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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE MEDICINA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGÍA

“EFECTO IN VITRO DE 04 DERIVADOS COMERCIALES DEL CACAO SOBRE EL

CRECIMIENTO DEL STREPTOCOCCUS MUTANS”

TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE

BACHILLER EN ESTOMATOLOGÍA

AUTOR:

ROSAS URBINA, MARCO ANTONIO

TRUJILLO – PERÚ

2009

Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/

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I. RESUMEN

Este trabajo se realizó en el laboratorio de Microbiología Médica de la

Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo en el año

2008. Su propósito fue el análisis del efecto “in Vitro” de 04 derivados

comerciales del cacao sobre el crecimiento del Streptococcus mutans;

para ello, fue necesario evaluar de manera independiente los efectos del

cacao en polvo, manteca de cacao, chocolate no azucarado y el chocolate

azucarado sobre el crecimiento de Streptococcus mutans y luego hacer

una comparación entre ellos. Se realizó un sembrado de Streptococcus

mutans en 27 placas petri y se les adicionó discos de difusión preparados

con diluciones de los derivados de cacao a distintas concentraciones para

los grupos experimentales y con agua bidestilada como grupo control. Las

placas petri fueron incubadas a 37 °C en microanaerobiosis por espacio

de 18 horas. Al análisis posterior se obtuvo la generación de halos

inhibitorios de pequeña longitud para el cacao en polvo, chocolate no

azucarado y chocolate azucarado; y la generación de halos de gran

longitud para la manteca de cacao; así mismo la no generación de

inhibición alguna para el grupo de control con lo que se concluyó que los

04 derivados comerciales del cacao presentan efecto inhibitorio sobre el

crecimiento de Streptococcus mutans “in Vitro”.

Palabras clave: Cacao, derivados del cacao, inhibición de crecimiento

bacteriano, Streptococcus mutans.



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II. ABSTRACT

This present work has been done in the Microbiology Laboratory of the

Medical School of the “Universidad Nacional de Trujillo” in the 2008. It

purpose was the analysis of the “in Vitro” effect of 04 commercial derivates

of cacao over the Streptococcus mutans growth.

For that it was necessary to evaluate in an independent way the effects of

cacao powder, cacao fat, no sugar chocolate and sugar chocolate over the

growth of Streptococcus mutans and then make a comparison between

them.

A seeding was performed in 27 petri dishes with diffusion discs of the

cacao derivates in different concentration for the experimental group and

bi-distilled water for the control group.

The petri dishes were incubated at 37 ºC in microaerobiosis for 18 hours

and result in generation of low width inhibition rings for the cacao powder,

no sugar chocolate and sugar chocolate and the generation of a high

width for the cacao fat as well the no generation of inhibition ring in any of

the control groups with the conclusion that the 04 chocolate derivates

present an inhibitory effect over the Streptococcus mutans growth “in

Vitro”.

Keywords: Cacao, derivates of cacao, inhibition of bacterial growth,

Streptococcus mutans.



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EVALUACIÓN DE LA TESIS

El Jurado deberá:

a. Consignar las observaciones y objeciones pertinentes relacionados a los

siguientes ítems

b. Anotar el calificativo final

c. Firmar los tres miembros del jurado

TESIS:.......................................................................................................................

....................................................................................................................................

....................................................................................................................................

1. DE LAS GENERALIDADES :

El Título:.......................................................................................................

........................................................................................................................

Tipo de Investigación:..................................................................................

........................................................................................................................

2. DEL PLAN DE INVESTIGACIÓN :

Antecedentes:................................................................................................

Justificación:.................................................................................................

Problema:......................................................................................................

........................................................................................................................

Objetivos:......................................................................................................

Hipótesis:.......................................................................................................

Diseño de Contrastación:............................................................................

Tamaño Muestral:.......................................................................................

Análisis Estadístico:....................................................................................

3. RESULTADOS:...................................................................................................

4. DISCUSIÓN:

....................................................................................................................................

....................................................................................................................................



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5. CONCLUSIONES:

...................................................................................................................................

6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:............................................................

...............................................................................................................................

7. RESUMEN:..........................................................................................................

...............................................................................................................................

8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN:

...............................................................................................................................

9. ORIGINALIDAD: ...............................................................................................

10. SUSTENTACION

10.1 Formalidad:

................................................................................................

10.2 Exposición:

.................................................................................................

10.3 Conocimiento del Tema:

...........................................................................

CALIFICACIÓN:

(Promedio de las 03 notas del Jurado)

JURADO: Nombre Código Docente Firma

Presidente: Dr...................................... …………… ………………..

Grado Académico:……………………………………….…………………

Secretario: Dr...................................... …………… .…….………...

Grado Académico: …………………………………………………………

Miembro: Dr...................................... .…………… ……..….……..

Grado Académico: ……………………………………………….………



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RESPUESTAS DE TESISTAS A OBSERVACIONES DEL

JURADO

El Tesista deberá responder en forma concreta a las observaciones del jurado

a manuscrito en el espacio correspondiente:

a. Fundamentando su discrepancia

b. Si está de acuerdo con la observación también registrarla.

c. Firmar

TESIS:.......................................................................................................................

....................................................................................................................................

....................................................................................................................................

1. DE LAS GENERALIDADES:

El Título:.......................................................................................................

........................................................................................................................

Tipo de Investigación:..................................................................................

........................................................................................................................

2. DEL PLAN DE INVESTIGACIÓN:

Antecedentes:................................................................................................

Justificación:.................................................................................................

Problema:......................................................................................................

........................................................................................................................

Objetivos:......................................................................................................

Hipótesis:.......................................................................................................

Diseño de Contrastación:............................................................................

Tamaño Muestral:.......................................................................................

Análisis Estadístico:....................................................................................

3. RESULTADOS: ..................................................................................................

4. DISCUSIÓN: .......................................................................................................



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...............................................................................................................................

5. CONCLUSIONES: .............................................................................................

6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:............................................................

...............................................................................................................................

7. RESUMEN:..........................................................................................................

...............................................................................................................................

8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN:

...............................................................................................................................

9. ORIGINALIDAD: ..............................................................................................

10. SUSTENTACIÓN

10.1. Formalidad:

..............................................................................................

10.2. Exposición:

..............................................................................................

10.3. Conocimiento del Tema:

..............................................................................................

...................................................

Firma

Nombre:



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ÍNDICE

Pág.

