toma de muestra de micosis superficiales

7/17/2019 Toma de muestra de micosis superficiales

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CÁTEDRA DE MICOLOGÍAFacultad de Bioquímica y Ciencias Biol!icas

"ni#e$sidad %acional del Lito$al

TOMA DE M"E&TRA DE MICO&I& &"'ERFICIALE& ()*+,- OBJETIVOS

- Conocer las instrucciones que deberá recibir el paciente para permitirnos realizar una buena toma de muestra.- Conocer las distintas formas de tomar una muestra de micosis superficialdependiendo de la lesin ! la cl"nica del paciente.- Conocer los distintos m#todos para el procesamiento de la muestra.- Conocer las diferentes condiciones de culti$o a utilizar se%&n la sospec'a

dia%nstica ! lo obser$ado al microscopio. I(T)O*+CCI,(

El dia%nstico de una micosis se 'ace fundamentalmente por la demostracindel 'on%o en las muestras biol%icas ! su posterior identificacin taonmica medianteel estudio de sus caracter"sticas morfol%icas ! fisiol%icas. El dia%nstico de una micosis superficial se realiza en / etapas0

1- 2reparacin pre$ia del paciente ! anamnesis.3- Toma de muestra0 a - antisepsia pre$ia del paciente

b - obtencin del material biol%icoc - recoleccin del material

/- 2rocesamiento de la muestra0 a- m#todos directos b- m#todos indirectos

+. 'RE'ARACI/% 'RE0IA DEL 'ACIE%TE

El dia%nstico de una micosis depende en %ran parte de una correcta toma de

muestra por lo que 'a! que poner especial atencin en su obtencin. 2ara ello se debeentre%ar en forma escrita las si%uientes indicaciones al paciente0

Indicaciones generales Justificación



a- (o aplicarse en forma tpica o localmedicamentos antif&n%icos por lo menos 4d"as antes de la toma de muestra.

5a aplicacin tpica de medicamentosantif&n%icos impide la recuperacin de 'on%osen los culti$os.

b- 6i%ienizarse la zona antes de concurrir al

laboratorio con 7abn blanco o solucinsalina 8si está contraindicado el 7abn9la$ando la lesin con una %asa ! no conal%odn.

5a 'i%iene pre$ia disminu!e las posibilidadesde contaminacin del culti$o con 'on%osfilamentosos ambientales.Se prefiere el uso de %asa porque cuando seutiliza al%odn pueden quedar fibras del mismoque pueden interferir en la obser$acinmicroscpica.

c- (o colocarse cosm#ticos talcosperfumes etc. en la zona de la lesin.

5os cosm#ticos talcos etc. dificultan la$isualizacin de las estructuras parasitarias aldirecto !a que suelen ser oleosos ! tener cristales.

Indicaciones especiales para lesiones en uñas Justificación

a- (o cortarse al ras las u:asinfectadas.

2ara obtener suficiente material ! obser$ar lascaracter"sticas de la lesin

b- Cepillarse las u:as infectadas lue%o derealizar ba:os de inmersin en salmueratibia de /; minutos repitiendo los / d"aspre$ios a la toma de muestra / $eces por d"a.

Esta operacin elimina detritos celulares !c#lulas muertas que interfieren en la realizacindel directo.

Indicaciones especiales para lesiones en piel o

uñas de pies

Justificación

a- (o concurrir con sandalias. 2ara e$itar que se produzca contaminacin dela lesin con conidias ! esporas de 'on%osfilamentosos ambientales

b- 5ue%o de realizar la 'i%iene de lazona infectada cubrir perfectamente el piecon medias ! calzado cerrado

2ara e$itar contaminaciones.

