vibrio cholerae, vibrio parahaemolyticus de lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes...

47
Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo Microbiológico a lo Molecular Dr. Juan Carlos Hormazábal O. Jefe Subdepto. Enfermedades Infecciosas Instituto de Salud Pública de Chile

Upload: others

Post on 17-Apr-2020

12 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus

De lo Microbiológico a lo Molecular

Dr. Juan Carlos Hormazábal O.

Jefe Subdepto. Enfermedades Infecciosas

Instituto de Salud Pública de Chile

Page 2: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticusDe lo Microbiológico a lo Molecular:

� Generalidades

� De lo Microbiológico a lo Molecular: Vibrio cholerae

� Vibrio cholerae en Chile

� Vibrio parahaemolyticus en Chile

Page 3: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Vibrio sp.

Familia Vibrionaceae

Género extraordinariamente diverso con mas de 85 especies

identificadas

Sólo 12 especies han sido relacionadas con infección en

humanos

Bacilos Gram negativos curvos, anaerobios facultativos, catalasa

y oxidasa positivos

Móviles, con uno o varios flagelos polares

Requieren Na para su crecimiento, y las especies

halofílicas requieren NaCl para su desarrollo.

Mayores representantes:

Vibrio cholerae

Vibrio parahaemolyticus

1. Generalidades

Man of Clinical Microbiol, 9th Ed ASM Press

Page 4: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Heitmann et al.

Vibrios Patógenos para el Hombre

1. Generalidades

Page 5: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Vibrio cholerae, Una Historia, De lo Microbiológico a lo Molecular

Cólera, por siglos ha sido y es una enfermedad diarreica aguda que

afecta a millones de personas en el mundo. En térmicos históricos, hay

muy pocas enfermedades que se pueden igualar el cólera en términos

de severidad y expansión explosiva en brotes epidémicos.

Su capacidad de daño a la humanidad ha sido motor de una intensiva

investigación clínica y científica para la formulación de estrategias de

tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad.

Como fruto de este esfuerzo histórico se ha generado valiosa

información en pato-fisiología, genómica y evolución del Vibrio cholerae

2. De lo Microbiológico a lo Molecular

Asoke C.Ind. J Med Res 2011 133;164-170

Page 6: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

2. De lo Microbiológico a lo Molecular

Vibrio cholerae, Dr. Robert Koch y el nacimiento de la Microbiología.

El los inicios del 1800, se creía que el Cólera era causado por el

“miasma” (aire maligno)

En 1854 el Dr. Fillipo Pacini propone la teoría del “germen” del

Cólera, identifica organismos en “forma de coma” como causa de

la enfermedad

1882, se establecen los postulados de Koch, que establece la

etiología microbiana de las enfermedades infecciosas

En 1883, el Cólera irrumpe en Alejandría, Egipto. Alemania envía

al Dr. Robert Koch a estudiar el amenazante brote.

En 1884 el Dr. Koch establece la etiología microbiana del cólera,

constituyendo una piedra fundamental en la naciente

Microbiología Clínica

Page 7: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

2. De lo Microbiológico a lo Molecular

El Cólera, el agua y la Epidemiología

En 1854 se produce un agresivo brote en Londres

El Dr. John Snow (anestesista 1813-1858), postula

que las “infecciones intestinales” eran causadas

por la ingestión de material causal

Luego de investigar los casos de un pequeño brote, sus domicilios y las

fuentes del agua que consumían, estableció que la fuente del brote

provenía de la bomba de agua de la cual se surtía el barrio

El Dr. Snow convence a las autoridades para retirar el mango de bombeo

para que el barrio no utilice esta fuente. A los pocos días el brote declina

A pesar deque el origen microbiológico del Cólera no estaba firmemente

establecido, el Dr. Snow establece un método de investigación de un brote

epidémico basado en la colección sistemática de datos y uso de métodos

estadísticos estableciendo una nueva perspectiva en las ciencias médicas

llamada Epidemiología.