DEDICATORIA

AGRADECIMIENTOS

RESUMEN

ABSTRACT

I. INTRODUCCIÓN 1 - 11

II. MATERIAL Y MÉTODO 12 - 21

III. RESULTADOS 22 - 32

IV. DISCUSIÓN 33 - 35

V. CONCLUSIONES 36 - 37

VI. RECOMENDACIONES 38

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 39 - 43

VIII. ANEXOS 44 - 55



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I. INTRODUCCIÓN

1.1. ANTECEDENTES Y JUSTIFICACIÓN DEL PROBLEMA:

La caries, según Bhaskar, es la enfermedad más común del ser humano. 1

F. V. Domínguez la describe como una secuencia de sucesos de

destrucción localizada en los tejidos duros dentarios que evoluciona en

forma progresiva e irreversible y que comienza en la superficie del diente

y luego avanza en profundidad. 2

Centrándonos en los microorganismos responsables de la caries dental,

la evidencia actual apoya la idea de que la iniciación de la caries está

asociada a Estreptococos acidogénicos específicos. 3

Cuantiosos estudios longitudinales han intentado demostrar una relación

directa entre la presencia de Streptococcus mutans y la aparición de

lesiones cariosas.

Rimondia S. Percival y col. en sus investigaciones epidemiológicas sobre

el tema, efectuaron comparaciones de muestras de placa a partir de dos

poblaciones humanas, una con alta y la otra con baja incidencia de caries

demostrando una relación entre la presencia de Streptococcus mutans y

la incidencia de lesiones cariosas. En el estudio, el 71% de fisuras

cariadas tenían cuentas de Streptococcus mutans mayores al 10% del

total de microorganismos mientras que el 70% de fisuras libres de caries

no tenían ninguna cuenta perceptible. 4



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Newman en sus investigaciones obtiene datos que muestran cierta

discrepancia con los estudios de Rimondia S. Percival y col., en cuanto a

que; aunque la dominación de un sitio con los Streptococcus mutans

ocurre frecuentemente antes de la iniciación de caries, un alto conteo de

Streptococcus mutans se encuentra más a menudo después de la

ocurrencia de caries y más específicamente en las profundidades de la

lesión cariosa. 3

Esto permite concluir que ninguna especie parece estar asociada

únicamente al inicio de lesiones cariosas, es probable que éste sea el

resultado de un ataque combinado de todos los microorganismos

generadores de ácido de la placa, pero no hay duda de que el

Streptococcus mutans es una de las bacterias de mayor potencial

acidogénico y virulencia de la placa dental evidenciando así su gran

importancia en la aparición de lesiones cariosas.1- 4

La ciencia médica ha estado siempre en la constante búsqueda de

insumos y productos con propiedades benefactoras para la salud, que

pudiesen ser incorporados en la alimentación habitual de la persona

humana, dentro de una dieta equilibrada y en cantidades moderadas.

El cacao, ha sido estudiado por la medicina desde antaño, y en su

extenuante investigación se ha logrado evidenciar numerosas

propiedades medicinales que van desde la mejora del estado nutricional

hasta su uso a modo de agente preventivo y coadyuvante en el



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tratamiento de enfermedades crónico degenerativas como ciertas

afecciones cardíacas y la diabetes mellitus. 5 – 9

En el campo de la ciencia estomatológica, desde tiempos remotos han

surgido controversias en cuánto al potencial cariogénico de determinados

alimentos y el cariostático de otros, teniendo como prejuicio, que toda

sustancia manejada en la constitución de golosinas está considerada

dentro del grupo de los alimentos cariogénicos.

Es así que, el cacao, ingrediente principal del chocolate y otros derivados,

ha sido siempre motivo de controversia, ya que permanecen

discrepancias en cuánto a su potencial cariogénico por la imagen popular

que siempre ha imperado y por otra parte, en cuánto a su potencial

cariostático que numerosos estudios han intentado demostrar mediante

experimentos de diversa índole. 10 – 16

Una de las más antiguas investigaciones relacionadas; el experimento de

Vipeholm (Suecia) en el año 1954, en el que un total de 436 pacientes

fueron estudiados durante 5 años, intentó establecer la cariogenicidad de

los alimentos con hidratos de carbono. En éste, un grupo control

consumía una dieta estándar mientras que el grupo experimental

consumía la misma dieta suplementada con diferentes tipos de hidratos

de carbono durante y entre las comidas; dentro de la realización de la

investigación se encontró qué el grupo de pacientes que recibió dosis

diarias de chocolate entre comidas obtuvo mayor conteo de caries que el



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grupo de control, pero a la vez, éstos produjeron menos cantidad de

caries que aquellos con un consumo de toffes y caramelos como

suplemento en su dieta. 10

Stralfors en el año l966, publicó un estudio en el cuál se incorporó en la

dieta de hámsteres extracto de cacao. Según informa su experimento el

chocolate redujo la ocurrencia de caries dental en los hámsteres a los

cuales se agregó el extracto comparados con el grupo de control.11

Rozeik y col. encontraron en sus experimentos con ratas blancas una cifra

considerablemente menor de caries dentales en los animales alimentados

con una dieta que contenía la ceniza de semilla de cacao que en los

animales del grupo control desprovistos de dicha dieta.12

Estas investigaciones condujeron a muchos autores a concluir que la

ceniza de la semilla de cacao es inhibidora de la formación de caries. Con

el tiempo, estudios más recientes han intentado esclarecer si existe una

verdadera relación entre los componentes del cacao y el efecto

cariostático. 13 – 16

En el año 2000 T. Ooshima y col intentaron demostrar la actividad

inhibitoria del extracto de la cáscara del haba del cacao en la caries dental

realizando estudios tanto “in Vitro” como en animales de experimentación.

Este trabajo aisló Streptococcus mutans y Streptococcus sobrinus

mediante caldos de cultivo selectivo e intentó examinar el efecto del



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extracto de cáscara del haba del cacao en el crecimiento celular de las

bacterias, así como la producción de ácido y adherencia celular de las

mismas. Los resultados arrojaron que el extracto del cacao inhibió el

crecimiento celular de Streptococcus mutans en un 69% y del

Streptococcus sobrinus en un 72%. Asimismo la producción de ácido se

vio afectada arrojando un resultado de un Ph de 4.2 en el grupo de

control contra un Ph de 4.5 en el grupo experimental a las 12 horas de

tiempo de incubación. La adherencia bacteriana de los microorganismos

se vio también disminuida mediante la evaluación de la síntesis de

glucanos insolubles necesarios para ésta, los resultados demostraron

una supresión del 15%. Para la investigación en animales se utilizó 75

ratas que fueron divididas al azar en 5 grupos para su estudio, a las

mismas les fue administrada una dieta usual y el aditamento de agua con

diversas concentraciones del extracto de la cáscara del haba del cacao.

