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UNIVERSIDAD CENTROCCIDENTAL “LISANDRO ALVARADO” DECANATO DE MEDICINA
POSTGRADO DE DERMOPATOLOGÍA
EXPRESIÓN DE LA P27 KIP1 DEL CICLO CELULAR EN EPITELIOMAS ESPINOCELULARES DE PIEL Y MUCOSAS
Trabajo presentado para optar al grado de: Especialización en Dermopatología
Por: MARÍA GRACIETE NUNES CONTRERAS
Barquisimeto, 2004
EXPRESIÓN DE LA P27 KIP1 DEL CICLO CELULAR EN EPITELIOMAS ESPINOCELULARES DE PIEL Y MUCOSAS
Por: MARÍA GRACIETE NUNES CONTRERAS
Trabajo de grado aprobado
Dra. María A. Mejía de Alejos Dra. Houda Drikha de Chami Tutor Jurado
Dr. Francisco Menolascino Jurado
Barquisimeto, de de 2004.
ii
DEDICATORIA
Dedicado a mis hijos María Graciela, Manuel Alejandro y Helen Gabriela fuente de inspiración. Dedicado a mis colegas profesores, del Servicio de
Dermatología. Sección Dermopatología del Hospital Central Antonio María Pineda y Sección de Anatomía Microscópica Departamento de Ciencias Morfológicas del Decanato de Medicina.
iii
AGRADECIMIENTO
Deseo expresar mi profunda gratitud y hacerles saber que con estas palabras manifiesto al mismo tiempo mi reconocimiento a :
Las doctoras María Antonieta Mejía de Alejos y Houda Drikha de Chami, quienes a través de su entusiasmo, ejemplo de perseverancia influyeron en forma positiva en la culminación del presente trabajo.
Dr. Francisco Menolascino, quien realizó un gran esfuerzo bajo
el apremio del tiempo, en la fase más importante de este trabajo.
Eddy, Zonny, Judith, Marlene y Biviana, gente amiga y
trabajadora, que me ayudaron de manera tan distintas.
Dra. Patricia Zeman digno ejemplo de paciencia y espíritu colaborador.
iv
ÍNDICE DE CUADROS Cuadros Páginas Cuadro N° 1 Patrón de expresión de P27 kip1 en los epiteliomas según su diferenciación................................................... 27
Cuadro N° 2 Relación entre cantidad de infiltrado inflamatorio linfocito plasmocitario y patrón de positividad
de los epiteliomas espinocelulares a P27 Kip1......………………………………………………. 28
v
EXPRESIÓN DE LA P27 KIP1 DEL CICLO CELULAR EN EPITELIOMAS
ESPINOCELULARES DE PIEL Y MUCOSAS Autor: Dra. María Graciete Nunes Contreras Tutor: Dra. María A. Mejía de Alejos
RESUMEN Se realizó un estudio descriptivo, para determinar la utilidad histopatológica del marcador P27kip1, regulador negativo de la fase G1 del ciclo celular, considerado como supresor de tumor, en epiteliomas espinocelulares de piel y mucosas. Se seleccionaron 25 biopsias de piel con el diagnóstico histopatológico de epiteliomas espinocelulares con sus diferentes grado de diferenciación, procedentes de la Sección de Dermatopatología . Al material seleccionado se le realizó inmunohistoquímica por el método de streptavidina-biotina-peroxidasa, utilizando el anticuerpo monoclonal de p27 kip 1. La inmunoreacción positiva nuclear de color pardo se observó en el 90% de los epiteliomas espinocelulares diferenciados, de los cuales 40% presentaron patrón extenso o difuso, 30% un patrón regionalmente positivo y 20% con patrón esporádicamente positivo. En el grupo de los epiteliomas semidiferenciados, la positividad se observó en más del 60%, predominando el patrón regionalmente positivo y esporádicamente positivo, con un 20% respectivamente, y 15 % con un patrón focalmente positivo; 35% de estos tumores no presentaron positividad. En el grupo de epiteliomas espinocelulares poco diferenciados no se observó positividad en el 100% de los casos. Se determinó la utilidad diagnóstica de p27 kip1 para diferenciar los epiteliomas espinocelulares bien diferenciados de los poco diferenciados. Palabras Claves: epiteliomas espinocelulares, Pk27 kip1, diferenciación.
ÍNDICE DE ILUSTRACIONES Ilustraciones Páginas Ilustración N° 1 Fotos de los diferentes patrones de expresión
de P27 kip1............................................................ 38
vii
ÍNDICE Páginas DEDICATORIA iii AGRADECIMIENTO iv ÍNDICE DE CUADROS v ÍNDICE DE ILUSTRACIÓN vii RESUMEN viii INTRODUCCIÓN 1 CAPITULO
I. EL PROBLEMA 2 Planteamiento del Problema. 2
Objetivos 3
Justificación 3
Limitaciones y alcance 4
II. MARCO TEÓRICO 5
Antecedentes de la investigación. 5
Bases Teóricas. 10
III. MARCO METODOLÓGICO 22
Tipo de Investigación. 22
Población y Muestra. 22
Procedimiento 22
Técnicas e instrumentos de Recolección de Datos. 22
IV. RESULTADOS 25
V. DISCUSIÓN 29
VI. CONCLUSIONES 31 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 32
INTRODUCCIÓN
Esta investigación se realizó a fin de evaluar la expresión de la proteína p27 kip1,
regulador negativo de la fase G1 del ciclo celular, considerado como supresor de
tumor, en epitelioma espinocelular, el cual es un tumor maligno, infiltrante y
destructor; con capacidad de diseminación hemática y linfática. Desde 1994 hasta
2002, se han realizado un gran número de estudios que han examinado la utilidad de
la expresión de p27 kip1 en el diagnóstico y carácter primitivo de diversos tumores
malignos y benignos. Es por ello que nos abocamos a la aplicación de P27 kip1 en los
epiteliomas espinocelulares en sus diferentes grados de diferenciación, con la
finalidad de conocer su utilidad desde el punto de vista histopatológico.
CAPITULO I
EL PROBLEMA Planteamiento del problema Los epiteliomas espinocelulares de piel y mucosas corresponden a la segunda
causa de cáncer de piel tipo no melanoma, con gran capacidad de originar metástasis
en especial los localizados en mucosas, que conlleva a terapéuticas quirúrgicas
agresivas y en algunos casos se acompañan de tratamientos de radioterapia;
incrementando el costo por paciente a las instituciones hospitalarias públicas. Es
conocida la relación del grado de diferenciación de los tumores con el pronóstico, a
menor grado de diferenciación mayor el riesgo de diseminación y recidivas posterior
al tratamiento. En Dermatopatología, se utilizan criterios arquitecturales y citológicos
para clasificar a los diferentes tumores de piel, en el caso de los epiteliomas
espinocelulares o carcinomas de células escamosas, se clasifican en bien
diferenciados, semi-diferenciados y poco diferenciados o indiferenciados. Existen
tumores que presentan dificultad al momento de realizar un diagnóstico
histopatológico, y es en estos casos donde el estudio inmunohistoquímico, mediante
anticuerpos monoclonales, le permiten al médico dermatopatólogo y patólogo
dilucidar e identificar el tumor. Hemos observado múltiples estudios relacionando un
anticuerpo en diferentes tipos de cáncer, realizándolos en un primer momento para
conocer su utilidad o no para ese tipo de cáncer, y luego correlacionar los hallazgos
con el pronóstico, tiempo de sobrevida o tipo de tratamiento. P27kip1 tiene entre sus
funciones la de actuar como supresor de tumores, promotor de apoptosis, regulador
de la diferenciación celular, protector contra la inflamación; es por ello que surge la
interrogante de conocer la expresión de p27kip en estos tumores en relación con el
grado de diferenciación, con el objeto de conocer su utilidad en aquellos casos que
presenten dificultad en el diagnóstico histopatológico y decidir la terapéutica más
adecuada.
