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Salus online 12-3 Diciembre 2008 Las muestras en toxicología forense p. .

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Las muestras en toxicología forense. Importancia de la cadena de custodia. Aura Palencia, Gabriela Romero, Ewwa Dubaj de Danielle.

RESUMEN Las ciencias forenses se definen en términos generales como la aplicación de las ciencias a los asuntos legales. Dentro de estas ciencias se encuentra la toxicología forense, la cual tiene como finalidad el hallazgo de posibles tóxicos implicados en sucesos con consecuencias legales, por lo que requiere de un laboratorio con características especiales tanto por el equipo humano como por la tecnología con la que debe estar dotado. Este estudio presenta una revisión de los aspectos más importantes relacionados con el manejo de las muestras para el análisis forense así como lo inherente a la cadena de custodia, a través de la revisión de los protocolos actualizados de diversas organizaciones e instituciones a nivel mundial dedicadas al estudio de las ciencias forenses, tales como: The Internacional Association for Forensic Toxicologists y American Academy of Forensic Sciences. En Venezuela, el Cuerpo de Investigaciones Científicas, Penales y Criminalísticas (CICPC) es el organismo encargado de la implementación de la cadena de custodia y posterior análisis de las muestras de implicación forense, para lo que solo cuenta con el “Código de Instrucción Médico-Forense” del año 1878, el cual carece de aspectos relevantes y necesarios para la estandarización del trabajo en el laboratorio toxicológico forense y para el establecimiento de criterios definidos sobre aspectos de especial interés como la cadena de custodia, por lo que es necesaria su adaptación progresiva a los nuevos tiempos y a la tecnología disponible en la actualidad. Palabras clave: toxicología forense, laboratorio toxicológico forense, sistemática analítica toxicológica, muestras biológicas post-mortem.

ABSTRACT Forensic toxicology samples. Importance of the custody chain. In general terms, Forensic Sciences are defined as the application of sciences to legal issues. Forensic toxicology is one of such sciences, having the purpose of finding possible toxic substances involved in events with legal consequences; therefore, it requires a laboratory with special characteristics in terms of both human resources and technology equipment. This study presents a review of the most important aspects related to the handling of samples for forensic analysis, as well as to the custody chain, through a review of updated protocols of various organizations and institutions, world-wide, devoted to the study of forensic sciences, such as: The International Association for Forensics Toxicologists, and the American Academy of Forensic Sciences. In Venezuela, the Cuerpo de Investigaciones Científicas, Penales y Criminalísticas (CICPC) is the body in charge of implementing the custody chain and later analysis of

REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA

Departamento de Ciencias Básicas de la Escuela de Bioanálisis, Pabellón 5 (UTM), Bárbula, Universidad de Carabobo. Código postal 2005. Venezuela Correspondencia: A. Palencia E-mail: [email protected]. Tel.: +58. 241.866.4329 Recibido: Mayo 2007 Aprobado: Septiembre 2008


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the samples with forensic implications, relying only on the Código de Instrucción Médico Forense” (The Medical Forensic Instructional Code) dated 1878, which lacks relevant and necessary aspects for procedure standardization in the forensic toxicology laboratory, and for establishing definite criteria on aspects of special interest such as the custody chain. For this reason, its progressive revision in accordance with the present times and technology is necessary. Key words: forensic toxicology laboratory, systematic analytical toxicology, post-mortem biological samples.