Page 8: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

2. De lo Microbiológico a lo Molecular

Cólera y la Toxina Colérica: Estableciendo el fundamento biológico de la enfermedad

Los “Factores Tóxicos” fueron inicialmente propuestos por Koch

En Calcuta en 1959 se establece el rol de la CT en modelo animal.

La purificación de la CT permite establecer estructura sub unidades A B5

ADP ribosilación del GTP que activa permanentemente la Adenilato

ciclasa, lo que aumenta AMPc intracelular

Perdida de sal, agua Diarrea masiva

Shamini et al. Bioinformation. 2011 6(1):1-9

Asoke C.Ind. J Med Res 2011 133;164-170

Page 9: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

2. De lo Microbiológico a lo Molecular

Cólera: Vibrios viables pero no cultivables

Por muchos años, la microbiología ha utilizado el cultivo como gold

estándar

V. cholerae subsiste en el ambiente en forma viable pero no cultivable

Explica la falta de aislamiento ambiental de V cholerae O1 en periodos

inter-epidémicos

El fundamento fisiológico aun es desconocido

Este estado especial y la integración del Vibrio

a biopelículas, la asociación con zooplacton

establece una nueva dimensión en la ecología

del V. cholerae que impacta profundamente

en la dinámica de la transmisión del cólera.

Uberaba et al. Rev. Soc. Bras. Med. Trop., 40, n. 4, Aug. 2007

Asoke C.Ind. J Med Res 2011 133;164-170

Page 10: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

2. De lo Microbiológico a lo Molecular

Cólera, un cuento de dos cromosomas

Usualmente las bacterias contienen un solo cromosoma circular

V. cholerae contiene dos cromosomas circulares

chrI, cromosoma mayor, contiene genes de patogenicidad y crecimiento

chrII, cromosoma pequeño, contiene los genes de regulación transcripcional y

transporte de sustratos, para asimilación de nutrientes en el ambiente

La distribución en dos cromosomas facilitaría la sobrevivencia en el intestino

humano y en el ambiente en un ciclo muy complejo para permitir la vida libre y en

asociación con superficies biológicas y no biológicas

Chin el al. N Engl J Med, 2011;364:33-42

Indian J Med Res, 2011;133:164-170

Page 11: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

2. De lo Microbiológico a lo Molecular

Bacteriófagos, Islas de Patogenicidad y Evolución de Cepas Epidémicas

V. cholerae en un habitante común en ecosistemas acuáticos, pero muy pocos

poseen la capacidad de enfermar al hombre

200 serogrupos, pero solamente O1 y O139 se asocian con enfermedad y brotes

La reciente O139 ha emergido de O1 El Tor, por el intercambio horizontal de

genes que determinan biosíntesis antígenos O.

Cepas patogénicas evolucionaron de cepas progenitoras no patogénicas a

través de la adquisición de genes de virulencia móviles

Elemento genético CTX que incluye CT y otras toxinas accesorias

Islas de Patogenicidad que det. pili TCP y otros mec. virulencia

El elemento CTX y receptores TCP se originan de bacteriófagos

Diversos estudios filogenéticos han determinado las formas de diseminación en

escenarios de epidemia y endemia

Asoke C.Ind. J Med Res 2011 133;164-170

Ali et al. EID, 2011,17(4) 699-701

Ghosh el al. FEMS Microbiol Lett. 2008 Nov;288(2):196-201

Page 12: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

2. De lo Microbiológico a lo Molecular

Fenómeno de “El Niño” y el Ciclo del Cólera. Un modelo para el Estudio de Enfermedades Infecciosas Clima Dependientes

El cambio climático producto del calentamiento global, proveen un

escenario favorable para la emergencia y reemergencia de enfermedades

infecciosas

El evento del “El Niño” en el Pacífico Ecuatorial puede provocar un

aumento de los casos de cólera 11 meses después en Bangladesh

Variaciones climáticas locales, cambios en la temp. océanos y aumento en

la población de plancton pueden alterar la sobrevivencia del V. cholerae

en el ambiente.

