vibrio parahaemolyticus en chile. dr. juan carlos hormazábal o. jefe subdepartamento microbiología...

Vibrio parahaemolyticus en Chile.

Dr. Juan Carlos Hormazábal O.Jefe Subdepartamento Microbiología Clínica

Instituto de Salud Pública de Chile.

Vibrio parahaemolyticus

Aislado por primera vez en Japón en 1950.

Uno de los agentes asociados a ETA más prevalentes en Asia. Causa de brotes desde 1969 en U.S.A.

Asociado al consumo de alimentos de origen marino (bivalvos, crustáceos)

Vibrio parahaemolyticus.

Características generales.

Familia Vibrionaceae Bacilo, gram neg., móvil, no esporogénico Halófilo Parte de la flora normal de estuarios y costas del mundo. Densidad bacteriana ambiental aumenta en períodos

cálidos. Capacidad de producir enfermedad variable, cepas ambientales mayoritariamente no patogénicas.

V. parahaemolyticus.

• Dosis infectante: > 106 células

• Modo de transmisión:Ingestión de alimentos marinos crudos o mal cocinados.Contaminación cruzada ( con otros Alimentos o agua marina contaminados)Período a temperatura ambiental necesario.

• Reservorio:Costa marina, sedimento ( invierno), en agua libre (verano)

• Supervivencia:Crustáceos hasta 120 días.

Gastroenteritis:

Manifestaciones Clínicas.

Gastroenteritis

Infección Entérica: %

-DiarreaDiarrea acuosa acuosa 9898-Cólico abdominalCólico abdominal 8282-NáuseasNáuseas 7171-VómitosVómitos 5252-CefaleaCefalea 4242-FiebreFiebre 2727-CalofríosCalofríos 2424

Período incubación 12-24 Hrs. (4-96 hrs).Proceso autolimitado ( 3 días ).

Infección Heridas Septicemia

Síntomas y Signos Porcentaje de frecuencia

Dolor abdominal 90%

Nauseas y vómitos 89%

Diarrea sin sangre 80%

Fiebre 77%

Deshidratación 38%

Parestesias 16%

Calambres 16%

Diarrea con sangre 6%

Cefalea 4%

Elaborado por Departamento de Epidemiología, Ministerio de Salud de Chile

Fuente: SEREMI X Región (n = 502 acumulados al día 12 de febrero 2005)

Brote de Gastroenteritis por V. parahaemolyticusPrincipales Síntomas y Signos. Chile, Enero - Febrero 2005

Hallazgos de Laboratorio.

Deposiciones acuosas, a veces mucoides o con sangre (<15%) Leucocitos fecales (+) TCBS agar, Colonias verde opacas.

Pruebas Moleculares:

- PCR Tdh-Trh (Lee et al., Bej A. Et al., Suthienkul et al.)

- Hibridización sondas Tdh-Trh (Osawa et al., Nishibuchi M. Et al.)

- Oligonucleotide array tech. (Bang-Xing Hong et al.)

ELISA TDH-TRH


Deposición directa o en medio Cary Blair

Agar TCBS

Repicar coloniasverdes a placa de

Agar Sangre

OXIDASA

Descartar

- +Siembra de

TSILIAMIO

Incubar 4-5 h a 35ºC


Diagnóstico Presuntivo

Laboratorio de Referencia ISP

Confirmación bioquímica

Confirmación

Informe al Laboratorio Informe al LaboratorioInforme al Servicio de SaludNotificación al Ministerio de Salud

No Si

OxidasaTSILIAMIOArgininaVoges ProskauerArabinosaManitolCaldo Corazón (Indol)NaCi 0%NaCi 1%


V. parahaemolyticusFlujograma Diag. Microbiológico.

Tratamiento

No requerido en la mayoría de los casos.

Tratamiento antibiótico no recomendado ya que no reduce el curso clínico ni la excreción del agente.

Pacientes de edades extremas pueden requerir terapia de rehidratación oral o parenteral.

V. parahaemolyticus.


Cepas patogénicas -hemólisis en Agar Wagatsuma.

95% aislamientos clínicos FK (+) (Joseph et al 1983, Morris 1985)

0.18-1% Aislamientos amb. son FK(+) En el ambiente un pequeño grupo de cepas patogénicas sobreviven en una extensa población de cepas no patogénicas. (Thomsom et al 1976, Joseph et al, 1983).

