dr. juan carlos hormazábal o. sección bacteriología ... · absceso abdomen herida herida herida...
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SAMR de la Comunidad
Staphylococcus aureus adquirido en la comunidad.
Confirmación de los casos y tipificación molecular
Dr. Juan Carlos Hormazábal O.
Subdepartamento de Microbiología ClínicaSección Bacteriología
Laboratorio Referencia Cocáceas Gram PositivasLaboratorio de Microbiología Molecular
Sección de Genética Molecular
Instituto de Salud Pública de Chile
SAMR de la ComunidadHISTORIA
1934 Panton y Valentine describen “Leucotoxina” PVL
1940s S. aureus resistente a penicilina
1959 Registro de la Meticilina
1961 Primer Reporte de SAMR (Inglaterra)
1968 Primer Reporte de Brote por SAMR (EEUU)
1980s SAMR es Endémico en Hospitales
1997 Reporte de 4 Muertes por SAMR en la Comunidad
2002 Reporte de VRSA
2003 Diseminación del SAMR en la Comunidad
2006 Reporte de Primeros Casos en Chile
CID 2003;36:131-9
Dra. L Jofré, ISP.
SAMR de la ComunidadHISTORIA
SAMR-com en el mundo:
SAMR de la ComunidadAmérica Latina
Reporte de Casos y Brotes
Kowalski: Mayo Clin Proc, Volume 80(9).September 2005.1201-1208
SAMR-com: Presentaciones Clínicas
SAMR-com: Presentaciones ClínicasInfección de Partes Blandas
SAMR-com: Presentaciones ClínicasInfecciones Invasoras
SAMR-com: Diagnóstico
SAMR de la ComunidadDefiniciones
SAMR de la ComunidadFactores de Riesgo de la Infección
SAMR de la ComunidadColonización
Búsqueda de portación Nasal de S. aureus Meticilino resistente comunitario en población sana de la ciudad de Santi ago de Chile. Carolina Aranís, PUC, XXV Congreso SOCHINF 2008.
Búsqueda de portacion Nasal de S. aureus Meticilino re sistente comunitario en población penal, R.M. de Santiago. M ónica Lafourcade, XXVI Congreso SOCHINF, 2009.
SAMR de la ComunidadColonización - Chile
Estudios locales no han logrado detectar colonización en población sana
SAMR-com: Diagnóstico
SAMR-com: Diagnóstico
SAMR-com: Diagnóstico
Laboratorio Local SOSPECHA
Perfil Suscept
Antec. Clínicos
Antec. Epidemiológicos
Lab. Referencia:
Diagnóstico Confirmatorio MOLE CULAR
SAMR-com: Tratamiento Antimicrobiano
SAMR-com: Tratamiento
Dra. L Jofré, ISP
SAMR-com: Tratamiento
Dra. L Jofré, ISP
SAMR-com: Tratamiento Antimicrobiano
SAMR-com: Tratamiento
SAMR de la ComunidadEstudio de Susceptibilidad
SAMR de la ComunidadErradicación
SAMR
SAMR-com
Marcadores Moleculares:
Genes PVL LukF-PV LukS-PV
SCCmec
Determinación de líneas genéticas involucradas:
PFGE (Electroforesis de Campo Pulsado)
MLST (Multilocus Sequence Typing)
Laboratorio de Microbiología Molecular, Sección Bac teriología, Lab. Genética Molecular ISP
SAMR-com: Marcadores Moleculares
SAMR de la ComunidadLeucocidina de Panton Valentine (PVL)
PVL y SAMR-com
� PVL no se encuentra en SAMR de origen hospitalario con SCCmec I, II y III ???.
� Más del 90% de SAMR-com causantes de casos presentan PVL
� PVL está presente en todos los casos de sepsis severa, fasceítisnecrosante o neumonía, independiente del ST (tipo genético) o presencia de gen mecA.
