Urocultivo¿Qué es el Urocultivo?

El examen de Urocultivo es el cultivo de la orina que permite investigar la presencia de bacterias en la orina, su cantidad, especie, y sensibilidad a los antibióticos.

La sospecha de una infección urinaria se da por los siguientes síntomas: dolor al orinar, micciones frecuentes, dolor suprapúbico (por encima de la zona pélvica), sensación febril, y orina turbia y de mal olor. Quienes más se realizan este examen son las mujeres adultas (principalmente embarazadas), niños menores de dos años y adultos mayores.

De haber infección, se debe recuperar el agente infeccioso y hacer un recuento de éste. Los principales agentes son bacterias propias del tubo digestivo, tales como Escherichia coli, Klebesiella pneumoniae, Proteus mirabilis y Enterococcus spp.

Forma en que debo prepararme

• Se   recomienda   no   ingerir líquidos en exceso las 5 ó 6   horas previas a la obtención de la muestra.

• Realizar higiene de la zona genital con agua y jabón.

• El  paciente debe estar sin tratamiento antibiótico al menos  48 horas antes.

Obtención de muestras

Orina obtenida por “Chorro medio”

A. MATERIAL NECESARIO.

- Gasas estériles.

- Jabón neutro.

- Recipiente de boca ancha con tapa de rosca hermético y estéril.

B. OBTENCIÓN DEL PRODUCTO.

La muestra idónea es la primera micción de la mañana, ya que permite la multiplicación de bacterias durante la noche.

TÉCNICA PARA MUJERES.

- Lavarse las manos cuidadosamente con agua y jabón, enjuagar con agua y secar con una toalla limpia.

- Se separarán los labios mayores y menores, y los mantendrá separados en todo momento hasta que se haya recogido la orina.

- Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasándola de delante hacia atrás, se repetirá el proceso un total de 4 veces.

- Enjuagar cuidadosamente con agua para eliminar los restos de jabón.

- Se indicará a la paciente que orine desechando el primer chorro (20-25 primeros mililitros) tras lo cual y sin interrumpir la micción, se recogerá el resto de la orina en el recipiente, el cual se cerrará inmediatamente.

- El frasco debe sujetarse para que no tome contacto con pierna, vulva o ropa del paciente. Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie interior.

TÉCNICA PARA HOMBRES.

- Lavado de las manos con agua y jabón.

- Retraer completamente el prepucio, que se mantendrá así en todo momento, hasta que se haya recogido la orina.

- Limpiar el glande con jabón neutro.

- Eliminar los restos de jabón enjuagándolo con agua.

- Se pedirá al paciente que orine desechando el primer chorro, los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir la micción, recoger el resto de la orina en el recipiente estéril.

OBTENCIÓN DE ORINA PARA UROCULTIVO EN EL

PACIENTE CON SONDA VESICAL

A. MATERIAL NECESARIO.

- Gasas.

- Alcohol 70º o Yodo povidona 10%.

- Jeringa o aguja estéril.

- Recipiente estéril.

B. OBTENCIÓN DE LA ORINA.

1. Si es posible realizar la toma inmediatamente luego del recambio de la sonda.

2. Pinzar la sonda a 10 cm del meato durante 1 a 2 dos horas como máximo.

3. Sin despinzar, desinfectar la sonda con Yodo povidona al 10 %, a 3-4 cm por encima de la pinza.

4. Extraer orina puncionando la sonda con jeringa y aguja.

5. Colocar la orina en frasco estéril.

C. VOLUMEN MÍNIMO DE LA MUESTRA.

Es suficiente un volumen de orina de 5-10 ml.

D. TRANSPORTE.

La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora. Cuando esto no sea posible debe refrigerarse a 4ºC durante un tiempo máximo de 12 horas.

E. OBSERVACIONES.

Para la búsqueda de micobacterias, la orina se recoge por técnica de chorro medio, durante 5 días consecutivos. En este caso el volumen de orina no debe ser inferior a 300 ml por muestra. Se elegirá preferentemente la primera micción de la mañana.

PUNCIÓN SUPRAPÚBICA

Es un procedimiento médico.

Indicaciones.