OBJETIVOS
Objetivo general:
- Determinar la utilidad interrogante de conocer la expresión de p27kip en estos
tumores en relación con el grado de diferenciación, con el objeto de conocer
su utilidad en aquellos casos que presenten dificultad en el diagnóstico
histopatológico y decidir la terapéutica más adecuada.
OBJETIVOS
Objetivo general:
- Determinar la utilidad del marcador p27 kip1 en los epiteliomas espinocelulares
de piel y mucosas.
Objetivos específicos:
- Determinar la utilidad diagnóstica de p 27 kip1 en los diferentes grados de
diferenciación de los epiteliomas espinocelulares en piel y mucosas.
- Fundamentar el uso de p27 kip1 en aquellos tumores espinocelulares que
presenten problemas en su diagnóstico.
- Corroborar que el inicio de los espinocelulares en piel y mucosas resulta de
una disregulación de los inhibidores de las ciclinas.
Justificación e importancia
Desde 1994 hasta 2002, se han realizado un gran número de estudios que han
examinado la significancia de la expresión de p27 kip1 en el diagnóstico y carácter
primitivo de diversos tumores malignos y benignos. Interesantes y profusas
investigaciones han caracterizado la p27kip1 como un factor independiente de
pronóstico en varios tipos de cáncer humano, incluyendo los de mama, colon, cuello
uterino, gástrico, adenocarcinoma de próstata y otros. Por lo citado anteriormente y
que generalmente se requiere de terapéuticas quirúrgicas agresivas y en algunos
casos de radioterapia, es que nos inclinamos hacia el estudio de este tipo de cáncer, y
el uso de un marcador inmunohistoquímico que nos permita determinar con seguridad
el grado de diferenciación de los epiteliomas espinocelulares y la posibilidad de
metastatizar.
Limitaciones y alcance:
Limitaciones:
- Costo del anticuerpo monoclonal: el valor del anticuerpo usado en este
estudio fue de 1.220.000 Bs. Sin contar el resto de las sustancias empleadas
para llevar a cabo la inmunohistoquímica.
- Número de biopsias estudiadas: debido a que el estudio no puede ser
retrospectivo, por indicaciones de la coordinación de Postgrado, la muestra es
reducida.
Alcance.
- Este estudio corresponde a la primera fase de una línea de investigación en
relación a los epiteliomas espinocelulares, nos ha permitido obtener otro
parámetro para diferenciar a los epiteliomas diferenciados de los poco
diferenciados, la segunda fase seria correlacionarlo con pronóstico y recidivas.
CAPITULO II
MARCO TEÓRICO Antecedentes de la Investigación: P27 y diferentes tipos de cáncer. Yatabe et al (1998) encontraron que la p27 es un factor pronóstico significativo en
cáncer de pulmón de células no pequeñas, ellos identificaron un incremento de la
expresión de p27 en comparación con el epitelio normal del pulmón.
La variable expresión de p27 en tumores endocrinos fue también estudiada, así
tenemos que en diversas investigaciones sobre adenocarcinoma prostático y la
expresión de p27 realizado por Tsihlias et al y Yang et al, citados por Newcomb
(1999) demostraron que una reducida expresión de p27 fue un predictor
independiente del tratamiento y un factor pronostico independiente de la recurrencia
de la enfermedad. Este ultimo autor, sugiere que los pacientes con una disminución o
ausencia de p27, pueden ser candidatos para una terapia adyuvante a parte de la
quirúrgica. Cordón Cardo et al citado por Lloyd (1999) observaron que los
carcinomas primarios prostáticos con bajos niveles de proteína p27, fueron mas
agresivos biológicamente.
Otros estudios que analizaron la expresión de p27 en tumores endocrinos dentro
de los cuales el primero fue realizado por Loyd et al (1997) reportaron un descenso de
la expresión de esa proteína en adenomas endocrinos y carcinomas en comparación
citado por Jin (1997) en un estudio de carcinoma de tiroides, (carcinoma anaplásico y
carcinoma papilar) donde pudo observar niveles similares de p27 en cáncer tiroideo
de alto y bajo grado. En comparación, con una gran serie de investigaciones en
tumores de paratiroides, donde fue significativo el descenso de la expresión de p27
en carcinomas en comparación con los adenomas . Jin et al (1997) reportaron que los
tumores de la glándula pituitaria o hipófisis, los niveles de la proteína p27
disminuyeron durante la progresión de adenomas a carcinomas, pero la diferencia fue
moderada comparada con otros tumores endocrinos.
En investigaciones de linfomas y la expresión de p27, han mostrado que esta
proteína esta presente en linfocitos inactivos dentro del tejido linfoide y sangre
periférica (Quintanilla, 1998). Los linfomas con un bajo índice proliferativo son
intensamente positivos, mientras que los tumores con un alta fracción de crecimiento
tienen un bajo positividad de proteína p27. Sin embargo, la expresión de p27 en
algunos linfomas con altos grados de actividad mitótica como el linfoma de Burkih y
el de células B grandes, esta incrementada. Estos tumores también presentan
mutaciones en la ruta de p53 y esto puede permitir el escape de las células a los
efectos inhibitorios de p27. También observaron que la expresión de p27 en linfomas
fue inversamente relacionada con la proliferación celular. Interesantemente,
apreciaron que las células de linfomas en capas carecían de la proteína p27.
Postularon que la sobre unión de la expresión de p27 con el índice de proliferación
celular podría estar relacionadas con altos niveles de ciclinas D1, encontrados en la
capa de células de linfomas.
En piel, el primer estudio reportado de p27 y Melanoma (maligno),fue realizado
por Florenes et al citado por Trocone (1999) observaron que esta CDKi estaba
correlacionada con el espesor del tumor, en el tipo nodular, pero no en el desarrollo
del tipo superficial. Aunque la p27 no parece influir en la supervivencia de cada
subgrupo, una completa disminución de la expresión de p27 es un indicador
pronóstico de importancia en la temprana reincidencia de los pacientes con melanoma
de tipo nodular.
Richard (1998) observó una significativa reducción de la expresión de la proteína
p 27 kip1, en displasias orales y carcinomas, comparados con los controles de
epitelio normal. Sin embargo, otro estudio como el de Tsuzuki et al (2003)
demostraron niveles elevados de expresión P27 en las leucoplasias (hiperplasias y
displasias) en comparación con los epiteliomas espinocelulares. Sugiriendo que esta
Abundancia de p27 puede inhibir la proliferación celular de las células tumorales,
dirigirla hacia la apoptosis y con ello limitaría la progresión del tumor.
