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Universidad Central Del Ecuador

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia

Carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia

Determinación de la presencia de anticuerpos de Toxoplasma gondii

en suero de bovinos de la provincia de Pichincha.

Informe final de investigación presentado como requisito para

obtener el título de Médico Veterinario y Zootecnista.

Autor: Jorge Nicolás Salazar Medina

Tutor: Dr. Eduardo Fabián Aragón Vázquez

Quito, Noviembre 2017

ii

Agradecimientos

Especial agradecimiento a:

Laboratorio de Agrocalidad por permitir procesar las muestras de

este estudio y conceder el uso de sus instalaciones.

Lcda. Margoth Barrionuevo por ser parte fundamental en el

procesamiento de las muestras.

Srta. Daniela Toro por colaborar en el procesamiento de las

muestras.

Dr. Eduardo Aragón por ser el tutor de este proyecto.

A la empresa Provetagros por financiar el proyecto.

iii

DERECHOS DE AUTOR

Yo, Jorge Nicolás Salazar Medina, en calidad de autor del trabajo de

investigación: “Determinación de la presencia de anticuerpos de

Toxoplasma gondii en suero de bovinos de la provincia de Pichincha.”,

autorizo a la UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR, hacer uso de

todos los contenidos que me pertenecen o parte de los que contiene esta

obra, con fines estrictamente académicos o de investigación.

Los derechos que como autora me corresponden, con excepción de la

presente autorización, seguirán vigentes a nuestro favor, de conformidad

con lo establecido en los artículos 5, 6, 8, 19 y demás pertinentes de la

Ley Intelectual y su Reglamento.

Así mismo, autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice

la digitalización y publicación de este trabajo de investigación en el

repositorio virtual, de conformidad a lo dispuesto en el Art. 144 de la Ley

Orgánica de Educación Superior.

_______________________

Jorge Nicolás Salazar Medina

C.I. 1721284527

iv

INFORME APROBACIÓN DEL TUTOR

En mi calidad de Tutor del Trabajo de Grado, presentado por el señor

Jorge Nicolás Salazar Medina, para optar por el Título o Grado de Médico

Veterinario Zootecnista, cuyo título es “Determinación de la presencia de

anticuerpos de Toxoplasma gondi” en suero de bovinos de la provincia de

Pichincha.” Considero que dicho trabajo reúne los requisitos y méritos

suficientes para ser sometido a la presentación pública y evaluación por

parte del jurado examinador que se designe.

En la ciudad de Quito, a los 15 días del mes Noviembre de 2017

__________________________

Dr. Eduardo Fabián Aragón Vázquez

C.I. 170977343-4

v

APROBACIÓN DEL INFORME FINAL/TRIBUNAL

“Determinación de la presencia de anticuerpos de Toxoplasma gondii en

suero de bovinos de la provincia de Pichincha.”

El Tribunal constituido por:

Vocal 1: Dr. Christian Albuja

Vocal 2: Dr. Jorge Mosquera

Vocal 3: Dr. Fernando Pazmiño

Vocal 4: Dr. Dario Pérez

Luego de calificar el Informe Final de Investigación del trabajo de

titulación denominado “Determinación de la presencia de anticuerpos de

Toxoplasma gondii en suero de bovinos de provincia de Pichincha”, previo

a la obtención del título (o grado académico) de Médico Veterinario

Zootecnista presentado por el señor Jorge Nicolás Salazar Medina.

Emite el siguiente veredicto:

Fecha:

Para constancia de lo actuado firman

Nombre y Apellido Calificación

Firma

Vocal 1: Dr. Christian Albuja

Vocal 2: Dr. Jorge Mosquera

Vocal 3: Dr. Fernando Pazmiño

Vocal 4: Dr. Darío Pérez

vi

INDICE GENERAL

Agradecimientos ............................................................................................................... ii

DERECHOS DE AUTOR ............................................................................................... iii

INFORME APROBACIÓN DEL TUTOR .......................................................................iv

APROBACIÓN DEL INFORME FINAL/TRIBUNAL .................................................... v

RESUMEN......................................................................................................................... x

SUMARY ........................................................................................................................... xi

CAPÍTULO I ...................................................................................................................... 1

1. INTRODUCCIÓN ..................................................................................................... 1

CAPÍTULO II ..................................................................................................................... 2

2. OBJETIVOS .............................................................................................................. 2

2.1 Objetivo General ................................................................................................ 2

2.3 Objetivo específico ............................................................................................ 2

CAPÍTULO III .................................................................................................................... 3

3. MARCO TEÓRICO .................................................................................................. 3

3.1 Agente etiológico de la Toxoplasmosis .......................................................... 3

3.2 Historia ................................................................................................................ 3

3.3 Morfología ........................................................................................................... 3

3.4 Ciclo biológico .................................................................................................... 5

3.5 Transmisión ........................................................................................................ 8

3.7 Inmunidad ........................................................................................................... 9

3.8 Toxoplasmosis bovina ...................................................................................... 9

3.9 Toxoplasmosis humana .................................................................................. 10

3.10 Métodos de diagnóstico................................................................................ 11

3.11 Tratamiento .................................................................................................... 12

3.12 Prevención ...................................................................................................... 13

CAPÍTULO IV .................................................................................................................. 14

4. MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................................ 14

4.1 Materiales ......................................................................................................... 14

4.2 Equipos ............................................................................................................. 14

4.3Metodología ........................................................................................................... 14

vii

4.3.1 Variables de estudio .................................................................................... 14

4.3.2 Número de individuos analizados ............................................................. 14

4.4 Métodos específicos del manejo del experimento ......................................... 14

4.4.1 Kit ELISA indirecto multi especie para Toxoplasma gondii ................... 14

4.5 Análisis estadístico .............................................................................................. 15

CAPÍTULO V ................................................................................................................... 16

5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ............................................................................ 16

5.1 Resultados Generales .................................................................................... 16

5.2 Resultados por sexo ....................................................................................... 18

5.3 Resultados por cantones ................................................................................ 19

5.4 Resultados por edad ....................................................................................... 20

5.4 Resultados por predios ................................................................................... 22

CAPÍTULO VI .................................................................................................................. 25

6. CONCLUSIONES .................................................................................................. 25

CAPITULO VII................................................................................................................. 26

7. BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................................... 26

CAPÍTULO VIII ............................................................................................................... 31

8. ANEXOS ................................................................................................................. 31