Evidencia clínica de infección urinaria con recuentos bajos o nulos, neonatos, lactantes y urocultivos repetidos con dos o más bacterias.

La punción supra púbica requiere un buen conocimiento de la técnica y de las precauciones que hay que adoptar, con rigurosa asepsia, descartando problemas de hemostasia y con la vejiga palpable y previa desinfección y anestesia local; se punciona ésta a 1,5 cm de la sínfisis pubiana, en la línea media, estando el paciente en decúbito supino, con una jeringa de 10 ml y con aguja larga (calibre 19) se aspira el contenido vesical. En caso de orina obtenida por punción suprapúbica se enviará al laboratorio lo antes posible. Colocar la muestra en frasco estéril. Se debe indicar en la hoja de pedido la técnica empleada para su extracción (dato importante a la hora de valorar el recuento de colonias).

RECEPCIÓN DE LA MUESTRA

Las muestras deben venir acompañadas de su respectiva hoja de pedido donde deben llenarse todos los datos solicitados por el laboratorio.

Los datos a preguntar son los siguientes:- Nombre y apellido completo.- N° de historial clínico.- Edad.- Sexo.- Servicio de procedencia y cama.- Tipo de muestra, catéter, supra púbica, etc.- Recibió antibióticos en los últimos 7 días, si es así anotar el

nombre del antibiótico y dosis.- Control o sospecha de algún germen anterior

RECHAZO DE LA MUESTRA

Si las solicitudes y/o las muestras no cumplen los requisitos mínimos e indispensables para su correcto procesamiento, el laboratorio deberá rechazarlas.

Algunos criterios a tomar en cuenta son:

- Muestras que no evidencian se refrigeradas más de 2 horas de colección.

- Rechazar las orinas de más de 24 horas colectadas.- Rechazar muestras de sonda de Foley.- Rechazar la orina de la bolsa de un paciente con catéter.- Si ha sido inadecuadamente colectada, transportada y

manipulada la muestra no será recepcionada.

MÉTODOS

Método de conteo en placa o recuento de colonias (método de Kass), el cual consta del siguiente procedimiento:

- Se homogeniza la muestra mediante agitación.- Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1ml de orina en

9.9ml de caldo tripticasa o de suero fisiológico estéril.- Se preparan diluciones de 1:1000 y 1:10000 a partir de la

dilución 1:100.- Se deposita 1ml de cada dilución en placas Petri estériles

que contienen agar tripticasa o medio CLED, mediante rotación suave favoreciendo a la distribución homogénea de la siembra.

- Se incuban todas las muestras a 37°C de 24 a 48 horas.- Para calcular el número de colonias se eligen las placas

que contengan de30 a 300 colonias. Contadas estas basta multiplicar su número por la dilución respectiva para obtener la cuenta total.

Método de asa calibrada

Esta estimación cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de Agar Sangre o medio CLED en una muestra de orina, sin centrifugar, empleando una asa de platino calibrada (4mm de diámetro).

Después de incubar las muestras a 37°C durante 24 a 48 horas se cuenta el número de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100, ya que el asa de platino contiene 0.01ml de orina.

LECTURA

Los resultados del estudio cuantitativo se reportan de la siguiente manera:

- No hubo desarrollo bacteriano.- Menos de 10000 colonias por ml.- Menos de 10000 y 100000 colonias por ml.- Más de 100000 colonias por ml/E.

Cuando se obtienen 2 recuentos sucesivos con más de 100000 colonias por ml, la probabilidad de infección es del 80%, cifra que se eleva a un 95% si el mismo resultado se obtiene en 3 recuentos sucesivos.

Por lo general las muestras contaminadas tienden a mostrar cuentas inferiores a 10000 colonias por ml, cuando el resultado revela valores intermedios, entre 10000 y 100000 colonias por ml, el examen debe repetirse.

PRACTICA DE UROCULTIVO

COMPETENCIA: Identifica la diferente flora patógena que puede desarrollarse en el tracto urinario.

MATERIAL:

*Asa bacteriológica.

*Porta objetos.

*Cubre objetos.

*Centrifuga.

*Microscopio.

* Incubadora.

*Mechero de Fisher.