). TOMA DE M"E&TRA

a -<(TISE2SI< 2)EVI< *E5 2<CIE(TE

<ntes de la toma de muestra se debe proceder a la 'i%iene de la zona con etanol=;> para remo$er contaminantes tales como bacterias ! 'on%os filamentososambientales. Si se sospec'a candidiasis utilizar solucin fisiol%ica est#ril.



b - OBTE(CI,( *E5 ?<TE)I<5 BIO5,@ICO 5ESIO(ES *E 2IE5 5<?2IA< Lesiones "secas"

Se debe seleccionar para el raspado la zona perif#rica de la lesin donde se

aprecia un borde eritematoso que indica el crecimiento acti$o del 'on%o manifestacincl"nica producida por los dermatofitos 8tinea9. Si la lesin es 'omo%#nea podemosraspar de cualquier zona de la manc'a este tipo de lesin es caracter"stica de 2itiriasis$ersicolor. Lesiones "húmedas" o exudativas

Se deben tomar con un 'isopo 'umedecido en solucin fisiol%ica isotnica

est#ril. Si no se procesa inmediatamente la muestra el 'isopo se coloca en un tubo deensa!o est#ril para transportarse rápidamente al laboratorio. 5ESIO(ES *E C+E)O C<BE55+*O 82E5OS9

Se realiza la toma de muestra por traccin con una pinza est#ril. (o se debeutilizar una ti7era para cortar los pelos parasitados !a que eisten infecciones desde laemer%encia del fol"culo que se informarán como falsos ne%ati$os. 5as &nicasecepciones donde se pueden cortar los pelos con ti7era es cuando se sospec'a piedrane%ra o piedra blanca !a que en estas patolo%"as los fol"culos nunca están infectados.



+A<S

Onicomicosis subun%ueal distal 8OS*9

Como los dermatofitos en los pacientes con OS* in$aden a las u:as por el lec'oun%ueal la muestra debe tomarse en esa zona !a que all" se encuentra una ma!or concentracin de 'on%os $iables.

El material debe obtenerse con una cureta o bistur" n14 est#riles.

Onicomicosis Subun%ueal 2roimal

El 'on%o in$ade la u:a desde la cut"cula ! se instala en el lec'o un%ueal por esto se debe tomar la muestra por deba7o de la u:a propiamente dic'a con una curetao bistur" n14 est#riles ! lo más cercano posible a la l&nula. Onicomicosis Blanca Superficial



El 'on%o infecta la u:a en forma superficial por ende la toma de muestra serealiza raspando la zona blanca afectada utilizando una cureta o bistur" n14 o detama:o ma!or est#riles. Onicomicosis lateral o Candidiásica

El material debe ser tomado de los bordes laterales ! proimales buscandoobtener las escamas del lec'o un%ueal. En caso de ser escaso el material se puedetomar por deba7o de la u:a. En ambos casos se debe utilizar para la toma de muestrauna cureta o bistur" n14 est#riles. Este tipo de infecciones suelen presentar perioniis8inflamacin de la zona periun%ueal9 donde normalmente se puede obtener por presin material de supuracin. Este &ltimo debe reco%erse con 'isopo est#ril ! se lointroduce en un tubo est#ril con un peque:o $olumen de solucin fisiol%ica est#ril paramantener la 'umedad de la muestra para su posterior identificacin. c . RECOLECCI/% DEL MATERIAL

El material obtenido si%uiendo las t#cnicas descritas anteriormente 8pelos !oescamas de piel ! u:as9 se puede reco%er sobre una placa de 2etri est#ril o sobre unportaob7eto limpio flameado ! enfriado colocado de canto por deba7o de la superficieque se raspa se lo cubre con otro porta est#ril ! se los en$uel$e en una 'o7a de papelen la cual se 'a anotado la 'istoria cl"nica o el dia%nstico presunti$o de la lesinnombre edad seo ! otros datos &tiles del paciente.

,.'ROCE&AMIE%TO DE LA M"E&TRA 2ara determinar la etiolo%"a mictica de una lesin de piel ! faneras se deben

realizar0D ?#todos directos0 -Eámen directo

-Coloraciones

D ?#todos indirectos0 - Culti$os a. M1TODO& DIRECTO&

Es importante tener en cuenta las limitaciones de la microscop"a directa en eldia%nstico de las micosis superficiales !a que0

D 6a! un 4 a un 14> de falsos ne%ati$os en muestras de u:as.D El tiempo dedicado a la obser$acin ! la eperiencia del obser$ador influ!e enlos resultados obtenidos.



