uro cult ivo

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UROCULTIVO El urocultivo o urinocultivo es un análisis microbiológico de la orina que sirve para determinar si existe presencia de bacterias en la orina de la gestante. Es el análisis que se le realiza a la orina para detectar con exactitud y presión cual es el agente microbiano que está causando una infección en un organismo. En el embarazo, por los cambios físicos que se producen, existe una mayor predisposición a las infecciones de orina y muchas veces cursan sin síntomas, por lo que puede ser que la embarazada no note nada. Sin embargo, si se detecta que existe la presencia de bacterias en la orina, deberá de tratarse administrando antibiótico a la paciente. Si existen microorganismos en la orina, que son los que han producido la infección, crecerán colonias de ese gérmen en toda la superficie de una o más placas de cultivo. Los resultados del cultivo informan de la identificación del gérmen, así como del número de colonias que han crecido en las placas de cultivo. La confirmación de la infección urinaria representa que han crecido más de 100.000 colonias de microorganismos por mililitro y ello representa la necesidad de tratamiento. Cuando crecen menos colonias (por ejemplo entre 50.000 y 90.000) se denomina bacteriuria o presencia de bacterias en la orina, que normalmente no requiere tratamiento, excepto en caso de mujeres embarazadas y pacientes diabéticos. LA MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO Para muestras de orina recolectadas por micción se debe realizar una cuantificación del número de microorganismos presentes por volumen de muestra mediante recuento en medios sólidos, determinando el número de unidades formadoras de colonias (UFC) por mililitro de muestra. Esta metodología se puede aplicar a muestras de orina recolectadas por cateterización, pero no se debe aplicar a aquellas muestras de orina recolectadas por punción suprapúbica por cuanto se evita la contaminación uretral o periuretral.

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Urocultivo procedimiento

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UROCULTIVOEl urocultivo o urinocultivo es un anlisis microbiolgico de la orina que sirve para determinar si existe presencia de bacterias en la orina de la gestante. Es el anlisis que se le realiza a la orina para detectar con exactitud y presin cual es el agente microbiano que est causando una infeccin en un organismo. En el embarazo, por los cambios fsicos que se producen, existe una mayor predisposicin a las infecciones de orina y muchas veces cursan sin sntomas, por lo que puede ser que la embarazada no note nada. Sin embargo, si se detecta que existe la presencia de bacterias en la orina, deber de tratarse administrando antibitico a la paciente. Si existen microorganismos en la orina, que son los que han producido la infeccin, crecern colonias de ese grmen en toda la superficie de una o ms placas de cultivo. Los resultados del cultivo informan de la identificacin del grmen, as como del nmero de colonias que han crecido en las placas de cultivo.La confirmacin de la infeccin urinaria representa que han crecido ms de 100.000 colonias de microorganismos por mililitro y ello representa la necesidad de tratamiento. Cuando crecen menos colonias (por ejemplo entre 50.000 y 90.000) se denomina bacteriuria o presencia de bacterias en la orina, que normalmente no requiere tratamiento, excepto en caso de mujeres embarazadas y pacientes diabticos.LA MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVOPara muestras de orina recolectadas por miccin se debe realizar una cuantificacin del nmero de microorganismos presentes por volumen de muestra mediante recuento en medios slidos, determinando el nmero de unidades formadoras de colonias (UFC) por mililitro de muestra. Esta metodologa se puede aplicar a muestras de orina recolectadas por cateterizacin, pero no se debe aplicar a aquellas muestras de orina recolectadas por puncin suprapbica por cuanto se evita la contaminacin uretral o periuretral.En pacientes sintomticos (dolor al orinar, urgencia, frecuencia) usualmente una nica muestra es usualmente suficiente y adecuada para el diagnstico, siempre y cuando el paciente no haya sido sometido an a tratamientos con antimicrobianos. En pacientes asintomticos (bacteriuria asintomtica) se pueden necesitar hasta dos o tres muestras recolectadas en tres das consecutivos para poder hacer el diagnstico de laboratorio. En casos de que se sospeche de tuberculosis renal, se deben procesar tres muestras recolectas en tres das