Kudo (2003) utilizó P27 en una línea celular de metástasis de carcinomas
escamocelulares, en ganglios linfáticos, las cuales fueron comparadas con células de
lesiones primarias de carcinoma escamocelular y de mucosa oral no neoplásica,
observó una reducida expresión de P27 en las células metastásicas, en comparación
con las células del tumor primario; determinando una relación inversa entre grado de
expresión de P27 y el riesgo de invasión, por consiguiente de originar metástasis.
Oh C.W. y Penneys ( 2004 ) describieron un descenso de la expresión de P27 en
epiteliomas o carcinomas espinocelulares en comparación con epidermis normal,
queratosis actínica y la enfermedad de Bowen.
Shintani et al (2003) reportaron un descenso en los niveles de expresión de P27
asociados con un incremento de la expresión de Skp2 (proteína quinasa asociada a la
fase S del ciclo celular) y Jab 1 (proteína de unión dominante – activación Jun) en
carcinomas espinocelulares orales; interpretando esta relación inversa esta asociada
en forma significativa con metástasis en ganglios linfáticos y signo de mal
pronóstico. A su vez, Choi (2003) concluyó en su estudio la relación entre la poca
expresión de p27 y la precoz o temprana progresión de carcinomas espinosos orales,
y que de los marcadores utilizados, p27 se correlacionaba positivamente con la
diferenciación celular.
Hu W. Citado por Cesinaro (2002) reportó altos niveles de p 27 en
queratoacantomas regresivos ( pero no expansivos), informaron un alto nivel de esta
proteína fue observada en tumores triquilemales proliferativos en comparación con
carcinomas de células basales .
Taguchi et al (2004) realizaron un interesante trabajo sobre la sensibilidad de las
células de carcinomas escamocelulares, a dos sustancias utilizadas en quimioterapia (
cisplatina y paciltaxel) con los niveles de expresión de p21y p27.
Percibieron que aquellas células con fuerte expresión de p21 y p27 presentan una
alta sensibilidad a la cisplatina, mientras que aquellas células que presentaron débil
expresión a estos dos anticuerpos, eran sensibles a paciltaxel. Concluyeron que la
expresión de p21 y p27 pueden usarse como guía para el tratamiento con agentes de
quimioterapia.
Hu W. citado por Ohashi (1999) en cáncer de células escamosas de esófago, l
reportaron una reducida expresión de p27 en este tipo de tumores, la cual puede ser
correlacionada con la conducta biológica de este tipo de cáncer, y podría tener un rol
importante en las etapas tempranas.
Estudios de cáncer de mama demostraron que la expresión de la proteína p27
estaba disminuida en los tumores mas agresivos. Catzavelos et al citado por Richard
(1998) demostraron que dicha proteína es un predictor en un reducido grupo de
sobrevivientes libre enfermedad, por un análisis de Kaplan-Mejer. Morgan (1999)
informa sobre un estudio donde combinaron el análisis de p27 y ciclina E,
demostrando que para esos reguladores del ciclo celular son marcadores pronósticos
de la conducta tumoral. Lan et al citado por Morgan (1999) analizaron la expresión de
p27 en cáncer de mama menores de 1 cm, en 202 pacientes y observaron el estadio
nodal asociado a una baja expresión de p27 son parámetros pronósticos.
Vanzulli S. (2002) en un estudio experimental en ratones con células tumorales de
mama, apreció regresión de las células tumorales de las metástasis, cuando aplicaba
tratamiento con estradiol y antiprogestagenos, con un incremento de la expresión de
P27 y P21, dichas células presentaron un descenso precoz del numero de mitosis y un
incremento en el porcentaje de apoptosis. Una muestra más de cómo la investigación
con anticuerpos monoclonales pueden ayudar en la escogencia de un tratamiento.
Qin (2000) comunicó la significancia de p 27 en relación al grado de malignidad
del carcinoma laringeo y a su vez con el pronostico, pero no así con el estadio ni la
presencia de metástasis en los ganglios linfáticos. Liu (2002) corrobora lo reportado
en otras investigaciones, concluyó en su estudio de carcinomas escamosos de laringe,
que P27 se correlaciona con la diferenciación del tumor, pero no así con las
metástasis en ganglios linfáticos. Hirai (2003) en un estudio retrospectivo, comparó
dos marcadores como P27 y P53 en lesiones precancerosas y cáncer de laringe,
observando una mayor expresión de P27 en las lesiones precancerosas (hiperplasia,
displasia), en comparación con los carcinoma de células escamosas; además de una
mayor especificidad de P27 que P53, sugiriendo utilizarlo como elemento
evaluativo en pacientes con lesiones precancerosas de laringe.
Goff (2003) aclara el uso de P27 en lesiones preinvasivas y malignas invasivas,
Planteó que no debe usarse en el estudio de las displasias, sino en cáncer de cuello
uterino, donde la expresión para p27 fue mayor del 50% y estaba asociada con el
incremento de invasión linfovascular.
Bases teóricas El epitelioma espinocelular es un tumor maligno de los queratinocitos del estrato
espinoso de la epidermis de la piel así como de mucosas, infiltrante y destructor; que
tiene capacidad de diseminación hemática y linfática.
La etiología de los epiteliomas espinocelulares es multifactorial. La exposición
solar, en especial la radiación ultravioleta (RUV) B (290- 320 nm) parece ser el
factor etiológico más importante sobre el núcleo celular, la radiación ultravioleta A
(320-400 nm) juega un papel menor; pero parecen ser otros mecanismos complejos
los implicados en la carcinogénesis inducida por RUV. En relación con el deterioro
de la capa de Ozono, Ortonne (2002) cita que una disminución del 10% de dicha
capa, causa un incremento del 20% de la RUV, con un incremento del 40% de cáncer
en piel.
Según Villarubia (2001) los mecanismos por los cuales la RUV es capaz de
comportarse como un carcinógeno completo, iniciando y promoviendo el desarrollo
tumoral, son asimismo conocidos en su mayoría. De esta manera, la iniciación de la
transformación maligna requiere en primer lugar de la absorción de la energía
fotónica por los queratinocitos, lo que va a provocar la dimerización de las bases de
pirimidina en el ADN, dando lugar a la formación de anillos de ciclo butano y 6-4
pirimidina-pirimidona, entre otros foto productos, con la consiguiente alteración
genética, y que al replicarse posteriormente conducen a la incorrecta reposición de las
bases, provocándose mutaciones citosina-timidina o dobles mutaciones. Dokianakis
y Zielgler, citados por el anterior autor, hacen referencia que en el caso de los
epiteliomas espinocelulares, la lesión inducida por la RUV se manifiesta
preferentemente por mutaciones del gen supresor p53. Kraemer citado por Ortonne
(2002) propone al exón ESS1, como el sitio donde ocurre la alteración genética
(cromosoma 9q31). Apoyando lo anterior, se ha expuesto entre los aspecto genéticos
de este tipo de cáncer de piel, la acción de RUV sobre el gen supresor de tumores
p53, el cual tiene entre sus funciones esta la de producir la detención del ciclo celular
en la fase G1, destinada a la reparación del ADN dañado por la acción de RUV;
aquellas células que presenten ADN dañado y no pueda ser reparado son eliminadas
por el proceso de apoptosis, dirigido también por dicho gen. Cuando estas funciones
no se cumplen en forma adecuada, da como resultado la división continua de células
mutadas, con la consecuencia de un cúmulo de mutaciones adicionales; tales
mutaciones se han observado en más del noventa por ciento de los epiteliomas
espinocelulares in situ e invasivos.
