• Cuarta Generación: Se adicionó el p24.


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Continuación…

– Pruebas de confirmación: Tienen alta especificidad

• Western Blot• Inmunofluorescencia Indirecta.• Radioinmunoprecipitación

• PUEDEN SER UTILIZADAS PARA DISMINUIR LA POSIBILIDAD DE OBTENER RESULTADOS FALSO POSITIVO.


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Western Blot• Prueba de confirmación• Principio: Ensayo

inmunoenzimático• Detecta anticuerpos

contra proteínas específicas del VIH 1

• Interpretación: visual• Muestras: suero y plasma• Volumen: 20 µl• Tiempo: 3.5 hrs • Sensibilidad: 100%• Especificidad: 100%


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Gen Proteína Denominación CDC OMS env Precursora de la

envoltura gp160 gp160

Glucoproteína externa gp120 gp120 Glucoproteíina

transmembrana gp41

Al menos 2 bandas

gag Precursora del core p55 Precursora del core p40 Proteína principal p24 p24 Proteína de la matriz p17 pol Transcriptasa inversa p66 Transcriptasa inversa p51 Endonucleasa p32

Nomenclatura de las bandas en Western Blot


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Ventajas de las pruebas rápidas de VIH

• Versatilidad y existencia de diferentes principios inmunológicos así como en las muestras biológicas que se pueden utilizar.

• No necesitan un laboratorio muy sofisticado para utilizarlas.

• La realización y la interpretación de los resultados obtenidos es fácil.

• Los resultados preliminares se obtienen en poco tiempo, y cuando se combinan los resultados definitivos los podemos obtener en menos de una hora

• Personal a nivel técnico las puede realizar con la debida capacitación y supervisión de un profesional con experiencia.


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Fortalezas de las pruebas rápidas de VIH

• Algunas se pueden almacenar a temperatura ambiente.

• Se optimiza el uso de los recursos y el tiempo comparado con el ELISA.

• Los resultados obtenidos son igual de confiables que los resultados del ELISA y con menos limitaciones técnicas.

• Algunas requieren poca inversión económica.


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Debilidades de las pruebas rápidas de VIH

• El costo comparado de estas pruebas con el ELISA puede a veces ser mayor.

• Presencia de falsos positivos por lo que necesitan confirmación de los resultados obtenidos.

• El periodo de ventana es mas largo por lo que podemos tener resultados falso negativo comparado con el ELISA de cuarta generación.


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Causas de resultado falso-positivo:

• Relativas al suero: Relativo a la calidad y manipulación de la muestra:

Calidad, extracción, almacenamiento y contaminación de la misma, estabilidad y calidad de los reactivos.

• Relativas a la presencia de auto anticuerpos:– Presencia de enfermedades autoinmunes (AR, LES).

• Relativas a otras condiciones: – Vacunaciones, Enf. Virales, I Renal, Cirrosis,

Enfermedades hemato -oncológicas, alcoholismo, embarazo, etc.


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Causas de resultado falso- negativo:

• Periodo de ventana• Tratamiento con inmunosupresores• Procesos malignos• Trasplante de médula ósea• Disfunciones de las Células B• Factores reumatoides• Pérdida de estabilidad de los reactivos• Reactivos que detectan principalmente p24• Pobre respuesta inmune


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Selección de pruebas rápidas de VIH apropiadas

• Es necesario tomar en cuenta tres factores:– El objetivo de hacer la prueba.– Sensibilidad y especificidad de la prueba.– Prevalencia de la infección de VIH en la

población que será tamizada con las pruebas.


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Elección de Pruebas rápidas de VIH

• Los tres objetivos para hacer un tamizaje de anticuerpos contra VIH son:– Tamizaje de donadores de sangre u órganos.– Para fines epidemiológicos– Diagnóstico de personas infectadas.


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Sensibilidad y especificidad de la prueba

• Estos dos factores son críticos para diferenciar entre una persona infectada y una que no está infectada.

