NÚMERO MAS PROBABLE

(NMP)

Método Cuantitativo

Estimación de concentraciones de bacterias presenten en el agua

Inoculación de una serie de tubos en concentraciones decimales decrecientes

Medio de cultivo adecuado

Incubación en condiciones de tiempo y temperatura determinados

NÚMERO MAS PROBABLE (NMP)

Se utiliza para determinar número de bacterias presentes en una muestra

Estimación estadística

Se basa en el hecho de que cuanto mayor sea el número de bacterias en una muestra, mayor será la dilución

necesaria para reducir densidad hasta que no se desarrolle ninguna bacteria

FUNDAMENTO

Aislar grupo de Coliformes fecales

Seleccionando microorganismos

por incubación del inóculo

presente en caldo

Utilizando técnica de tubos múltiples

Descrito por McCrady en

1915

Microorganismos por contar no crecen en medios sólidos

Crecimiento en un medio líquido diferencial para identificar el microorganismo (bacterias

coliformes)

• Es un informe de que existe un 95% de probabilidades de que la población bacteriana disminuya

dentro de ciertos límites y de que el NMP es el número

estadísticamente más probable.

NMP

NMP se utiliza para:

Se fundamenta en la capacidad de los

organismos coliformes en

fermentar la lactosa con producción de

ácido y gas

Incubación a 35°C ± 1 °C durante 48 h., utilizando un medio de cultivo

que contenga sales biliares

Esta determinación consta de dos fases, la fase

presuntiva y la fase confirmativa

Prueba presuntiva

• Caldo lauril sulfato de sodio el cual

permite la recuperación de

los microorganismos dañados que se

encuentren presentes en la muestra y que

sean capaces de utilizar a la lactosa

como fuente de carbono

Prueba confirmativa

• Medio de cultivo caldo lactosado

bilis verde brillante el cual es

selectivo y solo permite el

desarrollo de aquellos

microorganismos capaces de tolerar

tanto las sales biliares como el verde brillante

La determinación del número más probable de microorganismos coliformes fecales se realiza a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se fundamenta en

la capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y producir gas cuando son incubados a una temperatura de

44.5 ± 0.1 °C por un periodo de 24 a 48 h.

Finalmente, la búsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos positivos de caldo EC, los cuales se siembran por agotamiento en medios selectivos y diferenciales (Agar Mac Conkey, Agar eosina azul de metileno) y posteriormente realizando las pruebas bioquímicas básicas (IMViC) a las colonias típicas

CAMPO DE APLICACIÓN

Coliformes fecales Coliformes totales Escherichia coli

Productos que se encuentran en bajas concentraciones de

microorganismos (<10 UFC/g o ml) Leche

Agua

Coliformes fecales

• Bacterias Gram-negativas

• Capaces de fermentar la lactosa

• Incubación 48 h a 44.5 °C

Bacilo corto Gram

negativo

Familia Enterobacteriaceae

Existen en el intestino

delgado de humanos y animales

Existen cepas de E. coli

patógenas que provocan enfermedades

diarreicas

TÉCNICA EMPLEADA

NORMAS MEXICANAS QUE REGULAN EL NUMERO MAS PROBABLE

NMX-F-187-1978. DETERMINACIÓN DEL NÚMERO MÁS PROBABLE DE GÉRMENES. METHOD OF TEST FOR GERMS

MOST PROBABLE NUMBER. NORMAS MEXICANAS. DIRECCIÓN GENERAL DE NORMAS.

• Objetivo:

• Esta Norma Mexicana establece el método microbiológico para determinar el número más probable de gérmenes.

• NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-112-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. DETERMINACIÓN DE BACTERIAS COLIFORMES.

TÉCNICA DEL NÚMERO MÁS PROBABLE.

• Objetivo:

• Esta Norma Oficial Mexicana establece el método microbiológico para estimar el número de coliformes presentes en productos alimenticios, por medio del cálculo del número más probable (NMP) después de la incubación a 35 °C de la muestra diluida en un medio líquido.

VENTAJAS

La capacidad de estimar tamaños

poblacionales basados en atributos

relacionados a un proceso

(selectividad)

Provee una recuperación

uniforme de las poblaciones

microbianas de suelos diversificados

Determina sólo organismos vivos y

activos metabólicamente

Suele ser más rápido e igual de confiable

que los métodos tradicionales de

esparcimiento en platos de cultivo,

entre otros

Bibliografía • Mendez, R. 2007. OP/PRODUCCION LIMPIA EN LA INDUSTRIA DEL CURTIEMBRE.

Universidad Santiago de Compostela. 401 pp

• Tortora, G. Berdell, R. y Case, C. 2007. Introduccion a la microbiología/ Microbiology An

introduction. Ed. Médica Panamericana. 959 pp

• Disponible en: http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/P7_NMPcoliformes_19617.pdf

consultado 12 de noviembre de 2012

• Disponible en: http://www.uprm.edu/biology/profs/massol/manual/p4-

nmpenumeracion.pdf consultado 12 de noviembre de 2012

• Disponible en: www.cofepris.gob.mx/TyS/Documents/.../ccayacm04.pdf consultado 12 de

noviembre de 2012

• Disponible en: http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/112ssa14.html consultado 12

de noviembre de 2012

• Disponible en : http://www.colpos.mx/bancodenormas/nmexicanas/NMX-F-187-1978.PDF

consultado 12 de noviembre de 2012