Otros agentes etiológicos asociados son:
- Virus del papiloma humano (VPH). Tanto los datos epidemiológicos como los
fisiopatológicos obtenidos en animales de experimentación, sugieren la
implicación oncogénica del VPH en la naturaleza de este tipo de cáncer, según
lo afirma Coussens et al, citado por Villarubia (2001). Los tipos de VPH
ligados al carcinoma en el área periungueal y anogenital son l6,18, 31,33 y 35,
en pacientes tanto inmunosuprimidos como inmunocompetentes.
- Inmunosupresión. Es un factor importante en los tumores de este tipo y otros
de evolución rápida, en sitios foto expuestos en pacientes con antecedentes de
transplantes (renal, cardiaco), así como en aquellos pacientes con virus de
inmunodeficiencia humana y SIDA. Ortone (2002) refiere un incremento del
7% después del primer año del transplante, del 45% a los 11 años, y del 70% a
los 20 años. Según Nguyen, citado por Ohashi (1999) altas tasas de
crecimiento tumoral o desarrollo agresivo y metástasis ocurren en este tipo de
pacientes.
- Agentes quimioterapéuticos, como la mostaza nitrogenada de aplicación
tópica, usada en pacientes con Micosis fungoide, puede inducir este tipo de
cáncer.
- La foto quimioterapia PUVA oral, utilizada en pacientes con psoriasis pueden
presentar mayor riesgo para epitelioma espinocelular.
- Existen publicaciones aisladas sobre la aparición de este carcinoma en varios
tipos de enfermedades dermatológicas como la epidermolisis ampollar
distrófica, la enfermedad de Hailey-Hailey, lupus eritematoso discoide, liquen
plano, liquen escleroso atrófico, balanitis xerótica obliterante, condiloma
acuminado del periné citados por Weedon (2002).
- Hay mayor frecuencia de este tipo de carcinoma en pacientes con Xeroderma
Pigmentoso (1000 veces mayor), en los que está disminuida la capacidad de
reparación del ADN dañado por el sol, y en pacientes con albinismo .
- Carcinógenos industriales como resina, alquitrán, aceite de parafina crudo,
aceite combustible, cresota, aceite lubricante, han sido implicados en el
desarrollo de este tipo de cáncer.
- El tabaco es un factor importante en este tipo de cáncer cuando se localiza en
los labios o en la boca, algunos autores afirman férreamente que es causa
directa del cáncer escamoso oral.
- Arsénico en aguas contaminadas, usado en el siglo pasado en la agricultura,
induce amplificación genética.
Incidencia.
El Epitelioma espinocelular es la segunda forma más frecuente de cáncer de piel
en caucasianos. Su incidencia en un estudio realizado en 1988 en Australia, fue de
166 casos por 100 mil habitantes, y para 1998 se incremento a 2087 por 100 mil
habitantes la más alta del mundo, según lo reporta Diepegen (2002). En Estados
Unidos de América, la proporción continental reportada es de 100 a 150 mil casos por
año (2002). En Latinoamérica, en especial Chile, país que se encuentra entre los más
afectados por el adelgazamiento de la capa de ozono, Araya et al (1999) reportó un
estudio epidemiológico realizado entre 1992 y 1996, con una incidencia de este tipo
de cáncer de un 23% de los 250.000 informes histopatológicos reportados en 5
hospitales de dicho país.
Raza. Predominan en personas con piel blanca y deficiente capacidad de bronceado
(fototipos de piel I y II). Las personas de piel morena o negra pueden desarrollar este
tipo de cáncer por numerosos agentes etiológicos diferentes a la exposición solar.
Edad
Los epiteliomas espinocelulares de piel y mucosas predominan en hombres,
mayores de 55 años, posterior a la cuarta década de la vida, son raros en la
adolescencia e infancia ( a excepción de aquellos pacientes portadores de Xeroderma
pigmentoso). Según Holme (1999) en individuos mayores de 75 años, es 35 veces
superior la incidencia de este tipo de cáncer que en individuos entre 50 a 55 años.
Sexo
Clásicamente se ha mencionado el predominio en hombres, debido a que
generalmente desempeñaban trabajos bajo la exposición directa al sol, pero se ha
reportado un incremento en las mujeres, debido al cambio de estilo de vida,
profesiones, estilo de ropa y la moda del bronceado.
Geografía
El Epitelioma espinocelular inducido por la exposición a la luz solar es más
frecuente en aquellas áreas que tienen muchos días de intensidad solar al año.
Ocupación
Predomina en personas que trabajan expuestas a la acción de la luz solar como
agricultores, marineros, reparadores de líneas telefónicas, obreros de la construcción,
empleados de los puertos, así como aquellos empleados de las industrias que
manipulan o estén expuestos a carcinógenos químicos (nitróureas, hidrocarburos
aromáticos policíclicos).
Cuadro clínico.
- Tipos de lesiones.
Ulcera, pápula, de bordes indurados, placa o nódulo indurado que presenta una
descamación queratósica gruesa, adherente, a menudo erosionada, costrosa o
ulcerada. Forma: ovalada, redondeada o poligonal.
- Distribución corporal:
Puede ser una lesión aislada en la mayoría de los casos, sin embargo se han
reportado lesiones múltiples. Según los autores Epstein, Jonson, Hubell, Lumpkin,
Guitart, citados por Weedon (2002) la mayoría de los epiteliomas espinocelulares se
originan en áreas de exposición directa al sol, como son: frente, cara ( mejillas, nariz,
labios) en un 90%; cuello, lóbulos de la oreja, área periauricular, cuero cabelludo (en
hombres calvos), dorso de las manos, antebrazos, tronco y piernas. Áreas no
expuestas, como las nalgas, genitales y regiones subungueales se afectan
ocasionalmente. Se ha reportado en países en vías de desarrollo, un 20% de los
epiteliomas espinocelulares localizados en
pene, a diferencia de los Estados Unidos de América que solo reporta el 1% de los
casos.
De forma infrecuente, suelen aparecer en zonas que presentan úlcera crónica,
quemaduras, cicatrices de vacunas, tractos fistulosos, sinus pilonidales de larga
evolución.
Evolución:
Lenta, su desarrollo dura meses hasta años. Las recidivas son más probables en
aquellos tumores con aspectos histológicos agresivos, como la invasión profunda, la
pobre diferenciación, la invasión perineural y los aspectos acantolíticos. La tasa de
recidivas es el doble que la de los carcinomas de células básales.
- Riesgo de metástasis:
Varia con el contexto clínico de la lesión primaria. Es más bajo para los que se
originan en piel dañada por el sol (0,5%), y aquellos que se originan en la
enfermedad de Bowen mestastatizan en un 2 a 5 % de los casos.
Existe un riesgo mayor para las lesiones del labio (2-16%). Las metástasis son casi
constantes en los tumores de más de 6 mm de grosor. Para los carcinomas que se
originan sobre las úlceras se piensa que la incidencia de metástasis oscila entre el
10% y 30%, mientras que para los tumores perineales y en pene puede ser del 30% al
80%.