* Cajas de Petri estériles.

* Pipetas de 1ml estériles.

* Tubos de ensayo conteniendo 9ml de agua peptonada, estériles.

Sustancias:

Muestra de orina tomada en frasco estéril.

Agar nutritivo.

Agar sal y manitol.

Agar sangre.

Agar Mc Conkey.

Agar EMB.

INTRODUCCIÓN

Las infecciones urinarias pertenecen al grupo de los procesos infecciosos más frecuentes de la patología médica. Su importancia radica en el daño que pueden ocasionar sobre la función renal.

Las vías urinarias normalmente son estériles por encima del nivel de la uretra distal. Los microorganismos que infectan las vías urinarias altas son comensales localizados en áreas vecinas. En esta colonización intervienen varios factores predisponentes que pueden ser de origen local o general. Los primeros incluyen la contaminación fecal del meato urinario, el cateterismo, la patología urinaria congénita o adquirida y el reflujo vesical. Entre los factores generales están la

diabetes mellitus, el embarazo y la terapia con fármacos de amplio espectro.

Las bacterias que con mayor frecuencia se aíslan de la orina de pacientes ambulatorios con infección urinaria son: Escherichia coli, Staphylococcus saprophyticcus, Proteus sp, Klebsiella sp, Enterococcus faecalis etc.

Para lograr que el cultivo de orina realmente sea veraz, requiere que las muestras sean obtenidas en condiciones óptimas.

PROCEDIMIENTO

El Urocultivo incluye:

1) Aislamiento e identificación de microorganismos.

2) Cuenta viable.

3) Antibiograma para los gérmenes patógenos aislados e identificados.

1) Aislamiento e identificación de los microorganismos

a) Mezclar perfectamente el frasco con la muestra de orina y depositar

aproximadamente entre 5 y 10 ml de orina en un tubo.

b) Centrifugarla durante 5 minutos a 3500 r.p.m.

c) Se desecha el sobrenadante dejando solo unas gotas de orina residual para emulsionar el sedimento.

d) Con la suspensión del sedimento se lleva a cabo el estudio

microscópico directo, tomando una gota del sedimento que se

deposita en un portaobjetos, colocándole un cubreobjetos.

e) Observarlo al microscopio con el objetivo seco fuerte, e identificar lo observado.

f) Mediante un asa de platino se hacen siembras por aislamiento en estrías del sedimento, obtenido al centrifugar una muestra de la orina colocada en tubo estéril y centrifugada. La siembra se realiza en los siguientes medios de cultivo. AS, Mc Conkey, ASM y EMB

g) Los medios inoculados se incuban a 37°C entre 24 y 48 horas.

h) Observar las características de cultivo de las colonias desarrolladas en los diversos medios. Si es necesario, realizar pruebas bioquímicas para confirmación de la especie bacteriana.

i) Preparar frotis para realizar una tinción de Gram para el estudio de morfología microscópica.

2) Cuenta viable

a) Realizar diluciones de la orina de la siguiente manera:

Colocar 5 tubos estériles conteniendo 9 ml. de agua peptonada. La cantidad de tubos utilizada dependerá de la carga bacteriana observada en el examen microscópico del sedimento urinario

Tomar 1ml. de la orina problema con una pipeta estéril,

y agregarlo al tubo No.1. (dil. 1:10), agitar el tubo y tomar de este 1ml. para pasarlo al tubo No.2, (dil 1:100) realizar el mismo paso las veces que sea necesario rotulando el tubo con la dilución correspondiente.

Recuerda que el número de diluciones dependerá de la carga bacteriana.

b) Colocar 1ml de cada dilución en diferentes cajas de Petri estériles y rotularlas con la correspondiente dilución.

c) Vaciar en estas cajas de 15 a 20 ml de Agar nutritivo fundido a Baño María previamente enfriado hasta que alcance una temperatura

que soporte la piel de tu mano (debes evitar que solidifique).

d) Mezclar perfectamente por rotación suave este agar con la dilución y dejar que solidifique. Incubar las cajas a 37°C durante 24 a 48 horas

e) Contar el número de colonias desarrolladas, para esto seleccionar para su lectura, la placa que muestre entre 30 a 300 colonias.45

f) Reportar la cuenta bacteriana de la siguiente manera:

Número de colonias contadas X el factor de dilución de la caja en la que se observa y cuentan las colonias bacterianas = Unidades

Formadoras de Colonias por ml. (UFC/ml).