Asoke C.Ind. J Med Res 2011 133;164-170

Ohtomo et al. Epidemiol Infect. 2010;138(1):99-107

Page 13: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

El Vibrio choleraeBacilo curvo Gram Negativo Móvil, flagelo polarProlifera en el ambiente en agua dulce y saladaFamilia Vibronaceae139 serotipos diferentes

Algunos serotipos de V. cholerae son capaces de producir diarrea. Los casos mas severos V. cholerae O1 y O139 toxigénicos

Enfermedad de Cólera

3. V. cholerae en Chile

Page 14: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Solo las cepas de serogrupos O1 y O139 han sido causa de brotes epidémicos y estos casos deben ser reportados a la OMS como “Cólera.”

V. cholerae O1 dos biotipos Clásico

El Tor

Cada biotipo tiene dos serotipos diferentes, Inaba y Ogawa.

Reservorio:Las aguas salobres o marinas cálidas representan el reservorio natural

del agente etiológico del cólera. No existen hospederos animales (no

humanos) para el Vibrio cholerae.

3. V. cholerae en Chile

Page 15: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

923421117589655920Total Vibrio spp

13159649V.cholerae No O1, No O139

201020092008200720062005Resultado

Aislamientos de Origen Humano:

Desde el último brote en 1997, No se ha detectado la presencia de V.

cholerae Toxigénico O1 – O139 en nuestro país

Confirmación de Laboratorio V. cholerae en Chile

Laboratorio Referencia Vibrios, Sección Bacteriología.

3. V. cholerae en Chile

Page 16: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

3. V. cholerae en Chile

Page 17: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Aislamiento (TCBS)

Identificación Bioquímica

Caracterización Serológica

3. V. cholerae en Chile

Page 18: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Reacción de la Polimerasa en Cadena: Métodos Rápidos de Detección

gen Vc-m (16S-23S): codifica fragmento específico para Vibrio cholerae de 16S

y 23S del rDNA.

gen ctxA : codifica para la subunidad A de la toxina colérica (CT ).

gen tcpA :codifica para la proteína efectora (subunidad del pili) específico del

Biotipo El Tor.

3. V. cholerae en Chile

Page 19: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

tcpA ElTor ctxA

Vc-m (16S-23S)

451 pb

564 pb

300 pb

Reacción de la Polimerasa en Cadena: Métodos Rápidos de Detección

3. V. cholerae en Chile

Page 20: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

V. cholerae, Estudio de Susceptibilidad

Brote Haití 2010:

Perfil de Resistencia Antimicrobiana:

Sensible:

Tetraciclina (Doxiciclina)

Ciprofloxacino

Kanamicina

Resistente:

Trim-Sulf

Furazolidona

Ac. Nalidíxico

Streptomicina

Circular Ministerio

Salud

3. V. cholerae en Chile

Page 21: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético
Page 22: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

AMP

SXTNIT

CIP

TET

CHL

J. Antimicrob. Chemother. 52 (2): 303-305 . (2003).

NAL

East African Medical Journal 77 (7): 350-3 (2000)

Clin Infect Dis. 15; 49(10): 1473–1479 (2009)

Lancet 363:223–233 (2004)

N. Engl. J. Med. 354:2452–2462.(2006)

ERY Metodología…

TET Doxiciclina

NIT Furazolidona

?

Estudio de Susceptibilidad Antimicrobiana:

3. V. cholerae en Chile

Page 23: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Epidemiología Molecular

•Aplicación e integración de la Biología Molecular a lasinvestigaciones epidemiológicas.

•Estudio a nivel genético de la etiología, distribución y prevención de las enfermedades infecciosas en las poblaciones humanas, animales, vegetales y susposibles interacciones.