consecutivos. Las muestras de orina deben provenir de la primera miccin de la maana para asegurar un mejor diagnstico. La solicitud de anlisis que acompaa la muestra clnica debe indicar si el paciente es sintomtico o asintomtico, y no debe indicar simplemente infeccin urinaria o sepsis urinaria.La orina puede ser un buen medio de cultivo para los diferentes microorganismos, tanto los causantes de infecciones como los contaminantes provenientes de la uretra o de la regin periuretral. Por lo tanto, las muestras de orina deben ser refrigeradas a 4C hasta por 24 horas si no van a ser procesadas inmediatamente en el laboratorio.Recoleccin de muestras de orina1. Nios que controlan esfinteresLa muestra de eleccin es el chorro medio miccional. El tiempo de retencin deseado es de por lo menos 3 horas.NiasSe debe higienizar la zona genital con agua y jabn, de adelante hacia atrs, secar con toalla limpia. Se elimina el primer chorro (10 ml) y se recolecta en frasco estril la fraccin siguiente (10-20 ml). Se recomienda orinar separando los labios mayores.NiosSe debe retraer el prepucio e higienizar el glande y surco balanoprepucial con agua y jabn. Luego se deber secar con una toalla limpia. Se elimina el primer chorro (10 ml) y se recolecta en frasco estril la fraccin siguiente (ms de 20 ml).Se desaconseja el uso de antispticos, ya que pueden afectar el resultado del urocultivo, provocando un descenso en el recuento de colonias.2. Nios que no controlan esfinteresNunca utilizar bolsas colectoras para el estudio de urocultivo. Su especificidad es muy baja: 0,62 contra 0,97 de la orina obtenida por cateterismo vesical.Existen, al menos, tres alternativas. Recordar que la mayora de estas muestras no cumplen con el tiempo de retencin deseado. Se recomienda alguno de los siguientes procedimientos:Al acecho El mtodo se aplica con los lactantes y es similar al descrito para los pacientes que controlan esfnteres. La dificultad estriba en que se desconoce cual ser el momento en que se va a producir la miccin. El operador deber esperar entonces a que la misma se produzca y recoger en un frasco estril lo que seguramente ser la porcin media del chorro miccional. Su especificidad es de aproximadamente 80%.Puncin suprapbicaEste procedimiento deber ser efectuado por mdicos entrenados. En principio, se reserva para casos especiales, como neonatos graves, pacientes cuyos urocultivos previos presenten resultados conflictivos, sospecha de microorganismos de difcil desarrollo, etc. Primeramente se verifica que el paciente presente un globo vesical palpable, se desinfecta la zona pubiana con iodopovidona y se deja actuar un minuto, se limpia con alcohol al 70% y se punza con aguja adecuada en la zona ubicada 1 o 2 cm por encima de la snfisis pubiana. Se aspira la orina y se vuelca en frasco estril.CateterizacinEs el mtodo de eleccin para pacientes en los que habitualmente se practica el cateterismo intermitente (enfermos con vejiga neurognica). En algunos centros lo utilizan para lactantes en lugar de la toma al acecho, ya que presenta la ventaja de ser una toma ms rpida y confiable cuando se realiza por personal entrenado. Sin embargo, presenta el riesgo de producir el ascenso de los microorganismos desde la uretra a la vejiga y generar as una IU iatrognica. Para efectuar este mtodo se desinfecta la zona perineal, se introduce la sonda por la uretra y se recoge la porcin media del chorro de orina que sale por la sonda.Del mismo modo pueden obtenerse muestras a partir de ureterostomas, nefrostomas o vesicostomas. La diferencia puede radicar en que los catteres a utilizar podran ser de menor dimetro. En estos casos, se deja fluir la orina retenida en la boca del conducto, se limpia la misma con un hisopo humedecido en alcohol, se introduce el catter en el conducto y se permite el drenaje de la orina al exterior. La parte media del chorro se recoge en un recipiente estril.3. Mujeres adultasLa muestra de eleccin es el chorro medio miccional. El tiempo de retencin deseado es de, por lo menos, 3 horas. Se debe higienizar la zona genital con agua y jabn, de adelante hacia atrs, secar con toalla limpia y se debe colocar un tapn vaginal (de tipo comercial o fabricado con una torunda de gasa o algodn).Se elimina el primer chorro (10 ml) y se recolecta en frasco estril la fraccin siguiente (10-20 ml).Se recomienda orinar separando los labios mayores. El efecto de una buena higiene puede verse en la tabla 1. Como se dijo, el uso de antispticos est contraindicado porque puede resultar en una reduccin artificial del recuento de colonias. En ancianas y en embarazadas