8.1 Tabla de resultados por animal. ........................................................................ 31

8.2 Resultados ELISA ............................................................................................... 38

8.3 Fotos ...................................................................................................................... 39

8.3.1 Kit ELISA. ...................................................................................................... 39

8.3.2 Hoja de Trabajo. ........................................................................................... 39

8.3.2 Distribución de soluciones. ......................................................................... 40

8.3.4 Incubación. .................................................................................................... 40

8.3.5 Equipo de lectura de placas. ...................................................................... 40

8.3.6 Lectura de placas. ........................................................................................ 41

viii

INDICE DE TABLAS

Tabla 1. Resultados Generales de la prueba ELISA para Toxoplasmosis

en sueros bovinos ………………………….………………………………… 16

Tabla 2. Resultados por sexo de la prueba ELISA para Toxoplasmosis en

sueros bovinos ……………………..………………………………………… 18

Tabla 3. Resultados por cantones de la prueba ELISA para

Toxoplasmosis en sueros bovinos ………………………….……………… 19

Tabla 4. Resultados por grupo de edad de la prueba ELISA para

Toxoplasmosis en sueros bovinos ……………………….………………… 21

Tabla 5 Resultados por predios de la prueba ELISA para Toxoplasmosis

en sueros bovinos……………………………….………………………...… 23

ix

INDICE DE FIGURAS

Figura 1. Esporozoito Figura 2. Estructura del

Taquizoito. ......................................................................................................................... 3

Figura 3. Ciclo biológico del T. gondii.. ......................................................................... 5

Figura 4. Ciclo de vida de T. gondii. .............................................................................. 7

Figura 5. Transmisión de T. gondii.. .............................................................................. 8

Figura 6. Resultados generales. .................................................................................. 16

Figura 7. Resultados por sexo de la prueba ELISA para Toxoplasmosis en

sueros bovinos................................................................................................................ 18

Figura 8. Resultados por Cantón. ................................................................................ 19

Figura 9. Resultados por edad. .................................................................................... 21

x

RESUMEN

Determinación de la presencia de anticuerpos de Toxoplasma gondii

en suero de bovinos de la provincia de Pichincha.

La toxoplasmosis es una zoonosis mundialmente distribuida, que tiene

importancia principalmente cuando afecta a mujeres en gestación que no

han tenido una previa exposición al parasito y la infección afecta al feto.

También tiene relevancia en personas que padezcan de VIH u otras

patologías donde el sistema inmune se vea afectado.

La toxoplasmosis en los bovinos cursa sin sintomatología o puede ser

leve en animales jóvenes, pero se registran dos abortos donde se logró

aislar el parásito. Los bovinos son hospedadores intermediarios del

parásito y en ellos se encuentran quistes tisulares, por esta razón los

bovinos se consideran una fuente de infección.

En este estudio se procesaron 269 muestras de suero bovino

pertenecientes a la provincia de Pichincha de un total de 25 predios, para

el análisis de las muestras se utilizó un kit ELISA indirecto multiespecie,

que mide la cantidad de IgG que presentan los sueros. Se demostró la

presencia de toxoplasmosis bovina en la provincia de Pichincha

obteniendo un resultado de 23,45% de sueros positivos.

Palabras Clave: Toxoplasma gondii, Bovinos, Anticuerpos, ELISA.

xi

SUMARY

Determination of the presence of Toxoplasma gondii antibodies in

bovine serum from the province of Pichincha.

Toxoplasmosis is a globally distributed zoonosis which is specially

important when it affects women in gestation when they have not had a

previous exposure to the parasite and the infection affects the fetus. It also

has relevance in people suffering from HIV or other pathology where the

immune system is affected.

Toxoplasmosis occurs in bovine animals without signs or may be mild in

young animals. But two abortions have been recorded where the parasite

was isolated. The cattle are one of the intermediate hosts of the parasite

where the tissue cysts are considered a source of infection.

In this study, 269 bovine serum samples from the province of Pichincha

were processed from a total of 25 farms. For the analysis of the samples,

an indirect ELISA kit was used, which measures the amount of IgG

present in the serum. It was demonstrated the presence of bovine

toxoplasmosis in the province of Pichincha obtaining a result of 23,45%

positive serums.

Keywords: Toxoplasma gondii, Bovine, Antibodies, ELISA.

1

CAPÍTULO I

1. INTRODUCCIÓN

La toxoplasmosis es una enfermedad causada por el parásito intracelular

Toxoplasma gondii, la misma que presenta una distribución mundial y

tiene gran importancia debido a que es una zoonosis. Principalmente,

genera riesgo en humanos inmunodeficientes y fetos congénitamente

infectados, particularmente en estos casos puede ser mortal. Sin embargo

en el resto de la población la enfermedad rara vez tiene presentación

clínica pero afecta al 30% de la población mundial (Bravo, 2005; CFSPH,

2005; Muñiz & Mondragón, 2009; OIE, 2008; Sánchez et al., 2012).

La toxoplasmosis bovina adquiere relevancia ya que en los bovinos se

encuentran los quistes, los que son fuente de infección de la enfermedad

al encontrarse en los tejidos del animal. Humanos y animales, al ingerir

carne cruda o mal cocida conteniendo los quistes tisulares, pueden

infectarse (Almirall, Escobedo, Nuñez & Ginoro, 2006; OIE, 2008; Plata,

2017).

Los felinos, al ingerir carne de bovino con la presencia de los quistes,

permiten que el parásito cumpla su ciclo de vida en su tracto intestinal,

terminando éste con la liberación de los ooquistes al ambiente en las

heces para comenzar un nuevo ciclo (CFSPH, 2005; Plata, 2017).

En los bovinos la enfermedad cursa, normalmente, sin sintomatología. No

obstante, se han reportado dos casos de aborto con la presencia del

parásito en los fetos (Plata, 2017). La presencia o ausencia de la

enfermedad en bovinos en Ecuador no había sido determinada.

En el estudio se utilizó un kit de ELISA para toxoplasmosis y sueros de

bovinos del muestreo realizado por Agrocalidad en la sierra ecuatoriana y

de esta manera se determinó la presencia de la enfermedad en la

provincia de Pichincha.

2

CAPÍTULO II

2. OBJETIVOS

2.1 Objetivo General

Determinar la presencia o ausencia de anticuerpos para Toxoplasma

gondii en suero de bovinos de la provincia de Pichincha.