INTRODUCCIÓN

La palabra forense proviene del lat ín forenses (foro de la corte imperial de Roma) y se ut i l iza en la actual idad para referirse a todo aquel hecho o profesión que interviene en el foro o sala de just ic ia, para cooperar en y con la administración de just ic ia, mejorando el ejercic io del derecho (1, 2). Mediante la apl icación de las diferentes ramas de las ciencias forenses, se pretende examinar las evidencias encontradas en la escena de un del ito, para real izar aportes a las pruebas que los expertos deben presentar ante un tr ibunal. Dentro de estas ciencias se encuentra la toxicología forense, que no es más que la apl icación de todos los métodos de estudio y anál is is toxicológico con propósitos legales (3). Se dedica al examen de especimenes tomados de un individuo fallecido, cumpliendo con una cadena de custodia que garantice la integridad, conservación e inalterabi l idad de las evidencias f ísicas entregadas al laborator ios, para detectar, ident if icar y cuantif icar compuestos tóxicos o sus metabol itos en el cadáver, lo que permite esclarecer la causa de la muerte. En la actual idad, aparte de estar al servicio de la just ic ia, la toxicología forense se ha abierto a otros campos de trabajo acordes con los problemas legales que se plantean en nuestra sociedad tales como la contaminación ambiental, el análisis de drogas en el mercado i l ícito y el estudio del consumo reciente y del consumo crónico de esas sustancias (4). El laboratorio de toxicología forense presenta característ icas especiales tanto en el equipo humano como en la tecnología de la que debe estar dotado. En el se desarrollan una gran cant idad de métodos analít icos para poner de manif iesto la presencia o ausencia de sustancias tóxicas o potencialmente tóxicas en las muestras forenses. La investigación químico toxicológica en casos post-mortem es el campo de trabajo donde la toxicología forense se enfrenta al reto de ser capaz de detectar un mayor número de sustancias, lo que también se aplica en casos de intoxicaciones (4). El conocimiento de la estadíst ica sobre las sustancias de interés médico legal f recuentemente relacionadas con causas de muerte, permiten or ientar con mayor ef iciencia la investigación forense. En tal sent ido, un estudio realizado por el Laboratorio de Toxicología y Química Legal de la UNAM en muestras post-mortem revela que, en orden descendente, las sustancias en mayor número detectadas fueron: etanol, monóxido de carbono, plaguicidas, psicofármacos, drogas de abuso i l íc itas, hidrocarburos, analgésicos, y otros (5).


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El laboratorio toxicológico juega un papel importante en el análisis de drogas de abuso, alcohol y medicamentos psicotrópicos, por su condición de modif icadores de la conducta, capacidad de percepción, estado de alerta, y otras actuaciones del individuo, que t ienen consecuencias legales. También en el ámbito laboral, existe la posibil idad de realizar anál is is toxicológicos para determinar el consumo de alcohol y drogas. Esto no está considerado expresamente en la legis lación venezolana, pero si en la de otros países como España (6). El laborator io de toxicología forense debe estar preparado igualmente en caso de incautaciones de estupefacientes, medicamentos o sustancias de apar iencia dudosa o desconocida, en las que se solicita la investigación de su composición. En Venezuela el CICPC cuenta con un laborator io de Toxicología Cr iminalíst ica en el que se determinan básicamente drogas de abuso (heroína, cocaína, alcohol y otros) así como también medicamentos, plaguicidas, anestésicos, inhalatorios y otras sustancias implicadas en hechos judic iales (7). Por otra parte, cuando se trata de del itos medioambientales el laborator io de toxicología forense debe contar con un área para la determinación de sustancias nocivas en vert idos y en animales, acelerantes de incendios. En consecuencia esta rama de la toxicología se ve involucrada con la Ecotoxicología, tras derivación a la vía judic ial, al requerir métodos analít icos sensibles y f iables para muestras de al imentos, aguas, aire ambiental, suelos y otros que puedan acarrear consecuencias legales tras afectación de individuos enfermos (8). Protocolo para el envio de material al laboratorio. Cadena de custodia La cadena de custodia es el procedimiento documental que pretende asegurar a través de un seguimiento trazable, fundado en la responsabil idad asumida por los intervinientes, que la muestra que se procesa en el laboratorio toxicológico no sea alterada, sust ituida o cambiada, entre el momento en que ésta se recoge hasta el momento que f inal iza el análisis (9). El objet ivo de la cadena de custodia es evitar los errores que no están relacionados con el método analít ico (10). A veces, los dictámenes judic iales que se emiten con los resultados obtenidos en las investigaciones, pueden estar sujetos a impugnaciones legales acerca de su veracidad, quizás no por razones analít icas, si no porque las muestras dejen algún margen de duda acerca de la ident if icación de las mismas. Por lo tanto, es importante que todo lo que le ocurre a una muestra desde que entra en el laborator io, antes, durante y después de su anál is is, debe estar perfectamente documentado (6). En el art ículo 115 de la Ley Orgánica contra el Tráf ico I l íc i to y Consumo de Sustancias Estupefacientes y Psicotrópicas del marco legal venezolano, se hace mención del procedimiento inic ial al que debe ser sometida la sustancia (en caso de incautación) en el momento de su recolección, así como también cualquier otra indicación que se considere necesar ia para su ident if icación plena, dejando a cr iter io del f iscal del minister io públ ico ordenar la práct ica de la expert ic ia que corresponda, la cual es real izada por el CICPC tal como lo determina el art iculo 118 de la referida ley (11). Basados en fuentes abiertas