Coprocultivo

¿Qué es coprocultivo?

Es un examen de laboratorio para encontrar organismos en las heces (materia fecal) que puedan causar enfermedad y síntomas gastrointestinales.

Razones por las que se realiza el examen

Este examen se realiza cuando usted tiene malestar gastrointestinal y el médico sospecha que la causa es una infección. Asimismo, se puede llevar a cabo si usted presenta diarrea severa, persistente (que no desaparece) o recurrente (que sigue reapareciendo) sin una causa conocida.

También se puede realizar si usted tiene diarrea y recientemente ha estado tomando antibióticos, para observar si bacterias como la C. difficile (que puede ocasionar diarrea después de que las personas toman antibióticos) están ahora presentes en el intestino.

La indicación de un examen coproparasitario, debe tener en cuenta las características del cuadro clínico que presenta el paciente, y debe atender al parásito que se sospecha, teniendo como premisa que esta metodología es útil para protozoarios y helmintos, cuyas formas evolutivas (trofozoítos, quistes, ooquistes, huevos, larvas, adultos) se emiten con las materias fecales.

REQUISITOS PARA OBTENER UN RESULTADO SATISFACTORIO

1) Solicitud de Examen coproparasitario.

2) Preparación del paciente.

3) Muestra correctamente obtenida.

4) Muestra seriada (3 muestras mínimas de materia fecal).

1) En la solicitud del examen, siempre debe constar además de los datos filiatorios del paciente, los datos clínicos (sintomatología, signología clínica relevante, diagnóstico clínico presuntivo), antecedentes personales, familiares y ambientales a destacar.

Antecedentes personales de inmunodepresión, de viaje al extranjero (zonas endémicas de parasitosis exóticas o de baja prevalencia para nuestro medio); antecedentes ambientales como vivienda sin agua potable, saneamiento, etc.; antecedentes familiares de parasitosis (parasitosis de grupo o parasitosis con una fuente de infección común para todos los integrantes), no deben obviarse en la solicitud, ya que tienen implicancias en el procesamiento de la muestra.

Es importante saber si el paciente ha recibido antidiarreicos, antiparasitarios y/o antibióticos y en tal caso cuales; se indicará el examen coproparasitario antes de iniciar tratamiento con cualquiera de los fármacos mencionados, si es posible.

Todos estos datos pueden adaptar o orientar la secuencia de técnicas diagnósticas que ejecutará el especialista en el laboratorio y son condición imprescindible para obtener resultados fidedignos.

2) Debe indicársele al paciente la realización de un régimen alimentario 48-72 hs. antes de realizarse el estudio, libre de frutas, verduras y grasas, dado que preparaciones con abundantes residuos o grasas, obstaculizan la visualización microscópica, pudiendo ser causa de falsos negativos.

3) Una muestra correcta de materia fecal para realizar un examen coproparasitario debe ser suficiente (mayor de 50 grs.), debe ser emitida recientemente pudiéndose conservar en heladera hasta unas 8-12 horas, debe ser enviada al laboratorio correctamente rotulada con nombre completo del paciente y fecha de emisión, en frasco de vidrio o plástico transparente, limpio, seco y de boca ancha , con tapa de rosca. La muestra debe recolectarse sin mezcla de orina, para evitar el deterioro de parásitos.

4) La muestra debe ser seriada, considerándose que muestras únicas solo permiten diagnósticos positivos en 60% de las materias fecales con parásitos; que tanto protozoarios como helmintos tienen ciclos de eliminación de quistes y huevos, con períodos negativos.

Existen diferentes esquemas sobre la secuencia de recolección de materias fecales para realizar un examen coproparasitario; algunos de los más usados indican: 3 muestras en días alternos o 3 muestras separadas 1 semana entre sí, teniendo siempre presentes las premisas antes mencionadas para la colecta de la muestra.

Procesamiento de la muestra una vez llega al laboratorio.