Los resultados del experimento mostraron una inhibición de caries en

aquellos grupos que recibieron una concentración del extracto de cacao

mayor al 5%. 13

En el mismo año los autores realizaron una investigación similar pero esta

vez utilizaron extracto de la masa del cacao, el principal componente del

chocolate, en lugar de la cáscara de haba del anterior experimento. En

contraposición al anterior estudio se encontraron valores poco

significativos “in Vitro” en cuanto a la inhibición del crecimiento y

producción de ácido de los Streptococcus mutans, pero la investigación



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arrojó nuevos resultados de importancia. El extracto de la masa del

cacao redujo la hidrofobicidad de la superficie de las células del

Streptococcus mutans, así mismo, se obtuvo una reducción poco

significativa de la adhesividad de los mismos. En el experimento en

animales, esta vez la dieta se basó en extracto de masa de cacao en

conjunto con un 40% de sacarosa y agua potable, resultando en

reducción de la caries dental y acumulación de la placa en ratas

infectadas con Streptococcus sobrinus aunque no de manera significativa.

Esos resultados indicaron a los autores que el extracto de masa del cacao

posee cierto potencial anticariogénico pero no lo suficientemente fuerte

como para suprimir la actividad cariogénica de la sacarosa. 13, 14

En el año 2003, Kyoko Ito y col intentaron demostrar las propiedades

anticariogénicas del agua con extracto de cacao disuelto; el experimento

adicionó un extracto de polvo de cacao disuelto en agua a un modelo de

comida cariogénica y un chocolate blanco que contenía 35% de azúcar.

Se seleccionó aleatoriamente cuatro grupos de ratas, el primer grupo no

fue infectado por ser el grupo de control, los 3 grupos restantes fueron

infectados diariamente por 6 días consecutivos con 0.1ml con una

suspensión con 4 x 109 unidades formadoras de colonias de

Streptococcus sobrinus (resistentes a la estreptomicina) y 50ug de

estreptomicina para obtener una flora microbiana oral selectiva. Todos los

grupos fueron expuestos al extracto de polvo de cacao disuelto pero la

alimentación fue distinta para los grupos; el grupo de control y uno de los



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grupos infectados fueron alimentados con una dieta cariogénica libre del

chocolate blanco y los 2 grupos restantes infectados con la misma dieta

cariogénica y chocolate blanco adicionado. A los 56 días se analizaron los

resultados obteniendo puntajes de caries mediante una plantilla

preparada (escala de medición por conteo de lesiones cariosas). El grupo

de control obtuvo un puntaje de 10, el grupo infectado sin dieta de

chocolate blanco obtuvo un puntaje de 35, mientras que los grupos

infectados y que fueron alimentados con una dieta rica en chocolate

blanco obtuvieron un puntaje mayor a 10 y menor a 20 en la escala de

medición. Estos resultados llevaron a los autores a concluir que existe

una significativa reducción de caries en el chocolate a pesar del contenido

de azúcar del mismo.15

En un estudio similar por Wynfrey Wynn y col, los investigadores utilizaron

ratas albinas como animales de experimentación. Dividieron los animales

en 3 grupos, un grupo de control y 2 grupos experimentales. Al grupo de

control se le alimentó con una dieta con alto contenido de azúcar. Al

primer grupo experimental se le agregó 2mg de ceniza de haba de cacao

por cada 100mg de dieta básica. Al segundo grupo experimental se le

agregó además de los 2mg de ceniza de haba de cacao 20mg de

margarina vitaminada. Los resultados obtenidos en el experimento fueron;

para el primer grupo experimental la no existencia de reducción de caries

dental significativa, mientras que en el segundo grupo experimental se

obtuvieron resultados significativos de reducción de la misma. Este



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experimento llevó a la conclusión de los autores de que la grasa

adicionada a la dieta con contenido de cacao es la responsable de efectos

inhibitorios de caries dental. 12

En el año 2006, Rimondia y col realizaron un estudio que apuntaba a

determinar si los polifenoles del cacao podían interferir con la formación

del biofilm por Streptococcus mutans o el Streptococcus sanguinis, así

como en la formación de ácido del Streptococcus mutans. La actividad

antimicrobiana de los polifenoles fue determinada contra la especie

cariogénica (Streptococcus mutans) y la especie que ayuda a su

supervivencia (Streptococcus sanguinis) por análisis inhibitorio mínimo de

concentración. Los dímeros, tetrámeros y pentámeros de polifenol del

cacao inhibieron el crecimiento de los Streptococcus sanguinis, mientras

el crecimiento del Streptococcus mutans era inafectado. Sin embargo el

tratamiento previo de superficies con el pentámero de polifenol del cacao

redujo la formación del biofilm por el Streptococcus mutans en 4 y 24 hrs,

mientras que los efectos sobre S. sanguinis eran menores. En cambio, la

breve exposición de biofilms preformados al pentámero del polifenol no

tenía ningún efecto significativo. Además también se observó un efecto

reductor de la formación de ácido por el Streptococcus mutans en

condiciones similares. Los autores concluyeron que los polifenoles

pueden reducir la formación del biofilm por el Streptococcus mutans y el

S. sanguinis e inhiben la producción del ácido por el Streptococcus

mutans en ausencia de colonias preformadas. 16



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Como muestran los antecedentes existen ciertas discrepancias en el

campo en cuánto al efecto del cacao sobre la caries dental.

Al haber quedado demostrado por la ciencia médica las propiedades

benéficas del cacao y chocolate sobre la salud del ser humano, resulta

irónico que en el quehacer odontológico, pudiésemos estar privando a las

personas de dichas propiedades benefactoras, por la diatriba de sus

supuestos efectos cariogénicos.

Los derivados del cacao como el chocolate, polvo de cacao y otros,

poseen como materia básica el cacao mismo y por lo tanto gozan de las

propiedades básicas inherentes a su componente principal, además, de

las añadidas por sus elementos agregados y procesamiento; y por ello, al

ser incluidos en la diatriba mencionada y hacer extensiva su prohibición

de consumo también posiblemente incurriríamos en la interdicción de un

grupo de alimentos saludables para el ser humano con base en

aseveraciones infundadas, por lo cual, resultó necesario evidenciar

mediante un estudio propio de la región el efecto de los derivados del

cacao sobre el crecimiento de Streptococcus mutans (al ser considerados

éstos de gran importancia en el origen de la caries dental), a fin de

reafirmar o finiquitar las ideas en cuánto a sus efectos cariostáticos o

cariogénicos y dilucidar nuestras recomendaciones o censura hacia su

consumo no cayendo en una posible privación injusta de alimentos

beneficiosos para la salud oral y sistémica del individuo.



