10. medios de cultivo

7/26/2019 10. Medios de Cultivo

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MEDIOS DE CULTIVO


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1.- CULTIVO DE MICROORGANISM

Es el desarrollo activo de microorganismos en medios adecuados.El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las confsicas, qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarcontrolada.Toda clula viva requiere consumir nutrientes que le permitan realizprocesos metablicos necesarios para su supervivencia.

MEDIOS DE CULTIVOEs la mezcla adecuada de nutrientes que, permiten el crecimiento dmicroorganismos.Es un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes necesarios que en condiciones favorables de pH y temperatura, se produzca el

de microorganismos, clulas o plantas.


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2.- REQUERIMIENTOS QUIMICOEl medio de cultivo debe tener una composicin tal que provea almicroorganismo los nutrientes que le aporten energa y elementos para la sntesis de sus constituyentes celulares.

Los componentes qumicos de las clulas son: carbono, alrededorpeso seco, oxgeno (32%), nitrgeno (14%), fsforo (3%), azufre elementos traza como: Fe, K, Mg, Mn, Co, Mb, Cu y Zn.Una parte importante del K est unida al RNA de manera que susrequerimientos aumentan con los factores que influyen en el aumede las clulas, como la velocidad de crecimiento. El in K actua comy probablemente acta como catin en la estructura aninica de vacomponentes celulares. El in Mg es esencial para la estabilidad dribosomas y actua como cofactor en numerosas reacciones del meTanto el K como el Mg se incorporan a los medios en forma de sale

fosfato y sulfato.


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Disponib i l idad de los com ponentes

Aparte de su presencia en el medio de cultivo, los nutrientes debendisponibles para ser usados por la clula. (en forma asimilable).As, el C debe estar en forma de carbono orgnico para los heterotCO

2para los autotrofos, el N en forma de NH

4, de NO

3- o de NO

2- o

aminocidos; el P en forma de PO43-; el S como aminocidos sulfuraSO42-, etc.La disponibilidad de los iones metlicos es modificada por quelacimuchos constituyentes del medio y productos del metabolismo actaagentes complejantes o precipitantes, _por ejemplo aminocidos, hihidrxidos, y los aniones P04 y C03-2.

Con el objeto de controlar su concentracin y prevenir la precipitaciiones metlicos, puede ser necesario quelar el ion mediante algn aquelante como el EDTA. (OEA, 2006).


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Fuentes de Macronutrientes

Fuente de

carbono

- CO2- Compuestos

orgnicos

Carbohidratos, azcares,

protenas, aminocidos,

lpidos, cidos grasos,glicerol

Fuente de

nitrgeno

- Inorgnica

- Orgnica

NH4, NO3-, N2

Protenas, peptonas, aa,

bases pricas y

pirimdicas, ureaFuente de

fsforo

- Inorgnica

- Orgnica

Fosfatos

Esteres del cido fosfrico

Fuente de

azufre

- Inorgnica

- Orgnica

Sulfuros y sulfatos

Aminocidos sulfurados

vitaminas


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Requerimientos de Oxigeno

Segn los requerimientos de oxigeno, los microorganismos son:Aerobios

obligados: requieren oxgeno (21%). Ej. Bacillus, hongos,Acetobetc.microaeroflicos: requieren niveles menores (5-10%). Ej.AzospAnaerobiosobligados:no toleran O2, muere en su presencia. Ej. MethanobaClostridium.

facultativos: no requieren O2, pero el desarrollo es mejor con O2aerotolerantes: no son sensibles al oxgeno (crecen en ausenciapresencia de oxgeno de hasta 8%). Ej. Enterococcus faecalis.


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TIPOS DE MEDIOS

A.- Segn la naturaleza de su s con stitu yentes.

Definidos cuando su composicin qumica se conoce totalmente.laboratorio para trabajos de investigacin.Complejos No se conocen los componentes ni las cantidades expresentes, y estn compuestos por mezclas de extractos de matercomplejos (extracto de levadura, extracto de carne, etc.).


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.Tipos de medios

B.- Segn la cons istencia del medio .