Histopatológica: El epitelioma espinocelular típico esta formado por nidos de células epiteliales
escamosas que se originan del estrato espinoso (de la epidermis), y en las formas
invasivas configura cordones o lóbulos que rompen la membrana basal e invaden la
dermis y tejidos cercanos a una distancia variable.
Las células neoplásicas son poligonales, de citoplasma eosinofílico, extenso y un
núcleo grande, a menudo vesícular, hipercromático, con mitosis atípicas . Existe una
queratinización central variable y formación de perlas corneas, dependiendo del grado
de diferenciación del tumor.
Generalmente se utiliza las categorías de “bien”, “moderadamente” y
“pobremente” diferenciado, más que la clásica gradación de Broders basada en la
presencia de mayor o menor grado de queratinización, realizada en 1921, citado por
Weedon(2002) de los grados 1 al 4, donde el grado 4 se utiliza para las lesiones más
pobremente diferenciadas.
Los epiteliomas espinocelulares infiltran a lo largo de las vainas nerviosas, la
adventicia de los vasos sanguíneos, linfáticos, planos faciales y planos de fusión
embriológica. Pueden provocar una respuesta del estroma desmoplásica. Existe con
frecuencia un infiltrado celular inflamatorio crónico de leve a moderado en la
periferia del tumor. Raramente hay pigmento de melanina en las células tumorales o
en el estroma.
Microscopia electrónica: las células tumorales en lesiones típicas tienen
tonofilamentos y desmósomas bien desarrollados y algunas microvellosidades
interdigitantes.
P27kip1 Desde la clonación del gen de p27 en 1994, una multitud de funciones le han sido
asociadas. El gen está localizado en el cromosoma 12p13 y en la unión de 12p 12-
12p13.1 reportado por Ponce-Castañeda et al (1995) y en 1996 fue reportado por
Russo el análisis estructural de la proteína p27.
Ciclo celular y p27K1
Los ciclos celulares de los eucariotas superiores se controlan, no solamente por
múltiples ciclinas, sino también por múltiples proteínas quinasas dependiente de las
ciclinas y se conocen como Cdk’s (quinasas dependientes de ciclinas).En las células
de mamíferos, existen dos familias de inhibidores de Cdk que son los responsables
de regular los diferentes complejos Cdk/ciclinas :un grupo familiar llamado Cip/Kip
que incluye a p21, p27 y p57; y otro grupo familiar llamado Ink que incluye a
p15,p16,p18,p19.
Los miembros de la familia Cip/Kip regulan todas las etapas de progresión a
través de las fases G1 y S1, inhibiendo los complejos que forman las Cdk2,4, y 6 con
las ciclinas A, D y E. Por el contrario, los miembros de la familia INK4 solo regulan
la progresión a través del punto de restricción en G1, S.
FUNCIONES DE p27kip1 Son muchas las funciones atribuidas a p27, y son numerosos los investigadores
como Poliak et al (1994), Toyoshima, (1994 ) Cotas (1996) , Ravitz et al(1995),
quienes trabajaron entre los años de 1994 y 1996 con el propósito de discernir el
papel de p27 como una Cdki en células normales y neoplásicas.
SUPRESOR DE TUMORES
Algunos investigadores como Morosetti R. et al (1995) y Tanaka et al (1997),
afirmaron que la función es la de actuar como un gen supresor de tumores, y
argumentan que una baja expresión de esta proteína puede dar por resultado el
desarrollo o progresión de un tumor; sin embargo, esta baja expresión no parece ser
el resultado de una mutación del gen.
PROMOTOR DE APOPTOSIS La apoptosis es un modo de morir de la célula que juega una parte importante en
la regresión del crecimiento tumoral. El crecimiento del tumor depende de un
balance entre la célula en crecimiento o en proliferación y una célula dañada (por
apoptosis o necrosis). Un descenso en el índice de apoptosis es asociada con un
rápido crecimiento del tumor, y algunos investigadores han reportado que el
descenso del índice o rata de apoptosis esta significativamente relacionado con la
agresividad del crecimiento tumoral y con un peor diagnóstico según Atul y Mark
(1995), Masahiro (1999), Katajose et al (1997) y los de Leykau et al (1998) . En el
2003 Tsuzuki et al , observaron una expresión abundante de P27 en luecoplasias
orales, en comparación con epiteliomas espinocelulares, sugiriendo un efecto
inhibitorio en la proliferación celular y dirigir a las células premalignas hacia la
apoptosis; y por consiguiente la prevención de la progresión hacia un tumor maligno.
REGULACIÓN DE LA DIFERENCIACIÓN CELULAR En los años de 1997 a 1998, Zastudoff Et al, Durand et al, Onishi et al, Robker,
citados por Trocone (1999) demostraron el papel de p27 en la regulación de la
diferenciación celular en algunos tejidos, ya anteriormente Lloyd (1997) y Thomas et
al (1998) habían referido a la p27 como un disparador para CDKi, abriendo el ciclo
celular e iniciando su diferenciación.
PROTECCIÓN CONTRA LA INFLAMACIÓN. La p27 fue implicada en la protección de algunas células contra la injuria
inflamatoria, reportado por Ophascharrersuk, citado por Lloyd (1999) , utilizando
para ello un análisis de la inflamación mediada por mecanismos inmunes en un ratón
con delección gen p27, en un modelo experimental de glomérulo nefritis. Observó
que la función renal esta descendida, y asociada con un incremento de la
proliferación celular, apoptosis y acumulación de proteínas en la matriz
extraglomerular.
Marcadores de la regulación del ciclo celular para diferenciar entre tumores
benignos y malignos.
El microambiente que rodea a un tumor puede influenciar en los inmunofenotipos
de marcadores del ciclo celular, produciendo patrones heterogéneos en el interior de
los tumores individuales y solapar entre tumores benignos y malignos. Tenemos por
ejemplo en relación al marcador Ki-67, unos autores reportaron poca intensidad de
coloración o positividad para Ki-67 y de PCNA distribuidas en el espacio de los
islotes del tumor de células de carcinoma
basocelular, con el objeto de diferenciarlo de otro tumor benigno de piel como el
tricoepitelioma, Contrariamente, otros autores sugirieron que el descenso de
positividad de Ki-67 en subtipos de carcinoma basocelular estaban asociados con la
progresión del tumor. Todos estos estudios pueden ser validos, simplemente reflejan
diferencias en los niveles de alteración celular, en áreas dispares de tumores, que
están relacionadas con la biología intrínseca del tumor y/o el microambiente del
tumor.
También depende de la dirección de la investigación, así tenemos por ejemplo a
Hanai (2003), quien en su estudio utilizó diferentes marcadores para predecir la
supervivencia de los pacientes en cáncer de pulmón , comparándolos con variables
como edad, sexo, hábitos tabáquicos, tamaño del tumor, estadio, características
histológicas del tumor; demostrando la superioridad de un marcador sobre los
métodos estadísticos convencionales, en el sentido de predecir o determinar el
pronóstico de esos tumores.
De acuerdo con Steeg and Abhams para que un marcador pronóstico nuevo,
pueda ser usado en la rutina diaria, es necesario que cumpla tres criterios como
mínimo: el marcador proporcione información independiente, sea superior que
criterios patológicos convencionales, que proporcione información que pueda alterar
o cambiar la decisión del tratamiento y por ultimo que los estudios con el marcador
sean reproducibles.
