ANEXOS

A

C

Anexo 1.- Preparación del método de Lowry. A. Material e instrumental para la preparación del método Lowry. B. Soluciones de 1% de sulfato de cobre pentahidratado y 2% de tartrato de sódico-potásico. C. Reactivo comercial de Folin-Ciocalteau es diluido a una proporción de ¼

Anexo 2.- Preparación de la solución estándar. A. Solución comercial de albúmina de suero bovino se encuentra en una concentración de 200 mg/ml. B. Dilución a 2 mg/ml para un volumen de 2,5 ml de albumina de suero bovino. Para ello se utilizo la formula:

C1 x V1 = C2 x V2

A B

Cada una de las soluciones alcanzaron un volumen de 6,5 ml, estas soluciones se utilizaran para establecer nuestra curva de calibración y para analizar nuestra muestra problema

Anexo 3.- Dilución de la muestra Problema. A. Solución de 10mg de veneno liofilizado en 1ml de buffer acetato de amonio. B. Solución madre de buffer acetato de amonio. Para la preparación del buffer acetato de amonio se utilizo la formula de Henderson y Hasselbach

pH = Pka +Log (base)/(acido)

A B

Anexo 4.- Preparación de las soluciones de trabajo. Cada una de las soluciones alcanzaron un volumen de 6,5 ml, estas soluciones se utilizaran para establecer nuestra curva de calibración y para analizar nuestra muestra problema.

Ecuación de la recta de la curva de calibración (Y=mx +b)

Absorbancia = Y

Concentración de proteínas= X

La ordenada al origen es (0)=b

Pendiente =4,9399

Y=4.9399 X + 0

Anexo 5.- Obtención de un espectro de absorción. Se observaron los valores de absorbancias y se identifico la longitud de onda con mayor valor de absorbancia (λ máximo).

Anexo 6.- Obtención de la curva de calibración estándar. Una vez obtenida la longitud de onda a la cual se trabajó se procedió a medir las absorbancias de los tubos (B, 1, 2, 3, 4,5). Finalmente el programa del equipo te muestra una grafica en el eje Y (las absorbancias) y en el eje X (las concentraciones)

Ecuación de la recta de la regresión lineal (Y=mx +b)

Absorbancia = Y

Concentración del veneno= X

La ordenada al origen es (0,211)=b

Pendiente =1,955

Y= 1,955X + 0,211

Anexo 7.- Medición de las muestra problema. Con la misma longitud de onda que se trabajó para realizar la curva de calibración, se realiza las mediciones de los tubos (6, 7, 8,9) de manera individual en el equipo espectrofotómetro (Thermo Scientific Evolution 300 UV-Vis)

Anexo 8.- Análisis Estadístico. Con la ayuda del Excel y con los resultados de Absorbancia y concentración de veneno se realizo la curva de regresión lineal.