•Identificación de subtipos microbianos

•Determinación de relaciones entre aislamientos

Dr. J. C. Hormazábal, Bacteriología, ISP.

3. V. cholerae en Chile

Page 24: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

•Aislamiento Cultivo

Único

Proviene directamente de su fuente de origen (persona, animal, alimento, etc.).

•CepaUno o varios aislamientos con similares características feno y

genotípicas que los diferencian de otros aislamientos de la misma especie.

•ClonAislamiento/cepas muy semejantes que sugieren origen común.

Aislamiento microbiano que se recuperó independientemente de diferentes fuentes, en diferentes localizaciones y quizás en diferentes momentos, que muestran tantas características feno ygenotípicas idénticas que la única explicación posible para esaidentidad es que tengan un origen común. (F.Oskov, J Infect Dis 148:346-354, 1983)

Dr. J. C. Hormazábal, Bacteriología, ISP.

3. V. cholerae en Chile

Page 25: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Origen de la diversidad genética

• Mutaciones:Cambios hereditarios en la secuencia de ADN

SustitucionesInsercionesDelecionesTranslocacionesInversiones

•Transferencia Horizontal Transformación (ADN libre)Conjugación (plásmidos)Transducción (fagos)

Recombinación: elementos genéticos de dos genomas distintos se combinan en una nueva unidad

Dr. J. C. Hormazábal, Bacteriología, ISP.

3. V. cholerae en Chile

Page 26: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Dr. J. C. Hormazábal, Bacteriología, ISP.

3. V. cholerae en Chile

Page 27: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Electroforesis de Campo Pulsado

DNA Fingerprinting

Huella Genética de Identificación

Page 28: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

A B C D E

0 3 3 2 2

Lane

Nº ofdiferences

PFGEgel

Kb

600

500

400

200

100

75

400 250\150 600 450 350

Fragmentos resultantesFragmentos resultantes

PFGE : Cambios en los patrones frente a eventos genéticos

Cambios en el ganancia de \pérdida de inserción de \deleción deFragmento de 400 kb ninguno sitio de restricción un fragmento de 50 kb

Dr. J. C. Hormazábal, Bacteriología, ISP.

3. V. cholerae en Chile

Page 29: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

PFGE y estudios de brote

Dr. J. C. Hormazábal, Bacteriología, ISP.

3. V. cholerae en Chile

Page 30: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

E. Coli O157:H7 Vibrio parahaemolyticus Salmonella

Vibrio cholerae Listeria

Clostridium botulinum Shigella sonnei

Campylobacter jejuni Clostridium perfringens

Yersinia enterocolitica Otros E. coli

PulseNet International, CDC, PAHO/WHO

Standars, Capacitación, Certificación

Capacidades Tipificación PFGE

� Tres Equipos PFGE

� Bionumerics software

� Capacitación continua y certificación PulseNet

Capacidad detección brotes, nuevas tecnologías:

Huella Digital Bacteriana: PFGE

Page 31: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-NotI

100

90

80

PFGE-NotI

359-09

373-09

052-10

083-10

207-09

086-10

093-10

095-10

096-10

097-10

430-09

462-09

077-10

078-10

090-10

069-09

070-09

142-09

218-09

267-09

240-09

092-10

104-10

475-09

143-09

071-10

Electroforesis de Campo Pulsado: Análisis filogenético de cepas chilenas de Vibrio cholerae no O1

Patrones genéticos de cepas de V. cholerae O1Haití. Bases de datos regional PulseNet

Patrones genéticos de cepas de V. cholerae no O1Bases de datos nacional PulseNet

Base de Datos Genética Nacional

3. V. cholerae en Chile

Page 32: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Origen de las Cepas Epidémicas Haitianas

Chin el al. N Engl J Med, 2011;364:33-42

3. V. cholerae en Chile

Page 33: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-NotI

100

95

PFGE-NotI

005-91

011-91

Haiti 1

Haiti 2

Chile

Chile

Aislamientos V.cholerae de Chile año 1991, comparadas con

patrones genéticos de aislamientos de Haití año 2010

Estándares PulseNet International, Centers for Disease Control, Atlanta EEUU, OPS.

