DR. MARCELO CHIRIBOGA URQUIZO27 de Febrero del 2012

¿virus del HIV?¿virus del HIV?Es un organismo muy pequeño (microorganismo) que no puede vivir por sí solo; por tanto necesita alojarse dentro de las células para utilizar su material genético y de esta forma lograr replicarse (reproducirse)

Los genes codifican las proteínas estructurales del virus

GAG ENV POL

p24 p17

cápsides

p7 p9

nucleocápside.

gp120, gp41

glicoproteína de la

envoltura .

Integrasa (p32).

Proteasa (p12)

Transcriptasa reversa (p66).

Nomenclatura de las bandas diferenciadas

Gen Proteína VIH-1 VIH-2

env Precursora de la envoltura gp160 gp140 Glucoproteína externa gp120 gp105

Glucoproteína transmembrana gp41 gp 36

gag Precursora del core p55 p55Proteína principal p24 p26

Proteína de la matriz p17 p15

pol Transcriptasa inversa p68 p64Integrasa p34 p34Proteasa p12 p11

WHO. Wkly Epidemiol Rec 1990; 37: 281-8

• Nef: REGULA LA BAJA DE CD4 esencial para la inducción de la enfermedad. • Vpu: REGULA LA BAJA DE CD4 promueve la liberación viral. • Vif: FACILITA LA MADURACION DEL VIRON• Vpr: DETIENE LA PROLIFERACIÓN CELULAR• Vpx. PERMITE LA INFECCION DE LOS MACROFAGOS Y LA DISEMINACIÓN VIRAL.

GENES ACCESORIOSGENES ACCESORIOS

Las glicoproteínas gp41 y gp120, relación con la bicapa lipídica de la membrana viral. La gp41 es una proteína de transmembrana que expone un

dominio al extracelular con el que interactúa la gp120 formando un complejo covalente.