Medios Liquidos, si no se aaden agentes

gelificantes. Son tiles para promover el crecimientocelular (Caldo de cultivo)Ejm. caldo lactosado para coliformes.Medios semislidos(agar al 0.7%) para poner demanifiesto la movilidad de la bacteriaSiembra con aguja, y se observa si la bacteriapresenta turbidez mvil en el tubo.Ejplo. Agar SIM. agarMIA, agar PCA.Medios slidos. si se aade un agente solidificanteno consumible por los microorganismos(normalmente agar).Se usan para obtener coloniasaisladas del m.o de inters.El crecimiento se observa en la superficie de placa

o pico de flauta. Agar al 1-2%


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c.- Segn el us o

Medios de laboratorio.Pueden ser medios definidos o complejos.

Se usan para:Desarrollo de m.o (reproduccin)Conservar m.oAislar m.o.

Medios industriales.

Generalmente son medios complejos y se desarrollan a partir de sindustriales como; melazas de caa o remolacha, suero de leche, liEtc.Se usan para:Produccin de biomasa.Produccin de metabolitos


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d.- Segn la fun cin .

Generales, Es un medio altamente enriquecido que permite el crecimietipo de microorganismos. Ejemplo: Agar nutritivo, caldo nutritivoSelectivos cuando favorecen el crecimiento de ciertos microorganismo

suprimen el de otros. Un medio selectivo puede usar un antibitico, comoampicilina, para permitir nicamente el crecimiento de las bacterias resis

Diferenciales. Capaz de distinguir dos m.o por su crecimiento diferencimismo, usando las propiedades metablicas de ambos en presencia de determinado nutriente y de un indicador que evidencia por ejemplo, un pentorno. (Agar LIA: Lisine iron agar (lisina hierro)

Selectivo-diferenciales cuando combinan las dos caractersticas anterejemplo, el agar de MacConkey para identificar Escherichia coli), y

Medios de enriquecimiento que permiten aislar un tipo determinado demicroorganismo a partir de una mezcla una poblacin mixta de gran tam

Agar sangre.


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MEDIOS DE LABORATORIO

Pueden ser sintticos o complejos, y sus constituyentes tienen lassiguientes caractersticas:

a. Fuentes de carbono

1.1. Carbohidratos.Monosacridos. Dextrosa. Presente en jugos de frutas. Hidrlisislactosa, sacarosa, almidn.Oligosacridos. Lactosa (suero de leche), Sacarosa. Dextrina.Polisacridos.Almidn. agar1.2. alcoholes.Glicerol. Etanol. Metanol1.3. Lpidos1.4. Hicrocarburos


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b. Fuentes de nitrgeno

Nitratos, Sales de amonioHidrolizados. Peptonas. Digeridos, extractos.1) Peptonas. Obtenidas por hidrlisis cida o enzimtica de fuentes

como carne, pescado, casena, gelatina, harina de soja, algodn, girRepresenta una fuente fcilmente asequible de nitrgeno y carbn,aminocidos y peptidos presentes en la peptona, son mas faciles deMediante ajuste de la relacin enzima-sustrato y variando tiempo deposible variar el tamao de la cadena de polipptidos.2) Extracto.Se obtiene por extraccin acuosa y concentracin postfuente rica en nutrientes: Extracto de carne, extracto de levadura (obmediante autlisis o plasmlisis de la levadura, es bsicamente una aminocidos, pptidos, vitaminas solubles en H2O y carbohidratos), 4) "Cornsteep. Agua de maceracin de la industria del maz.


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c. Micronutrientes

Son activadores enzimticos. Fe, Cu, Zn, Mn, Mo, Co, B.Sales: NaCl, KH2PO4, NH4(SO4), MnSO4, ZnSO4, CaCl2.Macronutrientes. En cantidades de gr/l. C, O2, H2, N2, P, S, K, Na,

Micronutrientes.oligoelementos,en mg/l o g/lCon respecto a los micronutrientes se distinguen 2 categoras:a) Los que son frecuentemente esenciales para el crecimiento comFe, Co, Cu y Zn yb) los que son raramente esenciales como B, Na, Al, Si, Cl, V, Cr, NMo, Sn, I.