asintomticas conviene tomar ms de una muestra para tener seguridad del grado de significacin de los hallazgos.4. Varones adultosLa muestra de eleccin tambin es el chorro medio miccional. El tiempo de retencin deseado tambin es de, por lo menos, 3 horas. Se debe retraer el prepucio e higienizar el glande y surco balanoprepucial con agua y jabn. Luego se seca con una toalla limpia. Al comenzar a orinar, se elimina el primer chorro (10 ml) y se recolecta en frasco estril la fraccin siguiente (20 ml).5. Pacientes con sonda permanentePuncin de la sonda Este procedimiento se utiliza en aquellos enfermos con sonda permanente en los que no es posible retirar o reemplazar la sonda. Se obtura la sonda con una pinza ad hoc. Se espera unos minutos, se desinfecta la parte externa de la sonda en la zona proximal con alcohol yodado o iodopovidona y se punza la sonda con aguja y jeringa estril. Se vuelca el contenido en forma asptica en un frasco estril.Recoleccin a travs de una sonda estril recin colocada Aprovechando la colocacin o el cambio de sonda, se recoge directamente la orina que fluye por el extremo distal de la sonda nueva en un frasco estril. Si se trata de un recambio de sonda, es importante considerar la posibilidad que se produzca la resuspensin de bacterias de la zona uretral en la orina vesical. Esto puede resultar en la presencia transitoria de bacterias colonizantes de la sonda previa en la orina y dar lugar a cultivos falsamente positivos. En estos casos, es recomendable tomar una nueva muestra a posteriori.CONTAMINACION DE LA MUESTRA DE ORINASi exceptuamos la presencia de microorganismos en la uretra anterior, la va urinaria es estril, por lo que, en general y si la muestra est recogida de una forma adecuada, el aislamiento de cualquier microorganismo en la orina es diagnstico de infeccin. A pesar de ello, el diagnstico de una infeccin urinaria no siempre es sencillo. La dificultad ms importante es la posible contaminacin de la orina recogida, con microorganismos presentes de forma natural en la uretra anterior, regin genital y perineal. Este hecho puede condicionar el desarrollo de microorganismos en los medios de cultivo, lo cual no indica la existencia de una verdadera infeccin. De hecho, en ocasiones, este desarrollo de microorganismos a veces oculta al verdadero patgeno, que es incapaz de crecer sobre los medios de cultivo debido al sobrecrecimiento de microorganismos contaminantes.Otra dificultad es el hecho de que si la muestra de orina no se transporta y se procesa de una manera rpida al Laboratorio de Microbiologa, se puede producir una multiplicacin de los recuentos reales de microorganismos presentes en la orina originando recuentos falsamente elevados. Adems, en ocasiones, los microorganismos causantes del episodio de infeccin urinaria no crecen sobre los medios de cultivo que se emplean habitualmente en el laboratorio, por lo que si no hay sospecha clnica concreta el cultivo puede ser informado como negativo; es el caso de microorganismos como Mycoplasma spp, o Chlamydia spp.PROCEDIMIENTO EN LA SIEMBRA DE UROCULTIVOLa siembra debe realizarse de la orina sin centrifugar con un ansa calibrada, lo que permitir obtener una estimacin semicuantitativa del desarrollo microbiano. Existen numerosos medios de cultivo para sembrar una muestra de orina. La eleccin del medio de cultivo debe contemplar la relacin costo-beneficio, de modo de elegir la opcin que permita la recuperacin de la mayora de los patgenos con el menor costo posible.Para tal fin, el microbilogo debe tener en cuenta cierta informacin bsica:i. El 70-80% de los urocultivos enviados al laboratorio resultan "negativos".ii. El 85-90% de las IU son producidas por enterobacterias.iii. De los grmenes gram-positivos, los que se aislan con mayor frecuencia son enterococos y estafilococos.iv. El medio CLED permite el desarrollo de bacilos gram-negativos, estafilococos y enterococos. Los medios de Levine, EMB o MacConkey permiten nicamente la recuperacin de bacilos gram-negativos. La mayora de los grmenes (incluyendo estreptococos y corinebacterias) desarrollan en agar sangre, pero este medio no permite la recuperacin de Haemophilus spp., ni neisserias patgenas (gonococos y muchas cepas de meningococos).El agar chocolate posibilita la recuperacin de todos los microorganismos mencionados anteriormente.Teniendo en cuenta estos conceptos, el microbilogo tiene varias opciones para la siembra racional de la orina.a. Siembra de acuerdo a la observacin previa del sedimento. Este procedimiento ofrece la ventaja de cultivar el microorganismo en el medio ms apropiado, tanto