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se conoce que en dicha inst itución se han establecidos l ineamientos que determinan quienes están involucrados en la cadena de custodia y sus responsabi l idades en cada uno de los eslabones de la misma. Es importante recalcar que el laboratorio toxicológico o criminalíst ico, podrá abstenerse de analizar elementos de prueba enviados por las autor idades competentes, cuando se compruebe que no ha exist ido cadena de custodia o que está se ha interrumpido. Muestras de interés judicial. Las muestras biológicas en toxicología forense incluyen sangre, orina, semen, r iñón, cerebro, hígado, bi l is, contenidos gástr icos, intest ino, bazo, pulmón, huesos y más recientemente cabello, uñas, sal iva y sudor (5). También son fundamentales en casos de agresión sexual, las muestras de contenido vaginal y/o rectal, así como las prendas ínt imas más cercanas o en contacto con estos f luidos, pues permiten situar al sospechoso en el lugar del hecho e identif icar lo, a través de la realización de diversos estudios. La selección, preparación y remisión de la muestra debe hacerse en conformidad con la ley, razón por la cual a nivel internacional los diferentes laborator ios toxicológicos forenses o de carácter Médico Legal deben seguir una r igurosa sistemática para tal f in, de manera que esté garantizada la veracidad de los resultados aportados a los tr ibunales. Existen diversos protocolos que deben seguirse para l levar a cabo estos procedimiento. Por ejemplo, en México en el año 2001, la Of icina del Alto Comisionado para los Derechos Humanos de las Naciones Unidas diseñó el “Protocolo Modelo para la Investigación Forense de muertes sospechosas de haberse producido por violación de los derechos humanos”, en el cual se especif ica con detal le todos los pasos a seguir en el anális is químico toxicológico, entre otros aspectos (12). En Venezuela, los laborator ios de toxicología forense no cuentan con un protocolo of ic ial, necesario para la estandarización a nivel nacional, del trabajo real izado en los mismos, sólo se dispone del Código de Instrucción Médico Forense, el cual esta vigente desde el año 1878, y tan solo contempla en los art ículos 91, 99, 101 y 107 al 121 algunos aspectos referidos a las muestras, su envasado, ident if icación y a la expert icia química de manera muy general (13). Por otra parte, se conoce que en el CICPC se siguen procedimientos analít icos establecidos en el manual Clarke’s Anál is is of Drugs and Poisons in Pharmaceuticals, Body f luids and Postmortem material, en el que se descr ibe detal ladamente las técnicas estandarizadas internacionalmente. En tal sent ido, motivado por la necesidad de actualizar la sistemát ica de la recolección de la muestra y todos los aspectos relacionados con ésta, a continuación se contempla una revis ión de protocolos y guías internacionales empleadas para tal f in.