2.3 Objetivo específico

Determinar la presencia o ausencia de anticuerpos para Toxoplasma

gondii en suero de bovinos de la provincia de Pichincha.

3

CAPÍTULO III

3. MARCO TEÓRICO

3.1 Agente etiológico de la Toxoplasmosis

El Toxoplasma gondii es el agente causal de la toxoplasmosis, es un

parásito protozoario intracelular de distribución mundial, perteneciente al

phylum Apicomplexa, clase esporozoita, subclase coccidia, orden

eimeeriina, familia toxoplasmatidae y especie gondii (Dubey, 2010;

Giraldo, 2008; Luyo, 2015; Uribarren, 2017; Velázquez, 2014)

3.2 Historia

En 1908, Alfonso Splendore en Brasil descubrió este parasito en conejos

de laboratorio; a la par fue observado en el roedor Ctenodactylus gondii

del norte de África por los franceses Charles Nicolle y Louis Manceaux

(Besné, 2011; De Santos, 2016; Dubey, 2010; Esteves, 2011; Giraldo M.,

2008; Luyo, 2015; Raiden, Ángel, & Jeddú, 2013; Sánchez et al., 2012).

En un inicio fue denominado Leishmania gondii pero al tratar de hacer que

creciera en medios de cultivo descrito para Leishmania spp. no se

obtuvieron resultados, por lo que se concluyó que no pertenecían a este

género y fue denominado Toxoplasma (griego toxon: arco) debido a su

forma de arco y gondii por el roedor africano (Dubey, 2010; Esteves,

2011; Giraldo, 2008; Luyo, 2015; Raiden et al., 2013).

3.3 Morfología

Figura 1. Esporozoito Figura 2. Estructura del Taquizoito.

Fuente (Uribarren, 2017). Fuente (Franco, 2015)

4

Los tipos de T. gondii son: I, II, III y son de virulencia variable (Uribarren,

2017). El primer grupo son cepas virulentas, el segundo y el tercer grupo

son cepas menos virulentas (Giraldo, 2008).

T. gondii tiene varias formas durante su ciclo biológico:

3.3.1 Oquistes: son eliminados únicamente por los felinos ya que solo

ellos se produce el ciclo completo; los oquistes se producen por la

reproducción sexual del parásito que se da a cabo en el intestino de los

felinos, tienen una forma ovoide y miden de 10 a 12 µm, contienen dos

esporoquistes dentro de los que se encuentran cuatro esporozoitos en

cada uno (Giraldo, 2008; Uribarren, 2017).

3.3.2 Taquizoitos: es la forma invasiva del parásito la cual puede

prácticamente infectar a cualquier célula nucleada, son observados en la

fase aguda de la enfermedad, se reproducen de manera asexual por

división binaria, presentan una forma ovalada y miden 3 µm x 6 µm

(Giraldo, 2008; Uribarren, 2017). Esta forma es la responsable de la

diseminación de parásito a los tejidos y causa la sintomatología de la

enfermedad (Giraldo, 2008).

3.3.3 Bradizoitos: esta forma se encuentra dentro de los quistes tisulares,

son similares a los taquizoitos y miden 1,5 µm x 7 µm (Uribarren, 2017).

Se diferencian de los taquizoitos principalmente por su resistencia a ser

digeridos una vez que son liberados de los quistes tisulares (Esteves,

2011).

3.3.4 Quistes tisulares: pueden presentar diferentes tamaños de 10 a 200

µm, en promedio miden 70 µm y contienen alrededor de mil bradizoitos

(Giraldo, 2008; Uribarren, 2017). Los quistes se encuentran

principalmente en el cerebro, músculo esquelético y cardíaco, pueden

permanecer en el hospedero por tiempo indefinido (OMS, 2017; Raiden et

al., 2013; Uribarren, 2017). Los quistes pueden estar presentes en los

hospedadores intermediarios y en los definitivos, que al ser ingeridos

5

llegan al intestino delgado donde liberan a los bradizoitos (Esteves, 2011;

Uribarren, 2017).

3.4 Ciclo biológico

Figura 3. Ciclo biológico del T. gondii. Fuente (CDC, 2017).

Los felinos son los hospedadores definitivos del parásito y los

intermediarios son animales de sangre caliente; la fase sexual solo se da

en los hospedadores definitivos y la fase asexual se puede dar en ambos,

esto hace que los felinos sean los principales reservorios de la

enfermedad; se puede dividir el ciclo biológico en tres fases:

enteroepiterial que se da únicamente en el hospedador definitivo,

extraintestinal que se da tanto en el hospedador definitivo como en los

intermediarios, y por último, la esporogónica que se da en el medio

ambiente (Esteves, 2011; Giraldo, 2008; OMS, 2017; Raiden et al., 2013;

Uribarren, 2017)

6

3.4.1 Fase sexual

Esta fase ocurre únicamente en los felinos y se produce cuando se

infestan por la ingesta de quistes tisulares presentes en tejidos de sus

presas principalmente o por ingesta de ooquistes esporulados; también se

describe la infección por ingesta de taquizoitos, pero su desarrollo se

puede dar en el epitelio de la boca, ya que tienen un nivel bajo de

resistencia a los jugos gástricos y por esta razón no logran llegar al

epitelio del intestino delgado (Raiden et al., 2013; Uribarren, 2017).

Únicamente en el intestino de los felinos se lleva a cabo esta fase; en el

caso que el felino se infeste por ooquistes esporulados, éstos son

digeridos y liberan los esporozoitos; en el caso de quistes tisulares se

liberan bradizoitos, en ambos casos llegan al intestino delgado y penetran

las células del epitelio donde se realiza la fase asexual; la fase sexual

inicia 2 días después en el caso de que le infección sea por quistes

tisulares y de 3 a 15 días en el caso de esporozoitos, la formación de

gametos se produce en los días indicados. (Esteves, 2011; Raiden et al.,

2013).