para su desarrollo, como para su caracterizacin macroscpica (aspecto de la colonia, fermentacin de lactosa, tipo de hemlisis, etc), por lo que posibilita orientar con mayor certeza el esquema inicial de identificacin. La desventaja es que demanda ms tiempo que la siembra "a ciegas".Uno podra entonces establecer el siguiente esquema de siembra de acuerdo al sedimento:i. Sedimento normal y ausencia de grmenes: media placa de CLED.ii. Sedimento patolgico y ausencia de grmenes: media placa de agar sangre o chocolate y media de CLED, Levine o MacConkey.iii. Presencia de bacilos, independientemente del sedimento: placa entera de CLED, Levine o MacConkey.iv. Presencia de cocos, independientemente del sedimento: placa entera de agar sangre o agar chocolate.b. Siembra "a ciegas". Esta opcin es ms prctica y sencilla que la anterior. Sin embargo, tiene la desventaja de la demora potencial en la recuperacin o identificacin del microorganismo. En la Argentina y en Europa el medio ms utilizado es el CLED. Se puede sembrar media placa, pero esto muchas veces entorpece la obtencin de colonias aisladas o la visualizacin de mezcla de grmenes. Se debe recordar adems, que en este medio no desarrollan varias especies que pueden causar IU (corinebacterias, estreptococos y otros), por lo que un sedimento patolgico sin recuperacin de grmenes, o cualquier otro elemento que sugiera IU, debe promover la resiembra de la orina en agar sangre o agar chocolate, antes de asumir la muestra como "negativa". En los EEUU se prefiere realizar la siembra inicial en agar MacConkey y agar sangre.c. Segn patologa de base. Si se tiene oportunidad de conocer la patologa de base del paciente mediante una buena comunicacin con el mdico tratante, o de la solicitud expresa por escrito en forma rutinaria al recibir la muestra, se puede establecer alguna discriminacin en los medios a emplear. Los urocultivos de pacientes urpatas, con malformaciones, tumores, instrumentacin o traumatismos de las vas urinarias merecen la utilizacin de 2 medios (CLED y agar chocolate). Para el resto de pacientes, alcanzara slo con la siembra de una placa de CLED.INTERPRETACION Y VALORACION DE UN UROCULTIVOPara la valoracin del urocultivo se cuantifica el nmero de colonias crecidas por mililitro de orina. Resultados:1. Menos de 10.000 UFC/ml. Se informar se aslan menos de 10.000 UFC/ml. En casos especiales, como nios que precisan un urocultivo de control despus de una infeccin pasada, embarazadas o diabticos, y siempre en caso de cultivo puro, puede informarse del nmero de colonias y una identificacin mnima.2. De 10.000 a 100.000 UFC/m. Si corresponde a un nico microorganismo patgeno, se indicar el nmero de colonias, identificacin a nivel de especie y antibiograma con la indicacin de valorar clnicamente. Con dos microorganismos aparecer el nmero de colonias, una identificacin de gnero y se solicitar una nueva muestra. Con tres o ms uropatgenos se considera muestra contaminada, pues es difcil saber si alguno de ellos est causando la ITU.3. Ms de 100.000 UFC/ml. En cultivo puro de uno o dos uropatgenos, en el informe aparecer la identificacin por especie y el antibiograma de cada uno de ellos. Si crecen tres o ms, consideraremos la orina contaminada.El urocultivo puede ser negativo o tener recuentos bajos en caso de: a) tratamiento antibitico previo; b) miccin reciente, a menudo secundaria al sndrome cstico; c) obstruccin uretral; d) pH urinario muy bajo; e) infeccin por microorganismo exigente o de crecimiento lento. Especial atencin merece cualquier cantidad de colonias de SGB en gestantes.Urocultivo negativo.No hay infeccin de orina. Se puede expresar como: Cultivo negativo, crecimiento negativo o no se aslan bacterias patgenas. Todas estas son las distintas maneras de expresar lo mismo, que no existe infeccin, que todo est bien.Contaminacin, o muestra contaminada.La contaminacin se produce cuando ha habido algn fallo en el proceso de recogida de la muestra. En las muestras contaminadas suele haber crecimiento bacteriano, pero, o bien es una cantidad demasiado pequea para pensar que existe infeccin y es necesario comprobarlo con una nueva muestra, o hay una mezcla de bacterias que hacen pensar en errores en el proceso de recogida de la orina. Las causas de un cultivo contaminado pueden ser por que no se ha lavado bien la zona o por que no se ha desechado la porcin inicial de la miccin.Cultivo positivo. Este resultado se da cuando realmente hay una infeccin de orina. En el informe se debe indicar el nmero de UFC/cc (Unidades Formadoras de Colonias por centmetro cubico), el tipo de bacteria