control de calidad analisis inhmunohematologicos
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INMUNOHEMATOLOGIATRANSCRIPT
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176 Franco • Calidad de los análisis inmunohematológicos
Temas de actualidad / Current topics
El control de la calidadde los análisis
inmunohematológicosen la Región
de las Américas
Elena Franco1
1 Centro de Transfusión de la Comunidad Valenciana, Valencia, Es-paña. Dirección postal: Avda. del Cid, 65 acc. Valencia 46014, España.Fax: +34 96 3868109. Correo electrónico: [email protected]
Si bien conseguir la excelencia es meta de todas lasespecialidades médicas, la medicina transfusionalha sido una de las que más medidas ha adoptado en los últimos años para lograrla. Ello se debe a queesta especialidad se sitúa en el punto de mira de lasociedad en general y a que las transfusiones san-guíneas siguen presentando riesgos, aunque seanmínimos, para la salud de los receptores. Desde que comenzó la pandemia de sida a mediados delos años ochenta, muchos aspectos de la práctica de la especialidad han sido sometidos a un controlexhaustivo.
La creciente demanda de calidad y seguridadpor parte de los pacientes y de la sociedad en ge-neral en relación con el tratamiento transfusional ha impulsado esfuerzos continuos para mejorar lasprácticas y garantizar que la transfusión cumplacon determinados objetivos. Tales esfuerzos hanconducido a notables logros, ya que se han introdu-cido medidas de seguridad más rigurosas en cadapaso intermedio desde la selección del donantehasta el seguimiento postransfusional del paciente.
La mayoría de los países han adoptado leyesaplicables a la terapia transfusional, tanto en susaspectos organizativos como en los eminentementetécnicos, para garantizar la seguridad de la transfu-sión sanguínea. Por esta razón, se está superando el concepto de control de calidad y actualmente sehabla de la garantía de la calidad, habida cuenta dela necesidad de ejercer un estricto control sobre todoel sistema y de establecer y observar protocolos paratodos los pasos, desde la obtención de la sangre deldonante hasta su administración al receptor.
La correcta tipificación de las muestras san-guíneas y la detección de anticuerpos irregulares entodas las donaciones de sangre constituyen unaparte crucial del proceso de garantizar que la trans-fusión cumpla con sus objetivos terapéuticos sinprovocar efectos indeseados, algunos de los cualespodrían poner en riesgo la vida del paciente. Por lotanto, la obtención de resultados correctos en lastécnicas inmunohematológicas aplicadas de formageneralizada para constatar la perfecta caracteriza-ción de las unidades de sangre o de sus componen-tes es fundamental para garantizar una buena asis-tencia transfusional.
Son varios los aspectos que deben controlarsepara conseguir resultados correctos. En esta bús-queda de la calidad desempeñan un papel determi-nante factores tales como los reactivos utilizados, la
Palabras clave: control de calidad, inmunohemato-logía, transfusión sanguínea.
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precisión de los instrumentos y equipos, las técni-cas utilizadas y, desde luego, la formación y des-treza del personal que las ejecuta. Al mismo tiempo,es preciso contar con una organización que impida,o al menos reduzca a un mínimo, el error humanoen cualquiera de los puntos de la cadena transfu-sional una vez que estén reguladas mediante unprotocolo todas las medidas que inciden en la cali-dad, desde la procedencia de las muestras hasta laidentificación correcta del receptor, pasando por latranscripción de los resultados analíticos a los re-gistros, bien sean electrónicos o manuales. En esteartículo se examinan más ampliamente todos estosaspectos.
Cada vez son más numerosas las organizacio-nes e instituciones que se adhieren de forma volun-taria a programas de control de calidad externospara comprobar de forma periódica la fiabilidad delos resultados de laboratorio que obtienen, hechoque demuestra sin duda su interés y compromisocon la calidad asistencial. La Organización Paname-ricana de la Salud (OPS), consciente de esta nece-sidad, apoya desde 1996 el Programa de Control de Calidad Externo en Inmunohematología para la Región de las Américas, que está proporcionandomuy buenos resultados.