HIPÓTESIS
Hipótesis general:
- El p27kip1 es un marcador de utilidad en los tumores espinocelulares de piel
y mucosas.
Hipótesis especificas:
- El marcador p27kip1 permite determinar el grado de diferenciación de los
tumores espinocelulares.
- El p27kip1 corrobora el origen de los epiteliomas espinocelulares basado en
un trastorno del ciclo celular.
Hipótesis Alternativa:
- El porcentaje de positividad a p27kip1 en los tumores espinocelulares de piel
y mucosas, es significativamente diferente al porcentaje de los núcleos en piel
sana y en aquellos epiteliomas indiferenciados.
- El porcentaje de células (núcleos) marcados con p27kip1 de los epiteliomas
espinocelulares con bajo grado de malignidad es significativamente diferente
en al porcentaje de núcleos tenidos en tumores espinocelulares pobremente
diferenciados.
Hipótesis nula:
- No existe diferencia significativa entre el porcentaje de núcleos marcados de
los epiteliomas espinocelulares bien diferenciados y aquellos pobremente diferenciados. No existe diferencia significativa entre el grado de malignidad y el porcentaje de núcleos marcados con p27kip1.
CAPITULO III
MARCO METODOLÓGICO Tipo de investigación. Descriptiva. Población y muestra. Tipo: finito Población: todos los pacientes que se han diagnosticados clínicamente e
histopatológicamente con Epiteliomas espinocelulares en piel o mucosas.
Muestra: Representativa, probabilística, aleatoria simple. Procedimiento. Técnicas e Instrumentos de recolección de datos En esta investigación se utilizaron 29 biopsias de piel con el diagnóstico
histopatológico de Epiteliomas Espinocelulares con sus diferentes grados de
diferenciación. Las muestras se tomaron de biopsias de la Sección de
Dermopatología, Servicio de Dermatología del Hospital Dr. Antonio Maria Pineda,
el material seleccionado fue fijado en formol al 10% e incluido en bloques de
parafina. Luego se obtuvieron cortes de 3 a 5 µ de espesor, los cuales fueron teñidos
con hematoxilina eosina. Posteriormente fueron evaluados para ser clasificados
tomando en cuenta el grado de diferenciación de cada tumor. Después de evaluar
cada biopsia con hematoxilina eosina, se procedió a cortar secciones de 3 a 4
µ , montándose con poly-L-lisina, y se realizó inmunohistoquímica por el método de
streptavidina-biotina-peroxidasa, utilizando el anticuerpo monoclonal p27 kip1.
Dicho método se realizó según la siguiente metodología:
- Desparafinar y rehidratar.
- Eliminar la peroxidasa endógena incubando las secciones con peróxido de
hidrógeno al 0,1% y con sodio ácido al 1% por 15 minutos.
- Lavar con solución Buffer fosfato (PBS) durante 5 minutos.
- Incubar con el anticuerpo primario (diluido en PBS) POR 1HORA.
- Lavar con PBS por 5 minutos.
- Incubar con el anticuerpo secundario.
- Lavar con PBS por 5 minutos.
- Incubar con el conjugado streptavidina-biotina-peróxidasa por 10 minutos.
- Lavar con PBS por 5 minutos.
- Revelar con Diaminobencidina (DAB) por 5 -7 minutos.
- Lavar con agua destilada por 5 minutos.
- Contrateñir con Hematoxilina de Harris por 5 minutos.
- Lavar en agua.
- Virar en agua amoniacal con 10 pases.
- Deshidratar y montar con medio sintético.
La positividad dela inmunotinción se valoró en el núcleo, independientemente del
grado de tinción (leve, moderado o marcado). La reacción positiva nuclear estuvo
caracterizada por una tinción de color marrón o pardo. Para evaluar la positividad o
expresión de P27 kip1, se contaron aquellos núcleos donde existía inmunoreactividad,
Se contaron 100 células (teñidas o no) siendo el número total de células. Luego se
contaron solamente las células positivas (aquellas que presenten inmunoreactividad
nuclear o positividad) y luego se clasificaron bajo el siguiente patrón de distribución:
- Negativa: totalidad de los núcleos que no presenten positividad.
- Esporádicamente positiva: cuando menos del 1% de los núcleos presenten
positividad.
- Focalmente positiva: cuando el 1 al 5 % de los núcleos fueran positivas.
- Regionalmente positiva: cuando los núcleos con inmunoreactividad alcanzaban de 5 a 50% .
- Extensamente o difusamente positiva: cuando se observaron más del cincuenta por ciento de los núcleos positivos.
Luego de revisar cada lámina, de los diferentes tipos de �iferenciación de los
tumores, se procedió a anotar en una tabla los datos obtenidos.
CAPITULO IV
RESULTADOS En el presente estudio se obtuvieron los siguientes resultados: 1. De los 11 biopsias con epiteliomas espinocelulares bien diferenciados, dos
presentaron áreas de necrosis, y una se dañó durante el procedimiento
inmunohistoquímico. La inmunoreacción positiva nuclear de color pardo se
observó en 9 biopsias, representando el 90%, de los cuales 4 (40%) presentaron
patrón extenso o difuso, 3 (30%) un patrón regionalmente positivo y 2 (20%) con
patrón esporádicamente positivo. Solamente en una biopsia (10%) se observó
ausencia de inmunoreactividad nuclear, determinándose como patrón negativo.
En las biopsias que se describieron como patrón regional y esporádicamente
positivos, observamos aumento de la cantidad del infiltrado inflamatorio
(linfocitos, plasmocitos),en la dermis anexa al tumor, en comparación con
aquellos que presentaron un patrón de extensa positividad, en los cuales el
infiltrado estaba en escasa cantidad, pero del mismo tipo. Donde se observó
patrón negativo existía una zona de necrosis.
2. En el grupo de los epiteliomas semidiferenciados, un total de 8 casos, la
positividad se observó en 5 biopsias (más del 50%), predominando el patrón
regionalmente positivo y esporádicamente positivo, 2 (20%) , y 1 (15 %) con un
patrón focalmente positivo; y 3 biopsias (35%) de estos tumores fueron
catalogados como patrón negativo.
Al igual que con los epiteliomas espinocelulares diferenciados, observamos la
relación entre la cantidad del infiltrado y el patrón observado, a mayor cantidad de
infiltrado, menor el porcentaje de núcleos tenidos, y por lo tanto se ubicaban en
patrones esporádicamente positivos. Incrementándose aún más en aquellos con
patrón negativo.
3. En el grupo de epiteliomas espinocelulares poco diferenciados, un total de 6
láminas de biopsias, una se daño durante el procedimiento, y se observó ausencia
de positividad en los núcleos, siendo catalogados como patrón negativo en un
100% de os casos. En este grupo se observó presencia del infiltrado
linfoplasmocitario.
4. En este estudio se aplicó P27 kip1 a biopsias de epiteliomas basoespinocelulares,
queratosis actínicas y epiteliomas metatípicos, así como a epitelioma
espinocelular indiferenciado tratado con radioterapia, observándose en los
basoespinocelulares un patrón de extensa o difusa positividad, a predominio de la
parte conformada por células neoplásicas espinosas, quedando delimitada la parte
de células básales. En las queratosis actínicas se apreció esporádicas áreas de
leve positividad, a predominio de la capa espinosa limitante al estrato granuloso.