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d. SuplementosCompuestos que inhiben o favorecen el crecimiento de algunos microorg

d.1. inhibidores.Antibiticos: penicilina, estreptomicina, cloranfenicol. Ejm. Agar sabora

(Contiene cloranfenicol).Fungicidas: fungizona, amphotericina (mohos y levaduras).Metales pesados: Agar sulfito-bismuto. Contiene Bi y colorante verde brinhiben a bacterias Gram (+) y mayora de Gram (-), excepto a salmonellaCompuestos orgnicos inhibidores: Agar salmonella-shigella. Contienconcentraciones de sales biliares y citrato de sodio que inhibe a las Grammayora de gram(-) incluyendo coliformes, excepto salmonella yshigella.

D.2.- factores de crecimiento.Compuestos orgnicos que se suministran en bajas concentraciones.No son sintetizados por los m.o que se desea favorecer, pero son necesdesarrollo. Vitaminas, aminocidos, cidos grasos.Los aminocidos y vitaminas del grupo B como tiamina, riboflavina, cidoniacina, etc., que representan para muchas bacterias y levaduras factoreen los medios sin los cuales no se produce crecimiento celular. La mayor vitaminas son constituyentes de co-enzimas.

Suplementos


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.Suplementosd.3. Colorantes e indicadores.Indicadores de la reaccin del medio.Verde malaquita:pH muy cido: amarillopH =2 : verdepH = 11.5: azlpH = 14: incoloroRojo-fenol.pH = 7.8: azlpH =7.8: prpura.pH = 7.4: rojo

oH = 7.0: naranjapH =6.5: amarillo.Para indicar produccin de acidos;lctico, ctrico, actico.Rojo neutroRango de pH: 6.8-8.0 (rojo a amarillo)Azul de bromotimolRango de pH: 6-7.6 (amarillo a azul).

Indicadores del potencial dreduccin.

Azul de metileno: Medio oxidaMedio reductor: incoloro

Indicadores selectivos.Verde malaquita, cristal violetbacterias gram(+)Colorantes bsicos: inhiben bEjplo. Agar Mc-Conkey. Conti

biliares y cristal violeta que ingram(+)Agar EMB. Para determinacicoliformes fecales. Contiene de metileno que inhiben gramdesarrollo de enterobacterias


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Particularidades de los medios de laboratoPara la preparacin de medios solidos, el agar es el agente solidificempleado. Se lica completamente al hervir el agua y se solidifica aCon algunas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de la

y no es atacado las que crecen en l.La fuente de nitrgeno: la forma ms extendida de aportar N, es utipeptona.En el caso de medios sintticos hay concentraciones definidas comAgar McConkey . 50 g/lAgar nutritivo . 20 g/lAgar LIA . 32 g/lAgar TSI . 65 g/lAgar EMB . 36 g/l

Ej l M di


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Ejemplos: Medios

General: Agar nutritivo

El agar nutritivo es un medio de cultivousado como rutina para todo tipo de

bacteria.El agar nutritivo contiene normalmente(p/v):0,5 % de peptona;0,3 % de extracto de carne/extracto delevadura;1,5 % de agar;

0,5 % de cloruro de sodio;agua destilada;pH casi neutro (6,8) a 25 C.El caldo nutritivo se hace exactamenteigual, excepto por la omisin del agar.

Medio para la dete

aislamiento de hongComposicin por Digesto pancreticcasena- 5gPeptona de tejido dgDextrosa -40gAgar- 15gcloranfenicol

Selectivo: Agar Sab

Ej l di l ti dif i l


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Ejplo: medio selectivo-diferencialAgar Mac Conkey.Este medio es selectivo contra Gram (+) debido al violeta cristal y a muchdebido a las sales biliares (agentes tensoactivos que desorganizan muchasexternas).

En cambio las enterobacterias, estn adaptadas a soportar las sales biliarnatural (el intestino de vertebrados superiores) y pueden crecer en este mAccin diferencial. Los microorganismos capaces de fermentar lactosa procada de pH, junto con una absorcin del colorante, apareciendo en la colo(del rojo neutro), las colonias de m.o que no fermentan lactosa permanec


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Agar Eosina Azul de Metileno (EMB)

La presencia de los colorantes eosina y azul demetileno inhibe el crecimiento de la flora Grampositiva; y permiten diferenciar a los Gramnegativos e indican cuales fermentan la lactosa.Las bacterias fermentadores de lactosa dancolonias de un color violeta.Las colonias de Escherichia colise distinguen porser regulares con un brillo metlico verde.