LINFOCITO TCD4gp120

gp41

ADHESIÓN DEL VIRUS A LA MEMBRANA

Acoplamiento del virus a la membrana

Entrada de material genético viral

ARN viral

ADN huésped

Transcripción

Traducción

Nuevas proteínas víricas

Ensamblaje

Virión formado

REPLICACIÓN VIRAL

1.- Enlace y fusion

2.- Transcripción Inversa

3.- Integración

4.- Transcripción

5.- Ensamblaje

6.- Gemación

TASA DE INCIDENCIA DE ADULTOS - ECUADOR

AÑO2003 0.32004 0.32005 0.32006 0.32007 0.32008 0.32009 0.32010 0.32011 0.4

25.9

17.8

11.5

6.3

3.63.1 1.9 1 0.6 0.5 0.4 0.01

0

5

10

15

20

25

30

TASA DE INCIDENCIA DE LA POBLACION ADULTASUAZILANDIA

SUDAFRICA

MOZANBIQUE

KENIA

NIGERIA

BAHAMAS

HAITI

RUSIA

PANAMA

GUATEMALA

EEUU

ARGENTINA

ECUADOR

ITALIA

NICARAGUA

CUBA

COREA DEL SUR

ARABIA SAUDITA

KENIA

BAHAMASEEUU EC ARABIA

Tabla con las ocupaciones de las personas identificadas como casos SIDA 2010

Ocupación Frecuencia Porcentaje

Quehaceres domésticos 241 19.26

No trabaja 190 15.19

Oficiales Operarios Artesanos Otros Oficios 177 14.15

Ocupaciones Elementales 162 12.95

Personal Apoyo Administrativo 147 11.75

Trabajadores Servicios Vendedores Comercio 136 10.87

Profesionales científicos intelectuales 57 4.56

Agricultores Forestales Pescadores Cazador 55 4.4

Estudiante 33 2.64

Directores Gerentes 15 1.2

Técnicos Profesionales Nivel Medio 13 1.04

Militares 10 0.8

Trabajadoras/es Sexuales 6 0.48

Jubilado 4 0.32

Policía 3 0.24

Operadores Instalaciones Maquinas Ensambladores 1 0.08

PPL 1 0.08

Total 1,251 100

AÑO 1989 ERA DE 20:1, AÑO 1993 7:1, AÑO 2005 3:1

MUJERES EMBARAZADAS SOMETIDAS A TAMIZAJE CON CONSENTIMIENTO INFORMADO ECUADOR 2006-2010

188024202.878

221.355

260.236273.643

0

50000

100000

150000

200000

250000

300000

2006 2007 2008 2009 2010

AÑOS

NÙM

ERO

Fuente: Sistema de Monitoreo y Evaluación de VIH/SIDA, Programa Nacional de prevencion del VIH/SIDA e ITS 2011. Elaborado:PNS

Diagnóstico de HIVDiagnóstico de HIV El screening de anticuerpos y El screening de anticuerpos y

antígenos en suero es el método más antígenos en suero es el método más usadousado

Las pruebas deben poseer alta Las pruebas deben poseer alta Sensibilidad y EspecificidadSensibilidad y Especificidad

Es importante reducir al máximo los Es importante reducir al máximo los falsos positivos y falsos positivos y falsos negativosfalsos negativos

Características Características operacionales de las operacionales de las

pruebas de anticuerpos pruebas de anticuerpos anti-VIHanti-VIH

Tener presente para el diagnóstico:Tener presente para el diagnóstico: Período de ventana (Seroconversión)Período de ventana (Seroconversión) Etapa terminalEtapa terminal Pacientes con VIH pero sin anticuerpos Pacientes con VIH pero sin anticuerpos

por causas orgánicas o defectos inmunespor causas orgánicas o defectos inmunes Prevalencia de la infección de la Prevalencia de la infección de la

población estudiadapoblación estudiada En muestras reactivas considerar En muestras reactivas considerar

estrategias de confirmaciónestrategias de confirmación

En el gráfico podemos observar la carga viral (cantidad de partículas virales por ml de sangre) y los indicadores del sistema inmune en la sangre:

- Célula T helper- Célula T Killer- Anticuerpos

diasPeriodo de

ventana

VIH Ac (IgM)

VIH p24 Ag

VIH RNAVIH Ac (IgG)

Infección

ELISAELISA

Diagnóstico: Diagnóstico: Determinación de anticuerpos y Determinación de anticuerpos y

antígenos:antígenos: ELISAELISA WESTERN-BLOTWESTERN-BLOT

Detección de antígenos VIH (P24)Detección de antígenos VIH (P24) Detección del virus por PCR (ARN – Detección del virus por PCR (ARN –

ADN)ADN)

PRUEBAS DE CRIBADO DE PRUEBAS DE CRIBADO DE ANTICUERPOS FRENTE AL ANTICUERPOS FRENTE AL

VIHVIH De detección primaria:De detección primaria:

EIA 1ª generación.- Lisado viral VIH-1 (+falsos EIA 1ª generación.- Lisado viral VIH-1 (+falsos positivos)positivos)

EIA 2ª generación.- Péptidos EIA 2ª generación.- Péptidos recombinantes/sintéticos de VIH-1 y VIH-2recombinantes/sintéticos de VIH-1 y VIH-2

EIA/ELFA 3ª generación.- Péptidos EIA/ELFA 3ª generación.- Péptidos recombinantes/sintéticos de VIH-1 y VIH-2 y Ag. recombinantes/sintéticos de VIH-1 y VIH-2 y Ag. VIH-1 del grupo “0” (outhlayer o marginal)VIH-1 del grupo “0” (outhlayer o marginal)

EIA/ELFA 4ª generación.- Péptidos EIA/ELFA 4ª generación.- Péptidos recombinantes/sintéticos de VIH-1 y VIH-2 y VIH-recombinantes/sintéticos de VIH-1 y VIH-2 y VIH-1 “0” y anticuerpos para detectar Antígeno p241 “0” y anticuerpos para detectar Antígeno p24