La formación de gametos se denomina gametogonia; el gameto

masculino se denomina microgameto y el femenino macrogameto; una

vez que se forman los gametos, el microgameto penetra en el

macrogameto formando el cigoto, dando paso a la formación de los

ooquistes. Los ooquistes son liberados al lumen del intestino y salen en

las heces de los felinos; los ooquistes liberados no están esporulados,

una vez que se encuentran en el ambiente se da la fase esporogónica

siempre y cuando se den las condiciones adecuadas para que ésta se

realice, siendo éstas un ambiente húmedo con temperatura cálida; por lo

general, pasarán de 1 a 5 días para que los ooquistes esporulen; éstos

pueden permanecer infectantes durante meses o hasta un año si las

condiciones son favorables ya que son muy resistentes al ambiente; su

viabilidad disminuye rápidamente a temperaturas mayores a 67 °C y

menores a -12°C; los felinos pueden excretar hasta 1 millón de ooquistes

7

no esporulados al día, en un periodo de 3 a 15 días o hasta 21 días; una

vez que el animal adquiere inmunidad cesa la excreción y mientras sea

inmunocompetente no volverá a excretar ooquistes (Esteves, 2011;

Franco, 2015; Giraldo, 2008; Raiden et al., 2013; Uribarren, 2017).

3.4.2 Fase asexual

Esta fase inicia con la ingestión de ooquistes esporulados o por quistes

tisulares, en el caso de los ooquistes llegan al aparato digestivo donde

son destruidos y liberan esporozoitos en células epiteliales del intestino

delgado, los que se diferencian y forman taquizoitos, los taquizoitos

replican rápidamente para luego salir a la circulación invadiendo

principalmente monocitos, se diseminan por vía sanguínea y llegan a los

diferentes tejidos; los taquizoitos se transforman en bradizoitos y se

forman los quistes tisulares. En el caso de ingestión de quistes tisulares al

igual que los ooquistes son destruidos por acción enzimática y liberan los

bradizoitos. Los bradizoitos invaden las células epiteliales del intestino

delgado y se diferencian a taquizoitos y se continúa con el ciclo antes

descrito (Esteves, 2011; Franco, 2015; Giraldo, 2008).

Figura 4. Ciclo de vida de T. gondii. Fuente (Gangneux & Dardé, 2012)

8

3.5 Transmisión

La transmisión se produce por la ingestión de quistes tisulares presentes

en tejidos de hospedadores intermediarios, en el caso de humanos por

ingestión de carne cruda o mal cocida, también puede darse por la

ingestión de ooquistes esporulados presentes en agua o alimentos

contaminados con heces de felinos. En cuanto a los bovinos, la fuente

principal de infección son los ooquistes presentes en las pasturas; en

humanos se describe la transmisión de la enfermedad por transfusión de

sangre, trasplante de órganos e inoculación de del parasito en el

laboratorio; se puede producir la transmisión vertical por vía

transplacentaria (Esteves, 2011; Franco, 2015; Uribarren, 2017).

Figura 5. Transmisión de T. gondii. Fuente (Gangneux & Dardé, 2012).

9

3.6 Patogenia

Al ser un parásito intracelular obligado requiere de mecanismos que le

ayuden a ingresar en las células blanco; este proceso se parece a la

fagocitosis. El parásito presenta organelos que le ayudan a la adhesión e

invasión que se encuentran en la zona apical principalmente el conoide,

además de la conformación de la membrana plasmática formada por una

tricapa lipídica la cual también interviene en la invasión; una vez que el

parasito ingresa en la célula forma una vacuola parasitófora y posterior a

esto inicia la reproducción asexual y se replica hasta producir la lisis

celular para posteriormente salir y los parásitos replicados buscan nuevas

células para continuar con el ciclo (Franco, 2015; Uribarren, 2017).

3.7 Inmunidad

Se produce una reacción tanto celular como humoral; en el inicio de la

infección la respuesta se da principalmente por neutrófilos, macrófagos y

células NK. Los anticuerpos de tipo IgM son los que el parásito estimula

en la fase aguda de la enfermedad, y se encuentran a partir del día 12 y

su pico se presenta alrededor del mes post infección. En la fase crónica

de la infección los del tipo IgG están presentes a partir de los tres meses

post infección, pudiendo permanecer por toda la vida del hospedero. El

mecanismo de defensa del parásito ante la respuesta inmune es la

formación de quistes que permanecen en los tejidos y ante una baja en la

inmunidad del hospedero los bradizoitos pueden generar taquizoitos y dar

lugar nuevamente a la infección aguda (Esteves, 2011; Uribarren, 2017).

3.8 Toxoplasmosis bovina

La toxoplasmosis bovina cursa sin sintomatología, siendo los bovinos un

hospedador intermediario para el parásito; en ellos se encuentran los

quistes tisulares, aunque son difíciles de aislar en infecciones naturales,

se cree que los bovinos tienen cierta resistencia a la infección y logran

eliminar los quistes, aunque experimentalmente se han logrado recuperar

los quistes hasta 267 días post infección. Un estudio realizado en

Colombia en 2015 arrojó 36,7% de prevalencia de T. gondii en carne lo

10

que sugiere que los bovinos podrían ser una fuente de infección para los

humanos (FAO, 2011; Franco, 2015; Jimenez, 2009; Plata, 2017). Pese a

que no se encuentra sintomatología en los bovinos adultos se han

registrado dos abortos en los cuales se logró aislar el parásito, sucedió

uno en Portugal a los 5 meses de gestación y otro en Estados Unidos al

final de la gestación, lo que da una premisa para involucrar al parasito

como posible causante de problemas en la reproducción bovina (Plata,

2017). En bovinos jóvenes especialmente en terneros puede causar

linfoadenopatia, fiebre, inapetencia, signos a nivel respiratorio y del

sistema nervioso (Cabral et al., 2013; Plata, 2017)

3.9 Toxoplasmosis humana

Las toxoplasmosis en el humano principalmente tiene importancia en

grupos determinados como en fetos, recién nacidos, mujeres

embarazadas, personas con toxoplasmosis congénita no diagnosticada o

personas que tengan enfermedades que comprometan el sistema inmune,

ya que normalmente causa sintomatología leve caracterizada por

linfoadenopatia; se pueden presentar más signos en casos de

toxoplasmosis aguda, como son dolor muscular, cefalea, astenia, fiebre,

dolor de garganta, problemas pulmonares y cardiacos en personas

inmunocompetentes. Es de la zoonosis mayormente distribuida a nivel

mundial ya que se cree que afecta a por lo menos a un tercio de la

población y su prevalencia varía de acuerdo a la zona geográfica; en

zonas tropicales la prevalencia aumenta (FAO, 2011; Montealegre,

Valbuena, Cortes, & Flóres, 2009; Montoya & Remington, 2008; Muñiz &

Mondragón, 2009; OMS, 2017; Uribarren, 2017).