Las colonias de Klebsiellason siempre mucosas,grandes y ligeramente rosadas.Los no fermentadores de lactosa dan coloniasincoloras sin producir mayor modificacin en elmedio a simple vista


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Agar KIA: Kliger Iron AgarEs un medio que permite evidenciar la habilidad delos bacilos Gram negativos, para fermentar glucosa olactosa, as como su habilidad de producir hidrgenosulfurado.

La peptona de carne y la triptena, aportan losnutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano.La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbonofermentables. El tiosulfato de sodio es el sustratousado para la produccin de cido sulfhdrico, elcitrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+.El rojo de fenol es el indicador de pH.Por fermentacin de azcares, se producen cidos,que se detectan por medio del indicador rojo defenol, el cual vira al color amarillo en medio cido.El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro dehidrgeno el que reacciona luego con una sal dehierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de

color negro.


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PREPARACION DE MEDIOSSe pueden preparar:A partir de sus constituyentes bsicos, o por rehidratacin de med

PASOS:

1. Rehidratacin: Usar agua destilada.Se aade el agar al agua a T ambiente, se deja embeber unos miagita y se calienta a 98-100 C hasta disolucin total.En medios con azcares un excesivo calentamiento lleva a carameLos medios agarizados con pH


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Preparacin3- Esterilizacin (121 C, 15 min.)El tiempo de esterilizacin (tiempo a 120 C) requerido, para tubosde 18 x 50 mm es de 12-14 min y para tubos de 38 x 200 mm, de 1Erlenmeyers de 2 L. de 30-35 min, para 125 ml es de 12-14 min.

Un frasco pyrex cuadrado de 1000 ml requiere 30-35 min y una bosuero de 9000 ml 50-55 min.

Medios con componentes grasos, enfriar en agitacin para no formLos medios con azcares se esterilizan mejor por debajo de 118 30), para evitar caramelizacin.

4. Almacenamiento de medios deshidratadosAlmacenados bajo condiciones ptimas tienen caducidad de 3 a 5Una vez abierto el bote no usar mas de 6 meses.Deben permanecer en armario cerrado, sin luz, humedad o calor (estufas).Conviene lugar fresco, pero no refrigerador, porque condensara aUna vez preparado y esterilizado se debe almacenar entre 2 y 8

que el medio requiera alguna condicin diferente.


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MEDIOS INDUSTRIALESSe usan siempre medios complejos.Es conveniente considerar tres fases:diseo

formulacin yoptimizacin de los mismos.


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a. Diseo del medio

Consiste en la eleccin de los componentes necesarios para logracrecimiento y la formacin de productos deseados.

Se debe tener en cuenta; los requerimientos nutricionales delmicroorganismo y algunos especficos del proceso, la disponibilidalos componentes y consideraciones sobre las materias primas. (OE2006).Tener en cuenta:Requerimientos nutricionales del m.o.

Aspectos especficos del procesoDisponibilidad de las materias primas.

M t i i f d t l


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Mater ias pr im as fund amentalesLas materias primas ms importantes son: fuentes de carbono y de nitrLas fuentes de carbono pueden ser: 1) Hidratos de carbono como glucdextrosa, sacarosa, lactosa, almidn, dextrina; 2) Alcoholes como el glicey 3) Hidrocarburos como hexadecano, octadecano y otros.En una fermentacin uno de los mayores costos es la fuente de carbonorepresenta el 50% de la economa del proceso. Para obtener un medio dindustrial, se requiere que los componentes del mismo sean econmicosrendimientos de productos se incrementen. (Montoya et al, 1999).Las fuentes de nitrgeno de naturaleza inorgnica ms comun son el las sales de amonio. Las orgnicas pueden ser: peptonas o extractos. (O

Se pueden emplear algunos subproductos de procesos industriales comnutrientes para el crecimiento microbiano, buscando disminuir costos de Asi para la produccin de renina a partir de Mucor miehei, se utiliza subpcomo; el suero de leche, debido a su alto contenido de lactosa y diversaslo hacen una buena fuente de carbono y nitrgeno; la melaza, constituyerica de carbono; la cscara de papa y la harina de maz, son posibles fuenitrgeno. (Osorio et al 2009)

-Requerimientos especficos


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-Requerimientos especficos.