• Pruebas alta mente sensibles disminuyen la posibilidad de obtener resultados falsos negativo.

• Las pruebas altamente específicas disminuyen la posibilidad de tener resultados falsos positivo.

• La mejor elección dependerá del objetivo de hacer la pruebas.

• Los estándares mínimos son: Sensibilidad >99%y especificidad >95% preferiblemente validadas en nuestra

población.


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Sensibilidad y especificidad de las pruebas

aVerdaderos

Positivos

bFalsos

positivosa + b

cFalsos negativos

dVerdaderosnegativos

c + d

a+c b + d

Res

ulta

dos

De

la p

rueb

a

Sensibilidad = a / (a + c) Especificidad = d / (b + d)VPP = a / (a + b) VPN = d/ (c + d)


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Detección de anticuerpos contra el VIH

Pruebas deTamizaje

Pruebas de Confirmación

Sensibilidad

Falsos negativos es bajo Falsos positivos es bajo

Especificidad


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Prevalencia de la infección de VIH

• Definición: Casos positivos * 100% población total• La prevalencia puede variar de población

a población o en un hospital de servicio a servicio.

• A > prevalencia > VPP y < VPN• A > prevalencia > VPN y > VPP


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Estrategia I

• Utilizada en:– Donadores de sangre,

órganos, emergencias – Estudios de

prevalencia• Donde la P > 10%

– Diagnostico:• Signos o síntomas

clínicos de infección por VIH y la P > 30%


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Estrategia II

• Utilizada en:– Estudios de prevalencia

• Donde la P < 10%

– Diagnostico:• Signos o síntomas clínicos

de infección por VIH y la P < 30%

• Pacientes asintomático con P >10%


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Estrategia III

• Diagnóstico de Pacientes asintomático donde la P < 10%


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Tamizaje en labor y partos

• Fase preanalitica: Antes de realizar la prueba

• Se ha hecho pruebas de VIH anteriormente

• Tenemos los insumos y el personal necesarios

• Que tan cerca est’a del momento del parto• Que muestra usar’e para hacer la prueba• Sistema de identificaci’on de muestras


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• Fase analitica: proceso de realizaci`on de la prueba: – Es suficientemente sensible– Que tan rapido tendremos el resultado– Necesitamos equipo muy complejo para

hacer la prueba– Que nivel de especializaci’on tiene que

tener la persona que realiza las pruebas– Ayudar’a nuestro trabajo a disminuir el

riesgo de trasmisi’on materno fetal


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• Fase Post analitica: Despues de realizar la prureba<– Registro adecuado de resultados en libro de

trabajo.– A quien le doy el resultado, al medico, a la

paciente.– Tengo otras pruebas para confirmar

resultados positivos.


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Bioline VIH ½ 3.0Estándar Diagnostic

• Principio: Análisis Inmunocromatográfico

• Prueba de 3ra. generación• Interpretación:Visual• Muestras: Suero, plasma y

sangre (EDTA)• Volumen de muestra:10µl • Tiempo:20 minutos • Sensibilidad: 100.0%• Especificidad: 99.4%


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Experiencias

Performance of a Rapid Immunochromatographic Screening Test for Detection of Antibodies to Human Immunodeficiency Virus Type 1 (HIV-1) and HIV-2: Experience at a Tertiary Care Hospital in South IndiaTheophilus-Sunder Vijayakumar, Shoba David, Kavitha Selvaraj, Thiruppavai Viswanathan, Rajesh Kannangai, and Gopalan Sridharan*

Department of Clinical Virology, Christian Medical College, Vellore, Tamil Nadu PIN 632004, India*Corresponding author. Mailing address: Department of Clinical Virology, Christian Medical College, Vellore 632 004, Tamil Nadu, India. Phone: 91-416-2282312. Fax: 91 (416) 2232035. E-mail: g_sridharan/at/yahoo.com .Received March 16, 2005; Revised May 9, 2005; Accepted May 16, 2005.