MECANISMOS PARA ELIMINAR ERRORES
Cometer errores es parte consustancial de lacondición humana, pero a su vez es algo que en lapráctica médica no se puede permitir. Por estarazón, la organización y los métodos de trabajo decualquier centro deben tener como objetivo estable-cer barreras contra posibles fuentes de error. Todaorganización debe recoger y analizar los errores ob-servados, así como los que estuvieron a punto decometerse, porque de su estudio deben nacer lasmedidas encaminadas a evitar que se repitan. Lascausas de error más frecuentes en un laboratorio deinmunohematología suelen ser de origen organiza-tivo o técnico:
Errores de origen organizativo
Identificación incorrecta de las muestras. Puedeno estar indicado el origen del tubo de sangre pilotoo el de la unidad de sangre correspondiente, o bienel del tubo piloto y la identidad del paciente al quese le debe transfundir la sangre. Para evitar erroresde identificación se debe usar de modo rutinario unsistema numérico que debe ser bien conocido portodos los miembros de la organización encargadosde ejecutar tareas transfusionales, sea o no informa-
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tizado el sistema. En el caso de las unidades de san-gre, siempre se deberá proceder a analizar los gru-pos ABO y D por duplicado, una vez con la sangredel tubo que acompaña a la bolsa de sangre y otracon el tubo piloto, anotando cuidadosamente la iden-tidad de ambos.
Errores en la transcripción de los resultados a losregistros, sean estos informáticos o manuales. Enel caso de registros informáticos se evitan los erro-res en los procesos que se realizan automáticamentemediante conexiones en línea. Cuando la transcrip-ción es manual, el técnico que hace el análisis ytranscribe los resultados está obligado a firmar y sufirma sirve como comprobante. Aunque la existen-cia de protocolos obliga a todos los técnicos a reali-zar las pruebas de una misma manera, no se reco-mienda que una persona inicie una técnica y queotra la termine y registre el resultado.
Errores de origen técnico
Los reactivos. Los problemas pueden deberse, porejemplo, a la caducidad de los reactivos o a su altera-ción por almacenamiento en condiciones poco idó-neas. Es necesario realizar un control de la reactividadde los mismos con una o más muestras conocidas.
Las muestras. La calidad de las muestras puedeverse afectada por las técnicas de extracción y deconservación.
El equipo. Los instrumentos empleados pueden serdefectuosos.
Los métodos. Pueden surgir errores debido, entreotras cosas, a prácticas inadecuadas o a no seguir lasinstrucciones del fabricante de los reactivos usados.
El uso sistemático de controles conocidos enconexión con todas las técnicas aplicadas alertarásobre cualquier problema técnico. Además, es con-veniente recordar aquí la enorme importancia dedeterminar siempre el grupo hemático y sérico alque pertenece toda muestra como mecanismo paragarantizar la correcta identificación del grupo ABO.
LA CALIDAD DE LOS REACTIVOS
Todas los centros adquieren los reactivos quevan a utilizar después de comprobar que cumplensus expectativas técnicas. Ello no significa, no obs-tante, que no deban someterse a controles sistemá-ticos, que deben abarcar:
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178 Franco • Calidad de los análisis inmunohematológicos
1. El registro, en el momento de la recepción de losreactivos, de que las condiciones de embalaje,temperatura y caducidad son adecuadas.
2. La evaluación de cada lote en el laboratorio antesde usarlo (cuadros 1 a 6).
3. El control de las condiciones de almacenamiento.4. El cumplimiento de las instrucciones del fabri-
cante para garantizar resultados correctos.5. El análisis diario de controles internos apropia-
dos para garantizar la corrección y repetibilidadde los resultados.
Cualquier error o problema debe ser conve-nientemente registrado y comunicado.
LA CALIDAD DE LAS TÉCNICAS
Todos los procedimientos de trabajo debenestar escritos con claridad y concisión y, una vezque estén aprobados, deberán colocarse en un lugar
de fácil acceso para que el personal pueda consul-tarlos. Nadie puede practicar las técnicas de unaforma distinta de la aprobada y no hay que olvidarque la mayoría de los errores que se cometen sepueden evitar si se siguen las normas. Es preciso:
1. Identificar y ordenar las muestras correctamente.2. Controlar los reactivos.3. Estudiar controles positivos y negativos junto con
las muestras problemáticas y constatar que se obtie-nen los resultados esperados (cuadros 7 y 8).