FK asociado a Hemolisina Termoestable Directa (TDH)

Fenómeno kanagawa

V. parahaemolyticus, Factores de virulencia:

TDH (hemolisina Termoestable Directa).

Importante determinante de virulencia 90% cepas clínicas (Nishibushi et al., Miyamoto et al., Okuda et al., Wong et al.).

<1% cepas ambientales. No inactivada por calor (100ºC por 10 min) Actividad hemolítica, citotóxica, aum. permeab. vasc.(Honda, Ljungh, Takeda et al).

Aumenta flujo iónico en celulas intestinales (Cl), formación de porinas Fenómeno Kanagawa: Hemólisis en Agar Wagatsuma (Miyamoto et al., 1969).

Cepas K(-) poseen gen tdh 16% (Nishibuchi et al.)

Cepas k intermedias 1 copia tdhCepas K(+) 2 copias tdh (1,2).

Regulación expresión tdh:Fortaleza promotorVptoxRS operon: regulador global genes Vp.Expresión preferencial tdh2 (90%).

TRH (Hemolisina Relacionada a TDH).

Descubierta en brote islas Maldivas, aislamientos con con ausencia de tdh (Honda et al. 1987).

Similares características biológicas, inmunológicas y fisicoquímicas a TDH

Codificada por gen trh, 69% similaridad con tdh2

Puede coexistir con tdh (Okuda et al.)

Generalmente asociado a producción de Ureasa (Okuda et al.) isla de patogenicidad (Park et al.)

V. parahaemolyticus Factores de virulencia:

Tipificación Vibrio parahaemolyticus.Serotipificación:Estandarizada, técnicamente dificultosa y cara (Centros de Referencia).

O Group K Type1 1,25,26,32,38,41,56,58,64,69

2 3,28

3 4,5,6,7,27,30,31,33,37,43,45,48,54,57,58,59,65

4 4,8,9,10,11,12,13,34,42,49,53,55,63,67

5 5,15,17,30,47,60,61,68

6 6,18,46

7 7,19

8 8,20,21,22,39,70

9 9,23,44

10 19,24,52,66,71

11 36,40,50,51,61

12 52

Total 12 Total 65

El esquema antigenico fue propuesto por Sakazaki et al. 1963, Hugh, R., and J.

C. Feeley. 1972, (Elliot. E. L., FDA U.S.A., 1998.)

O lipopolisacárido, K cápsula.

O3:K6

O3:K6

O3:K6 O3:K6O3:K6

O3:K6O4:K68O1:KUT

O4:K68O4:K12O1:K56

O4:K63

O3:K6

Vibrio parahaemolyticus en Chile.

Antecedentes:

S.S. Arica desde inicio de años 90 envía cepas de casos clínicos para su confirmación por Lab. de Referencia.

S.S. Antofagasta, Brote asociado a consumo de mariscos,298 casos, Noviembre 1997-Abril 1998.

S.S. Llanchipal, extenso brote Enero-Febrero 2004.

Brote de Intoxicación Alimentaria por Vibrio parahemolyticus en el Servicio de Salud Llanchipal.

El domingo 18 de enero del 2004, se advirtió un importante aumento del número de consultas por cuadros de diarrea, cólicos, náuseas y vómitos. mayoritariamente en adultos y de evolución autolimitada (1-2 días).

El total de casos superó los 1.500 y generó brotes en otras regiones del país.

Se realizó la investigación de brote y en todos los casos encuestados apareció el antecedente de consumo de mariscos.

El 22 de enero, se estableció asociación con la extracción y consumo de mariscos en las playas del Seno de Reloncaví, comuna de Puerto

Montt.

Dra. Andrea Olea, Depto. Epidemiología MINSAL

S.S. Llanchipal: estudio de laboratorio de las muestras clínicas y ambientales.

En áreas muestreadas, se observó un aumento de las temperaturas del agua de mar, de media estacional (verano) de 14°C a 19 - 20°C.

Resultado confirmado por ISP: Vibrio parahemolyticus.

El 22 de Enero MINSAL dicta Resolución que prohibe actividades extractivas y de comercialización de mariscos procedentes de las zonas afectadas.

Posterior a esto, se observa una disminución de las consultas por esta causa en los Centros Asistenciales.