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La importancia científica del presente proyecto se basa en haber

generado en nuestro país mediante una investigación propia de la región,

el conocimiento del efecto de 04 derivados comerciales del cacao: cacao

en polvo, manteca de cacao, chocolate no azucarado y chocolate

azucarado; sobre el crecimiento de los Streptococcus mutans y la difusión

de este conocimiento para los fines antes mencionados. Además, con los

resultados obtenidos, el impacto generado podrá ser aplicado en la

producción de nuevos productos en nuestro medio, derivados del cacao,

que contribuyan al control de la caries y mejora de la salud general

además de satisfacer el gusto del paladar más exigente.

La realización del presente pretendió esclarecer el problema:

¿Cuál es el efecto del cacao en polvo, la manteca de cacao, el

chocolate no azucarado y el chocolate con azúcar sobre el

crecimiento “in Vitro” del Streptococcus mutans?

Para lo que se formuló la siguiente hipótesis:

El cacao en polvo, la manteca de cacao, el chocolate no

azucarado y el chocolate con azúcar inhiben el crecimiento de

Streptococcus mutans “in Vitro”.



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1.2. OBJETIVOS:

Los objetivos propuestos fueron los siguientes:

Objetivo General:

Determinar el efecto “in Vitro” de 04 derivados comerciales del

cacao sobre el crecimiento del Streptococcus mutans.

Objetivos específicos:

Determinar el efecto del cacao en polvo sobre el crecimiento del

Streptococcus mutans “in Vitro”.

Determinar el efecto de la manteca de cacao sobre el crecimiento

de Streptococcus mutans “in Vitro”.

Determinar el efecto del chocolate no azucarado sobre el

crecimiento de Streptococcus mutans “in Vitro”.

Determinar el efecto del chocolate azucarado sobre el crecimiento

de Streptococcus mutans “in Vitro”.

Comparar el efecto del cacao en polvo, la manteca de cacao, el

chocolate no azucarado y el chocolate azucarado sobre el

crecimiento de Streptococccus mutans “in Vitro”.



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II. MATERIAL Y MÉTODOS

2.1. TIPO Y ÁREA DE ESTUDIO:

La presente investigación es de tipo Experimental y, básica de acuerdo a

su orientación.

El área de estudio la constituyeron los ambientes de la Sección de

Microbiología Médica de la Facultad de Ciencias Médicas de la

Universidad Nacional de Trujillo durante los meses de octubre y

noviembre del 2008.

2.2. DEFINICIÓN DE LA POBLACIÓN MUESTRAL:

La población muestral fue creada de acuerdo a los parámetros

microbiológicos experimentales revisados. 18

2.3. UNIDAD DE ANÁLISIS

La unidad de análisis la constituyó el diámetro de halo inhibitorio de

los discos de difusión.

2.4. CRITERIOS DE INCLUSIÓN

Placas petri con el caldo de cultivo agar sangre que fueron

sometidas a un proceso de esterilización.

2.5. CRITERIOS DE EXCLUSIÓN

Placas petri que hubiesen presentado algún tipo de daño o



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rajadura en su estructura durante el proceso de esterilización.

Placas petri que se hubiesen contaminado accidentalmente luego

del proceso de esterilización.

Aquellas placas petri cuyo resultado en el proceso de esterilización

hubiese sido dudoso.

2.6. TAMAÑO DE LA MUESTRA: Se determinó un tamaño de muestra experimental de 27 placas petri; 9

placas petri por cada concentración, las operaciones se muestran en el

anexo número uno y siguiendo las indicaciones del autor.17

2.7. DEFINICIÓN DE VARIABLES:

2.7.1 DERIVADOS COMERCIALES DEL CACAO:

Productos comerciales con modificación de la forma o propiedades del

cacao y adición de algunas sustancias, como la manteca del cacao, el

chocolate u otros.

CACAO EN POLVO:

El cacao en polvo es el producto comercial que resulta de la

fermentación y el secado de las semillas (habas o maracas) del fruto

del árbol del cacao y su procesamiento industrial. Se utilizó en el

presente trabajo el producto comercial: Cocoa Hersheys®.

MANTECA DE CACAO: La manteca del cacao es el producto comercial que resulta de la

industrialización de la materia grasa que contiene la pasta de cacao.



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Se utilizó en el presente la manteca de cacao Mycryo.

CHOCOLATE AZUCARADO:

Aquel derivado del cacao que se obtiene de la mezcla de azúcar con

pasta de cacao y manteca de cacao y su industrialización. Se utilizó

en el presente trabajo el chocolate azucarado Prime Peruvian Dark

Chocolate de la marca comercial Winters®.

CHOCOLATE NO AZUCARADO: Chocolate que usa para su edulcoración elementos distintos al

azúcar. Para la presente investigación se utilizó el chocolate “Non

sugar free” de la marca comercial Cavalier® que emplea para su

edulcoración xilitol.

Los productos comerciales fueron elegidos por haber sido los

que contienen el más alto contenido de Cacao y pureza en el

mercado.

2.7.2. STREPTOCOCCUS MUTANS:

Cepa de Streptococcus mutans procedentes del laboratorio de

microbiología de la Universidad Nacional de Trujillo, la cepa que se

utilizó corresponde a la cepa 2657263 ATCC.



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2.8. OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES:

Cuadro Nº 01: Operacionalización De Variables

Variable Indicador Tipo Escala

Cacao en polvo

Exposición al cacao No exposición al

cacao

Independiente Cualitativa Nominal

Manteca de Cacao

Exposición a la

manteca de cacao

No exposición a la manteca de cacao


Chocolate no azucarado

Exposición al chocolate no azucarado

No exposición al

chocolate no azucarado


Chocolate azucarado

Exposición al

chocolate azucarado

No exposición al chocolate azucarado


Crecimiento de Streptococcus mutans

Inhibición y cantidad de efecto inhibitorio (diámetro de halo

inhibitorio)

No inhibición (halo inhibitorio = 0)

Dependiente Cuantitativa

discreta Dependiente Cuantitativa

discreta

De razón

De razón

DE

RIV

AD

OS

CO

ME

RC

IALE

S D

EL

CA

CA

O



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2.9. DISEÑO EXPERIMENTAL

El diseño del presente proyecto de investigación es de tipo

experimental. El experimento siguió un modelo de diseño

completamente aleatorizado que se muestra en el siguiente esquema:

Esquema Nº 01: Esquema del diseño experimental.