Capacidad de Detección de Brotes y Clones Circulantes:

Implementación de Tipificación Genética y Análisis Bioinformático

Comparación de Aislamientos

3. V. cholerae en Chile

Page 34: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Vibrio parahaemolyticus

�Aislado por primera vez en Japón en 1950.

�Uno de los agentes asociados a ETA más prevalentes en Asia. Causa de brotes desde 1969 en U.S.A.

�Asociado al consumo de alimentos de origen marino (bivalvos, crustáceos)

4. Vibrio parahaemolyticus en Chile

GFN, OPS/OMS, 2009

Page 35: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Vibrio parahaemolyticus.

Características generales.

� Familia Vibrionaceae

� Bacilo, Gram neg., móvil, no esporogénico� Halófilico

� Parte de la flora normal de estuarios y costas del

mundo.� Densidad bacteriana ambiental aumenta en períodos

cálidos.� Capacidad de producir enfermedad variable, cepas

ambientales mayoritariamente no patogénicas.� Toxinas TDH – TRH

� Serotipo O3:K6, Clon Pandémico

4. Vibrio parahaemolyticus en Chile

Page 36: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Densidad bacteriana en ostras según temperatura del agua.

FDA, Risk Assesment Task Force, 2000.

4. Vibrio parahaemolyticus en Chile

Page 37: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Predicción de crecimiento según temperatura ambiental.

FDA, Risk Assesment Task Force, 2000.

4. Vibrio parahaemolyticus en Chile

Page 38: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Manifestaciones Clínicas.

Gastroenteritis

Infección Entérica: %

--DiarreaDiarrea acuosaacuosa 9898

--CCóólico abdominallico abdominal 8282

--NNááuseasuseas 7171

--VVóómitosmitos 5252

--CefaleaCefalea 4242

--FiebreFiebre 2727

--CalofrCalofrííosos 2424

�Período incubación 12-24 Hrs. (4-96 hrs).

�Proceso autolimitado ( 3 días ).

Infección Heridas Septicemia

4. Vibrio parahaemolyticus en Chile

Page 39: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Deposición directa o en medio Cary Blair

Agar TCBS

Repicar coloniasverdes a placa de

Agar Sangre

OXIDASA

Descartar

- +Siembra de

TSILIAMIO

Incubar 4-5 h a 35ºC

Incubar 18-24 h a 35ºC

DiagnósticoPresuntivo

Laboratorio de Referencia ISP

Confirmación bioquímica

Confirmación

Informe al Laboratorio Informe al LaboratorioInforme al Servicio de SaludNotificación al Ministerio de Salud

No Si

OxidasaTSILIAMIOArgininaVoges ProskauerArabinosaManitolCaldo Corazón (Indol)NaCi 0%NaCi 1%

Incubar 18-24 h a 35ºC

V. parahaemolyticusFlujograma Diag. Microbiológico.

Page 40: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Vibrio parahaemolyticus : Microbiología Alimentos

Detección – Método Número mas Probable

Método BAM FDA Cualitativo Detección

Cuantitativo Enumeración

NMP

Otros Métodos BAX Dupont

PCR Tiempo Real

PCR TDH TRH

4. Vibrio parahaemolyticus en Chile

Page 41: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

V. parahaemolyticus, cepas recibidas por el Lab. de Referencia, ISP 1998- 2009.

Laboratorio Agentes ETAsSección Bacteriología- ISP

39

189

57 64 46

193

117

175

904

647

577

1053

333

6 90

520

200

400

600

800

1000

1200

1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009

Años

Nº de Cepas

Humanos

Amb/Alim

4. Vibrio parahaemolyticus en Chile

Page 42: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Depto. Epidemiología MINSAL.