3.9.1 Toxoplasmosis congénita

Esta se produce cuando la madre durante la gestación se infecta del

parásito y la sintomatología va a variar de acuerdo al día de gestación en

el que se encuentre al momento de ser infectada, siendo el primer tercio

de la gestación el momento en el que el parásito puede causar mayores

daños en el feto; si la madre se infecta en el último tercio de la gestación

11

podría darse un curso asintomático, los signos que se dan son:

encefalomielitis, retinocoroiditis, calcificación intracraneal e hidrocefalia,

también puede ocurrir aborto, parto prematuro, ceguera, estrabismo, entre

otros, relacionados a problemas del sistema nervioso (FAO, 2011;

Uribarren, 2017).

3.9.2 Toxoplasmosis ocular

Por lo general, afecta a pacientes con toxoplasmosis congénita pero

también se registran en casos de toxoplasmosis adquirida, los signos de

la enfermedad son: visión borrosa, fotofobia, dolor y lagrimeo; por lo

general se produce retinocoroiditis (Cordero, Pérez, Calleja, & García Ruiz

De Morales, 2010; Uribarren, 2017).

3.9.3 Toxoplasmosis en inmunocompromiso

Las personas que padecen SIDA o han recibido algún tipo de

quimioterapia se encuentran en este grupo; éstas se encuentran en riesgo

por el problema que presentan en el sistema inmunológico, siendo la

toxoplasmosis una de las causas de muerte de este tipo de pacientes. Los

taquizoitos principalmente afectan órganos como: sistema nervioso

central, ojos, corazón, hígado y pulmones. En pacientes con SIDA se ve

afectado el sistema nervioso central causando encefalitis necrotizante

multifocal (Pino, Salinas, & López, 2009; Ramírez et al., 2014; Uribarren,

2017).

3.10 Métodos de diagnóstico

Para el diagnostico de esta enfermedad se utilizan diferentes pruebas,

tanto serológicas como directas; el diagnóstico presuntivo es difícil de

realizar debido a que la sintomatología puede ser diversa y no es

especifica como para lograr éste. Dentro de las pruebas serológicas

tenemos: ELISA, hemoaglutinación indirecta, prueba de azul de metileno,

prueba de fijación del complemento reacción de inmunofluoresencia

indirecta y Western blot; se pueden utilizar pruebas directas como son el

12

aislamiento del parásito, PCR e histopatología (Besné, 2011; Esteves,

2011; Uribarren, 2017).

La prueba ELISA, se utiliza para identificar la presencia ya sea, de

antígenos o de anticuerpos y se basa en la afinidad y especificidad que

tiene este complejo. Las pruebas ELISA que detectan antígenos son

denominadas directas, y las que detectan anticuerpos se dominan

indirectas. Se utilizan enzimas para marcar el antígeno o el anticuerpo, en

el caso del ELISA directo el anticuerpo estará marcado y en el indirecto el

antígeno, si se la unión del complejo antígeno anticuerpo ésta enzima

reacciona y da un resultado de color, el que puede ser cuantificado

mediante densidad óptica (Calderón, 2007; Guzman, 2004).

3.11 Tratamiento

El tratamiento utilizado en humanos es la combinación de perimetamina

junto con sulfamidas, este tratamiento también se ha descrito en caninos,

felinos y ovinos; esta combinación debe ir suplementada con ácido fólico

debido a que la perimetamina al igual que las sulfamidas interviene en la

síntesis del ácido fólico interrumpiendo la formación de ARN y ADN en el

protozoario, pero debido a las grandes dosis que se deben utilizar

también causa deficiencia en el paciente; debido a que no se puede

utilizar perimetamina ni sulfamidas en el primer tercio de la gestación se

realiza un tratamiento con espiramicina (Montoya & Remington, 2008;

OMS, 2017; Sánchez et al., 2012) Cualquier tipo de tratamiento que se

utilice va dirigido a los taquizoitos, no hay tratamiento para eliminar los

quistes tisulares; en el caso de animales de consumo, específicamente en

los bovinos, no se describe un tratamiento. ya que el uso de antibióticos

es restringido en animales de consumo y se debe preferir la prevención

de la enfermedad (Esteves, 2011; Luyo, 2015).

13

3.12 Prevención

En humanos, las principales recomendaciones para prevenir la

toxoplasmosis son:

Consumir carne bien cocida y productos lácteos pasteurizados (FAO,

2011; Montoya & Remington, 2008).

Consumir vegetales y frutas (FAO, 2011; Montoya & Remington,

2008).

Al manipular heces de felinos utilizar guantes para evitar su contacto

directo (FAO, 2011).

En animales herbívoros se debe tratar de que no consuman ooquistes,

evitando la contaminación de heces de felinos la comida de los animales,

lo que es muy difícil de controlar; en animales carnívoros domésticos se

debe evitar que consuman carne o vísceras crudas, especialmente los

gatos que son los que mantienen el ciclo del parásito (Besné, 2011;

Esteves, 2011).

14

CAPÍTULO IV

4. MATERIALES Y MÉTODOS

4.1 Materiales

Kit ELISA indirecto para múltiples especies IDvet.

Muestras de suero bovino.

Guantes de nitrilo.

Mandil.

Puntas para micropipeta.

4.2 Equipos

Micropipeta multicanal.

Micropipeta.

Fotómetro de microplacas.

Software de lectura de placas IDvet.

4.3Metodología

4.3.1 Variables de estudio

Las variables que se analizaron en el estudio son: presencia o ausencia

de anticuerpos contra Toxoplasma gondii, estas variables son de tipo

nominales ya que los resultados posibles son presencia o ausencia.

4.3.2 Número de individuos analizados

Debido a que en el muestreo realizado por Agrocalidad existen 269

muestras de suero bovino, se realizó el análisis en todos estos sueros

pertenecientes a la provincia de Pichincha los que fueron tomados de

varios cantones de dicha provincia.

4.4 Métodos específicos del manejo del experimento

4.4.1 Kit ELISA indirecto multi especie para Toxoplasma gondii

Se utilizó un kit ELISA indirecto para detectar anticuerpos contra

Toxoplasma gondii en el suero de bovinos, el kit ELISA contiene el

15

antígeno P30 de Toxoplasma gondii y cuenta con 2 placas para 92

muestras cada una (IDvet, 2017).