MÉTODO MÉTODO INMUNOENZIMÁTIINMUNOENZIMÁTI

COCOMicroelisa Microelisa

1 2 3 4 5 6

Procedimiento Procedimiento

100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul

1 2 3 4 5 6

1 2 3 4 5 6

100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul

Destapar los micropocillos

Diluyente

Control negativoControl positivoSuero de muestras

Procedimiento Procedimiento

1 2 3 4 5 6

Incubar a 37° C durante 30 minutos en el

Stat Fax®2200 Incubator/Shaker

1 2 3 4 5 6

Lavar, agregar 100ul de Conjugado e incubar por 15’ a 37°C y volver a lavar

1 2 3 4 5 6

100ul

Absorber

100ul 100ul 100ul 100ul 100ul

Sustrato TMBIncubar a temperatura ambiente por 15 minutos en la

oscuridad

1 2 3 4 5 6

Procedimiento Procedimiento

1 2 3 4 5 6

Detener la reacción con ácido sulfúrico

100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul

Proceder a la interpretación de datos (lectura) en el LECTOR a 450 nanómetros usando blanco deaire.

Prueba de EIA - ELISAPrueba de EIA - ELISA

LECTURA VISUALLECTURA VISUAL            

 

 

POR POR INMUNOCROMAINMUNOCROMA

TOGRAFÍATOGRAFÍA

PRUEBAS RÁPIDASPRUEBAS RÁPIDAS Características:Características:

Antígenos similares a los de EIA Antígenos similares a los de EIA Resultado de 5 a 20 minutos (casos de Resultado de 5 a 20 minutos (casos de

emergencia)emergencia) Lectura siempre es subjetivaLectura siempre es subjetiva Usar preferiblemente detección de VIH-Usar preferiblemente detección de VIH-

1 y VIH-2 por separado1 y VIH-2 por separado Usar con otras pruebas de detección de Usar con otras pruebas de detección de

Ac y Ag para aumentar su especificidadAc y Ag para aumentar su especificidad

Pruebas rápidas para la Pruebas rápidas para la detección de anticuerpos detección de anticuerpos frente al VIH-1 y VIH-2frente al VIH-1 y VIH-2 Dot-Dot-EIA 1ª generación: péptidos EIA 1ª generación: péptidos

recombinantes/sintéticos de VIH-1 y VIH-2 en un único recombinantes/sintéticos de VIH-1 y VIH-2 en un único “spot”“spot”

Dot-Dot-EIA 2ª generación: péptidos EIA 2ª generación: péptidos recombinantes/sintéticos de VIH-1, VIH-2 y VIH-1 “0” recombinantes/sintéticos de VIH-1, VIH-2 y VIH-1 “0” en “spot” diferenciados para VIH-1 y VIH-2en “spot” diferenciados para VIH-1 y VIH-2

Látex/Aglutinación pasiva: péptidos Látex/Aglutinación pasiva: péptidos recombinantes/sintéticos de VIH-1, VIH-2 y VIH-1 “0” recombinantes/sintéticos de VIH-1, VIH-2 y VIH-1 “0”

Inmunocromatografía capilar: péptidos Inmunocromatografía capilar: péptidos recombinantes/sintéticos de VIH-1, VIH-2 y VIH-1 “0” recombinantes/sintéticos de VIH-1, VIH-2 y VIH-1 “0”

Inmunocromatografía, identificación de lo anterior + Inmunocromatografía, identificación de lo anterior + Ag p24Ag p24

Detección de HIVDetección de HIV1ª generación1ª generación

Paso 1: Colocar 3 gotas de Buffer en el filtro azul

Paso 2: Colocar 1 gota de sangre en el centro del filtro azul

Paso 3: Colocar 4 gotas de solución Buffer y esperar a que se absorba

Paso 4: Descartar el filtro azul y reemplazarlo con el verde. Añadir 10-12 gotas más de Buffer en el centro