� Fuerte asociación entre PVL y SCCmecIV - SCCmecV
SAMR de la ComunidadLeucocidina de Panton Valentine (PVL)
Modelo de la Emergencia del SAMR-com Productor de Leucocidina de Panton Valentine Boyle-Brava, R. Daum. Lab. Invest.(2007) 87,3-9
Amplificación genes PVL
Productos de amplificación
SecuenciamientoAutomático
ABI 310Gene Bank
Reconocimiento Secuencias PVLLaboratorio de Microbiología Molecular, Sección Bac teriología, Lab. Genética Molecular ISP
SAMR de la ComunidadLeucocidina de Panton Valentine (PVL)
Amplificación de los genes mecA, nuc y pvl (panton-valentineleukocidine)
1 y 14. 100 pb DNA Ladder; 2- 6. Amplificación genes nuc y mecA; 7.control negativo; 8-12. Amplificación gen pvl
mecA
nuc
pvl
C(+) 1 1 2 3
Casos
C(+) 1 1 2 3
Casos
Lina et al. CID, 1999;29:1128-32
Olmos et al. J Clin Microbiol 1998;36:1128-1134
SAMR de la ComunidadDetección Molecular
SAMR de la ComunidadGENOMA
S. Highlander et al. BMC Microbiology 2007, 7:99
SAMR-comTipificación Genética.
MLST PFGE
Tiempo evolutivo medido en cambios.
MLST: Gold Standard para relaciones evolutivasPFGE: Gold Standard para análisis de brotes
Laboratorio de Microbiología Molecular, Sección Bac teriología, Lab. Genética Molecular ISP
arcC
yqiL
pta
tpiA
gmkglpF
aroE
E. aureusGENOMA
� House Keeping Genes (7)
� Amplificación por PCR de fragmentos internos
� Secuenciar
� Identificación de Polimorfismos
� Remitir a sitio WEB MLST
� Determinación de ST (sequence Type)
SAMR de la ComunidadMulti Locus Sequence Typing MLST
MLST, Universo genético S. aureus
Agrupación STs
SAMR-com, Tipos genéticos circulantes en el mundo:
Ann Acad Med Sing. 2006;35:479-89 J. Clin Microbiol. 2005;43:3356-63EID.2006;12:2000-01 J. Clin Microbiol. 2005;43:1985-88
PositivoIV30,8Chile
PositivoIV?Colombia
PositivoIV30Japón
PositivoIV30Nueva Zelanda
PositivoV-Australia
Pos / NegIV93,1Australia
PositivoIV30China
PositivoV┬59Taiwán
PositivoIV59 – 508Taiwán
PositivoIV80Reino Unido
PositivoIV80Suiza
PositivoIV30Suecia
PositivoIV8Noruega
PositivoIV30Latvia
PositivoIV80Holanda
PositivoIV80Grecia
PositivoIV80Alemania
PositivoIV80Francia
PositivoIV80Dinamarca
PositivoIV80Bélgica
PositivoIV30Uruguay
PositivoIV30Brasil
PositivoIV1 – 8Canadá
PositivoIV1 – 8EEUU
PVLSCCmecTIPO MLSTPAÍS
ST30
ST80ST1
USA300ST8
ST30
ST59
ST30
ST30
ST80
ST80
ST30ST59
SAMR-com en el mundo:
USA300ST8
ST5
USA300ST8
ST1
ST80
ST93
USA300ST8
USA300ST8
SAMR de la ComunidadDifusión STs en el Mundo
SAMR de la ComunidadTIPIFICACIÓN MOLECULAR SCCmec
� La resistencia a Meticilina es codificada por el gen mecA
� Este gen se encuentra en el elemento genético móvil Cassette CromosomalStafilocócico mec (SCCmec)
� Se describen 6 tipos de SCCmec
� Los SCCmec mas pequeños se relacionan con SAMR-com
� El pequeño tamaño de SCCmec disminuiría los costos para la adaptación del S. aureus, facilitando de esta forma su adquisición y permanencia.