El procedimiento que se utilizó para analizar las muestras recomendado

por (IDvet, 2017) es el siguiente:

Realizar una hoja de trabajo ubicando la identificación de la

muestra en cada pocillo.

Dejar el kit a temperatura ambiente por 30 minutos, exceptuando

los controles y el conjugado, que deben estar refrigerado.

Colocar 90 µl de diluyente por pocillo.

Colocar 10 µl de suero por pocillo de cada muestra a analizar.

Colocar 10 µl de control negativo y positivo.

Incubar la placa por 45 minutos.

Realizar 3 lavados por pocillo con 300 µl de solución de lavado

20x.

Preparar el conjugado 10x con el diluyente número 3.

Distribuir el conjugado 100 µl por pocillo.

Incubar por 30 minutos.

Realizar 3 lavados por pocillo con 300 µl de solución de lavado

20x.

Distribuir el sustrato 100 µl por pocillo.

Incubar durante 15 minutos en la oscuridad.

Distribuir el stop 100 µl por pocillo.

Leer la placa con el fotómetro, utilizando el software IDvet.

Los resultados se interpretaron como: ≥50 positivo, ≤40 negativo,

>40 y <50 dudoso.

4.5 Análisis estadístico

Para los resultados de la prueba ELISA se utilizó estadística descriptiva

con tablas y gráficos de frecuencia (Gorgas.; Cardiel ; Zamorano, 2011).

16

CAPÍTULO V

5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

5.1 Resultados Generales

A continuación se detallan los resultados de la prueba ELISA realizada a

los sueros bovinos procedentes de la provincia de Pichincha, se detalla

además el sexo, edad y la procedencia del animal.

Tabla 1. Resultados generales de la prueba ELISA para Toxoplasmosis

en sueros bovinos.

Positivos Negativos Dudosos Total

63 189 17 269

23,42% 70,26% 6,32% 100,00%

Figura 6. Resultados generales.

Los resultados demuestran que existe la presencia de toxoplasmosis

bovina en la provincia de Pichincha. Como se muestra en la tabla 1 el

porcentaje de positivos es de 23,42% (63/269), negativos 70,26%

(189/269) y 6,32% (17/269) de dudosos.

Cabe recalcar que el porcentaje de positivos no indica que los animales

se encuentren enfermos. Las muestras fueron analizadas con un ELISA

0,00%

10,00%

20,00%

30,00%

40,00%

50,00%

60,00%

70,00%

80,00%

Positivos Negativos Dudosos

Series1

17

indirecto el que mide anticuerpos de tipo IgG, los que indican un estado

crónico, demostrando que los animales estuvieron expuestos al parásito.

No se puede descartar la presencia de quistes tisulares porque, como se

mencionó, pueden sobrevivir durante toda la vida del hospedero

intermediario; en bovinos, aislar los quistes es difícil de lograr, solo se ha

realizado en infecciones experimentales (IDvet, 2017; Plata, 2017).

Este porcentaje de bovinos positivos indica una presencia moderada del

parásito, comparado con países vecinos como Colombia en el que existe

una prevalencia de 36,7%(Franco, 2015) y en Perú 17%(Esteves, 2011),

lo que indica que la provincia de Pichincha tiene un porcentaje de

positivos promedio dentro de ambos países.

En otros países donde se han realizados estudios similares se han

obtenido los siguientes resultados: Estonia 18,62% (Jokelainen, Tagel,

Motus, Viltrop, & Lassen, 2017), Estados Unidos 25% (Esteves, 2011),

Brasil 11% (Franco, 2015), por citar algunos ejemplos de prevalencia de

Toxoplasmosis bovina.

En el estudio se presentó un porcentaje de 6,30% de dudosos, lo que se

puede atribuir a que la cantidad de anticuerpos presentes en las muestras

cuyo resultado fue dudoso no es suficiente para que sean positivos. La

causa es que los animales aún no se encontraban en estado crónico de la

enfermedad, en el que se encuentra mayor cantidad de anticuerpos de

tipo IgG, los que son los que mide el kit utilizado en este estudio (IDvet,

2017).

18

5.2 Resultados por sexo

Tabla 2. Resultados por sexo de la prueba ELISA para Toxoplasmosis en

sueros bovinos.

Figura 7. Resultados por sexo de la prueba ELISA para Toxoplasmosis en sueros bovinos.

En la tabla 2 se muestran los resultados obtenidos por sexo, del total de

hembras el 24,5% (60/244) presentó anticuerpos para T. gondii, un 6,56%

(16/244) de dudosos y 68,85% 168 (244) de negativos. En el caso de los

machos de los machos los resultados fueron: 12% (3/25) tuvieron un

resultado positivo, 4% (1/25) de dudosos y 84% (21/25) negativos.

24,59%

68,85%

6,56%

12,00%

84,00%

4,00%

0,00%

10,00%

20,00%

30,00%

40,00%

50,00%

60,00%

70,00%

80,00%

90,00%

Positivos% Negativos% Dudosos%

Hembras

Machos

Sexo Positivos Positivos% Negativos Negativos% Dudosos Dudosos% Total

Hembras 60 24,59% 168 68,85% 16 6,56% 244

Machos 3 12,00% 21 84,00% 1 4,00% 25

19

5.3 Resultados por cantones

Tabla 3. Resultados por Cantones de la prueba ELISA para

Toxoplasmosis en sueros bovinos.

Figura 8. Resultados por Cantón.

Cantón Positivo Positivo % Negativo Negativo

%

Dudoso Dudoso

%

Total

Cayambe 6 22,22% 20 74,07% 1 3,70% 27

Mejía 6 12,77% 37 78,72% 4 8,51% 47

P. V. Maldonado 8 88,89% 0 0,00% 1 11,11% 9

Puerto Quito 2 9,52% 18 85,71% 1 4,76% 21

Quito 38 24,36% 109 69,87% 9 5,77% 156

Rumiñahui 2 28,57% 5 71,43% 0 0,00% 7

San Miguel de los

Bancos

1 50,00% 0 0,00% 1 50,00% 2

269

22,22%

12,77%

88,89%

9,52%

24,36% 28,57%

50,00%

3,70% 8,51%

11,11%

4,76% 5,77%

0,00%

50,00%

0,00%

10,00%

20,00%

30,00%

40,00%

50,00%

60,00%

70,00%

80,00%

90,00%

100,00%

Cayambe Mejía P. V.Maldonado

PuertoQuito

Quito Rumiñahui San Miguelde los

Bancos

Positivo %

Dudoso %

20

En la tabla 3 se muestran los resultados analizados por cantones, el

porcentaje de más alto de positivos se fue el del Pedro Vicente

Maldonado 88,89% (8/9), donde de nueve muestras tomadas ocho fueron

positivas.