En algunos procesos existe la necesidad de efectuar otros agregadrequerimientos especficos del proceso considerado.Un ejemplo es el caso de precursores que constituyen la base de uque debe ser sintetizada por el microorganismo, como el cido fenil

la penicilina.El agregado de sulfato, en el proceso de fermentacin alcohlica, qla formacin de glicerol, es otro ejemplo de un requerimiento especEl diseo correcto tiene que ver con las caractersticas bioqumicasevolucin de los parmetros de cada proceso. Por ejemplo, un proccaracterizado por un descenso continuo de pH, debido al uso de unamonio como fuente de nitrgeno, obliga a considerar en su diseoagregado que no corresponda a una exigencia nutricional, como escontrol de pH del mismo.Este puede efectuarse por agregados al medio de agentes "buffer"mezclas de fosfatos o de carbonato de calcio o con agregados perisoluciones alcalinas.La produccin de cido ctrico debe considerar la influencia negatel proceso tiene un exceso de hierro en su composicin.


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b. FormulacinLa formulacin consiste en establecer las concentraciones de cadacomponente.Una primera aproximacin con respecto a las cantidades requeridacomponente, lo da la composicin de biomasa del microorganismo empleado.Una composicin elemental y tpica de la biomasa es (en % de pesCarbono, 46-48; Nitrgeno, 7-12; Fsforo, 1-3; Azufre, 0.5-1.0; Mg, (OEA, 2006)

c Optimi acin


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c. Optimizacin

Pueden ocurrir situaciones en las cuales sea imperativo la optimizmedios de cultivo, como:1) No existencia de informacin respecto a coeficientes de rendimmacro y micro elementos.2) Existencia de limitaciones nutricionales ocultas, (microelementode crecimiento).3) Ensayo de sustancias estimulantes, activadoras e inhibidoras dcrecimiento y formacin del producto.4) Empleo de fuentes nutricionales no convencionales.

La metodologa ms elemental consiste en realizar experimentos,cuales se vara la concentracin del componente a ensayar manteconstante las concentraciones de los dems ingredientes. (OEA, 2

d Esterilizacin


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d. EsterilizacinSe hace para evitar el desarrollo de microorganismos competidorecultivo del microorganismo deseado. (OEA, 2006)Adems de esterilizar los medios, se debe conservar al mximo sunutriente.En medios definidos puede haber prdida importante de Mg, K, amfosfatos por precipitacin de sales poco solubles como MgNH4PO4, MgNaPO4.Autoclavar, sales de Ca y Mg aparte de PO4.Los aminocidos(triptofano, glutamina, asparragina) y factores de c

(tiamina, riboflavina y piridoxina) son muy lbiles al calor.Es aconsejable disolverlas separadamente en pequeos volmeneluego esterilizarlas por filtracin.


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Caso aplicativo: Cultivo de Levadura pa

Antes se usaba la levadura de cerveza.Primera planta de produccin. Holanda, 1780 (proceso Dutch)

anaerobiocon rendimiento del 4 al 6% con respecto a la materia usada.Mejor el rendimiento, al 12-22% (proceso Vienna) con proceso1846.Con aireacin (1879), se aumenta rendimiento, a 50-60% del teCon melazas de remolacha o de caa pueden alcanzarse rendim

cercanos al 100% del terico.

Requerimientos nutricionales


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Requerimientos nutricionales

Fuentes de carbono y energa: Glucosa y sacarosa.El N como: NH4, urea, sales de amonio, mezclas de aminocidnitrito no pueden ser asimilados).Macroelementos indispensables: P(cido fosfrico), Mg como MgS. cerevisiae requiere 200 ug de Zn, 75 ug de Fe y 12-15 ug de Cmedio para crecimiento ptimo.Requerimientos de la biotina: 100 ug de biotina por 100 g de azcEl cido pantotnico, que es un componente de la coenzima A, e

requerido por muchas especies.La tiamina aumenta la actividad fermentativa de la levadura.El Mg, S, y Zn se agregan como sulfatosEl MgSO4se suele incorporar a razn de 1 g de la sal heptahidracomo 10 mg del sulfato tetrahidratado por Kg de melaza.