Resultado positivo

Látex/Aglutinación pasiva: Látex/Aglutinación pasiva: SERODIASERODIA

The Determine® HIV 1/2 Ag/Ab Combo detects both HIV-1 p24 antigen and antibodies to HIV-1 and HIV-2

Determine® HIV -1/2: 3G Determine® Combo Ag/Ab: 4G

43 47 50 54 57 61 43 47 50 54 57 61

The Determine® HIV 1/2 Ag/Ab Combo detects both HIV-1 p24 antigen and antibodies to HIV-1 and HIV-2

Determine® HIV -1/2: 3G Determine® Combo Ag/Ab: 4G

43 47 50 54 57 61 43 47 50 54 57 61

C BA

Inmunocromatografía Inmunocromatografía capilar capilar

5ul

Muestra: suero o sangre

Diluyente

NEGATIVO

POSITIVO

CA B

CA B

A BC

HIV Antigen

Control

1 2 3

Procedimiento Procedimiento Preparar el material, usar las tiras y destapar los pocillos necesarios

A B C D E F

50ul

Colocar la muestra

Procedimiento Procedimiento

Coloque el peine en la fila B, agite bien, seque y coloque en la fila C, en 20 minutos retire y seque, coloque en la fila D, agite, seque y coloque en la fila E, repita el paso anterior

Coloque el peine en la fila A por 30 minutos

Procedimiento Procedimiento Coloque el peine en la fila F, agite por 10 minutos, detengala reacción colocando el peine nuevamente en la fila E, retire y seque al aire. Leer.

Interpretación de resultados

Reactivo Inválido No reactivo

OraQuick Advance HIV-OraQuick Advance HIV-1/21/2

Muestras : puncion Muestras : puncion digital , sangre total , digital , sangre total , fluido oral ; moderada fluido oral ; moderada complejidad con plasmacomplejidad con plasma

Almacenamiento a Almacenamiento a temperatura ambientetemperatura ambiente

HIV-1 y 2HIV-1 y 2

Resultados en 20 minutosResultados en 20 minutos

Puncion digital

Insertar asa en el vial y agitar

Colección de fluido oral por frotis .Colección de fluido oral por frotis .Guantes opcionales ; bajo riesgo biológico Guantes opcionales ; bajo riesgo biológico

Insertar el dispositivo ; test se Insertar el dispositivo ; test se desarrolla en 20 minutosdesarrolla en 20 minutos

Positivo Negativo

Control

ReactivoPositivo HIV-1/2

Lectura de resultados en 20 – 40 Lectura de resultados en 20 – 40 minutosminutos

PRUEBAS DE PRUEBAS DE CONFIRMACIÓNCONFIRMACIÓN

Inmunoelectrotransferencia o Western Inmunoelectrotransferencia o Western Blot (WBBlot (WB))

Inmunofluorescencia indirecta (IFI)Inmunofluorescencia indirecta (IFI) Radioinmunoprecipitación (RIPA)Radioinmunoprecipitación (RIPA) Inmunoblot con antígenos recombinantes Inmunoblot con antígenos recombinantes

(LIA)(LIA) La técnica más usada es WBLa técnica más usada es WB Las técnicas de IFI y RIPA se emplean menos Las técnicas de IFI y RIPA se emplean menos

por:por: Subjetividad de la lecturaSubjetividad de la lectura Requerimientos de laboratorioRequerimientos de laboratorio

InmunoelectrotransferenInmunoelectrotransferenciacia

Inmunofluorescencia Inmunofluorescencia Indirecta (IFI)Indirecta (IFI)

Resultado positivo

Radioinmunoprecipitación Radioinmunoprecipitación (RIPA)(RIPA)

Inmunoblot con antígenos Inmunoblot con antígenos recombinantes (LIA)recombinantes (LIA)