Dra. Andrea Olea, Depto. Epidemiología MINSAL

V. parahaemolyticus, cepas de erigen clínico recibidas por el Lab. de Referencia, ISP 1998- Marzo 2005.

Sección Bacteriología, ISP-Chile

39

189

57 64 46

193

117

175

767

6 90

520

100

200

300

400

500

600

700

800

900

1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005*

Años

Nº

de

Cep

as

Nº % Nº % Nº %I Tarapacá 8 0,1 1 12,5 0 0,00II Antofagasta 0 0,0 0 0,0 0 0,00III Atacama 0 0,0 0 0,0 0 0,00IV Coquimbo 354 0,0 0 0,0 0 0,00V Aconcagua 1271 12,1 2 0,2 0 0,00VI O´Higgins 341 3,3 6 1,8 0 0,00VII Maule 839 8,0 0 0,0 0 0,00VIII Bío-Bío 2149 20,5 15 0,7 0 0,00IX Araucanía 262 2,5 1 0,4 0 0,00X Los Lagos 3693 35,2 33 0,9 1 0,03XI Aysén 2 0,0 0 0,0 0 0,00XII Magallanes 2 0,0 0 0,0 0 0,00RM Metropolitana 1570 15,0 1 0,1 0 0,00

10491 100 59 0,6 1 0,01Elaborado por Dpto. Epidemiología Ministerio de Salud de Chile

Fuente: Notificaciones de SEREMIS de Salud de Chile

Tabla N°

País

Brote de Gastroenteritis por Vibrio parahaemolyticus. Hospitalización y Letalidad. Chile, Enero - Marzo 2005

Casos (al 22/03/2005)Región

FallecidosHospitalizados

V. parahaemolyticus TDH-TRH

382 bp

460 bp

TDH

TRH

PCR

Gen Secuencia Amplicon Referencia

Tdh 5átgttgaagctgtaccttga 3´

5´gtaccgatattttgcaaa 3´

382 bp Suthienkul et al.

JID, 1995;172:1405-8

Trh 5ćtctactttgctgtacttga 3´

5áatattctggagtttcat 3´

460 bp Suthienkul et al.

JID, 1995;172:1405-8

04-22 Cholgas04-31 Cholgas04-85 Choritos04-86 Choritos04-87 Choritos04-90 Almejas04-91 choritos04-360 Agua Mar04-12-1 Choritos04-124 Cholgas04-135 Choro Malton04-92 coprocultivo04-343 Coprocultivo04-163 coprocultivo04-32 Cholgas04-105 Choritos04-305 Cholgas04-62 Choritos04-363 Torula04-62 Cholgas04-154 Choritos04-13-1 Navejuelas04-33 Cholgas04-99 Choritos04-10 Choritos04-107 Choritos04-116 Choritos04-30 Choritos04-45 Mariscos04-127 Choro Malton04-351 Coprocultivo04-125 Choro Malton04-126 Choro Malton04-128 Choro Malton04-02 Ostras04-139 Choro Malton04-133 Choro 04-265 coprocultivo04-17 Coprocultivo04-19 Coprocultivo04-21 Coprocultivo04-58 Coprocultivo04-73 Coprpocultivo04-94 Coprocultivo04-06 Coprocultivo04-07 Coprocultivo04-08 Coprocultivo04-14-1 Ostras04-95 coprocultivo04-143 coprocultivo04-145 coprocultivo04-149 coprocultivo04-157 Coprocultivo04-171 coprocultivo04-190 coprocultivo04-200 coprocultivo04-215 coprocultivo04-268 coprocultivo04-274 coprocultivo04-276 coprocultivo04-287 coprocultivo04-316 Choritos04-327 Coprocultivo04-328 Coprocultivo04-270 coprocultivo04-39 Mariscos04-42 Mariscos04-152 Chorito04-102 Choritos04-15-1 Choritos04-64 Choritos04-88 Choritos

100908070605040

V. parahaemolyticus

PFGE, patrones de Restricción enzima sfiI

04-22 Cholgas Llanchipal

TDH TRH

04-31 Cholgas Llanchipal(-) (-)(-) (-)

04-85 Choritos Llanchipal (-) (-)04-86 Choritos Llanchipal (-) (-)04-87 Choritos Llanchipal (-) (-)04-90 Almejas Llanchipal (-) (-)04-91 choritos Llanchipal (-) (-)

(-) (-)04-360 Agua Mar Llanchipal04-12-1 Choritos Llanchipal (-) (-)04-124 Cholgas Llanchipal (-) (-)04-135 Choro Malton Araucania S (-) (-)