5.4 Resultados por edad

Tabla 4. Resultados por grupo de edad de la prueba ELISA para

Toxoplasmosis en sueros bovinos.

Edad Positivos Positivo % Negativos Negativo

%

Dudosos Dudoso % Total

0,5 -3 Años 22 19,82% 85 76,58% 4 3,60% 111

3,1 - 6 Años 28 28,00% 64 64,00% 8 8,00% 100

6,1 -10 Años 13 22,41% 40 68,97% 5 8,62% 58

269

21

Figura 9. Resultados por edad.

En la tabla 4 se muestran los resultados por edad, para esto se dividió en

tres grupos de edad de 0,5 años a 3 años el primer grupo, de 3,1 a 6 años

el segundo y de 6,1 años a 10 años en el tercero. El grupo de 3,1 a 6

años el que presenta mayor número de positivos 28% (28/100).

19,82%

76,58%

3,60%

28,00%

64,00%

8,00%

22,41%

68,97%

8,62%

0,00%

10,00%

20,00%

30,00%

40,00%

50,00%

60,00%

70,00%

80,00%

90,00%

Positvo % Negativo % Dudoso %

0,5 -3 Años

3,1 - 6 Años

6,1 -10 Años

22

5.4 Resultados por predios

Tabla 5. Resultados por predios de la prueba ELISA para Toxoplasmosis

en sueros bovinos.

Predio Positivos Positivos

%

Negativos Negativos

%

Dudosos Dudosos

%

Total

Chausipanta 6 26,09% 14 60,87% 3 13,04% 23

Chontillas 1 4,76% 19 90,48% 1 4,76% 21

El buen Vivir 11 57,89% 7 36,84% 1 5,26% 19

El Caputlí 3 37,50% 5 62,50% 0 0,00% 8

El Carmen 1 25,00% 3 75,00% 0 0,00% 4

Greenwood 1 50,00% 0 0,00% 1 50,00% 2

La Esperanza 2 9,52% 18 85,71% 1 4,76% 21

Larcachaca 1 33,33% 2 66,67% 0 0,00% 3

Los Dragos 6 46,15% 7 53,85% 0 0,00% 13

Lote 04 1 33,33% 2 66,67% 0 0,00% 3

Piganta Agícola 1 20,00% 4 80,00% 0 0,00% 5

S/N La Moya 0 0,00% 7 87,50% 1 12,50% 8

S/N Pisambilla 0 0,00% 4 100,00% 0 0,00% 4

S/N, Chachil 1 9,09% 10 90,91% 0 0,00% 11

S/N, El Pedregal 0 0,00% 5 100,00% 0 0,00% 5

S/N, Las Tolas 6 35,29% 9 52,94% 2 11,76% 17

S/N, Musua 0 0,00% 12 92,31% 1 7,69% 13

S/N, Retiro Bajo 6 28,57% 13 61,90% 2 9,52% 21

S/N, Simón

Bolívar

2 9,52% 18 85,71% 1 4,76% 21

S/N, Turochico

Alto

1 14,29% 6 85,71% 0 0,00% 7

S/N, Turochico

Bajo

2 40,00% 3 60,00% 0 0,00% 5

San Fermando 8 88,89% 0 0,00% 1 11,11% 9

Santa Martha 1 5,56% 16 88,89% 1 5,56% 18

Suhi Potrero 2 25,00% 5 62,50% 1 12,50% 8

23

Figura 10. Resultados por predio

26

,09

%

4,7

6%

57

,89

%

37

,50

%

25

,00

%

50

,00

%

9,5

2%

33

,33

%

46

,15

%

33

,33

%

20

,00

%

0,0

0%

0,0

0%

9,0

9%

0,0

0%

35

,29

%

0,0

0%

28

,57

%

9,5

2%

14

,29

%

40

,00

%

88

,89

%

5,5

6%

25

,00

%

60

,87

%

90

,48

%

36

,84

%

62

,50

%

75

,00

%

0,0

0%

85

,71

%

66

,67

%

53

,85

%

66

,67

%

80

,00

%

87

,50

%

10

0,0

0%

90

,91

% 10

0,0

0%

52

,94

%

92

,31

%

61

,90

%

85

,71

%

85

,71

%

60

,00

%

0,0

0%

88

,89

%

62

,50

%

13

,04

%

4,7

6%

5,2

6%

0,0

0%

0,0

0%

50

,00

%

4,7

6%

0,0

0%

0,0

0%

0,0

0%

0,0

0%

12

,50

%

0,0

0%

0,0

0%

0,0

0%

11

,76

%

7,6

9%

9,5

2%

4,7

6%

0,0

0%

0,0

0%

11

,11

%

5,5

6%

12

,50

%

Positivos % Negativos Dudosos %

24

En la tabla 5 se muestran los resultados por predios, San Fernando

presentó el porcentaje más elevado 88,89% (8/9) de positivos.

25

CAPÍTULO VI

6. CONCLUSIONES

Se demostró la presencia de Toxoplasmosis bovina en la provincia

de Pichincha, presentando un porcentaje de positivos de 23,45%,

pese a que los bovinos no son un buen hospedero intermediario

para el T. gondii es discutible que al comer carne mal cocida o

cruda con presencia de quistes, tanto humanos como el resto de

animales carnívoros podrían contraer Toxoplasmosis. Además, por

la variabilidad del muestreo se debe continuar con los estudios

para mayor confiabilidad.