PRUEBA DE WESTERN BLOT

Western Blott CortoWestern Blott CortoMICROPOCILLOS

PEINE CON ANTÍGENOS

A Rapid ELISA confirmatory test for the presence of HIV antibodies

in samples found positive by a screening test

ImmunoComb® II HIV 1&2 CombFirm

It recognizes Ab for p24 (HIV 1&2), p31 (HIV 1&2), gp 120 (HIV 1), gp41 (HIV 1), gp36 (HIV 2)

of the main HIV gene products (gag, pol, env).

gp 120(HIV-1)gp 41(HIV-1)gp 36(HIV-2)

Internal Control

p 24(HIV-1&2)

p 31(HIV-1&2)

HIV CombFirm Configuration

The ImmunoComb® II HIV 1&2 CombFirm recognizes Ab for: p24 (HIV 1&2), p31 (HIV 1&2), gp 120 (HIV 1), gp41 (HIV 1),

gp36 (HIV 2)

Comparison of Configurations

p 17p 24p 31gp 41p 51p 55p 66

gp120gp 160env

gag

pol

Western Blot Vs.

Positioning HIV CombFirm Against Western Blot

gp 120(HIV-1)gp 41(HIV-1)gp 36(HIV-2)

Internal Control

p 24(HIV-1&2)

p 31(HIV-1&2)

CombFirm

INFECCIÓN

niveles

LINFOCITOS CD8 CON ACTIVIDAD ANTIVIRAL

Carga viral Anticuerpos frente al VIH

CD4

tiempo

PRIMOINFECCION FASE DE REPLICLACIÓN CRÓNICA FASE ACELERADA

Evolución de los parámetros inmunológicos y virológicos en la infección por el VIH.

0-------------------12 m--------------------5 a.-/ /-------------------------- 10 a.

Evolución infección Evolución infección VIH en niños.VIH en niños.

CD4 adultos

Carga viral-NIÑOS

CD4-NIÑOS

Carga viral adultos

•Se deben tener 2 resultados REACTIVOS por pruebas de tamizaje (ELISA – P. RAPIDA 4ta. Generación) y una prueba confirmatoria POSITIVA (WESTERN BLOT) para poder determinar que una persona está infectada.

CONDICION DEL CONDICION DEL PACIENTEPACIENTE

SEROPOSITIVOSEROPOSITIVO

PRESENCIA DE ANTICUERPOSPRESENCIA DE ANTICUERPOS

CASOCASO

PRESENCIA DE SINTOMATOLOGIAPRESENCIA DE SINTOMATOLOGIA

LINFOCITO POSITIVO MARCADOLINFOCITO POSITIVO MARCADO

Criterios de Positividad para Criterios de Positividad para Western BlotWestern Blot

CriteriCriterioo

Reactividad frente a: Reactividad frente a:

OMSOMS 2 glucoproteínas cualquiera de: 2 glucoproteínas cualquiera de: gp160, gp120, gp41gp160, gp120, gp41

CRUZ CRUZ ROJAROJA

1 proteína de cada gen 1 proteína de cada gen estructural (env, pol y gag)estructural (env, pol y gag)

FDAªFDAª p24 + p32 + (gp41 o gp120 o p24 + p32 + (gp41 o gp120 o gp160)gp160)

CRSSªCRSSª p24 + (gp41 o gp120 o gp160) o p24 + (gp41 o gp120 o gp160) o p32 + (gp41 o gp120 o gp160)p32 + (gp41 o gp120 o gp160)

CDC/CDC/ASTPHASTPHLDªLDª

p24 + (gp41 o gp 120 o gp160) o p24 + (gp41 o gp 120 o gp160) o gp41 + (gp 120 o gp160)gp41 + (gp 120 o gp160)