(+) (+) (+) (-) (+) (-)

04-92 coprocultivo Osorno04-343 Coprocultivo Val-S-Antonio04-163 coprocultivo Val-S-Antonio04-32 Cholgas Llanchipal (-) (-)04-105 Choritos Llanchipal (-) (-)04-305 Cholgas Llanchipal (-) (-)04-62 Choritos Llanchipal (-) (-)

(-) (-)04-363 Torula Llanchipal04-62 Cholgas Llanchipal (-) (-)04-154 Choritos Llanchipal (-) (-)04-13-1 Navejuelas Llanchipal (-) (-)04-33 Cholgas Llanchipal (-) (-)04-99 Choritos Llanchipal (-) (-)04-10 Choritos Llanchipal (-) (-)04-107 Choritos Llanchipal (-) (-)04-116 Choritos Llanchipal (-) (-)04-30 Choritos Llanchipal (-) (-)04-45 Mariscos M. Central04-127 Choro Malton Araucania S (-) (-)04-351 Coprocultivo Antofagasta04-125 Choro Malton Araucania S (-) (-)04-126 Choro Malton Araucania S (-) (-)04-128 Choro Malton Araucania S (-) (-)

(-) (-)04-02 Ostras Llanchipal04-139 Choro Malton Araucania S (-) (-)04-133 Choro Araucania S (-) (-)

(+) (+) (+) (-)(+) (-)

04-265 coprocultivo Arica04-17 Coprocultivo Llanchipal04-19 Coprocultivo Llanchipal04-21 Coprocultivo Val-S-Antonio04-58 Coprocultivo Araucania S04-73 Coprpocultivo Llanchipal04-94 Coprocultivo Maule04-06 Coprocultivo Llanchipal04-07 Coprocultivo Llanchipal04-08 Coprocultivo Iquique04-14-1 Ostras Llanchipal04-95 coprocultivo Llanchipal04-143 coprocultivo Valdivia04-145 coprocultivo M. Oriente04-149 coprocultivo Talcahuano04-157 Coprocultivo Viña-Valpo04-171 coprocultivo Concepción04-190 coprocultivo Coquimbo04-200 coprocultivo Araucania S04-215 coprocultivo Maule04-268 coprocultivo Arica04-274 coprocultivo Arica04-276 coprocultivo Arica04-287 coprocultivo Coquimbo04-316 Choritos Llanchipal04-327 Coprocultivo Talcahuano04-328 Coprocultivo Araucania S04-270 coprocultivo Arica04-39 Mariscos M. Central04-42 Mariscos M. Central04-152 Chorito Llanchipal

(-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-)

04-102 Choritos Llanchipal04-15-1 Choritos Llanchipal04-64 Choritos Llanchipal04-88 Choritos Llanchipal

100908070605040

(+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-)

(-) (-)

(+) (-)

Orgen Clin/Amb Área

(+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-)

V. parahaemolyticus

Genotipos

Nº Cepa Origen Procedencia Ampicilina Tetraciclina Trim/sulf C

V-171 Clínico SS Coquimbo 9 27 23 29

V-172 Clínico SS Osorno 14 25 26 30

V-173 Clínico SS Arica 6 25 26 30

V-174 Clínico SS Llanchipal 9 23 25 30




V-178 Clínico SS Araucania Sur 11 27 24 30

V-179 Clínico SS Iquique 8 24 24 29

V-180 Clínico SS Maule 8 23 24 30

V-181 Clínico SS MOriente 11 24 24 31

V-182 Clínico SS Talcahuano 10 25 24 32

V-183 Clínico SS Viña Valparaiso 8 23 24 28

V-184 Clínico SS Concepcion 11 29 26 33

V-185 Clínico SS Arica 11 29 25 31

V-186 Ambiental SS Llanchipal 8 24 23 28



V-189 Ambiental SS Araucania Sur 13 25 23 30

V-190 Ambiental SS MCEntral 9 27 24 32



V-193 Ambiental SS Araucania Sur 12 26 23 30



V. parahaemolyticus, Biotipificación.

20042004n=49n=49

O3:K6

O3:K58O4:K12

O6:K46 O10:KUT

Vibrio parahaemolyticus, Vibrio parahaemolyticus, serotipos mas serotipos mas frecuentes en cepas de origen clínico, frecuentes en cepas de origen clínico,