que est produciendo la infeccin (las ms comunes son Escherichia coli o Proteus spp). El informe se complementa con un antibiograma.Cada mes hay que realizar el urocultivo para "vigilar" todo el embarazo que no se repita la "situacin de riesgo" para la infeccin urinaria. Podramos considerar que esa mujer embarazada ha sufrido alteraciones en vas urinarias que predisponen a la colonizacin del aparato urinario y hay que vigilar. El problema es cuando este cultivo de control sigue siendo positivo. Existe predisposicin en este aparato urinario a la colonizacin durante el embarazo con el consiguiente riesgo de infeccin y debemos volver a tratar de suprimir la bacteriuria con otro ciclo de tratamiento. Si no logramos en un segundo ciclo de tratamiento que remita la bacteriuria hay que plantearse tratamiento supresor durante todo el embarazoDISCOS DE ANTIBIOTICOS PARA UROCULTIVOSEstos discos se utilizan para la evaluacin semicuantitativa de la susceptibilidad in vitro a los agentes antimicrobianos de bacterias de rpida proliferacin y varias especies difciles mediante un mtodo de difusin en agar.Este mtodo se basa en un procedimiento normalizado publicado por la WHO y adoptado como estndar consensuado por la CLSI, CA-SFM y EUCAST (se revisa peridicamente).El principio del mtodo involucra la aplicacin de una cantidad determinada de antimicrobiano en un reservorio (disco de papel, pastillas con drogas en estado cristalino, etc.) en la superficie del agar sobre la cual se ha distribuido un inculo del microorganismo en cuestin; se formar as, por difusin, un gradiente de concentracin de antimicrobiano alrededor del reservorio y la sensibilidad del microorganismo estar indicada por el tamao de la zona de inhibicin del crecimiento bacteriano.El dimetro obtenido depender no slo de la sensibilidad del microorganismo y la carga del disco, sino tambin del espesor de la capa de agar Mueller Hinton, su pH y composicin, de la capacidad de difusin de la droga en ese medio, de la temperatura y atmsfera de incubacin, de la velocidad de duplicacin bacteriana, del tamao del inculo y la fase de crecimiento de la bacteria, etc. Todas estas son las variables ms importantes que afectan el resultado del antibiograma.Una vez colocado el disco en la superficie del agar, la difusin del antibitico que contiene comienza instantneamente y sigue hasta alcanzarse un gradiente continuo de concentraciones alrededor del reservorio. Este gradiente se alcanza aproximadamente a las 6 hs. El tamao de la zona de inhibicin depender del equilibrio entre la difusin del antibitico y la velocidad de crecimiento del microorganismo. Las recomendaciones del CLSI son: colocar los discos dentro de los 15 minutos de inoculada la placa y proceder a la incubacin de la misma dentro de los 15 minutos posteriores a la colocacin de los discos. Cualquier variacin en estos tiempos ocasionar un desplazamiento del equilibrio antes mencionado que se traduce en errores en el tamao de la zona de inhibicin. Como la difusin del disco comienza instantneamente despus de apoyado sobre el agar, estos nunca deben levantarse para cambiarlos de lugar en el antibiograma porque seguramente ya no tendrn la carga de antibitico original.CONSERVACIN DE LOS SENSIDISCOSLos discos deben ser almacenados como sigue:-Refrigerar los viales a 8C o menos, o congelar a -14C o ms bajo, en un frezeer "non Frost o frost free".-Viales de discos sellados que contienen drogas de la clase -lactmicos deben ser almacenados congelados, excepto pequeas cantidades para trabajo inmediato, las que pueden ser refrigeradas slo para una semana. Algunos agentes como por ejemplo combinaciones de imipenem, cefaclor, combinaciones de antibiticos -lactmicos con inhibidores de lactamasas. Pueden conservar mayor estabilidad si se almacenan congelados hasta el da de uso.-Los viales de discos que no han sido abiertos deben ser sacados del refrigerador o frezeer, 1 o 2 horas antes de usar para que igualen su temperatura a la del ambiente antes de abrir. Este procedimiento minimiza la cantidad de condensado que se forma cuando aire caliente toca los discos fros.-Una vez que un vial de discos se ha sacado de su paquete sellado, debe ser puesto en un desecador bien sellado. Cuando se usa un dispensador de discos, ste debe ser puesto con una cubierta ajustada y con un adecuado agente desecante. El dispensador debe alcanzar la temperatura ambiente antes de abrir.La excesiva humedad se debe evitar remplazando el desecante cuando el indicador cambia de color.-Slo aquellos discos con fecha de expiracin del fabricante dentro del plazo pueden ser usados.