MC

E3

E4

C

E1

E2

E32

E42

C2

E12

E22

E33

E43

C3

E13

E23

E31

E41

C1

E11

E21

E34

E44

C4

E14

E24

C-A

C+A

A

CP

H2O

18h

18h

18h

18h

18h

24h

24h

24h

24h

24h

48h

48h

48h

48h

48h

72h

72h

72h

72h

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Donde:

Grupo 1: Estuvo representado por E1; constituyó el área de las placas

petri con cultivo de Streptococcus mutans a la cual le fueron aplicados los

discos de la variable independiente cacao en polvo y en el cuál se

efectuaron observaciones a las 18, 24, 48 y 72 horas.



discos de la variable independiente manteca de cacao y en el cuál se




discos de la variable independiente chocolate no azucarado y en el cuál

se efectuaron observaciones a las 18, 24, 48 y 72 horas.



discos de la variable independiente chocolate azucarado y en el cuál se


Grupo 5: Estuvo representado por C; constituyó el área de las placas


discos de la variable control (agua bidestilada) y en el cuál se efectuaron

observaciones a las 18, 24, 48 y 72 horas.



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2.10. PROCEDIMIENTO Y CAPTACIÓN DE INFORMACIÓN

El procedimiento de este experimento se realizó teniendo como base la

prueba de susceptibilidad de difusión en discos de Bauer – Kirby.18, 19, 20

1. OBTENCIÓN DE LA CEPA

El Streptococcus mutans ATCC 2652263 fue obtenido del cepario

del Laboratorio de la Sección de Microbiología de la Facultad de

Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.

2. PREPARACIÓN DE LA CEPA

Una vez obtenida la cepa, ésta se cultivó en tubos de ensayo con

tapa rosca conteniendo el medio Soya tripticasa, incubándose a 37

ºC con el fin de obtener colonias jóvenes. Luego de 24 horas de

cultivadas se les agregó solución salina estéril, hasta obtener una

turbidez semejante al tubo número 1 de la escala de Mac Farland

(Anexo 05 Fotografía Nº 01). Luego, los tubos con la bacteria

estudiada fueron girados entre las manos durante 30 segundos

antes de proceder a su sembrado con el fin de haber logrado una

distribución adecuada de los microorganismos.

3. SEMBRADO

Se utilizaron hisopos estériles, los cuales, luego de ser embebidos

con la cepa preparada de Streptococcus mutans y a una distancia

de 10 cm de la llama del mechero se emplearon para el sembrado



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en placas petri, conteniendo Agar Sangre, hisopando

uniformemente sobre toda la superficie del agar y girando cada

placa 30 grados por 10 veces aproximadamente (Anexo 05

Fotografía Nº 02). Las placas recién sembradas fueron colocadas

dentro de una estufa a 37 ºC de temperatura durante 10 minutos.

4. PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD

Para la prueba de susceptibilidad, se prepararon diluciones al

5%, 10 % y 15% teniendo como marco referencial las

investigaciones previas para este proceso de investigación.

Las diluciones utilizaron como soluto: cacao en polvo,

manteca de cacao, chocolate no azucarado y chocolate

azucarado de cada una de las tres concentraciones

respectivamente, utilizando agua destilada como diluyente; y a

una temperatura de 45º C para conseguir una fase uniforme

sin modificación de las propiedades de cada soluto. (Anexo 05

Fotografía Nº 03).

Se utilizó el método de difusión en discos. Se prepararon

discos de papel de filtro estériles, los cuales se sumergieron

dentro de cada dilución de los subgrupos de estudio, para el

grupo de control los discos fueron sumergidos en agua

destilada estéril q.p. (Anexo 05 Fotografía Nº 04).

Posteriormente, con una aguja estéril, los discos fueron

colocados sobre los cultivos de Streptococcus mutans en las



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placas petri previamente preparadas (Anexo 05 Fotografía Nº

05) y utilizando la disposición de los discos que se muestra

mediante gráfico en el anexo número 02. El total de Placas

Petri empleadas fue de 9, según el tamaño de muestra

obtenido en el cálculo estadístico (anexo 1); en

concentraciones de 5, 10 y 15 por ciento; lo que arrojó un total

de 27 placas petri con 135 discos de inhibición. (Anexo 05

Fotografía Nº 06).

A continuación las placas petri se incubaron a 37ºC en

microaerobiosis utilizando la Jarra Gas-Pack (con el método

de la vela, mediante el cual se procuró obtener un ambiente

aproximado de 5 a 10 % de CO2). (Anexo 05 Fotografía Nº

07).

Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10

cm. de la llama de un mechero.

5. Lectura y Registro:

Pasadas las 18, 24, 48 Y 72 hrs. se procedió a la observación

de las placas petri examinando los grupos experimentales y el

grupo de control. (Anexo 05 Fotografía Nº 08).

Los discos que presentaron la generación de un halo alrededor

de los mismos fueron considerados con inhibición de

crecimiento bacteriano, contabilizados como tal y anotados en

el anexo número 03.



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Los discos que presentaron crecimiento bacteriano sobre ellos

fueron considerados sin inhibición de crecimiento bacteriano,

contabilizados como tal y anotados en el anexo número 03.

Además se midió el diámetro del halo inhibitorio de cada disco

de sensibilidad (mayor inhibición a mayor diámetro de disco),

incluyendo el área del disco de papel de filtro y los datos se

registraron en el anexo número 04 para su evaluación e

interpretación.

Del registro total se evaluó por medio de análisis de promedios

de halos inhibitorios en qué período se generó la mayor

inhibición y dichos valores fueron considerados en el análisis e

interpretación estadística.



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III. RESULTADOS

Los resultados de la presente investigación son presentados en cuadros

del 1 al 6.

En el cuadro N° 01 apreciamos según la prueba exacta de Fisher que:

El derivado cacao en polvo; representado por E1, presentó una diferencia

significativa (p< 0.05) en la presencia de inhibición de crecimiento de los

Streptococcus mutans comparado con el grupo de control a una

concentración del 5 y 15 por ciento; asimismo, presentó una diferencia

altamente significativa (p< 0.001) en la presencia de inhibición de

crecimiento de Streptococcus mutans comparado con el grupo control (C)

a la concentración del 10%.

El derivado manteca de Cacao; representado por E2, presentó una

diferencia altamente significativa (p< 0.001) en la presencia de inhibición

de crecimiento de los Streptococcus mutans comparado con el grupo de

control (C) en todas las concentraciones (5, 10 y 15 por ciento).

El derivado chocolate no azucarado; representado por E3, presentó una

diferencia muy significativa (p< 0.01) en la presencia de inhibición de

crecimiento bacteriano comparado con el grupo de control (C) en las

concentraciones del 5 y 10 por ciento, y una diferencia altamente

significativa (p< 0.001) a la concentración del 15 por ciento.

El derivado chocolate azucarado; representado por E4, presentó una

diferencia significativa (p< 0.05) en la presencia de inhibición de

crecimiento bacteriano comparado con el grupo de control (C) en las

concentraciones del 5 y 10 por ciento, y una diferencia altamente



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significativa (p< 0.001) a la concentración del 15 por ciento.