Composicin de la melaza de caa y remolacha


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Medio de produccin


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p

La materia prima elemental es la melaza de remolacha o de caa oconjunto. (Sacarosa es el azcar predominante en ambas)Los orgnicos no azcares en la melaza de caa son: gomas solu

cidos orgnicos sobre todo acontico y compuestos nitrogenados.En melaza de remolacha los orgnicos no azcares son: betana, glutmico y algunos cidos orgnicos como lctico, mlico, actico En las cenizas predomina en ambas melazas el K.Mayor % de fsforo y biotina en melaza de caa que en remolachaEl contenido de pantotenato de Ca, y compuestos nitrogenados asmayor en la remolacha.

Los fabricantes prefieren, si tienen disponibilidad, utilizar mezclas

Las melazas se utilizan generalmente diludas al 50%.Componentes extraos (que pueden afectar el rendimiento): algunpesticidas, como lindane, aldrin, heptaclor, dieldrin, etc.Si se utiliza melaza de remolacha es indispensable agregar biotina

MEDIOS Y METODOS PARA CULTIVOS ANA


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MEDIOS Y METODOS PARA CULTIVOS ANA

La mayora de bacterias anaerobiasrequieren para su crecimiento vitamina Ky hemina.

Sistemas de incubacin enanaerobiosis.Los ms comunes son las cmaras,cajas y bolsas de anaerobiosis.Eliminacion del oxigeno: se puedeconseguir por:- Se inyecta CO2y nitrgeno a la estufa,

pues muchos anaerobios necesitancantidades pequeas de CO2para crecermejor.- Reacciones de formacin de H2, o porremocin mecnica del oxigeno.

Sistema anaerobios de

Sistemas de anaerobiosis.


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El oxigeno residual se eliminapromoviendo su reaccin con elHidrgeno, con catalizador,Paladio. La reaccion da agua.Se coloca un sobre conteniendosustancias qumicas que enpresencia de agua liberan H2 yCO2(contiene borohidrato sdico,bicarbonato sdico y cidoctrico).NaBH4+ 2H2O NaBO2+ 4H2

Se monitorea el ambienteanaerobio con papel indicador deazul de metileno o de resarzurina.El azul de metileno pierde coloren presencia de oxigeno.

Sistemas microareofilos.


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Los microaerfilos necesitan ciertaconcentracin de CO2y O2en laatmsfera.Esto se consigue, utilizando sobres

generadores comerciales paraatmsferas microaerfilas.Existen medios microaerobioscomo, MICROAEROBAC, quecuando se activa produce dentro dela jarra de 2,5 l una atmsfera de 5a 15% de O

2

y de 5 a 10% de CO2

.Tambin se puede crear esaatmosfera con el encendido de unavela.

CONSERVACION DE CULTIVOS MICROBIA


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CONSERVACION DE CULTIVOS MICROBIA

Mtod o de co nservac in a largo plazo- Conservacin por congelacin(conservacin de losmicroorganismos a temperaturas inferiores a cero gradoscentgrados. Se basa en la paralizacin del metabolismocelular por la disminucin del agua disponible. Se usancrioprotectores: Minimizar daos durante la congelacin.Limitar la formacin de hielo (tasa de congelacin). Glicerol,Dimetilsulfxido (DMSO), cido glutmico, Glucosa,Sacarosa , Meso inositol , Lactosa, Leche Descremada)- Conservacin por liofilizacin (Es un mtodo deconservacin a largo plazo)Mtodos A lternat ivos- Conservacin por transferencia peridica (Se debetransferir peridicamente, ya que los nutrientes seconsumen, y el agar se seca. (repicado) El proceso esrepetido a intervalos que garanticen la obtencin de uncultivo fresco antes de la prdida del viejo.)

- Conservacin por suspensin en agua destilada

MEDIOS DE CULTIVO DE CLUL


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MEDIOS DE CULTIVO DE CLULANIMALES

El suero fetal de ternera es la mayora de las veces aplicable.El suero contiene diversos factores esenciales para el metabolismoproliferacin celular, incluyendo factores de iniciacin, protenas ligafactores de unin y compuestos de peso molecular bajo.