METODO DE UROCULTIVOAntes de iniciar el estudio de la muestra, el microbilogo debe conocer algunos datos concernientes al paciente: edad, gnero, factores predisponentes, sntomas, antecedentes de ITU, tratamiento actual o previo con antibiticos. El paciente no debe haber recibido terapia antimicrobiana durante los tres das anteriores a la recoleccin, excepto en los casos de control de tratamiento y pacientes gravemente enfermos.Cuando las muestras de orina son recolectadas por miccin puede ocurrir la contaminacin de la muestra con bacterias habitantes de la uretra o de la regin periuretral. Para descartar el aislamiento y la identificacin de una bacteria contaminante como agente causal de una infeccin urinaria, se recomienda realizar un recuento del nmero de UFC/ml de muestra de orina recolectada por miccin. Este criterio puede ser aplicado tambin a las muestras de orina recolectadas por cateterizacin pero, sin embargo, no se aplica cuando la muestra ha sido recolectada por puncin suprapbica, por cuanto se evita la contaminacin uretral o periuretral.Durante mucho tiempo se ha aceptado el criterio que si una persona sufre de una infeccin urinaria o una bacteriuria asintomtica tendr un recuento de 105 UFC/ml de un solo morfotipo colonial, dado que la mayora de las infecciones urinarias son causadas por un solo tipo de microorganismo, mientras que una persona sin infeccin urinaria tendr un recuento de 102 UFC/ml, si se inocularon las placas con asa calibrada de 10 l.3. Si no se observa crecimiento y la muestra fue recolectada por puncin suprapbica, incubar las placas por 18-24 horas adicionales.4. Si se observan colonias muy pequeas o diminutas, incubar las placas por 18-24 horas adicionales.5. Si no se observa crecimiento y este resultado no correlaciona con lo observado en la tincin de Gram de la muestra o con la condicin clnica del paciente, incubar las placas por 18-24 horas adicionales.6. Sin tampoco se observa crecimiento luego de una incubacin de 48 horas y este resultado no correlaciona con lo observado en la tincin de Gram de la muestra o con la condicin clnica del paciente, solicitar una muestra de orina recolectada por puncin suprapbica para hacer un cultivo para bacterias anaerobias.7. Si se observa crecimiento, examine los cultivos por nmero de colonias (UFC/ml) y por los diferentes morfotipos coloniales.8. Realizar cuantificaciones adicionales segn la condicin clnica del paciente, como se muestra a continuacin:Tipo de infeccin Sintomatologa Agentes Recuento significativo

PielonefritisFiebre, dolor en flancos, escalofros, nuseas, cilindros leucocitariosBacilos Gram-negativos Staphylococcus aureus105

CistitisAsintomtica o disuria y frecuenciaEscherichia coli y otros bacilos Gram-negativos105

ProstatitisDolor dorsal, fiebre, escalofrosBacilos Gram-negativos105

UretritisDisuria y frecuenciaEscherichia coli Staphylococcus saprophyticus105

Interpretacin de los resultados.1. El criterio de un recuento de 105 UFC/ml se puede aplicar a la mayora de las muestras de orina recolectadas por miccin y enviadas para cultivo.2. En el caso de recuentos inferiores a 105 UFC/ml se puede aplicar una gua de anlisis de los resultados (Anexo )CONDICIONES AMBIENTALES Y DE LABORATORIO PARA LA SIEMBRA DE UROCULTIVOLa mayora de las bacterias que se aslan en el laboratorio de microbiologa clnica son agentes biolgicos del grupo 2 (Anexo ), aunque algunas estn clasificadas dentro del grupo 3, y pueden crecer en medios de cultivo bacteriolgicos habituales. Unas son muy infrecuentes, asociadas principalmente a bioterrorismo, pero otras como Brucella spp o Salmonella typhi no son infrecuentes en un laboratorio clnico. La manipulacin de cultivos de bacterias del grupo 3 debe realizarse con un nivel de contencin 3. Si el laboratorio no dispone de estas infraestructuras debe enviar los cultivos a un laboratorio de referencia, con las condiciones de transporte dispuestas en las normativas vigentes. El problema principal es que una bacteria del grupo 3, se puede aislar sin que el microbilogo haya sido alertado de su posible presencia y en un principio puede no ser reconocida. Como el mayor peligro que entraan estas bacterias es la infeccin adquirida a travs de aerosoles, es importante la utilizacin de cabinas de seguridad para la manipulacin de materiales infecciosos que pueden producir salpicaduras o aerosoles y que el manejo de los agentes patgenos sea realizado siempre, por personal especializado en tcnicas microbiolgicas.El laboratorio de bacteriologa general debe contar obligatoriamente con una cabina de seguridad biolgica clase I, II o III (generalmente I o II), un almacenamiento de seguridad para agentes biolgicos y al menos una autoclave. Las autoclaves deben instalarse en reas separadas pero cercanas al laboratorio de bacteriologa general, habitualmente en el rea de preparacin de