VALORACION DE LAS VALORACION DE LAS CARACTERISTICAS CARACTERISTICAS

OPERACIONALES DE PRUEBAS OPERACIONALES DE PRUEBAS RAPIDAS QUE DETECTAN EL HIV RAPIDAS QUE DETECTAN EL HIV

UTILIZADAS EN EL ECUADORUTILIZADAS EN EL ECUADORINSTITUTO NACIONAL DE HIGIENE Y INSTITUTO NACIONAL DE HIGIENE Y

MEDICINA TROPICAL “LEOPOLDO MEDICINA TROPICAL “LEOPOLDO IZQUIETA PEREZ” REGIONAL NORTE - IZQUIETA PEREZ” REGIONAL NORTE -

QUITOQUITOAutores: DR. MARCELO CHIRIBOGA URQUIZODR. ROBERTO YAJAMINLCDA. ELIANA CHAMPUTIZ ORTIZLCDA. DAYANA GUANO GALLARDO DR. LUIS PORRAS TORRESDRA. MARIA CRISTINA CHIRIBOGALCDO. LEONEL OJEDA

HALLAZGOS POR TEST CODIFICADO ENSAYADOHALLAZGOS POR TEST CODIFICADO ENSAYADO

PRUEBAPRUEBA SENSIBILIDADSENSIBILIDAD ESPECIFICIDADESPECIFICIDADRESULTADO RESULTADO

DUDOSODUDOSOCODIFICACODIFICA

DADA(95% I.C.)* - n= (95% I.C.)* - n=

165165(95% I.C.)* - n= (95% I.C.)* - n=

205205 % DEL TOTAL% DEL TOTAL

     

1198.8 98.8 (95.2 - (95.2 -

99.8)99.8)91.7 91.7 (86.8 - (86.8 -

94.9)94.9) 1.62%1.62%

22 99.4 99.4 (96.2 - 100)(96.2 - 100)95.6 95.6 (91.6 - (91.6 -

97.8)97.8) 0.54%0.54%

3398.8 98.8 (95.2 - (95.2 -

99.8)99.8)87.3 87.3 (81.8 - (81.8 -

91.4)91.4) 2.97%2.97%

4494.5 94.5 (89.6 - (89.6 -

97.3)97.3)90.2 90.2 (85.1 - (85.1 -

93.8)93.8) 1.35%1.35%

* 95% Intervalo de confianza* 95% Intervalo de confianza

REPRODUCIBILIDAD (3 Meses):REPRODUCIBILIDAD (3 Meses):

PRUEBA PORCENTAJE DE REPRODUBILIDAD

1 92.2%2 98.1%3 93.2%4 90.3%Concordancia 98.4%

Causas de falsos Causas de falsos positivos en las pruebas positivos en las pruebas séricas de detección de séricas de detección de anticuerpos anti VIHanticuerpos anti VIH

Relativas al suero:Relativas al suero:Congelaciones y descongelaciones Congelaciones y descongelaciones

repetidasrepetidasAlmacenamiento a temperatura subóptimaAlmacenamiento a temperatura subóptimaAspecto lipídico o turbio del sueroAspecto lipídico o turbio del sueroContaminación microbianaContaminación microbianaSueros tratados con calor (mayores o Sueros tratados con calor (mayores o

iguales a 60ºC)iguales a 60ºC)Errores de extracción o identificaciónErrores de extracción o identificación

Relativas a la presencia de Relativas a la presencia de autoanticuerposautoanticuerpos

Personas con anticuerpos anti-HLA – Personas con anticuerpos anti-HLA – DR4, DQw3DR4, DQw3

Enfermedades reumatoideasEnfermedades reumatoideas PolimiositisPolimiositis Lupus eritematosoLupus eritematoso MultitrasfundidosMultitrasfundidos Transplantados renalesTransplantados renales MultíparasMultíparas

Relativas a otras Relativas a otras condicionescondiciones

Hemodializados, fracaso renal crónicoHemodializados, fracaso renal crónico Síndrome de Stevens – JohnsonSíndrome de Stevens – Johnson Administración previa de Administración previa de

inmunoglobulinasinmunoglobulinas Sueros postvacunales (gripe, Sueros postvacunales (gripe,