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Pruebas de laboratorio validadas en Guatemala

Oraquick

Determine

Instanscreen


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DETERMINE: Prueba rápidaCaracterísticas:


• Interpretación:Visual• Muestras: Suero, plasma

y sangre (EDTA)• Volumen de muestra:50µl • Tiempo:30-35 minutos

• Sensibilidad: 99.6%• Especificidad: 99.4%


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Immunocomb IICaracterísticas:

• Principio: Ensayo inmunoenzimático Indirecto.

• Interpretación:Visual• Muestras: suero y plasma• Volumen:50µl• Tiempo: 60 minutos • Sensibilidad: 100%• Especificidad: 99.4% • No necesita equipo

automatizado


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ORAQUICKCaracterísticas


• Interpretación:Visual• Muestras: Suero, plasma

y sangre completa y fluído oral.

• Tiempo:30-35 minutos

• Sensibilidad: 99.6%• Especificidad: 99.4%


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PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS


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Recomendaciones de bioseguridad

• Uso de bata• Uso de guantes• Orden en la mesa de trabajo• Recipiente especial para transporte de

muestras de sangre. NO TRANSPORTAR MUESTRAS EN GUANTES.

• Descarte adecuado de desechos (agujas, jeringas y tubos)


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Diagnostico de casos de VIH positivos

• 2 pruebas de tamizaje: diferente principio inmunológico con resultados iguales.– Prueba Rápida + ELISA– ELISA + Prueba Rápida– ELISA + ELISA– Prueba Rápida + Prueba Rápida

Recomendación en: Protocolo Nacional para el Tratamiento Antirretroviral del VIH-SIDA. Capítulo 3, página 38. Comisión de acceso a tratamiento, Programa Nacional de SIDA, Ministerio de Salud Pública y Asistencia Social, Guatemala, Junio 2002.

Recomendación: OMS


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Consideraciones Especiales del Diagnóstico de VIH

• Niños < de 18 meses hijos de madre VIH positiva:– Todas las pruebas de anticuerpos dan resultados

Positivos.– Un resultado positivo con pruebas de anticuerpos no

siempre indica infección por VIH.– El diagnostico se establece con métodos directos de

diagnóstico y sospecha clínica.– Se debe dar seguimiento con pruebas de anticuerpos

hasta los 18 meses


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Consideraciones Especiales del Diagnóstico de VIH

• Primoinfección por VIH– Las pruebas que detectan anticuerpos darán

resultados negativo.– Un resultado negativo con pruebas de

anticuerpos no descarta infección por VIH– El diagnostico se establece con métodos

directos de diagnóstico.– La especificidad de los métodos directos de

diagnóstico dependerá del tiempo de inicio de la infección.


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Carga Viral y apoyo al diagnostico de VIH

• La sensibilidad es alta• La especificidad:

– Primoinfección 97(%2-4 sem)– Neonato: < 97%: (4 sem)

• Tomar en consideración cargas virales > 30,000

• Y no se deben tomar decisiones medicas con una sola determinación de CV

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ALGORITMO PARA DIAGNOSTICO DE VIH

PRUEBA RAPIDA

POSITIVA NEGATIVA

RESULTADO NEGATIVO

ELISA

POSITIIVO NEGATIVO ZONA GRIS

RESULTADO POSITIVO WESTERN BLOT

NEGATIVO

POSITIVO

INDETERMINADO

RESULTADO NEGATIVO

RESULTADO POSITIVO

REPETIR EN 6 SEMANAS


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Tamizaje de VIH en la Emergencia de la Maternidad

Prueba rápidaDETERMINE

POSITIVO NEGATIVO

Informe: POSITIVO Informe: NEGATIVO

Seguimiento de la paciente como VIH POSITIVO


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Hospital Roosevelt

Ciudad de Guatemala 2008

Muchas Graciaspor su atención.

Julio 2008

diagÓstico de hiv

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