SCCmecI 34.3Kb Hospitalario
SCCmecII 53.0 Kb Hospitalario
SCCmecIII 66.9 Kb Hospitalario
SCCmecIV 20.9-24.6 Kb Comunidad
SCCmecV/VT 28.0 Kb Comunidad
Wallin T., Emerg Med Clin N Am, 2008;26:431-455, Susan Boyle Brava, JCM, Sept. 2005 Vol43,p. 4719-4730Daum R. JID, 2002;186:1344-1347, Ito et al. Antimicrob Agents Chemother. 2004 Jul;48(7):2637-51
Okuma et al. J Clin Microb 2002, 40:4289-4294
SAMR-com Estructura de SCC mec
1. 1 kb DNA Ladder, 2-6. gen IS1272 Clase B, 7. control negativo, 8-12. gen complejoccr tipo 2; 13. control negativo, 14-18. gen SCCmec subtipo IVa, 19. control negativo, 20. 100pb DNA Ladder
Protocolo PCR Okuma et al, J. Clin Microbiol. 2002, 4 0:4289-4294
ccrA 2
Class B mec
ccrA Región J1 SCC mec
Amplificación de los genes estructurales de SCCmec Tipo IVa
SAMR de la ComunidadTIPIFICACIÓN MOLECULAR SCCmec
Amplificación de los genes estructurales de SCCmec Tipo IVa1. 1 kb DNA Ladder 2-19. Casos estudiados; 20. control positivo; 21. control negativo; 22. 100pb DNA Ladder.
Gen complejo ccrA2Gen IS1272
Gen Región J1 SCC mec subtipo IVa
SAMR de la ComunidadCA-MRSA Chile: SCC mec Type IVa
ST5 ST1 ST8 ST30SCCmec II SCCmec IV
SIEMPREPVL(-)
PVL(+) PVL(-) PVL(+) PVL(+)
SCCmec IV SCCmec IV SCCmec IV
SAMR de la ComunidadMarcadores Genéticos PVL y SCC mec IV en DiferentesLineas Genéticas.
Susan Boyle Brava, JCM, Sept. 2005 Vol43,p. 4719-4730
8
SmaI
+
Campo Pulsado PFGE
MLST PVL
SAMR, Genotipificación cepas chilenas .
Laboratorio de Microbiología Molecular, Sección Bac teriología, Lab. Genética Molecular ISP
Dice (Opt:1.00%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]SmaI
100
90807060
SmaI
ST 161-07/#1
ST 20-07/#1
ST 160-07/#1
ST 45-07/#1
ST 128-07/#1
ST 183-07/#1
ST 47-07/#1
ST31-07/#1
ST 21-07/#1
ST 93-06/#1
ST 143-07/#1
ST 75-07/#1
+++++++++++
?2088888888859
USA1100
USA300
SAMR de la ComunidadTIPIFICACIÓN MOLECULAR PFGE – MLST 2007
SAMR de la ComunidadTIPIFICACIÓN MOLECULAR PFGE – MLST, Octubre 2009
Dice (Opt:1.50%) (Tol 1.5%-1.5%) (H>0.0% S>0.0%) [0.0%-100.0%]SmaI
100
90807060
SmaI
st 147-08ST 20-07USA 1100USA 200ST 82-09st 161-07st 17-08st 75-07ST 66-09USA 1000USA 100USA 800USA 400st 160-07st 45-07st 93-06st 94-06st 95-06st 176-07st 93-09st 152-08ST 17-09st 178-08st 31-08ST 77-09ST 78-09st 95-09USA 300st 7-08st 73-08st 25-08st 8-08st 128-07ST 13-09st 132-09st 183-07ST 21-07st 31-07ST 34-09st 45-08st 47-07ST 65-09st 55-08st 131-08st 177-08ST 37-09st 143-07USA 500USA 600ST 85-09USA 700
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nuevo tiponuevo tipo
nuevo tiponuevo tipo59598
88888888888888
88888888888888888728
121
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abscesoherida
heridaabscesoLesion facialherida operatoriasecrecion nasal