Hepatitis B)Hepatitis B) Infecciones agudas por virus DNAInfecciones agudas por virus DNA Enfermedad hepática alcohólica graveEnfermedad hepática alcohólica grave

Causas de falsos Causas de falsos negativos en las pruebas negativos en las pruebas séricas de detección de séricas de detección de anticuerpos anti VIHanticuerpos anti VIH

Periodo Ventana que precede a la Periodo Ventana que precede a la aparición de anticuerposaparición de anticuerpos

Infección por virus de VIH no Infección por virus de VIH no detectables por los antígenos incluidos detectables por los antígenos incluidos en la pruebaen la prueba

Tratamiento inmunosupresor prolongadoTratamiento inmunosupresor prolongado Transplante de médula óseaTransplante de médula ósea Disfunciones de los linfocitos BDisfunciones de los linfocitos B Plasmaféresis, exanguíneotransfusiónPlasmaféresis, exanguíneotransfusión NeoplasiasNeoplasias Errores de extracción o identificaciónErrores de extracción o identificación Fallos en el principio técnico o en el proceso Fallos en el principio técnico o en el proceso

de fabricación del equipo diagnósticode fabricación del equipo diagnóstico Respuestas anómalas ante la infección Respuestas anómalas ante la infección

de VIHde VIH

Recuento de células CD4Las células CD4 (en ocasiones denominadas células-T o células auxiliares) son glóbulos blancos que ayudan a organizar la respuesta del sistema inmunitario frente a las infecciones. Es la medición del número de estas células en un milímetro cúbico de sangre (mm3. El recuento de células CD4 de una persona no infectada por VIH puede estar en un valor aproximado de 450 a 1.600. El recuento de CD4 también varía y puede subir o bajar como consecuencia del estrés, el fumar, el ciclo menstrual, la píldora anticonceptiva, la actividad física reciente o incluso la hora del día. Asimismo puede disminuir si tienes una infección o enfermedad.

Carga viralLa carga viral es el término empleado para referirse a la cantidad de VIH en sangre. Cuanto más virus haya en ese fluido (y por tanto, mayor sea la carga viral), más rápido disminuirá el recuento de células CD4 y mayor será el riesgo de enfermar.Las pruebas de carga viral miden la cantidad de material genético del VIH en sangre. Los resultados de una prueba de carga viral se expresan como el número de copias de ARN del VIH en un mililitro de sangre, donde una carga viral de 10.000 copias se consideraría baja y una de 100.000 copias , alta.

Diagnóstico de la infección por VIH-1 mediante detección de ácidos nucleicos.

Técnicas de diagnóstico genético.• Hibridación simple (dot-blot, hibridación in situ).• Amplificación por reacción en cadena de

la polimerasa (PCR) y variantes: RT-PCR, nested PCR, in situ-PCR, competitive PCR, etc.

• Amplificación isotérmica con RNasa H (NASBA).

Indicaciones.• Diagnóstico perinatal.• Individuos con patrón serológico

indeterminado.• Infecciones silentes (“periodo ventana”).

Ou et al. Science 1988; 239: 295-7Roth et al. Lancet 19991, 353: 359-63Sullivan et al. AIDS 1999; 13: 89-96

Causas de PCR positiva en individuos seronegativos para el VIH-1.

• “Periodo ventana” antes de la seroconversión.

• Contaminación de laboratorio (carryover).

• Secuencias exógenas de tipo retroviral o próximas.

• Secuencias endógenas, retrovirales o no.

• Hipogammaglobulinemia.

• Tratamiento inmunosupresor.

• Infección por virus defectivos o incompletos.

• Infección por variantes poco o no replicativas.

• Serorreversión por disfunciones en el sistema inmunitario.