Y en el epitelioma metatípico no se observó positividad. En el caso de epitelioma
espinocelular tratado con radioterapia, se apreció una tinción pardo claro en el
citoplasma, y abundancia de coilocitos.
Cuadro N° 1 PATRÓN DE EXPRESIÓN DE P27 KIP1 EN LOS EPITELIOMAS SEGÚN SU
DIFERENCIACIÓN.
Epiteliomas Número de biopsias Espinocelulares según su diferenciacion POSITIVO NEGATIVO D/E R F E Diferenciados 4 3 2 0 1 Semidiferenciados 0 2 1 2 3 Poco diferenciados 0 0 0 0 6 D/E: Patrón difuso o extensamente positivo. R: Patrón regionalmente positivo. F: Patrón focalmente positivo. E: Patrón esporádicamente positivo.
Cuadro N° 2
RELACIÓN ENTRE CANTIDAD DE INFILTRADO INFLAMATORIO LINOCITO PLASMOCITARIO Y PATRÓN
DE POSITIVIDAD DE LOS EPITELIOMAS ESPINOCELULARES A P27 KIP1
Patrón de positividad cantidad de infiltrado Difusamente o extensamente escaso Positivo Regionalmente positivo moderado Focalmente positivo moderado Esporádicamente positivo moderado-abundante Ausencia de positividad abundante
CAPITULO V
DISCUSIÓN Tal como se había hecho referencia con anterioridad, los marcadores utilizados en
los estudios con inmunohistoquímica pueden estar determinados por varios factores,
como el micro ambiente tisular en el que se desarrollan los tumores, así tenemos que
cambios en la intensidad, y distribución espacial dentro del tejido de las sustancias
reguladoras del ciclo celular, pueden estar influenciados por el grado de hipoxia
(como áreas adyacentes a úlceras o focos de necrosis) dado al descenso de los niveles
de proliferación y diferenciación celular. Esto pudiera explicar la negatividad que se
presentó en un caso de epiteliomas espinocelulares diferenciados.
Más no así en los epiteliomas espinocelulares poco diferenciados, quedaría el
factor infiltrado linfoplasmocitario, del cual observamos que era más constante y en
mayor cantidad en los patrones con reducida expresión a P27. Se ha descrito algunos
parámetros como la indiferenciación, el comportamiento del estroma con presencia de
reacción inflamatoria y neo formación vascular, profundidad de invasión, grosor del
tumor como factores de mal pronóstico, correspondería a una segunda parte de esta
investigación relacionar los aspectos antes mencionados. Se conoce que los linfocitos
en especial los T, producen diversas citocinas que participan en la respuesta tumoral,
faltaría revisar la bibliografía en relación a los epiteliomas espinocelulares y su
diferenciación. El análisis del papel de factores de crecimiento específicos, hormonas
sobre P27 o Cdki podrían proveer nuevos hallazgos de utilidad.
Como los niveles de P27 kip1 son regulados mediante su degradación por la vía
Ubiquitina proteosoma, el descenso de su expresión, observado en los epiteliomas
espinocelulares poco diferenciados, podría ser el resultado de una regulación anormal
de proteínas o de un RNAm anormal. Esta reducida expresividad contribuiría a una
Alteración cinética de la diferenciación celular. Agregándole que una alteración
Como los niveles de P27 kip1 son regulados mediante su degradación por la vía
Ubiquitina proteosoma, el descenso de su expresión, observado en los epiteliomas
espinocelulares poco diferenciados, podría ser el resultado de una regulación anormal
de proteínas o de un RNAm anormal. Esta reducida expresividad contribuiría a una
Alteración cinética de la diferenciación celular. Agregándole que una alteración
genética de este sistema seria la causa inicial. Pagano en 1995, había propuesto la
relación inversa entre el incremento del factor de crecimiento y disminución de la
expresión de P27, a través de la activación de este sistema, promoviendo el
crecimiento celular. Todo lo anterior nos indica lo complejo de determinar la causa
de una desregulación del ciclo celular, en especial en los tumores.
CAPITULO VI
CONCLUSIONES
- El uso de P27 kip1 permite diferenciar a los epiteliomas espinocelulares
diferenciados de los poco diferenciados, a través de la positividad de sus núcleos.
- El origen de este tipo de tumores basado en el trastorno del ciclo celular, a través
del uso de P27 kip1, no estaría fundamentado teniendo en cuenta lo multifactorial
de su regulación.
- El fundamento de usar este tipo de anticuerpo monoclonal en aquellos casos de
dificultad diagnóstica, no se justifica por su alto costo.
REFERENCIA BIBLIOGRAFÍCAS
• ARAYA I. Et al. 1999. Estudio clínico y epidemiológico de cáncer cutáneo en Chile: revisión de 250.000 informes histopatológicos. XIV Congreso Iberoamericano de Dermatología. Málaga. España.
• ATUL B. PANKAJ J.P., et al. 1995. Inhibition of apoptosis during
development of colorectal cancer. Cancer Res. 55: 1811-1816
• CESINARO A.M. et al. 2002. Expression of p 27 kip 1 in Basal Cell Carcinomas and Trichoepitheliomas. The American Journal of Dermatopathology.24: 313/318.
• CHOI H.R. et al. 2003. Differential expressions of cyclin-dependent kinase
inhibitors (p27 and p21) and their relation to p53 and ki67 in oral squamous tumorigenensis. International Journal Oncology, Feb.22(2): 409-14.
• COTAS S. FLANAGEN M., et al. 1996. Requirement of p 27 kipi for
restriction point control of the fibroblast cell cycle. Science. 272:877-880. • DIEPEGEN T.L., MAHLER V. 2002. The epidemiology of skin cancer.
Bristish Journal of Dermatology. 146 (Suppl. 61 ):1-6.
• DIGENNARO E. et al. 2003. Critical role of both p27 kip1 and p21 cip1/WAF 1 in the antiproliferative effect of ZD1839 (Iressa) an epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor, in head neck squamous carcinoma cells. Journal Cell Physiology. April 195(1): 139-150.
• GOFF B. A. et al. 2003. Evaluation of p27 in preinvasive and invasive
malignanc of the cervix. Ginecology Oncology. January 88 (1):40-44.
• HANAI T. et al 2003. Prongnostic models in patients with non-small-cell lung using artificial neural networks in comparison with logistic regression.Cancer Science. My 94(5): 473-7.
• HIRAI T. et al 2003. Reduced expression of p27 is correlated with
progression precancerous lesions of the larynx. Auris Nasus Larynx. May 30(2): 163-8.
• HOLME S.A. MALINOVSKY K. ROBERTS D.L. 2000.Changing trends innon-melanoma skin cancer in South Wales.1988-98. British Journal of Dermatology.143:1224-9.
• JIN L. QIAN X. et al. 1997. Transforming growth factor , transforming
growth receptor II, and p27 kip1 expression in nontumorous and neoplastic human pituitaries. American Journal of Pathology. 151: 509-519.
• KATAYOSE Y. KIM M., et al. 1997. Promoting apoptosis a novel activity
associated with the cyclin-dependent kinase inhibitor p27. Cancer Res. 57: 5441-5445
• KUDO Y. et al 2003. Establishment of an oral squamous cell carcinoma
with high invasive and p27 degradation activities from a lymph node metastasis. Oral Oncology. July 39 (5): 515-20.