Ningún disco del grupo de control presentó generación de halo inhibitorio

positiva por lo tanto no presentó inhibición bacteriana alguna.

En el cuadro N° 02, al aplicar una prueba de promedios marginales para

el derivado cacao en polvo, representado por E1, encontramos qué,

presentó un promedio marginal de 4,44 mm. de sus diámetros de halo

inhibitorio de crecimiento de Streptococcus mutans, esto a una

concentración del 5 por ciento, 8.89 mm. al 10 por ciento y 3.5 mm. al 15

por ciento. Por haber presentado este derivado una mayor significancia

mediante la prueba de Fisher a una concentración del 10%, se consideró

el valor de 8,89 mm. como su diámetro promedio de inhibición de

crecimiento de Streptococcus mutans.

En el cuadro N° 03, al aplicar una prueba de promedios marginales para

el derivado manteca de cacao (E2); encontramos qué, presentó un

promedio marginal de 12.56 mm. de sus diámetros de halo inhibitorio de

crecimiento bacteriano a una concentración del 5 por ciento, 15.63 mm. al

10 por ciento y 19.22 mm. al 15 por ciento. Por haber presentado este

derivado una alta significancia en todas sus concentraciones, se

consideró el valor de 15.806 mm. como su diámetro promedio de

inhibición de crecimiento de Streptococcus mutans.

En el cuadro N° 04, el derivado chocolate no azucarado (E3), al aplicar

una prueba de promedios marginales, presentó un promedio marginal de



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5.56 mm. de sus diámetros de halo inhibitorio de crecimiento bacteriano,

esto a una concentración del 5 por ciento, 6.19 mm. al 10 por ciento y

9.67 mm. al 15 por ciento. Por haber presentado este derivado una mayor

significancia en sus resultados a una concentración del 15 por ciento, se

consideró el valor de 9.67 mm. como su diámetro promedio de inhibición

de crecimiento de Streptococcus mutans.

En el cuadro N° 05, el derivado chocolate azucarado, representado por

E4, presentó un promedio marginal de 3.5 mm. de sus diámetros de halo

inhibitorio de crecimiento bacteriano, esto a una concentración del 5 por

ciento, 3.66 mm. al 10 por ciento y 8.94 mm. al 15 por ciento. Por haber

presentado este derivado una mayor significancia en sus resultados a una

concentración del 15 por ciento, se consideró el valor de 8.94 mm. como

su diámetro promedio de inhibición de crecimiento de Streptococcus

mutans.

En el cuadro N° 05, el derivado chocolate azucarado, representado por

E4, presentó un promedio marginal de 3.5 mm. de sus diámetros de halo

inhibitorio de crecimiento bacteriano a una concentración del 5 por ciento,

3.66 mm. al 10 por ciento y 8.94 mm. al 15 por ciento. Por haber

presentado este derivado una mayor significancia en sus resultados a una

concentración del 15 por ciento, se consideró el valor de 8.94 mm. como

su diámetro promedio de inhibición de crecimiento de Streptococcus

mutans.



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En el cuadro N° 06 A, al aplicar el análisis de Varianza para un diseño

factorial completo al azar, se aprecia en las pruebas F que al menos una

concentración y derivado del cacao, presentan diferencia altamente

significativa comparados con las demás concentraciones y derivados

respectivamente. Con dicha información; en el cuadro N° 06 B, se

promedió a realizar un análisis de Duncan; obteniendo:

Al analizar las concentraciones; se obtuvo que la concentración del 5 por

ciento logró diferir significativamente de las otras 2, asimismo, las

concentraciones del 10 y 15 por ciento, no presentan una diferencia

significativa entre ellas.

Al analizar los tipos de derivado, se encontró que el promedio marginal de

diámetro de inhibición de crecimiento de Streptococcus mutans del

derivado manteca de cacao; representado por E2, difiere

significativamente del resto de derivados comerciales del cacao,

asimismo, el promedio marginal de los diámetros de inhibición de

crecimiento bacteriano del cacao en polvo, chocolate no azucarado y

chocolate azucarado no presentan diferencia significativa entre ellos.



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CUADRO N° 01

PRUEBA EXACTA DE FISHER

Significancia:

Si p > 0.05; No hay.

Si p < 0.05; Si hay.

Si p < 0.01; Existe muy significativa

Si p < 0.001; Existe altamente significativa

5% 10% 15%

Grupo Inhibición

p Grupo Inhibición

p Grupo Inhibición

p SI NO SI NO SI NO

C 0 9 p = 0.0147 p < 0.05|

C 0 9 p = 0.00021 p < 0.001

C 0 9 p = 0.0412 p < 0.05 E1 5 4 E1 8 1 E1 4 5

C 0 9 p = 0.000021 p < 0.001

C 0 9 p = 0.000021 p < 0.001

C 0 9 p = 0.000021 p < 0.001 E2 9 0 E2 9 0 E2 9 0

C 0 9 p = 0.0045 p < 0.01

C 0 9 p = 0.0045 p < 0.01

C 0 9 p = 0.00021 p < 0.001 E3 6 3 E3 6 3 E3 8 1

C 0 9 p = 0.0412 p < 0.05

C 0 9 p = 0.0412 p < 0.05

C 0 9 p = 0.000021 p < 0.001 E4 4 5 E4 4 5 E4 9 0



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CUADRO N° 02

PROMEDIOS MARGINALES E1

E1 5%

(mm.)

E1 10%

(mm.)

E1 15%

(mm.)

01 7.5 9 10.5

02 0 0 6

03 7.5 11 6

04 0 8 0

05 8 11.5 0

06 8 8 0

07 9 9 9

08 0 14 0

09 0 9.5 0

Promedio marginal 4.444444 8.888889 3.5

Significancia p = 0.0147

p < 0.05 p = 0.00021 p < 0.001

p = 0.0412 p < 0.05

Significancia:





Variable

N°placa



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CUADRO N° 03


E2 5%

(mm.)

E2 10%

(mm.)

E2 15%

(mm.)

01 10.5 10 22

02 8 16 11.5

03 15 11 18.5

04 10 8.75 20

05 15.5 16 22

06 15 13.5 24.5

07 15 16 23.5

08 10.5 31.5 15

09 13.5 18 16


Promedio final 15.806


p < 0.001 p = 0.000021

p < 0.001 p = 0.000021

p < 0.001

Significancia:




Si p < 0.001; Existe altamente significativa.

Variable

N°placa



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CUADRO N° 04


E3 5%

(mm.)

E3 10%

(mm.)

E3 15%

(mm.)