D Esta t#cnica no permite realizar un dia%nstico diferencial entre los pat%enos !aque en la ma!or"a de los casos es necesario obtener un culti$o puro para identificar el pat%eno.

Escamas de piel ! u:as.

D Colocar una %ota de O6 al 3; > en el centro de un portaob7eto. 5a %otadebe ser peque:a porque al calentar pueden producirse pro!ecciones del O6sobre el cubreob7etos que al enfriarse forma cristales que interfieren en la$isualizacin.D <%re%ar las escamas sobre la %ota ! por encima un cubreob7eto.D Flamear el portaob7eto 'asta el desprendimiento de burbu7as. Esteprocedimiento sir$e para aclarar la queratina. Si se sospec'a de 2itiriasis Versicolor se recomienda además te:ir los preparados con <zul de ?etileno. En caso desospec'ar 2seudomicosis se debe reco%er el material di%erido por el 6idrido cona%ua destilada lue%o se centrifu%a ! se efect&a la coloracin del sedimento por losm#todos de @ram in!oun ! @iemsa.

D Obser$ar con ob7eti$o de 1;G ! lue%o de H;G buscando0

a9 Filamentos que pueden estar o no artrosporados.Sospec'a dia%nstica0 dermatofitosis.2osibles a%entes causales0 *ermatofitos ! raramente otros 'on%os filamentosos9.b9 Est$uctu$as le#adu$i2o$mes.

Sospec'a dia%nstica0 candidiasis.2osibles a%entes causales0 Candida spp.c9 Filamentos co$tos y acumulo de le#adu$as de / a um de diámetro.Sospec'a dia%nstica0 2itiriasis $ersicolor.2osibles a%entes causales0 Malassezia spp.

Obser$ar con ob7eti$o de 1;;G buscando0

d9 Filamentos la$!os3 2le4uosos u ondulados de *35 a *36 um de di7met$o3 delon!itud #a$ia8le 9$esentando3 al!unos con $ami2icaciones. Son @ram !

Kcido resistentes 8in!oun 9.Sospec'a dia%nstica0 Eritrasma. en lesiones de in%le aila espacios interdi%itales !surcos submamarios.

<%entes causales0 Nocardia spp o Cor!neacterium spp Sospec'a dia%nstica0 Lueratlisis punctata. En lesiones de planta de pie.

<%entes causales0 Cor!neacterium spp. #ermatophilus congolensis o $!tococcus

sedentarius.



2elos0

D Cortar los pelos parasitados en fra%mentos de unos 4 mm aproimadamente.D ?ontarlos entre portaob7etos ! cubreob7etos con O6 al 3; >. 2ara pelos mu!

atacados podemos $isualizar me7or las estructuras con una %ota de @ue%u#n o5actofenol. En caso de sospec'ar Tricomicosis se debe reco%er el material di%eridopor el 6idrido con a%ua destilada lue%o se centrifu%a ! se efect&a la coloracindel sedimento por los m#todos de @ram in!oun ! @iemsa.D Calentar sua$emente 'asta el desprendimiento de burbu7as.

Obser$ar al microscopio en ob7eti$os de1;G ! H;G. Buscando0 a9 Conidios y:o ;i2as en el inte$io$ del 9elo . Se denomina 9a$asitacin endot$i4cuando se encuentran conidios in$adiendo el corte ! la m#dula del pelo. Este tipo deparasitacin se presenta cuando el a%ente causal es %richoph!ton rurum % tonsurans

! otras especies más raras del %#nero %richoph!ton. Cuando en el interior del pelo seobser$an 'ifas lar%as se denomina in#asin 27#ica que es causada eclusi$amentepor % schoenlenii .Sospec'a dia%nstica0 *ermatofitosis