Otro, es conocido como BME (medio basal de Eagle), ampliamenteel cultivo de clulas de mamferos.

Las clulas se cultivan y mantienen a una apropiada temperatura yde gases (habitualmente, 37C, 5% CO2y 95% O2) en un incubadoAdems pueden variar en pH, concentracin de glucosa, factores dcrecimiento y la presencia de otros componentes nutritivos.

MEDIOS DE CULTIVO PARA CLULAS


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MEDIOS DE CULTIVO PARA CLULASVEGETALES

La biotecnologa vegetal tiende a convertirse en una estrategia tecnolgicdenominada agricultura global, para mejorar la produccion de alimentos. (C2005).La reproduccin asexual de plantas por cultivo de tejidos es posible graciageneral, varias clulas de un individuo vegetal poseen la capacidad de credesarrollar un nuevo individuo completo, sin necesidad de fusin de clulaEsta capacidad es caracterstica de un grupo de clulas vegetales conocidclulas meristemticas.Las clulas vegetales crecidas en condiciones aspticas sobre medios deadicionados con hormonas vegetales, pueden dividirse dando una desdifercelular acompaada de crecimiento tumoral, que da lugar a una masa de cindiferenciadas denominada callo, la cual bajo las condiciones adecuadasgenerar rganos o embriones somticos. (Sagretin, 2010)

El cultivo in vitro consiste en tomar una porcin de una planta (a la


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El cultivo in vitro consiste en tomar una porcin de una planta (a ladenominar explanto, como por ej. el pice, una hoja o segmento dsegmento de tallo, meristema, embrin, nudo, semilla, antera, etc.) en un medio nutritivo estril (usualmente gelificado, semislido) donregenerarn una o muchas plantas.

La formulacin del medio cambia segn se quiera obtener un tejiddesdiferenciado (callo), crecer yemas y races, u obtener embrionepara producir semillas artificiales.

Las fuentes de carbono ms utilizadas son: sacarosa, glucosa, frmaltosa y lactosa.La fuente ms importante de nitrgeno, son los nitratos, a veces

suplementa con sales amnicas.Algunas especies de clulas necesitan nitrgeno orgnico en formaminocidos.En la mayora de los cultivos de clulas vegetales son necesarias vegetales: auxinas, y citoquininas. (Calva y Perez, 2005).


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Figura 7. Cu

y rganos vpartir de unpueden estde clulas pcompuestopara obtenesomticos yartificiales, aplicacione

Adaptado dBiotecnolo2006

REFERENCIAS


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REFERENCIASSegretn Mara Eugenia. Los cultivos celulares y sus aplicaciones II (cultclulas vegetales). INGEBI-CONICET - Dpto. FBMyC, FCEyN-UBA. Bue

Argentina. 2010.Calva Calva Graciano y Prez Vargas Josefina. Cultivo de clulas y tejidfuente de alimentos para el futuro. Revista Digital Universitaria UNAM, 2Volumen 6 Nmero 11 ISSN: 1067-6079.Calva C., Rios L. (1999). Cultivo de callos y acumulacin de metabolitosEn: Rodrguez V. R., Calva C. G., Ramos R. E. G., Salazar M. A. (Eds.) Aaplicados de la biotecnologa. pp 267-301.Montoya D, Sierra J, Silva E , Buitrago G, Ramos J. Optimizacin de un cultivo industrial para la fermentacin acetobutilica (abe). Revista colombbiotecnologa . 1999.Muoz de Malajovich, M. A. Biotecnologa. Editorial Universidad Nacional de QOsorio Adriana, Gmez Natalia, Snchez Claudia. Evaluacin de diferencarbono y de nitrgeno para la produccin de renina a partir del moho MuRev. Fac. Ing. Univ. Antioquia N.45 pp. 17-26. Septiembre, 2008.OEA. Organizacin de los Estados Americanos . Microbiologia IndustriaDepartamento de Educacin, Cultura, Ciencia y Tecnologa. 1889 F StreeWashington, D.C. 20006, USA. 2006.

10. medios de cultivo

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