-Evitar contaminación por material no estéril.- Uso de contenedores y medios de transporte apropiados.

- Etiquetar muestra adecuadamente.- Temperatura de conservación: 4°C para evitar la proliferación

bacteriana.

Examen morfológico del crecimiento de las colonias cultivadas macroscópicamente y al

microscopio.

Se comprueba su olor, consistencia, presencia de mucus, sangre, restos de alimentos sin digerir.

Las características físicas de las colonias son de gran ayuda en la identificación. Cada microorganismo crece de manera diferente formando colonias de distinto color, forma, tamaño, textura, olor, brillo, etc. Existen colonias más o menos elevadas, con bordes enteros, estrellados, deflecados, y un largo etc. El tiempo de incubación necesario para que aparezcan las colonias también puede tener valor en la identificación. Las características de las colonias tampoco ofrecen un diagnóstico por si solas, pero dirigen los esfuerzos hacia un grupo más o menos amplio de microorganismos.

Hay colonias muy características, casi exclusivas de determinadas bacterias. Es el caso de las especies

de Proteus, que se extiende ampliamente por la placa formando un velo muy característico.

Examen microscópico

Una vez transcurrido el tiempo necesario se procede a sacar el medio de cultivo, la placa de Petri y se obtiene una pequeña muestra con la ayuda del asa de siembra y se coloca en un porta previamente humedecido con una gota de agua destilada. Para poder fijar la muestra lo podremos realizar con calor, por lo que se pasa a realizarlo con el mechero y cuidando de no quemarnos lo haremos con la ayuda de una pinza de madera.A continuación se procede a teñir la muestra.Tinción azul de metileno: El procedimiento es bastante sencillo. Primero se ha de fijar la muestra pasando el porta por el mechero varias veces. Luego se tiñe con el azul de metileno cubriéndola entera. Pasado 5 min. Se lava con agua destilada se deja secar y se procederá a observar en el microscopio con aceite de inmersión y en el objetivo de 100x.Esto nos permite comprobar la presencia o ausencia de leucocitos. Así:

 Presencia de leucocitos: La infección ha cursado con inflamación intestinal. Se trata por tanto de microorganismos invasivos como Salmonella, Shigella.

 Ausencia de leucocitos: Significa que no ha habido inflamación por lo que la infección puede ser debida a virus (Rotavirus) o a bacterias productoras de toxinas (Vibrio cholerae).

Para realizar la tinción de Gram: Primero se realiza un frotis con la

muestra en un portaobjetos.( Realizamos 3 frotis con tres colonias aisladas). Se fija la muestra en el mechero y se coloca después en la cubeta para proceder a teñirla.Se cubre la muestra con 1 minuto de cristal violeta, 1 min de lugol, 30seg y 1 min de fucsina básica, y se lava con agua destilada entre colorante y colorante además del alcohol y se deja secar.Esta tinción nos sirve para distinguir entre las bacterias Gram + y Gram – según sea la composición de su pared y apreciar visualmente su forma y organización.

EXAMEN MORFOLÓGICO DEL CRECIMIENTO DE LAS COLONIAS CULTIVADAS

MACROSCÓPICAMENTE Y AL MICROSCOPIO

1. Agar sangre: Colonias redondas, borde entero, circular, color blanquecino.2. Christensen: Colonias redondas, circular, convexa.3. Kia: Se observa producción de Ácido en todo el tubo, burbujas, agrietamiento e incluso desplazamiento del medio.4. McConkey: Colonias rosas a rojas si el aislado es capaz de fermentar la Lactosa y en caso de que fueran colonias sin color sería el caso contario.5. Hecktoen: No creció nada en este medio en 24 horas puede ser debido a un periodo de incubación insuficiente o a la siembra con inoculo muy diluido.

TINCIONES

-Con la tinción de Gram detectamos el tipo de bacteria que es, gracias a la diferenciación de su morfología.

AGAR SANGRE - Se observan diferentes agrupaciones de cocos: cocos, diplococos, tétrada, estreptococos, estafilococos.McCONKEY - Se observa agrupaciones de bacilos teñidos de azul por el azul de metileno.CHRISTENSEIN- Se observan agrupaciones de cocobacilos teñidos de azul por el azul de metileno.