Sangre. Los análisis de sangre son los únicos que permiten extrapolar los valores correspondientes al momento en que se recogieron las muestras, hasta el momento del accidente o del incidente, pudiéndose así establecer una hipótesis sobre la concentración de la droga en sangre en el momento que nos interesa y deducir, como consecuencia, el posible grado de afectación del


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individuo en el momento del incidente. Para la toma de muestra se desinfectará la piel con alcohol, excepto en el caso de determinación de alcoholemia, donde se recurr irá a la solución jabonosa, agua oxigenada o solución de lugol. Ante la sospecha de una intoxicación de or igen desconocido se deberá recoger la muestra de sangre en dos tubos, uno de el los con anticoagulante (f luoruro de sodio al 1%, que también es preservador antibacter iano) y el otro sin anticoagulante (9). El volumen mínimo recomendable en cada caso será de 10 mL (tomar 20 mL de sangre con una jeringa y dividir el contenido en ambos tubos).

Los recipientes que se envían deben ser tubos de polipropileno o similar con cierre hermético, de tapa rosca y sel lado con cinta adhesiva. Es preferible ut i l izar material nuevo o virgen, para evitar contaminaciones pues muchas veces quedan restos de medicamentos u otras sustancias que no se extraen con lavado, provocando confusiones en el ulter ior estudio analít ico (9). Al obtener la muestra no debe quedar espacio vacío en el recipiente, es decir, se debe evitar la formación de una cámara de aire, que produce pérdidas importantes no sólo de etanol s ino de cualquier otro tóxico volát i l . Para evitar esto, el recipiente debe ser l lenado al ras, bien tapado y si es posible sellado (14). La conservación de la muestra se hará en nevera a 4°C. Las muestras deben rotularse y sel larse correctamente en f rente de la persona sometida a examen (si se trata de paciente vivo), con datos apropiados mínimos y legibles, que correspondan al hecho ( ident if icación de la víct ima o imputado, juzgado o f iscalía interviniente, fecha, hora de toma de muestra y número de causa), que no den lugar a confusión, ut i l izando marcadores de t inta indeleble, iniciando inmediatamente cadena de custodia. Orina. Este t ipo de muestra es idónea para real izar un estudio de screening en el caso de no conocer el or igen de la intoxicación ya que todo medicamento o droga es excretado en mayor o menor parte por vía renal, ya sea en forma de compuesto inalterado o en forma de diversos metabol itos. Generalmente se emplea en la detección de consumo de sustancias i l íc itas en trabajadores o en casos de dopaje en el deporte. Sin embargo, un resultado posit ivo solo indicará el consumo de la sustancia detectada, independientemente del nivel obtenido. Las ventajas de esta muestra es que la concentración del anal ito puede ser mayor que en sangre, además la or ina está exenta de proteínas, con lo cual se t ienen menos interferencias, y es una muestra abundante, fáci l de recolectar y de conservar (15). Durante el proceso de recolección, algunos individuos tratan de fals if icar la muestra mediante el agregado de diferentes sustancias como por ejemplo: sales, solventes, sustancias enmascarantes. Con el f in de asegurar la autent icidad de la muestra, la persona efectuará la micción ante la presencia directa del responsable del proceso, y se evaluará el aspecto de la muestra así como también se pract icarán test para controles de temperatura, el pH y densidad urinar ia, que permitan detectar la adulteración de la muestra (8). Se deberá recoger un volumen de orina no inferior a 30 mL, en un f rasco de toma de muestra de pol ipropileno o similar con cierre hermét ico, de tapa rosca y sel lado con cinta adhesiva, es conveniente conservarla a -20 ºC, pero se