4. Establecer un sistema a prueba de errores para elregistro de los resultados.
LA CALIDAD DE LOS INSTRUMENTOS
El equipo que contiene un laboratorio debeser el adecuado para el uso al que está destinado.Para garantizar su correcto funcionamiento es nece-sario cumplir las siguientes normas:
CUADRO 1. Control de la calidad de los reactivos. Solución de baja fuerza iónica (LISS)
Parámetros quese deben controlar Requisitos cualitativos Frecuencia de los controles
Apariencia
pH
Conductividad
Ausencia de turbidez o partículas detectables por examen visual
6,7 (6,5 a 7)
3,7 mS/cm (3,44 a 3,75) a 23 °C
CUADRO 2. Control de la calidad de los reactivos. Hematíes
Parámetros quese deben controlar Requisitos cualitativos Frecuencia de los controles
Apariencia
Reactividad yespecificidad
Ausencia de turbidez o hemólisis en el sobrenadante por examenvisual
Reacciones claras con sueros seleccionados frente a los antígenoseritrocitarios
Diaria
Cada nuevo lote, el primeroy último día de vida
CUADRO 3. Control de la calidad. Proteasas
Parámetros quese deben controlar Requisitos cualitativos Frecuencia de los controles
Reactividad
Potencia
Ausencia de aglutinación o hemólisis empleando un suero AB inerteAglutinación de los hematíes sensibilizados con un anticuerpo anti-D
de tipo IgG a título débil
Un suero de tipo IgG, preferiblemente anti-D, estandarizado en un título de 1/64 a 1/128 debe dar esta misma titulación con losdiferentes lotes de la enzima
Cada nuevo lote
Cada nuevo lote
Diaria
Cada nuevo lote
Cada nuevo lote
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1. La empresa suministradora le proporcionará al técnico la formación necesaria para que sepausarlo.
2. Para cada aparato habrá una ficha donde se iránanotando todos los incidentes, reparaciones yoperaciones de mantenimiento. Se estableceráuna vida media después de la cual el aparato seconsiderará amortizado.
3. En el momento de adquirir un aparato y despuésde hacerle reparaciones importantes, es necesa-
rio someterlo a un control o una calibración (cen-trífugas, incubadoras de temperatura, lavadorade Coombs, etc.) (cuadro 9).
4. Es preciso planificar un mantenimiento perió-dico interno, realizado dentro del propio labora-torio, que comprenderá actividades de limpiezay de índole menor, así como un control externopara aquellos aparatos que se consideran críticospara garantizar la validez de los resultados. Elcontrol externo será realizado preferentemente
CUADRO 4. Control de calidad de los reactivos. Sueros ABO
Parámetros que se deben controlar Requisitos cualitativos Frecuencia de los controles
Apariencia
Reactividad y especificidad
Potencia
Ausencia de hemólisis, precipitación, partículas, o formación de gel de-tectables mediante examen visual
Ausencia de hemólisis inmune, formación de rouleaux o fenómeno deprozona
Reacciones claras con los hematíes portadores del antígenocorrespondiente
Ausencia de reacciones falsas
El suero no diluido debe producir una reacción de 3+ a 4+ en mediosalino con hematíes al 3% a temperatura ambiente. Su titulacióndebe ser de 1/128 para al anti-A, anti-B, y anti-AB con hematíes A1y B, y de 1/64 con hematíes A2 y A2B
Cada nuevo lote
Cada nuevo lote
Cada nuevo lote
CUADRO 5. Control de calidad de los reactivos. Sueros Rh
Parámetros que se deben controlar Requisitos cualitativos Frecuencia de los controles
Apariencia
Reactividad y especificidad
Potencia
Lo mismo que para los sueros ABOLo mismo que para los sueros ABO
El suero sin diluir debe dar una reacción de 3+ a 4+ en el test diseñadopara cada suero
Titulación de 1/16 para anti-D, anti-C, anti-E, anti-c, anti-e y anti-CDE,utilizando hematíes R1 r, R2 r, r' r, o r" r
DiariaDiaria
Cada nuevo lote
CUADRO 6. Control de calidad de los reactivos. Suero antiglobulina humana (polivalente)
Parámetros que se deben controlar Requisitos cualitativos Frecuencia de los controles
Apariencia
Reactividad y especificidad
Ausencia de turbidez, precipitado, partículas o formación de gel en el exa-men visual
Ausencia de actividad aglutinante o hemolítica de los hematíes no sensi-bilizados de cualquier grupo ABO
Aglutinación de hematíes sensibilizados con un suero anti-D que con-tenga una actividad de anticuerpos < 10 ng/mL
Aglutinación de hematíes sensibilizados por un suero que fije comple-mento (p.e. anti-Jka ), a un título más elevado en presencia que enausencia de complemento
Aglutinación de hematíes recubiertos de C3b y C3d y aglutinación débil onula con hematíes recubiertos de C4b y C4d
Diaria
Diaria
Diaria
Cada nuevo lote
Cada nuevo lote
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180 Franco • Calidad de los análisis inmunohematológicos
por la empresa que lo suministró y puede seranual o no, según la actividad a la que esté so-metido el aparato.