2006: 3651 casos

2007: 1008 casos2008: 3643 casos

2009: 704 casos

2010: 328 casos

4. Vibrio parahaemolyticus en Chile

Page 43: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

04-22 Cholgas Llanchipal

TDH TRH

04-31 Cholgas Llanchipal(-) (-)(-) (-)

04-85 Choritos Llanchipal (-) (-)04-86 Choritos Llanchipal (-) (-)04-87 Choritos Llanchipal (-) (-)04-90 Almejas Llanchipal (-) (-)04-91 choritos Llanchipal (-) (-)

(-) (-)04-360 Agua Mar Llanchipal04-12-1 Choritos Llanchipal (-) (-)04-124 Cholgas Llanchipal (-) (-)04-135 Choro Malton Araucania S (-) (-)

(+) (+) (+) (-) (+) (-)

04-92 coprocultivo Osorno04-343 Coprocultivo Val-S-Antonio04-163 coprocultivo Val-S-Antonio04-32 Cholgas Llanchipal (-) (-)04-105 Choritos Llanchipal (-) (-)04-305 Cholgas Llanchipal (-) (-)04-62 Choritos Llanchipal (-) (-)

(-) (-)04-363 Torula Llanchipal04-62 Cholgas Llanchipal (-) (-)04-154 Choritos Llanchipal (-) (-)04-13-1 Navejuelas Llanchipal (-) (-)04-33 Cholgas Llanchipal (-) (-)04-99 Choritos Llanchipal (-) (-)04-10 Choritos Llanchipal (-) (-)04-107 Choritos Llanchipal (-) (-)04-116 Choritos Llanchipal (-) (-)04-30 Choritos Llanchipal (-) (-)04-45 Mariscos M. Central04-127 Choro Malton Araucania S (-) (-)04-351 Coprocultivo Antofagasta04-125 Choro Malton Araucania S (-) (-)04-126 Choro Malton Araucania S (-) (-)04-128 Choro Malton Araucania S (-) (-)

(-) (-)04-02 Ostras Llanchipal04-139 Choro Malton Araucania S (-) (-)04-133 Choro Araucania S (-) (-)

(+) (+) (+) (-)(+) (-)

04-265 coprocultivo Arica04-17 Coprocultivo Llanchipal04-19 Coprocultivo Llanchipal04-21 Coprocultivo Val-S-Antonio04-58 Coprocultivo Araucania S04-73 Coprpocultivo Llanchipal04-94 Coprocultivo Maule04-06 Coprocultivo Llanchipal04-07 Coprocultivo Llanchipal04-08 Coprocultivo Iquique04-14-1 Ostras Llanchipal04-95 coprocultivo Llanchipal04-143 coprocultivo Valdivia04-145 coprocultivo M. Oriente04-149 coprocultivo Talcahuano04-157 Coprocultivo Viña-Valpo04-171 coprocultivo Concepción04-190 coprocultivo Coquimbo04-200 coprocultivo Araucania S04-215 coprocultivo Maule04-268 coprocultivo Arica04-274 coprocultivo Arica04-276 coprocultivo Arica04-287 coprocultivo Coquimbo04-316 Choritos Llanchipal04-327 Coprocultivo Talcahuano04-328 Coprocultivo Araucania S04-270 coprocultivo Arica04-39 Mariscos M. Central04-42 Mariscos M. Central04-152 Chorito Llanchipal

(-) (-) (-) (-)(-) (-)(-) (-)(-) (-)(-) (-)(-) (-)

04-102 Choritos Llanchipal04-15-1 Choritos Llanchipal04-64 Choritos Llanchipal04-88 Choritos Llanchipal

100908070605040

(+) (-) (+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)

(-) (-)

(+) (-)

Orgen Clin/Amb Área

(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)(+) (-)

V. parahaemolyticus

Genotipos

Page 44: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

D ic e (O p t: 1 .5 0 %) ( To l 1 .5 %- 1 .5 %) ( H > 0. 0 % S > 0 .0 % ) [0 .0 %- 1 00 . 0 %]