medios de cultivo y/o de limpieza de material y esterilizacin. La existencia de un rea especfica para almacenamiento de medios y reactivos se recomienda siempre que el espacio lo permita, pues de otra manera es difcil garantizar un suministro gil. En la prctica, los mayores requerimientos para el laboratorio de microbiologa se refieren al almacenamiento en fro, por lo que la cmara fra (2-8C) debe ser el elemento central. En los de pequeo tamao y complejidad se podr recurrir a refrigeradores y armarios individuales alojados en diferentes partes del laboratorio, preferentemente diferenciados de los destinados a las muestras. Si se disea de nuevo el laboratorio, la previsin de este espacio debera ser un requisito, con independencia de su tamao.Un medio se formula para suministrar todos los nutrientes que un microorganismo necesita para crecer, pero esto no es suficiente. En el laboratorio, tambin es preciso aportar las condiciones ambientales adecuadas. Tanto la temperatura como el pH deben estar dentro del intervalo apropiado; con respecto al oxgeno, segn el caso, ser aportado o eliminado.TemperaturaCada especie bacteriana se caracteriza por un intervalo de temperatura en el cual presenta su crecimiento ptimo. Pero, en general, los microorganismos crecen ms rpidamente cuando se aumenta la temperatura, sin llegar hasta un punto en el cual se daan las protenas. As pues, para favorecer un crecimiento rpido, las bacterias se suelen cultivar a la temperatura ms alta a la cual crecen bien, y que suele ser la de su medio natural. Escherichia coli la bacteria que ms frecuentemente se utiliza en investigacin, se encuentra en el intestino humano y de otros mamferos. Este microorganismo crece ptimamente a 37C, la temperatura del cuerpo humano. Los cultivos se mantienen a temperatura constante en incubadores o en baos de agua, ambos controlados termostticamente. Los incubadores, o estufas, son cmaras con aire adecuados para el crecimiento tanto de cultivos slidos como lquidos, preparados en cualquier recipiente, incluyendo placas Petri, tubos de ensayo, o matraces. Los medios lquidos, distribuidos en tubos o matraces, tambin pueden ser incubados en baos de agua caliente. Estos baos resultan cmodos para incubar los cultivos que tienen que manipularse con frecuencia, en la misma mesa de trabajo.pH El pH ptimo depende de la especie bacteriana, pero cada una de ellas crece en un intervalo de pH relativamente estrecho. Casi todas las bacterias crecen mejor a valores de pH prximos a la neutralidad, en el intervalo de 6,5 a7,5. Sin embargo, los hongos crecen mejor entre 4,5 y 6,0.Aunque el pH de un medio sea el adecuado cuando se inicia el cultivo, a menudo el crecimiento microbiano lo modifica. Esto sucede porque algunos microorganismos usan selectivamente algn componente cido o bsico del medio; o bien, porque algn producto de su metabolismo es un cido o una base. Para disminuir los cambios de pH en los medios definidos se suelen utilizar tampones. En los medios complejos no suele ser esencial, porque sus materiales naturales actan como tampones dbiles. Los tampones ms eficaces para valores neutros de pH son los fosfatos y el carbonato clcico. Ambos se aaden normalmente como nutrientes (fuente de fsforo y calcio); pero si se desea que acten como tampones se precisarn cantidades mayores. Oxgeno La concentracin de oxgeno del medio es un determinante crtico para el crecimiento bacteriano. Algunos microorganismos, a los cuales se denomina aerobios estrictos, no pueden vivir sin oxgeno porque lo necesitan para obtener energa. Otros microorganismos, llamados anaerobios estrictos, no pueden vivir en presencia de oxgeno, para ellos es un agente txico. Otros tipos de organismos, como los anaerobios facultativos o los anaerobios aerotolerantes, pueden crecer tanto en presencia de oxgeno como en su ausencia. Los anaerobios facultativos utilizan el oxgeno si disponen de l, pero tambin pueden crecer sin l. Los anaerobios aerotolerantes no utilizan el oxgeno, pero tampoco les afecta negativamente. Los organismos microaerfilos requieren ambientes con bajas tensiones de oxgeno; las altas tensiones, como las que existen en el are son txicas para ellos. Por tanto, dependiendo del microorganismo que se vaya a cultivar, se tendr que suministrar, restringir o eliminar el oxgeno. Suministrar oxgeno a las bacterias que lo necesitan para crecer, o que crecen ms rpidamente en su presencia, representa una dificultad tcnica. Los organismos aerobios que crecen en la superficie de las placas de agar, obtienen suficiente cantidad de oxgeno de la atmsfera, aunque el interior de toda colonia es completamente anaerobio. Cuando los microorganismos crecen en medios lquidos es ms difcil, porque no existe demasiado oxgeno disuelto en el agua y los microorganismos aerobios lo consumen rpidamente. Todos los cultivos lquidos con