01 7 7 11.5

02 0 0 11.5

03 8 8.5 10

04 0 0 9

05 8.5 0 12.5

06 9 12.5 0

07 10.5 9.5 13.5

08 7 8.25 11

09 0 10 8



p < 0.01 p = 0.0045 p < 0.01

p = 0.00021 p < 0.001

Significancia:





Variable

N°placa



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CUADRO N° 05


E4 5%

(mm.)

E4 10%

(mm.)

E4 15%

(mm.)

01 7 0 11

02 0 0 9

03 0 8 10

04 0 0 8.5

05 8 0 8

06 0 0 8

07 9.5 10 10

08 7 7 10

09 0 8 6



p < 0.05 p = 0.0412 p < 0.05

p = 0.000021 p < 0.001

Significancia:





Variable

N°placa



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CUADRO N° 06

ANÁLISIS DE VARIANZA PARA UN DISEÑO FACTORIAL COMPLETO AL AZAR

Significancia:





Fuente de variación

Suma de cuadrados gl

Cuadrado Medio F p

Concentración 263.310 2 131.655 7.124 0.001 Derivado Cacao 1980.792 3 660.264 35.726 0.000 Concentración * Derivado Cacao 346.792 6 57.799 3.127 0.008

Error 1774.194 96 18.481 Total 4365.088 107



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CUADRO N° 07

ANÁLISIS DE DUNCAN

Y

Significancia:





Concentración N Alfa 0.05

1 2

5% 36 6.514

10% 36 8.597

15% 36 10.333

p 1.000 .090

Tipo Chocolate

E4 27 5.370

E1 27 5.611

E3 27 7.139

E2 27 15.806

p 0.157 1.000



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IV. DISCUSIÓN

Resultados de experimentos previos al presente11-16, demuestran que

existe un efecto inhibitorio de caries en el cacao y sus componentes, pero

ninguno efectuó un experimento utilizando como agentes de estudio

derivados comerciales del mismo; el presente trabajo al hacerlo, reitera

los conocimientos de los estudios previos acerca de las propiedades

inhibitorias de crecimiento bacteriano que posee el cacao y además

ofrece el conocimiento de que dichas propiedades se mantienen aún

después de su procesamiento industrial, específicamente, la propiedad

inhibitoria sobre el crecimiento de los Streptococcus mutans.

Los estudios realizados por Wynfrey Wyn y col 12 encontraron en sus

investigaciones que la grasa adicionada al cacao es la responsable de

sus efectos inhibitorios sobre la caries dental, en relación a dichas

conclusiones, el presente trabajó encontró cierta similitud en cuánto a qué

el derivado manteca de cacao (de naturaleza grasa) fue el que presentó

un efecto inhibitorio altamente significativo comparado con el resto de los

otros derivados, con un efecto de más del doble respecto a los promedios

de diámetros de halo inhibitorio de los otros derivados (2.62 a 1).

En otros estudios previos al presente trabajo de investigación13-15, se

encuentra una contraposición de ponencias en cuanto a los efectos

anticariogénicos del chocolate en ausencia o presencia de azúcares. En

la presente investigación se encontró tras aplicar una prueba de Duncan



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qué, tanto el chocolate no azucarado como el chocolate azucarado

presentaron un efecto inhibitorio sobre el crecimiento de los

Streptococcus mutans, además ambos efectos fueron similares entre sí

por no presentar diferencia significativamente estadística entre los

promedios de sus diámetros de halo inhibitorio. Estos resultados nos

llevarían a cierta inclinación por los resultados de las investigaciones de

Kyoto ito y col. 15, los cuales aseveran que el chocolate posee un efecto

anticariogénico aún en presencia de azúcar; no obstante, no podríamos

censurar por completo las aseveraciones de T. Ooshima y col.13,14, las

que indican que el chocolate posee cierto potencial anticariogénico

aunque no suficiente como para contrarrestar el efecto cariogénico del

azúcar, ya que sus investigaciones se realizaron en animales de

experimentación mientras que los de la presente fueron en condiciones “in

Vitro”, pero si podemos afirmar que a pesar del contenido de azúcar, el

chocolate azucarado posee cierto efecto inhibitorio contra el crecimiento

de los Streptococcus mutans en condiciones experimentales de primer

grado.

En contraposición a los experimentos de Rimondia y col.16, quienes

afirman que el cacao puede reducir la formación del biofilm por

Streptococcus mutans sólo en ausencia de colonias preformadas, la

presente investigación obtuvo valores de diámetro inhibitorio mayores a

las 72 horas de su observación, demostrando un efecto de inhibición de

crecimiento que se propagaba hacia las colonias de Streptococcus

mutans formadas previamente desde su primera incubación.



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Debe tenerse en consideración que el diámetro inhibitorio antibacteriano

que generan las sustancias no sólo depende de su potencia sino de su

capacidad de difusión, por lo cuál, los diámetro de inhibición de

crecimiento de Streptococcus mutans generados en el presente, no sólo

reflejan la fuerza antibacteriana del derivado del cacao utilizado, sino que

conjuntamente reflejan la capacidad de difusión del derivado del cacao en

materia a través del medio agar sangre conejo. 18-20



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V. CONCLUSIONES

1. Los 04 derivados comerciales del cacao: cacao en polvo, la

manteca de cacao, el chocolate no azucarado y el chocolate con

azúcar inhiben el crecimiento de Streptococcus mutans “in Vitro”.

2. El cacao en polvo inhibe el crecimiento “In Vitro” de Streptococcus

mutans en un promedio de 8.89 mm. de halo inhibitorio.

3. La manteca de cacao inhibe el crecimiento “In Vitro” de

Streptococcus mutans en un promedio de 15.806 mm. de halo

inhibitorio.

4. El chocolate no azucarado inhibe el crecimiento “In Vitro” de


inhibitorio.

5. El chocolate con azúcar inhibe el crecimiento “In Vitro” de


inhibitorio.

6. El cacao en polvo, el chocolate no azucarado y el chocolate con

azúcar poseen una cantidad de efecto de inhibición “In Vitro” de

crecimiento de Streptococcus mutans similar, mientras que la



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manteca de cacao posee un efecto 2.62 veces mayor a los otros

derivados comerciales.



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VI. RECOMENDACIONES

Según el presente estudio se recomienda:

En cuanto a las concentraciones del 5, 10 y 15 por ciento que se

emplearon en el presente trabajo; cabe resaltar qué, se encontró

que a partir de una concentración del 10 por ciento no existe

diferencia significativa en los resultados obtenidos a

concentraciones mayores (15 por ciento) por lo cuál para futuras

investigaciones podría establecerse la concentración del 10 por

ciento como óptima para efectos de experimentación.