Apertrei et al. AIDS 1996; 10: F57-F60Dennis et al. J Infect Dis 1999; 180: 1.033-42Sullivan et al. AIDS 1999; 13: 89-96

Causas de PCR negativa en individuos seropositivos para el VIH-1.

• Transmisión pasiva (maternofetal, transfusiones, etc.).

• Mutaciones críticas en la región analizada.

• Presencia errática de la secuencia estudiada.

• Baja sensibilidad de la prueba.

• Error técnico.

• Anticuerpos con reactividad cruzada en pacientes con lupus, fibrosis quística y tras la vacuna de la gripe.

Celum et al. Arch Intern Med 1994; 153: 1129-37Clerici et al. J Infect Dis 1991; 164: 178-82Kaul et al. AIDS 1999; 13: 23-9

Diagnóstico de la infección perinatal por VIH.

• Transferencia pasiva de anticuerpos de la madre al recién nacido (pérdida en < 12-18 meses).

• Niños < 18 meses: necesidad de métodos directos.

PCR: - método rápido.

- sensibilidad 95-100% al primer mes para VIH.

Cultivo viral: complicado.

Antigenemia: posible formación de complejos Ag-Ac.

Carga viral: puede dar falsos positivos.

Muñoz-Fernández. Allergol et Immunopathol 1998; 26: 117-24De Mendoza et al. AIDS 1998; 12: 2076-7

Cultivo viral.

Indicaciones.• Infección pediátrica.• Infección silente (“período

ventana”).• Estudios de epidemiología

molecular.• Estudios de sensibilidad a los

antirretrovirales (fenotipo).• Caracterización biológica de las

cepas (tropismo, sincitiales, etc.).

Desventajas.• Sensibilidad variable (generalmente

baja).• Técnica laboriosa.

Vingano et al.Pathobiology 1997; 65: 169-76Sheppard et al. J Acquir Immune Def Syndr 1993; 6: 1.339-46Vallejo et al. Manual del SIDA 1999; 106-15

La secuenciación poblacional sólo detecta La secuenciación poblacional sólo detecta subpoblaciones que representen un 20-25% de la subpoblaciones que representen un 20-25% de la población viralpoblación viral

Determinación de resistencias al Determinación de resistencias al tratamiento antirretroviraltratamiento antirretroviral

Flujograma para Flujograma para diagnóstico diagnóstico de HIV/SIDAde HIV/SIDA

PACIENTE / MUESTRA

P. RAPIDA 4ta. GELISA

POSITIVO

P. RAPIDA 4ta. GELISA

NEGATIVO

ELISAPOSITIVO

CONFIRMACIÓN

POSITIVOSe informa/reporta

POSITIVO para HIV

NEGATIVOSe reporta/informa

NEGATIVO para HIV

INDETERMINADO

Si el paciente esde control/seguimientose repite el examende ELISA cada tresmeses por un año

Seguimiento de PVVIHSeguimiento de PVVIHPACIENTES POSITIVOS

HIV/SIDA

CD4, CD8, CD3 CARGA VIRAL

CON PEDIDO * TOMA DE MUESTRAS

INHMT - QUITO

CON PEDIDO * TOMA DE MUESTRAS

INHMT - QUITO

REALIZACION DE PRUEBAS INHMT-QUITO-GUAYAQUIL-CUENCA

ENTREGA DE RESULTADOS DEPENDE DE DISPONIBILIDAD DE REACTIVOS

•SE RECIBEN DE PROVINCIAS EL PLASMA Y SANGRE CON ANTICOAGULANTE

PROVIRUS - RESISTENCIA ANTIRRETROVIRAL

1

6

6

1

1

2

1

1

1

1

1

1

1

2

unidades de atención integral de VIH por unidades de atención integral de VIH por provinciaprovincia

Esmeraldas

Guayas

Pichincha

Los Ríos

Sto Domingo

Manabí

Imbabura

Loja

Azuay

Cañar

El Oro

Sucumbíos

Orellana

Tena

Napo

1

marceloinh@gmail.com