• LEVKAU B. KOYAMA H., et al. 1998. Cleavage of p21iates apoptosis in
endothelialcells trough activation of Cdk2 role of a caspace cascade.Moll. Cell. 1: 553-563.
• LIU M. et al. 2002. Prognostic value of cell proliferation markers, tumor
suppressor proteins and cell adhesion molecules in squamous cell carcinoma of the larynx and hypo pharynx. Eur. Arch. Otorhinolaryngology. January 260(1): 28-34.
• LLOYD RICARDO V. et al. 1997. Aberrrant p27 expression in endocrine
and other Tumors. American Journal of Pathology. 150: 401-407.
• LLOYD RICARDO V. et al. 1999. p27: a multifunctional cyclin-dependent kinase inhibitor with prognostic significance in human cancers. Am. J. Pathology.154: 313-322.
• MASAHIRO O. HIROSHI I., et al. 1999. Impact of the expression of Cyclin-
Dependt kinase inhbitor p27 kipi and apoptosis in tumor cells on the overall survival of patients with non-early stage gastric carcinoma. Cancer. 85: 1711-1718.
• MORGAN M.B. COWPER S.E. 1999. Expression of p 27 (kip1) in Nevi and
Melanomas. The American Journal of Dermatopathology. 21: 121-124.
• MORO A. et al. 2001. INF alpha 2b induces apoptosis and proteasome-mediated degradation of P27 KIP1 in human lung cancer cell line. Oncology Rep.
• MOROSETTI R. KAWAMATA N., et al. 1995. Alterations of the p 27/kipi
gene in no- Hodgkin’s lymphomas and adult T-cell leukemia/lymphoma. Blood. 86:1924-1930.
• NEWCOMB E. et al. 1999. Expression of the cell cycle inhibitor p27 kip1 is a
new prognostic marker associated with survival in epithelial ovarian tumors. American Journal of Pathology. 154: 119-125
• OH C.W. PENNEYS N. 2004. P27 and mib 1 expression in actinic keratosis,
Bowen disease, and squamous cell carcinoma. American Journal Dermatopathology. Feb 26 (1):22-6.
• OHASHI Y. et al. 1999. Cell cycle inhibitory protein p27 in esophageal
squamous cell Carcinoma. Anticancer Res. 19: 1843-1848. • ORTONE J.P. 2002. From actinic keratosis to squamous cell carcinoma.
British Journal of Dermatology: 146 (Supll.61):20-23
• POLYAK K. KATO J.Y., et al. 1994. p k27 kip 1, a cyclin –Cdk inhibitor links transforming growth factor-�and contact inhibition to cell cycle arrest.Genes Dev. 8: 9-22.
• POLYAK K. LEE MH., et al. 1994. Cloning of p27 kipi , a cyclin dependent
kinase inhibitor and potential mediator of extracellular antimitogenic signals. Cell. 8:78:59-66.
• PONCE CASTAÑEDA et al.1995. P27 kipi chromosomal mapping to 12p 12-
12p13.1 and absence of mutations in human tumors. Cancer Res. 55:1211-1214.
• QIN X.L. et al. 2000. P27 protein expresión and its significance in human
laryngeal carcinoma. Lin-Chuang Er Bi Yan Hou KeZa Zhi. December 14(12):533-5
• QUINTANILLA M.L. et al. 1998. Mantle cell lymphomas lack expression of
p27, a Cyclin dependent kinase inhibitor. American Journal of Pathology. 153: 175-182
• RAVITZ M.J. YAN S.,et al. 1995. Transforming growth factor induced activation of Cyclic E-Cdk2 kinase and down-regulation of p 27 kipi in C3H 10 T1/2 mouse fibroblasts. Cancer Res. 55: 1413-1416.
• RICHARD C.K. et al. 1998. Reduced levels of the cell cycle inhibitor
p27kip1In epithelial dysphasia and carcinoma of the oral cavity. American Journal Of Pathology. 152: 585-590.
• RUSSO A.A., et al. 1996. Crystalstructures of the p 27 Kipi cyclin dependent-
kinase inhibitor bound to the cyclin A-cdk 2 complex. Nature. 382:325-331.
• SHINTANI S. et al. 2003. Skp2 and Jab 1 expression are associated with inverse expression of P27(kip 1) and poor prognosis in oral squamous cell carcinomas. Oncolgy. 65(4):355-62.
• STEEG. P.S. et al. 1997. Cancer prognostics: post, present and p 27. Nature
Med. 3: 152-154. • TANAKA C. YOSHIMOTO K., et al. 1997. Infrequent mutations of p 27 kipi
gene and trisomy 12 in a subset of human pituitary adenomas. J. Clin.Endocrinol. Metabolism. 82:3141-3147.
• THOMAS G.V. et al. 1998. Down regulation of p27 is associated with
development of colorectal adenocarcinoma metastases. Am. J. Pathology. 153: 681-687.
• TOYOSHIMA H. HUNTER T. 1994. p 27, a novel inhibitor of G1 cyclin-cdk
protein Protein kinase activity is related to p21. Cell. 78: 67-74.
• TROCONE G. et al. 1999. Cyclin dependent kinase inhibitor p27 kip1 expression in normal and neoplasic cervical epithelium. J. Clin. Pathologic. 52: 886- 887.
• TSUZUKI H. et al. 2003. Expression of P27 and apoptosis in oral
Leukoplakia Anticancer Research. Mar-Apr.23(2B):1265-70
• VANZULLI S. et al. 2002. P21, P27 and P53 in estrogen and antiprogestin-induced tumor regression of experimental mouse mammary ductal carcinomas. Carcinogenesis. May 23(5): 749-58.
• VILLARRUBIA. V.G. et al. 2001. Virus del papiloma humano y radiación
ultravioleta. Piel. Vol.16. N.10. 494-505.
• WEEDON. D. SUTRUTTON G. 2002. Piel Patología. Editorial Marban. España.
• YATABE Y. et al. 1998. p 27 kip1 in human lung cancers: differential
changes in Small cell and non-small cell carcinomas. Cancer Res. 58: 1042-1047.
A N E X O S
CURRÍCULUM VITAE
MARÍA GRACIETE NUNES CONTRERAS Candidata para obtener el grado de Especialista en Dermopatología Trabajo de Grado: Expresión de la p27 Kip1 del ciclo celular en Epiteliomas
espinocelulares de piel y mucosas
Titulo de Médico Cirujano: Universidad Centroccidental Lisandro
Alvarado. Barquisimeto. Estado Lara. 1985
Médico Interno: Hospital IVSS “Pastor Oropeza”. Barquisimeto. Estado
Lara. 1985 – 1987.
Profesor Ordinario Asistente de la Sección Anatomia Microscópica.
Departamento de Ciencias Morfológicas. Decanato de Medicina. 1988 –
actual.
Residencia Asistencial Programada en Dermatología . Servicio de
Dermatología. Hospital Central Antonio María Pineda. 1994 – 1997.
Postgrado en Dermopatología. Universidad Centroccidental Lisandro
Alvarado. Barquisimeto. Estado Lara. 2002 –2004.
ANEXOS 37 A. CURRÍCULUM VITAE DEL AUTOR 38