Considerando los resultados positivos en cuánto a los efectos

inhibitorios de los derivados del cacao sobre el crecimiento de los

Streptococcus mutans en el presente trabajo que es de

experimentación de primer grado, se recomienda efectuar estudios

experimentales de segundo y tercer grado para poder reforzar la

imagen anticariogénica de los derivados del cacao.



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39

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Bhaskar. S. N. Patología bucal. Tercera ed. Buenos Aires,

Argentina. Editorial El Ateneo; 1977. p 107.

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Money. Operatoria dental. Tercera ed. Buenos aires, Argentina.

Editorial Panamericana; 1999. p 239.

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moderno; 1982. p 19 – 30.

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7. Heiss C, Kleinbongard. P, Dejam A, Perré S, Schroeter H, Sied H.

Acute consumption of flavanol- rich cocoa and the reversal of

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http://www.worldcocoafoundation.org/info-center/document-

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www.minag.gob.pe/dgpa1/ARCHIVOS/cacao_doc4.pdf

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43

17. Steel R, Tarnie J. Bioestadística: Principios y procedimientos.

Traducción Ricardo Martínez. 2da Edición. EE.UU. Editorial Mc

Graw-Hill; 1985. p 116.

18. Koneman EW, Allen SD, Janda WM, Schreckenberger PC, Winn

WC. Diagnóstico Microbiológico, Quinta ed. Buenos Aires,

Argentina. Editorial Médica Panamericana; 1999. p 610 -615.

19. Sonnenwith L, Jareltt L. Métodos y Diagnóstico de Laboratorio

Clínico. Tomo II. Octava ed. Buenos Aires: Panamericana; 1983.

p 215 -255

20. Brooks G, Batel J, Morse S. Microbiología Médica de Jawest,

Meldick y Adelberg. 16ª ed. Mexico: El Manual Moderno; 1999. p

310 -351



OFICI

NA D

E SI

STEM

AS E

INFO

RMAT

ICA

44

VIII. ANEXOS

ANEXO 01

OBTENCIÓN DEL TAMAÑO DE MUESTRA

2

222/ )(

E

SZZn

Dónde:

96.12/ Z Usando un coeficiente de confiabilidad 05.0

84.0Z Usando un coeficiente de confiabilidad 20.0

Se asume que S = E por no haber estudios anteriores.

Entonces:

22/ )( ZZn

2)84.096.1( n --

884.7 n

Obtención de n final:

)12

32(

gl

glnn f Donde: 1 ngl

Entonces:

)114

314(8

fn

906.9)

15

17(8 fn

Con estos datos el tamaño de muestra por cada grupo será de 9.



OFICI

NA D

E SI

STEM

AS E

INFO

RMAT

ICA

45

ANEXO 02

DISPOSICIÓN DE LOS DISCOS DE INHIBICIÓN EN

LAS PLACAS PETRI

C

E2

E4

E3

E1



OFICI

NA D

E SI

STEM

AS E

INFO

RMAT

ICA

46

ANEXO 03

FICHA DE REGISTRO DE ACTIVIDAD INHIBITORIA

Placa Número:..............

Cepa: ...................................

Concentración: .....................................

Medio De Cultivo: ........................................................

Inclusión De Las Variables: Fecha: …/…./.….

Hora: …....………

Horas transcurridas después de la inclusión de las variables:

Horas: ……………..

Variables

Inhibición

Cacao en

polvo

Manteca

de

Cacao

Chocolate

no

azucarado

Chocolate

azucarado

Agua

destilada

Presencia de

Inhibición

Ausencia

de

Inhibición



OFICI

NA D

E SI

STEM

AS E

INFO

RMAT

ICA

47

ANEXO 04

FICHA DE REGISTRO DE DIÁMETRO DE INHIBICIÓN

Placa Número:..............

Cepa: ...................................

Concentración: .....................................

Medio De Cultivo: ........................................................

Inclusión De Las Variables: Fecha: …/…./.….

Hora: ………….

Horas transcurridas después de la inclusión de las variables:

Horas: ……………..

Diámetro del Halo en mm.

PROMEDIO

dm. DM

CACAO EN

POLVO

MANTECA DE

CACAO

CHOCOLATE NO

AZUCARADO

CHOCOLATE

AZUCARADO

AGUA

DESTILADA



OFICI

NA D

E SI

STEM

AS E

INFO

RMAT

ICA

48

ANEXO 05

FOTOGRAFÍAS

FOTOGRAFÍA N° 01

Comparación de la turbidez de los tubos con cepas de Streptococcus mutans recién replicadas con la escala N° 01 de Mac Farland



OFICI

NA D

E SI

STEM

AS E

INFO

RMAT

ICA

49

ANEXO 05

FOTOGRAFÍAS

FOTOGRAFÍA N° 02

Sembrado de las cepas de Streptococcus mutans en las placas petri con el caldo de cultivo agar sangre conejo



OFICI

NA D

E SI

STEM

AS E

INFO

RMAT

ICA

50

ANEXO 05

FOTOGRAFÍAS

FOTOGRAFÍA N° 03

Diluciones de los solutos de los 04 derivados de cacao en tubos de ensayo a concentraciones del 5, 10 y 15 por ciento



OFICI

NA D

E SI

STEM

AS E

INFO

RMAT

ICA

51

ANEXO 05

FOTOGRAFÍAS

FOTOGRAFÍA N° 04

Impregnado de los discos de difusión en placas petri con las diluciones de los 04 derivados comerciales del cacao



OFICI

NA D

E SI

STEM

AS E

INFO

RMAT

ICA

52

ANEXO 05

FOTOGRAFÍAS

FOTOGRAFÍA N° 05

Colocación de los discos de inhibición en las placas petri ya sembradas con Streptococcus mutans



OFICI

NA D

E SI

STEM

AS E

INFO

RMAT

ICA

53

ANEXO 05

FOTOGRAFÍAS FOTOGRAFÍA N° 06

Número total de placas petri (27) sembradas y con los discos de inhibición presentes



OFICI

NA D

E SI

STEM

AS E

INFO

RMAT

ICA

54

ANEXO 05

FOTOGRAFÍAS

FOTOGRAFÍA N° 07

Colocación de las placas petri preparadas en un medio de microanaerobiosis con la Jarra Gas-Pack



OFICI

NA D

E SI

STEM

AS E

INFO

RMAT

ICA

55

ANEXO 05

FOTOGRAFÍAS

FOTOGRAFÍA N° 08

Observación de halos de inhibición en una placa petri preparada a las 72 horas de su incubación



OFICI

NA D

E SI

STEM

AS E

INFO

RMAT

ICA

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