MEDIOS DE

CULTIVOS

CONTENIDO DEFINICIÓN CLASIFICACIÓN De acuerdo a su consistencia De acuerdo a su composición De acuerdo a su función Requisitos para la Preparación Procedimiento Preparación pruebas bioquímicas TSI CITRATO LIA SIM VIDEO

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y deben estar exentos de cualquier microorganismo contaminante.

Los medios de cultivo contienen como mínimo: carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras.

CLASIFICACIÓN De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden

clasificarse en:

Líquidos: Se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote. Se denominan caldos de cultivo y no tienen agar en su formulación.

Semisólidos: Contienen 0.5% de agar en su formulación. Se utilizan para estudiar la

movilidad de las bacterias (presencia o ausencia de flagelo).

Sólidos: Contienen de 1.5 a 2% de agar en su formulación. Estos medios inmovilizan a las células, permitiéndoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias.

De acuerdo a su composición, los medios de cultivo pueden clasificarse en:

Definidos: es aquél medio de cultivo del cual se conoce su composición exacta. Son muy utilizados en estudios fisiológicos. Los medios mínimos son medios definidos que únicamente le proporcionan al microorganismo los nutrientes necesarios para crecer, pero no para desarrollarse óptimamente.

Complejos: es aquél del cual no se conoce la composición exacta del medio. A menudo, los medios complejos emplean sangre, leche, extracto de levaduras, extracto de carne u otras sustancias muy nutritivas pero de las cuales se desconoce la composición química exacta. Estos medios son muy utilizados para cultivar bacterias desconocidas o bacterias de requerimientos nutricionales muy complejos

De acuerdo a su función, los medios de cultivo se clasifican como:

• Medios selectivos: Son aquéllos que poseen uno o más componentes añadidos, los

cuales inhibirán o prevendrán el crecimiento de ciertos tipos de especies debacterias y/o promoverán el crecimiento de las especies deseadas. Uno puede

ajustarlas condiciones físicas de un medio de cultivo tales como el pH, la temperatura, parahacerlo selectivo para los organismos de interés.

• Medios diferenciales: Permiten al investigador distinguir entre diferentes tipos de

bacterias con base en alguna característica observable en su patrón de crecimientoen el medio, ya sea por producción de algún pigmento o por cambios de color en elmedio debido a indicadores de pH, o por halos de degradación de algún componenteen el medio de cultivo.

• Medios de enriquecimiento: Contienen algún componente que permite elcrecimiento de cierto tipo específico de bacteria, pero no contienen sustanciasinhibidoras.

• Medios enriquecidos: Se emplean para cultivar microorganismos que requieren un

gran número de factores de crecimiento. Generalmente contienen extractosbiológicos poco usuales como sangre, suero en polvo, extracto de cerebro de res,yema de huevo, etc.

REQUISITOS PARA PREPARACION

Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus constituyentes básicos, o por simple rehidratación de productos asequibles

comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de los medios de

cultivo deshidratados porque, además de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles.

Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:

• Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedoresque suministren productos de calidad.• Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y fisicoquímicaadecuada.• Utilizar materiales de vidrio bien lavados y enjuagados con agua destilada o

desmineralizada.• Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización. Nuncase deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante.

PROCEDIMIENTO

1. Leer cuidadosamente las instrucciones de preparación del medio de cultivo asignado.

2. Pesar la cantidad exacta del medio deshidratado o las porciones correctas de cadauno de los ingredientes. (Cerrar inmediatamente el frasco de medio de cultivo).

3. Disolver la porción pesada de acuerdo con las indicaciones del fabricante.Si es necesario calentar se debe tener cuidado de no sobrecalentar.

4. Ajustar el pH final de cada lote de medio preparado, preferiblemente a temperatura ambiente (25°C). Para ello se debe tomar una alícuota de 50 mL, medir el pH y de ser

necesario ajustar al pH indicado utilizando HCl 0,1N o NaOH 0,1N. Luego hacer el ajuste de pH al resto del medio de cultivo utilizando la solución correspondiente pero 1 N.

5. Distribuir el medio de cultivo de acuerdo a las indicaciones señaladas por el profesor.

6. Identificar el lote de medio de cultivo preparado indicando su nombre, distribucióny fecha de preparación.

PREPARACIÓN DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS

TSI o KIA.Agar hierro triple azúcar.

Medio inclinado de color inicial rojo.Estado sólido.pH 7.3 + 0.2

Peptona de casina 10 g Peptonas de carne 10 g NaCl 5 g Lactosa 10 g Sacarosa 10 g Dextrosa 1 g Sulfato de hierro y amonio 0.2g Tiosulfato de sodio 0.2g Rojo de fenol 0.25g Agar 13 g

CITUtilización del citrato.

Medio inclinado de color verde.Estado sólido.pH 6.9 + 0.2

Fosfato dihidrogenado de amonio 1.00 g Fosfato dipotásico. 1.00 g NaCl 5.00 g Citrato de sodio 2.00 g MgSO4 0.20 g Agar 15.00 g Azul de bromofenol 0.08 g

LIALisina y arginina.

Medio inclinado de color violeta.Estado sólido.pH 6.7 + 0.2

Peptona de gelatina 5 g Extracto de levadura 3 g Dextrosa 1 g L-Lisina 10 g Citrato de hierro y amonio 0.5g Tiosulfato de sodio 0.04g Púrpura de bromofenol 0.02g Agar 13.5g

SIMSulfato, indol y movilidad.

Medio plano de color amarillo.Estado semisólido.

pH 7.3 + 0.2

Peptona de caseina 20 g Peptona de carne 6.1g Sulfato de hierro y amonio 0.2g Tiosulfato de sodio 0.2g Agar 3.5g

GRACIAS !!

!