heridaheridaaspirado traquealTejidolabiosecrecion piernaabscesoabscesoherida piernaabscesoheridaHerida musloherida abdomenabsceso
Abdomenheridaheridaheridaheridaheridaheridaabsceso perirenalherida tobilloherida operatoriaHerida Rodillaheridapostulasecrecion nasalheridaabscesoheridaHerida Rodillaherida
secrecion cara
CL-Sau-Com-Sma-002CL-Sau-Com-Sma-002
CL-Sau-Com-Sma-014CL-Sau-Com-Sma-004CL-Sau-Com-Sma-009CL-Sau-Com-Sma-005CL-Sau-Com-Sma-015
CL-Sau-Com-Sma-006CL-Sau-Com-Sma-008CL-Sau-Com-Sma-001CL-Sau-Com-Sma-001CL-Sau-Com-Sma-001CL-Sau-Com-Sma-018CL-Sau-Com-Sma-018CL-Sau-Com-Sma-010CL-Sau-Com-Sma-010CL-Sau-Com-Sma-010CL-Sau-Com-Sma-010CL-Sau-Com-Sma-010CL-Sau-Com-Sma-010CL-Sau-Com-Sma-010
CL-Sau-Com-Sma-011CL-Sau-Com-Sma-012CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-003CL-Sau-Com-Sma-013CL-Sau-Com-Sma-019CL-Sau-Com-Sma-019CL-Sau-Com-Sma-016CL-Sau-Com-Sma-007
CL-Sau-Com-Sma-017
20082007
20092007200820072009
20072007200620062006200720092008200920082008200920092009
2008200820082008200720092009200720072007200920082007200920082008200820092007
2009
SAMR de la ComunidadTIPIFICACIÓN MOLECULAR PFGE – MLST, 1 DE MAYO DE 2010
GrupoClonalChile
Emergence of multiresistant variants of thecommunity-acquired methicillin-resistant
Staphylococcus aureus lineage ST1-SCCmecIVin 2 hospitals in Rio de Janeiro, Brazil
Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, Volume 65, Issue 3, Pages 300-305M. Silva-Carvalho, R. Bonelli, R. Souza, S. Moreira, L. dos Santos, M. de Souza
Conceição, S. de Mello Junior, J. Carballido, P. Rito, V. Vieira
SAMR de la Comunidady el Hospital…
SAMR-com, Casos en Chile:
SAMR-comCHILE
Marcadores Moleculares:
Genes PVL (+)
SCCmec IVa
Determinación de principales líneas genéticas involucradas:
PFGE USA300
MLST ST8
Laboratorio de Microbiología Molecular, Sección Bac teriología, Lab. Genética Molecular ISP
SAMR-com, Confirmación ISP
Comunicación Dr. George Golding, Health Canada 2009
SAMR de la ComunidadEL DESAFÍO del DIAGNÓSTICO
�La presencia del gen pvl no es marcador único para SAMR-com
�La ausencia de multirresistencia y determinación de SCCmecIV es de gran utilidad pero no siempre presentes en todos los SAMR-com
�Se requieren mayores estudios para la determinación un marcador o grupo de marcadores estables y confiables para MRSA-com
Rossney et al. J Clin Microbiol, 2007;45:2554-2563
Prevención
SAMR de la ComunidadDiagnóstico complejo, Fundamental la prevención
SAMR-com
I Taller Regional deVigilancia Molecular del S. aureus Meticilino Resistente de la Comunidad, SAMR-com
Organización Panamericana de la Salud,
OPS/OMS
•National Microbiology Laboratory, Public
Health Agency of Canada
•Instituto de Salud Pública de Chile
Santiago de Chile, 26 al 30 de Octubre de 2009.
Instituto de Salud Pública de Chile