TINCION DE GRAM

CHRISTENSEIN - Se observan agrupaciones de cocobacilos Gram +.

McCONKEY 

- Se observan agrupaciones de bacilos Gram – , algunos presentan puntos de color azul en la zona terminal del bacilo. Esto puede ser debido a que se estuvieran dividiendo

por lo que al romperse la capa externa de peptidoglicano se pudo teñir con el colorante de violeta de genciana. También pueden ser restos de este mismo colorante al realizar la tinción.

AGAR SANGRE 

- Se observan cocos gram negativos ( rosados) en su mayoría, pero también se pueden observan algunos color azul del colorante violeta de genciana.

PRACTICA DE COPROCULTIVO

COMPETENCIA: Identifica Enterobacterias por medio del coprocultivo.

MATERIAL:

Asa bacteriológica

Mechero Fisher

Estufa de incubación a 37ºC

Agares estériles de SS, EMB, Mc Conkey,

Caldo tetrationato, agar sulfito bismuto

Agar verde brillante.

Una muestra de heces recolectada en frasco estéril

Hisopos estériles

INTRODUCCIÓN

Las Enterobacterias representan la mayor parte de la flora microbiana del tracto intestinal del hombre. En ella se incluyen gérmenes comensales (Proteus y bacilos coliformes), así como patógenos del género Salmonella y Shigella. El vibrión colérico puede ser aislado de casos de cólera.

Durante las infecciones entéricas, cuando se presentan patógenos tales como Salmonella y Shigella, el bacteriólogo debe distinguir entre los habitantes normales del intestino y los agentes etiológicos de enfermedad.

Es importante destacar que las bacterias intestinales toman parte en los procesos digestivos tanto del hombre como de los animales. Ellos ayudan a la síntesis de vitaminas del complejo B y de la vitamina K.

La materia fecal evacuada debe ser reciente y deben cultivarse lo más pronto posible después de haber sido recolectada. Las muestras deberán obtenerse al inicio del cuadro clínico, antes de iniciar el tratamiento antimicrobiano.

Las muestras de heces se pueden tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y con tapa hermética, de preferencia estéril. Si la muestra se toma en el mismo laboratorio donde se va a realizar el aislamiento, no es necesario usar medio de transporte y hay que sembrar de inmediato.

En estudios de campo o cuando el laboratorio no esté cercano, la muestra se toma con un hisopo, el cual debe quedar bien impregnado de materia fecal. El hisopo se coloca en un medio de transporte como el Cary-blair.

PROCEDIMIENTO

1. Introducir un hisopo estéril en varios puntos de la muestra.

2. Descargar la muestra en un área pequeña de los medios de cultivo: SS, Mc

Conkey y EMB y realizar el estriado.

3. Incubar las cajas a 37ºC durante 24 o 48 horas

4. Observar las características morfológicas de las colonias desarrolladas indicando si existen cambios en el medio, pigmentos en la colonia etc.37

5. Tratar de identificar si existe crecimiento de Salmonella o Shigella que se manifiestan como colonias de color blanco en Mc Conkey e incoloras en EMB.

6. Al mismo tiempo que las placas, con la muestra fecal se inocula un medio de enriquecimiento como el caldo tetrationato, colocando el hisopo impregnado con la muestra en el caldo al cual se le agregó previamente 0.2 ml de yodo por gramo de materia fecal.

7. Incubar este medio de enriquecimiento por 12 o 18 horas a 37ºC

8. A partir del caldo tetrationato se siembran placas con medios inhibitorios como el agar verde brillante y el agar sulfito de bismuto, este último si se está buscando S. typhi. Después de incubar a 37ºC durante 24 horas la placa de verde brillante y 48 horas la de sulfito bismuto, se revisan cuidadosamente en busca de colonias sospechosas. En el verde brillante Salmonella crece como colonias rojas y en sulfito de bismuto como colonias negras.

9. Para mayor seguridad en la identificación de Enterobacterias es necesario realizar pruebas bioquímicas a las cepas aisladas en los medios de cultivo.Las más comunes son IMVIC.