26

CAPITULO VII

7. BIBLIOGRAFÍA

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164/ALFREDO DE JES%DAS VEL%C1ZQUEZ

CONSTANTINO.pdf?sequence=1

31

CAPÍTULO VIII

8. ANEXOS

8.1 Tabla de resultados por animal.

Nº de muestra

Sexo Edad Años

Parroquia Cantón Predio Resultado

1 Hembra 3 Gualea Cantón Quito Los Dragos POSITIVO



4 Hembra 7 Gualea Cantón Quito Los Dragos Negativo









13 Hembra 0,66 Gualea Cantón Quito Los Dragos Negativo

14 Macho 0,5 Atahualpa Cantón Quito Piganta Agrícola Negativo

15 Macho 5 Atahualpa Cantón Quito Piganta Agrícola Negativo

16 Hembra 5 Atahualpa Cantón Quito Piganta Agrícola POSITIVO

17 Macho 4 Atahualpa Cantón Quito Piganta Agrícola Negativo

18 Hembra 1,6 Atahualpa Cantón Quito Piganta Agrícola Negativo

19 Hembra 3 Aloasi Cantón Mejía No Informa, La Moya Negativo




23 Hembra 3 Aloasi Cantón Mejía No Informa, La Moya Dudoso




27 Hembra 3 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo






33 Macho 2 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo

32



36 Hembra 1,5 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo


38 Macho 1,6 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo


40 Hembra 3 Nono Cantón Quito Santa Martha POSITIVO



43 Macho 1,5 Nono Cantón Quito Santa Martha Negativo

44 Hembra 9 Nono Cantón Quito Santa Martha Dudoso

45 Hembra 10 Machachi Cantón Mejía S/N, El Pedregal Negativo





50 Hembra 5 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Negativo

51 Hembra 8 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo POSITIVO








59 Hembra 8 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Dudoso











70 Hembra 4 Machachi Cantón Mejía S/N,Retiro Bajo Dudoso

71 Hembra 6 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Negativo


73 Hembra 7 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Dudoso

33










83 Macho 1,5 Aloag Cantón Mejía S/N, Musua Negativo

84 Hembra 7 Pintag Cantón Quito S/N, Chachil Negativo

85 Macho 3 Pintag Cantón Quito S/N, Chachil Negativo






91 Macho 1 Pintag Cantón Quito S/N, Chachil POSITIVO




95 Hembra 4 Pintag Cantón Quito El Capulí Negativo


97 Hembra 2 Pintag Cantón Quito El Capulí POSITIVO

98 Hembra 4 Pintag Cantón Quito El Capulí POSITIVO


100 Macho 3 Pintag Cantón Quito El Capulí POSITIVO

101 Macho 2 Pintag Cantón Quito El Capulí Negativo


103 Hembra 4 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Dudoso

104 Hembra 2 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo


106 Hembra 6 Pintag Cantón Quito Chaupisanta POSITIVO








34












125 Macho 2 Pintag Cantón Quito Chaupisanta Negativo

126 Hembra 2 Sangolquí Cantón Rumiñahui El Carmen Negativo

127 Hembra 3 Sangolquí Cantón Rumiñahui El Carmen POSITIVO



130 Hembra 3 P. V. Maldonado Cantón P. V. Maldonado San Fernando POSITIVO


132 Macho 3,5 P. V. Maldonado Cantón P. V. Maldonado San Fernando POSITIVO



135 Hembra 3,5 P. V. Maldonado Cantón P. V. Maldonado San Fernando POSITIVO

136 Hembra 3,5 P. V. Maldonado Cantón P. V. Maldonado San Fernando Dudoso



139 Hembra 1,5 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo

140 Hembra 4 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo

141 Macho 1,5 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo

142 Hembra 0,83 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo

143 Macho 1,25 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Dudoso








151 Hembra 7 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar POSITIVO


153 Hembra 6 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar POSITIVO

35

154 Macho 1 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo




158 Macho 1 Puerto Quito Cantón Puerto Quito S/N, Simón Bolivar Negativo


160 Hembra 7 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas POSITIVO


162 Hembra 6 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Negativo





167 Hembra 6 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Dudoso








175 Hembra 0,6 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Negativo

176 Hembra 0,75 Gualea Cantón Quito S/N, Las Tolas Dudoso

177 Hembra 4 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir POSITIVO

178 Hembra 6,5 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir POSITIVO

179 Hembra 7,5 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir Dudoso


181 Hembra 7,5 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir Negativo




185 Hembra 5 Nanegal Cantón Quito El Buen Vivir Negativo









36



196 Hembra 1,5 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo


198 Hembra 1,5 Pacto Cantón Quito Chontillas Dudoso



201 Hembra 1 Pacto Cantón Quito Chontillas Negativo


203 Hembra 1,5 Pacto Cantón Quito Chontillas POSITIVO














217 Hembra 4 Los Bancos Cantón San M. de B. Greenwood Dudoso

218 Hembra 4 Los Bancos Cantón San M. de B. Greenwood POSITIVO

219 Hembra 5 Sangolquí Cantón Rumiñahui Lote 04 Negativo

220 Hembra 4 Sangolquí Cantón Rumiñahui Lote 04 POSITIVO

221 Hembra 0,91 Sangolquí Cantón Rumiñahui Lote 04 Negativo

222 Hembra 4 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo



225 Hembra 7 Nono Cantón Quito La Esperanza POSITIVO


227 Hembra 4 Nono Cantón Quito La Esperanza POSITIVO







37

234 Macho 3 Nono Cantón Quito La Esperanza Negativo



237 Hembra 7 Nono Cantón Quito La Esperanza Dudoso






243 Hembra 3 Cangahua Cantón Cayambe Sushi Potrero Negativo


245 Hembra 6 Cangahua Cantón Cayambe Sushi Potrero POSITIVO

246 Hembra 2 Cangahua Cantón Cayambe Sushi Potrero POSITIVO



249 Hembra 4 Cangahua Cantón Cayambe Sushi Potrero Dudoso


251 Hembra 4 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Bajo Negativo

252 Hembra 3 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Bajo POSITIVO


254 Hembra 7 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Bajo POSITIVO


256 Hembra 10 Cangahua Cantón Cayambe S/N Pisambillla Negativo




260 Hembra 3 Cangahua Cantón Cayambe Larcachaca Negativo

261 Hembra 7 Cangahua Cantón Cayambe Larcachaca Negativo

262 Hembra 3 Cangahua Cantón Cayambe Larcachaca POSITIVO

263 Hembra 2 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Alto Negativo




267 Macho 5 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Alto Negativo

268 Macho 1 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Alto Negativo

269 Hembra 4 Olmedo Cantón Cayambe S/N, Turochico Alto POSITIVO

38

8.2 Resultados ELISA

39

8.3 Fotos

8.3.1 Kit ELISA.

8.3.2 Hoja de Trabajo.

40

8.3.2 Distribución de soluciones.

8.3.4 Incubación.

8.3.5 Equipo de lectura de placas.

41

8.3.6 Lectura de placas.