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acepta la refr igeración a 4 ºC, si el anál is is se pract ica dentro de las 24 a 48 horas poster iores a la toma de muestra. No agregar ninguna sustancia como conservante. Contenido vaginal, rectal y/o bucal. Este t ipo de muestra es fundamental en casos de agresión sexual, toda vez que permiten no solo t ip i f icar el del ito, sino también identif icar al sospechoso en caso de un resultado posit ivo, para la detección de espermatozoides en estos f luidos corporales, a través de la real ización de un estudio comparat ivo de ADN (12). Este examen que t iene merito probatorio se l leva a cabo en las Unidades de Biología Molecular y Genética. Para la toma de muestra, el médico responsable real izará un lavado vaginal, rectal o bucal ut i l izando 10 mL de suero f isiológico estér i l , usando para ello una jer inga desechable de un volumen aproximado de 20 mL. El contenido total de la jer inga obtenido después del lavado, se depositará en tubos de de pol ipropileno o similar con cierre hermético, de tapa a rosca y sel lados con cinta adhesiva. Aunque se han ut i l izado tórulas estér i les para la real ización de este procedimiento, los resultados obtenidos son signif icat ivamente menos ef icientes, por lo que se pref iere la ut i l ización de lavado con suero f isiológico. Las muestras así obtenidas, deberán ser remit idas en cajas aisladas y refr igeradas, dentro de las 24 horas posteriores a la toma de muestra. . Pelo. El anál isis de pelo tradicionalmente se ha ut i l izado para la determinación de metales pesados como el arsénico, el cual se deposita en la raíz y a lo largo del cabel lo en la medida de su crecimiento. Posteriormente, se han real izado en esta matr iz dist intas determinaciones de drogas, tales como heroína, morf ina, l idocaína, además de contaminantes como hidrocarburos aromáticos policícl icos, y recientemente se desarrol ló un método para determinar escopolamina (16, 17).. La ventaja del uso de esta matr iz es que permite la detección de las sustancias en una muy amplia f ranja de t iempo si la comparamos con otras muestras biológicas, como sangre y orina, que lo permiten en unas horas o pocos días. Además es una muestra muy fáci l de obtener, se toma aprox. 1 cm de mechón lo más próximo al cuero cabel ludo, en el caso de vel lo pubiano o axi lar se obt iene al ras de la piel, dicha muestra deberá ser colocada en sobre de papel a temperatura ambiente (9). Humor vítreo. Se propone de forma novedosa en recientes investigaciones al humor vítreo como muestra de elección para la búsqueda de ciertos tóxicos como el etanol, también pueden ser determinadas en esta matr iz barbitúr icos, benzodiazepinas, antidepresivos, opiáceos, cannabinoles, anfetaminas, LSD, anestésicos generales (18). Las ventajas de esta muestra estr iban en que no se contamina fáci lmente con otros f luidos y su descomposición es más retardada en el cadáver (19). Líquido pericárdico El l íquido pericárdico es un ultraf i l t rado del plasma y puede constituir una muestra alternativa postmortem cuando no haya disponibi l idad de sangre. Existen estudios que han val idado métodos de extracción de cocaína y sus metabolitos en esta muestra, así como morf ina y


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codeína (20). También se real izó un estudio del comportamiento post mortem de la act ividad hidrolít ica de las enzimas Aceti lcol inesterasa (ACHE) y Butir i lcolinesterasa (BChE) en este l íquido, con la f inal idad de estudiar la fact ibi l idad de ut i l izar estos parámetros bioquímicos como "biomarcadores post mortem" y establecer diagnóstico de muerte por intoxicación con sustancias inhibidoras de las enzimas col inesterasas (5). Prendas. La prenda deberá ser f i jada, conservada seca a temperatura ambiente y remit ida en sobre de papel y no en bolsas plást icas (para evitar la contaminación bacteriana y de otros microorganismos), estas muestras deben rotularse y sel larse correctamente de la misma manera en que se ha señalado para los casos anter iores, in ic iando inmediatamente cadena de custodia (19). Muestras requeridas en una sistemática toxicológica general. Existen casos en que no hay sospechas o pistas acerca de lo que se quiere investigar en el cadáver, por lo que debe real izarse una sistemát ica toxicológica general, para lo cual es preciso remit ir al laboratorio las siguientes muestras postmortem (14,19): • Un f rasco bocal con estomago y su contenido, además de vómitos y lavado

gástr ico (10). • Un f rasco seco con sangre l impia (aprox. 100 mL), algunos protocolos

recomiendan 10 mL como mínimo (10, 21). • Un f rasco con or ina (el máximo volumen posible) o en su defecto pared de la

vej iga. Un f rasco bocal con aprox. 100 g de r iñón, esta cantidad deberá aumentarse ante la sospecha de intoxicación por mercurio, cadmio, manganeso, fósforo, etc.