ISP 1998-2004ISP 1998-2004

20042004n=42n=42

O4:K9

O3:KUT

O11:KUT

O10:KUTO6:KUT

O5:K30

O4:KUT

Vibrio parahaemolyticus, Vibrio parahaemolyticus, cepas de origen cepas de origen ambiental, no pandémicas, Chile 1998-2004ambiental, no pandémicas, Chile 1998-2004

Cepas ambientales año 2004Serotipo No %

O3:KUT 15 35,7O4:K9 9 21,4

O4:KUT 9 21,4O5:K30 4 9,5O6:KUT 1 2,4

O10:KUT 2 4,8O11:KUT 2 4,8

Total 42 100

No pandémico

Genotipificación Vibrio parahaemolyticus, ISP 1998-2004

Año Origen Nº Cepas positivas

toxR

tdh trh GS-PCR

ORF8 PCR

2004 ClinicoAmbiental

4943

4943

491

40

441

441

2003

Clinico

36 36 34 7 29 29

2002

Clinico

58 58 57 6 50 49

2001

Clinico

14 14 14 3 10 10

2000

Clinico

19 19 19 2 17 17

1999

Clinico

17 17 17 3 14 14

1998 Clinico

85 85 85 9 74 73

Origen

1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 Total %

Clínico O3:K6 67 12 16 9 49 29 41 223 80,2O3:K58 5 1 1 1 1 - 3 12 4,3OUT: K6 2 1 - - - - - 3 1,1

Clínico O1:K23 - - - - - 2 - 2 0,7O1: K56 4 1 - 1 - - - 6 2O1:KUT - 1 - - - 1 - 2 0,7O3:K29 - - - 1 - 1 - 2 0,7O3:KUT - - - - 1 - - 1 0,4O4:K12 2 - - - 4 2 3 11 3,9O5:K15 - - - - 1 - - 1 0,4O6:K18 1 - 1 - 1 - - 3 1,1O6:K46 1 - - - - 1 1 3 1,1O8:K20 - - - - 1 - - 1 0,4

O10:K19 1 - - - - - - 1 0,4O10:K66 - 1 - - - - - 1 0,4O10:KUT - - - 2 - - 1 3 1,1OUT:KU 2 - 1 - - - - 3 1,1

Total 85 17 19 14 58 36 49 278 100

Serotipo Año de aislamiento

Pandémico

No Pandémico

V. Parahaemolyticus Chile 1998-2004 Determinacion de grupos pandémicos

Pandemic Environmental O3:K6 NA NA NA NA NA NA 1 1

Nonpandemic

Environmental O3:KUTO4:K9

O4:KUTO5:K30O6:KUT

O10:KUTO11:KUT

Total

NANANANANANANA

NANANANANANANA

NANANANANANANA

NANANANANANANA

NANANANANANANA

NANANANANANANA

15994122

42

15994122

42

Source Serotype Year of isolation

1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 Total

Vibrio parahaemolyticus, serotipos pandemicos y no pandemicos en cepas Ambientales, ISP 1998- 2004

Antimicrobiano Interpretación

Resistente Intermedio Sensible

Ampicilina* 61 (61,6%) 38(38,4%) 0

Tetraciclina* 1(1%) 0 98(99%)

Gentamicina** 1(1%) 61(61,6%) 37(37,4%)

Ciprofloxacino** 0 7(7,1%) 92(92,9%)

SXT* 0 1(1%) 97(99%)

A. Nalidíxico** 2(2%) 0 97(98%)

Cloranfenicol* 0 0 97(100%)

Ceftriaxona** 0 0 99(100%)

*Lectura tabla NCCLS de Vibrio cholerae**Lectura tabla NCCLS Enterobacterias

Susceptibilidad V. parahaemolyticus

ISP total 99 cepas, año 2005

V. parahaemolyticus en Chile.

•Patógeno emergente.

•Estabilidad

•Clon pandémico O3:K6

•Cepas no pandémicas

•Inmunidad natural

•Inóculo

•Pautas de manejo clínico

•Control ambiental

Agradecimientos:

Sección Bacteriología ISP

T.M. Wally SilvaT.M. Berta OlivaresT.M. Soledad PratTec Lab. Ana MellaTec. Lab. Esperanza Ugarte

Unidad de Desarrollo ISP

PhD. Jorge Fernández

Centre for Diarrhoeal Disease Research, Dhaka, Bangladesh

Dr. Balakrish Nair

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