<%entes causales0 Especies del %#nero %richoph!ton.b9 Conidios en el e4te$io$ del 9elo3 !ene$almente dis9uestos en cadenas . Este tipode parasitacin se denomina 9a$asitacin ectot$i4 que es causada por Microsporum

canis M g!pseum % mentagroph!tes % ruum ! otras especies raras de

Microsporum ! %richoph!ton.Sospec'a dia%nstica0 *ermatofitosis <%entes causales0 Especies del %#nero %richoph!ton o Microsporum.c9 Micelio 2ilamentoso li!e$amente 9a$du<co de = a 5 um> de di7met$o3 casitotalmente se!mentado acom9a?ados de ascos elí9ticos de )@ a ,@ um> en sudi7met$o mayo$ conteniendo 6 ascos9o$os 2usi2o$mes con un 2ilamento te$minalen cada 9olo>Sospec'a dia%nstica0 2iedra ne%ra.

<%ente causal0 &iedraia hortai .d9 Micelio 2ilamentoso con a$t$oconidios de 3 a H um de diámetro medio cu!o

desarrollo 'a tenido lu%ar entre la epiderm"cula ! el tallo del pelo.Sospec'a dia%nstica0 2iedra blanca.

<%ente causal0 %richosporon spp.

Obser$ar al microscopio en ob7eti$os de1;;G. Buscando0

e9 Filamentos la$!os3 2le4uosos u ondulados de *35 a *36 um de di7met$o3 de



lon!itud #a$ia8le 9$esentando3 al!unos3 $ami2icaciones. Son @ram ! Kcidoresistentes 8in!oun 9.Sospec'a dia%nstica0 Tricomicosis. ?ás com&n en $ello de ailas p&bico ointer%luteos.

<%ente causal0 Cor!neacterium flavescens.

8 . M1TODO& I%DIRECTO& C"LTI0O

Se debe realizar se%&n lo obser$ado en el análisis microscpico !o se%&n lasospec'a cl"nica. %'cnica de siemra

5a muestra debe inocularse en el medio adecuado realizando tres toques

separados en la superficie del medio de culti$o seleccionado. Tomando material antesde realizar cada uno de los toques. Esto se realiza para lo%rar una ma!or sensibilidadde la t#cnica !a que se multiplica por tres la posibilidad de recuperar un 'on%opat%eno por cada tubo sembrado.

Condiciones de cultivo según el agente patógeno

Sospec'a -Obser$acin

?edios de culti$o a utilizar Tiempo deincubacin

Temperaturade incubacin

*ermatofitia D SabouraudMD 5actrimelM 8<%ar Borrelli9D *.T.?.M

14 - 3; d"as 34 - 3 C

5e$aduras D SabouraudM 6asta = d"as 34 - 3 C

Malassezia spp. D <%ar *ionMD <%ar Sab. <ceiteOli$aM

6asta 14 d"as /3 C 8ideal9 a3C tambi#n

desarrolla

2iedra ne%ra D SabouraudM 6asta 14 d"as 34 - 3 C

2iedra blanca D SabouraudM 6asta 14 d"as 34 - 3 C

Eritrasma-Tricomicosis

D <%ar san%re 4> 6asta = d"as /4 C

MSe puede adicionar cloranfenicol 84; - 1;; u%ml9 para e$itar la contaminacin



bacteriana.

=.ACTI0IDADE&

a - Toma de muestra0Se realizará toma de muestra de micosis superficiales entre los alumnos por lo quecada uno realizará la preparacin pre$ia de la zona en donde eiste la sospec'a deuna infeccin f&n%ica o de al%&n a%ente causal de las pseudomicosis.

b- 2rocesamiento de las muestras

5as muestras obtenidas durante el traba7o práctico se procesarán como fue

eplicado anteriormente 8*irectos Frescos ! coloraciones9. <demás se procesaránmuestras cl"nicas obtenidas pre$iamente ! que se entre%arán como material detraba7o.

c- Obser$acin de preparadosSe realizará obser$acin de preparados de muestras cl"nicas de di$ersas patolo%"asf&n%icas.



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