• Un f rasco bocal con aprox. 100 g de hígado y vesícula bil iar, necesarios para la invest igación de tóxicos orgánicos y metál icos. Además, un f rasco bocal con aprox. 500 g de cerebro especialmente indicado en intoxicaciones por disolventes orgánicos, productos de l impieza en seco, anestésicos y plaguicidas orgánicos fosforado y clorados (19).

• Humor vítreo: todo lo que se disponga (12). • Cuando se sospeche intoxicaciones por arsénico, plomo, beri l io, tal io,

estroncio, uranio, y f lúor deberán remit irse muestras de uñas, cabel los o huesos.

Principales técnicas de análisis en toxicología forense Una sistemát ica analít ica toxicológica puede def inirse como el conjunto de procedimientos analít icos, concisos, bien planeados, encaminados a poner de manif iesto la presencia o ausencia de sustancias de relevancia toxicológica en una muestra determinada (15). Comprende varias etapas:

• Pre-tratamiento de las muestras: homogeneización, desproteinización, hidról is is, de conjugados, etc.

• Extracción/Purif icación: mediante técnicas de extracción l íquido-l íquido (LLE), extracción en fase sól ida (SPE), en el espacio de cabeza (HSE), microextracción en fase sól ida (SPME), etc.

• Anál isis instrumental: Se apl ican técnicas tales como Cromatograf ía Líquida de Alta Presión (HPLC), Cromatograf ía de Gases acopladas a entes


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detectores, Espectrometría de Absorción Atómica con horno de graf ito y de generación de hidruros, Espectrometr ía de Emisión Atómica con acoplamiento de plasma inductivo.

Los recursos instrumentales en los laboratorios de toxicología forense deben cubrir las técnicas de screening ( inmunoensayos y cromatograf ía en capa f ina) anál is is rápidos, no específ icos, para poner de manif iesto la presencia o ausencia de un grupo de analitos, son orientat ivas por lo que siempre habrá que conf irmar el resultado con una segunda técnica, y técnicas analít icas conf irmatorias que ofrecen un pr incipio f ísico-químico diferente del screening y mediante el cual se puede conf irmar la presencia o ausencia del tóxico investigado. Se ut i l izan la absorción atómica para metales, HPLC y cromatograf ía de gases acoplada a detectores específ icos (10). Todas las técnicas mencionadas anteriormente deben desarrol larse garantizando control de cal idad a través de la cal ibración de equipos, val idación de los métodos y controles externos que en el caso nacional, debido a la falta de recursos pudiera real izarse con la part ic ipación de laboratorios privados y centros de investigación de educación super ior, asegurando en todo momento la cadena de custodia. Como en cualquier eventual idad cl ínica el diagnóstico de la intoxicación debe apoyase en el análisis de laborator io, y el toxicólogo puede aportar un test imonio objet ivo y una opinión como perito. El test imonio objet ivo suele constar de una descripción de los métodos de anál is is y de los resultados obtenidos, mientras que la opinión sería la interpretación de dichos resultados, por esta razón es necesar io que el laboratorio toxicológico forense disponga de protocolos y s istemáticas analít icas que contr ibuyan a obtener resultados certeros y de cal idad. Financiamineto : Esta invest igac ión ha s ido real izada en la Maestr ía de Toxicología Anal í t ica, Área de Postgrado de la Univers idad de Carabobo, Venezuela y ha s ido f inanc iada por las autoras

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