ms de uno o dos centmetros de profundidad deben oxigenarse. Esto se lleva a cabo haciendo pasar una corriente de aire a travs del cultivo o agitndolo vigorosamente de forma continua. En casi todos los laboratorios de microbiologa existen agitadores, que son plataformas en las cuales se pueden colocar los matraces convenientemente sujetos, para ser sometidos a un movimiento de rotacin o a una agitacin de vaivn, que mezclan el aire con el cultivo. El suministro de oxgeno a los cultivos de cientos de litros, como los que se utilizan para producir antibiticos, es un desafi para la ingeniera. Estos cultivos se remueven vigorosamente mediante grandes propulsores, mientras se fuerza a que pasen a travs de ellos enormes cantidades de aire. La exclusin del oxgeno del ambiente de los anaerobios tambin plantea problemas tcnicos. Muchos microorganismos anaerobios se pueden cultivar en tubos de ensayo expuestos al oxgeno, s el medio contiene un compuesto qumico que reaccione con el mismo, como el tioglicalato, que reacciona con el oxgeno manteniendo la parte inferior del tubo libre de oxgeno. Los anaerobios tambin pueden cultivarse en placas Petri, si estas se incuban dentro de unos contenedores, en los cuales se haya eliminado totalmente el oxgeno y se haya reemplazado por un gas inerte como nitrgeno o argn. Tambin se puede llevar a cabo una eliminacin qumica del oxgeno. Para ello, se comercializan paquetes con unas mezclas (le reactivos que producen hidrgeno cuando se les aade agua; el hidrgeno reacciona con el oxgeno en presencia de un catalizador; la reaccin consume el oxgeno produciendo agua. Un mtodo muy sencillo para disminuir la concentracin de oxigeno (y al mismo tiempo producir anhdrido carbnico, el cual es beneficioso para ciertos microorganismos) es encender una vela dentro de un recipiente y cerrarlo hermticamente; la vela consumir oxgeno hasta que se extinga. Esta tcnica se utilizaba para cultivar anaerobios aerotolerantes, como las bacterias del cido lctico. Tambin ha sido utilizada para microacrfilos, especialmente cuando el dixido de carbono les favorece. Los microorganismos anaerobios estrictos, que mueren incluso con una breve exposicin al aire, pueden cultivarse en jarras de cristal hermticamente cerradas. Cuando se abren estos contenedores para aadir medio o tomar muestras, se utiliza una corriente de nitrgeno para sacar el aire de la vasija. A veces, se requieren tcnicas ms elaboradas. Es frecuente el uso de cmaras libres de oxgeno, en las cuales se trabaja usando unos guantes conectados a las mismas. Algunos laboratorios tienen habitaciones libres de oxgeno, donde los tcnicos trabajan con mscaras de oxgeno.Los medios pueden prepararse en el laboratorio o comprarse, ya sea parcial o totalmente preparados. Los proveedores de los medios deben estar aprobados y calificados. El proveedor calificado puede certificar algunos de los parmetros de calidad detallados posteriormente. La prueba de promocin del crecimiento y, si fueran apropiadas, otras pruebas de desempeo adecuadas, deben realizarse para todos los medios, en cada lote y en cada envo. Cuando el proveedor de medios totalmente preparados est calificado y provee certificacin de la promocin del crecimiento para cada lote de medio y las condiciones de transporte han sido calificadas, el usuario puede confiar en el certificado del fabricante con una verificacin peridica de sus resultados.Las materias primas (tanto formulaciones comerciales deshidratadas como componentes individuales) y los medios deben almacenarse bajo las condiciones apropiadas recomendadas por el fabricante, ej. ambiente fresco, seco y oscuro. Todos los envases, especialmente aquellos de medios deshidratados, deben estar hermticamente sellados. Los medios deshidratados que estn apelmazados o agrietados o muestren un cambio de color no deben utilizarse.Los medios conteniendo antimetabolitos o inhibidores se deben preparar utilizando material de vidrio dedicado para esos medios, debido a que el arrastre de estos agentes dentro de otros medios podra inhibir el crecimiento y la deteccin de microorganismos presentes en la muestra en anlisis. Si no se emplea material de vidrio dedicado, los procedimientos de lavado para el material de vidrio deben estar validados.La distribucin de los medios despus de la esterilizacin debe realizarse bajo flujo de aire unidireccional (UDAF, por sus siglas en ingls) para minimizar la posibilidad de contaminacin ambiental. Esto debe considerarse como un requisito mnimo para los medios que se usan en ensayos de productos estriles, e incluye el enfriamiento de los medios, ya que las tapas de los envases necesitarn ser retiradas durante el enfriamiento para prevenir la condensacin.Los dispositivos de microondas no deben utilizarse para la fusin de los medios debido a la distribucin desigual del proceso de calentamiento.