PFGE- Sf iI

100

95

90

85

80

75

70

65

60

55

50

45

PFG E- Sf i I

0055- 07

V0 75-1 1

V0 37-1 1

V0 46-1 1

0060- 07

0001- 08

V0 21-1 1

0101- 07

0263- 07

0099- 07

0076- 07

0106- 07

1250- 08

0330- 07

V0 11-1 1

0351- 07

V0 43-1 1

0342- 05

0739- 05

0091- 05

0344- 05

0706- 07

0047- 07

0018- 05

0049- 05

0052- 05

0061- 07

0062- 07

0074- 05

0074- 07

0076- 05

0083- 05

0108- 05

0114- 05

0119- 05

0122- 05

0123- 07

0125- 07

0126- 05

0126- 07

0127- 07

0128- 07

0129- 07

0130- 07

0138- 07

0146- 07

0147- 08

0148- 08

0151- 07

0152- 07

0153- 07

0154- 07

0156- 07

0157- 07

0161- 07

0166- 05

0167- 05

0167- 07

0168- 05

0168- 07

0169- 07

0170- 07

0174- 07

0177- 07

0181- 08

0182- 07

0182- 08

0183- 08

0184- 08

0185- 08

0226- 07

0227- 08

0228- 07

0228- 08

0229- 07

0264- 07

0265- 05

0269- 05

0269- 09

0286- 08

0287- 08

0288- 08

0289- 08

0290- 08

0314- 05

0315- 05

0316- 05

0317- 05

0320- 08

0327- 07

0332- 05

0339- 07

0348- 07

0349- 07

0351- 05

0402- 08

0405- 08

0406- 08

0407- 08

0408- 08

0421- 08

0422- 08

0424- 08

0537- 07

0551- 05

0554- 05

0560- 07

0565- 05

0566- 05

0576- 07

0577- 07

0579- 07

0590- 08

0591- 08

0592- 08

0593- 08

0594- 08

0595- 08

0608- 08

0627- 08

0638- 08

0655- 05

0656- 05

0726- 08

0731- 05

0740- 05

0742- 05

0745- 05

0747- 05

0780- 05

0781- 05

0783- 05

0816- 05

0817- 05

0818- 05

0835- 08

0842- 05

0843- 05

0845- 05

0846- 05

1010- 08

1106- 08

1109- 08

1186- 08

V0 01-1 1

V0 06-1 1

V0 07-1 1

V0 42-1 1

V0 44-1 1

V0 61-1 1

0155- 07

0605- 07

0606- 07

0002- 08

0003- 08

0004- 08

0008- 08

0010- 08

0011- 08

0012- 08

0014- 08

0015- 08

0016- 08

0017- 08

0018- 08

0019- 08

0020- 08

0023- 08

0024- 08

0027- 08

0028- 08

0131- 08

0132- 08

0133- 08

0186- 08

0423- 08

0517- 08

0518- 08

0695- 07

0696- 07

0704- 07

0705- 07

0708- 07

0710- 07

0711- 07

0712- 07

0713- 07

0714- 07

0715- 07

0716- 07

V0 52-1 1

V0 58-1 1

V0 55-1 1

0040- 07

0042- 07

0132- 07

0054- 07

V0 25-1 1

V0 32-1 1

0562- 07

0398- 07

V0 33-1 1

V0 36-1 1

0173- 07

1030- 08

0021- 08

V0 18-1 1

V0 19-1 1

2007

2011

2011

2011

2007

2008

2011

2007

2007

2007

2007

2007

2008

2007

2011

2007

2011

2005

2005

2005

2005

2007

2007

2005

2005

2005

2007

2007

2005

2007

2005

2005

2005

2005

2005

2005

2007

2007

2005

2007

2007

2007

2007

2007

2007

2007

2008

2008

2007

2007

2007

2007

2007

2007

2007

2005

2005

2007

2005

2007

2007

2007

2007

2007

2008

2007

2008

2008

2008

2008

2007

2008

2007

2008

2007

2007

2005

2005

2009

2008

2008

2008

2008

2008

2005

2005

2005

2005

2008

2007

2005

2007

2007

2007

2005

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2007

2005

2005

2007

2005

2005

2007

2007

2007

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2005

2005

2008

2005

2005

2005

2005

2005

2005

2005

2005

2005

2005

2005

2008

2008

2005

2005

2005

2008

2008

2008

2008

2011

2011

2011

2011

2011

2011

2007

2007

2007

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2008

2007

2007

2007

2007

2007

2007

2007

2007

2007

2007

2007

2007

2011

2011

2011

2007

2007

2007

2007

2011

2011

2007

2007

2011

2011

2007

2008

2008

2011

2011

Enzima Restricción Sfi I

V. parahaemolyticus, aislamientos Chilenos, 1998-2011

Componente Clonal

Casos Chilenos

Asociados al

Clon Pandémico

4. Vibrio parahaemolyticus en Chile

Page 45: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Dice (Opt :1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]

PFGE-SfiI

100

80

60

PFGE-SfiI

V011-11

V075-11

V043-11

V037-11

V046-11

V021-11

V001-11

V006-11

V007-11

V042-11

V044-11

V061-11

V033-11

V036-11

V025-11

V032-11

V052-11

V058-11

V055-11

V018-11

V019-11

H.de Coquimbo

H. de La Serena

H.de LA Serena

H.de la Serena

H. de Antofagasta

Seremi de Salud Región del Bío-Bío

H.de Concepcion

H.de Concepcion

H.de Concepcion

Lab.Tecno-Medic - Puerto Montt

Cl.Las Condes

H. de Puerto Montt

CL. Antofagasta - Antofagasta

H.Clinico Universidad Catolica

Integramedica

H.de la Serena

H. de La Serena

H. de La Serena

H. de Coquimbo

Seremi de Salud Región del Bío-Bío

Seremi de Salud Región del Bío-Bío

Deposiciones

Deposiciones

Deposiciones

Deposiciones

Deposiciones

almejas puesto 8

Deposiciones

Deposiciones

Deposiciones

Deposiciones

Deposiciones

Deposiciones

Deposiciones

Deposiciones

Deposiciones

Deposiciones

Deposiciones

Deposiciones

Deposiciones

almejas

almejas

Cl-Vp-Sfi-066

Cl-Vp-Sfi-030

Cl-Vp-Sfi-043

Cl-Vp-Sfi-026

Cl-Vp-Sfi-069

Cl-Vp-Sfi-067

Cl-Vp-Sfi-001

Cl-Vp-Sfi-001

Cl-Vp-Sfi-001

Cl-Vp-Sfi-001

Cl-Vp-Sfi-001

Cl-Vp-Sfi-001

Cl-Vp-Sfi-013

Cl-Vp-Sfi-013

Cl-Vp-Sfi-065

Cl-Vp-Sfi-065

Cl-Vp-Sfi-070

Cl-Vp-Sfi-071

Cl-Vp-Sfi-072

Cl-Vp-Sfi-068

Cl-Vp-Sfi-068

V. parahaemolyticus, aislamientos Chilenos, 2011

ClonPandémico

¿Cambio en Clones Circulantes?

¿Retirada del Clon Pandémico O3:K6?

4. Vibrio parahaemolyticus en Chile

Page 46: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

http://www.ispch.cl/colera

Instituto de Salud Pública: Cólera

Page 47: Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus De lo ......tratamiento efectivas y prevención de brotes de esta enfermedad. ... investigaciones epidemiológicas. •Estudio a nivel genético

Agradecimientos:

Sección Bacteriología ISP

Subdepto. Genética Molecular ISP

Depto Epidemiología MINSAL