5. En el caso de los sistemas informáticos se estable-cerán procedimientos de verificación y control.
LA FORMACIÓN DE LOS RECURSOSHUMANOS
La posesión de los títulos apropiados y la ade-cuada formación del personal que practica las téc-
CUADRO 7. Control de calidad de las técnicas. Tipificación Rh
Tipo de prueba Requisitos mínimos Muestras de control Frecuencia de los controles
Tipificación del factor Rh (D)
Fenotipo Rh
Usar dos sueros anti-D diferentesUsar el test indirecto de antiglobu-
lina para detectar los Du, si esnecesario
Si se utilizan dos sueros mono-clonales deben ser de lotes di-ferentes y capaces de recono-cer con certeza las variantesdel antígeno D.
Tipificación por duplicado usandodos sueros para cada antígeno(C, c, E, e)
Una muestra D+ y otra D–
Para una fenotipificación com-pleta, una muestra de cada unode los siguientes Rh: R1 r, R2 r,r' r, r" r, r r y R1
w r.
En cada serie de pruebas,o al menos una vez aldía, siempre que se usenlos mismos reactivos
Ídem
CUADRO 8. Control de calidad de las técnicas. Investigación de anticuerpos irregulares
Tipo de prueba Requisitos mínimos Muestras de control Frecuencia de los controles
Detección de Ac anti-A y anti-B
Detección de Ac irregulares endonantes
Detección de Ac en receptores
Usar hematíes A1 y B
Usar una prueba que detecte losAc clínicamente significativos
Utilizar como mínimo un test deantiglobulina indirecto. Si se uti-lizan otros métodos manuales o automáticos deben tener una
Muestras de suero con un título deAc anti-A y anti-B superior e in-ferior al aceptado para anti-A yanti-B, respectivamente
Muestras de sueros con Acconocidos
Muestras de sueros con Acconocidos
En cada serie de pruebas
Ocasional (introducidos por el supervisor dellaboratorio)
Ocasional (introducidos por el supervisor dellaboratorio)
Ac: anticuerpos.
CUADRO 9. Control de calidad del equipo
Equipo Control Frecuencia
Centrífuga de laboratorio
CentrífugaLavadora de Coombs
RefrigeradoresCongeladoresBaños termostáticos
Pehachímetros
Cronometrar la velocidad, aceleración y demora
Utilizar hematíes sensibilizados con anti-D
Termómetros de precisión
Soluciones de control de pH: 4–7 y 7–10
Ocasional
Diaria
Diaria
Cuando se usan
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nicas son fundamentales como garantía de los re-sultados obtenidos. El personal debe saber no solocómo realizar las tareas encomendadas, sino el por-qué de las mismas y las consecuencias de no seguirlos procedimientos aprobados. Antes de encomen-darle la responsabilidad de una determinada tareaa un miembro del personal, es necesario que estehaya superado una formación adaptada a su puestoy algunas pruebas de pericia. Se establecerá unaformación continuada breve de forma periódica yuna formación específica ante variaciones de las ta-reas, la aplicación de nuevas técnicas, o cualquierotro cambio. El personal deberá firmar siempre eltrabajo que realiza y la acumulación de errores serámotivo de formación adicional.
LA AUTOMATIZACIÓN COMO MEDIOPARA ELIMINAR ERRORES
La automatización ha venido a impartir rapi-dez, estandarización y seguridad a las pruebas delaboratorio. Siguiendo las indicaciones del fabri-cante, los procesos automatizados evitan errores enlos procedimientos y en la transcripción de datos,siempre que los resultados se trasmitan directa-mente al ordenador central.
En inmunohematología, las reacciones deaglutinación son captadas por lectores automáticosque utilizan una técnica fotométrica. El sistema in-formático determina, por ejemplo, el grupo sanguí-neo de cada muestra comparando la reacción deaglutinación positiva o negativa de la muestra conlas reacciones observadas en sueros usados a ma-nera de patrón. Mediante el uso de etiquetas concódigos de barras se consigue identificar correcta-mente las muestras y los resultados, proporcio-nando al técnico una seguridad adicional.
LA ORGANIZACIÓN, INSPECCIÓN Y AUTORIZACIÓN DE CENTROSPARTICULARES COMO GARANTÍA DE LA CALIDAD
No basta solamente con superar ciertos aspec-tos técnicos para lograr la seguridad y calidad quese exigen en el campo de la medicina transfusional.Todo grupo de trabajo debe contar con una organi-zación interna en la que todo esté conveniente-mente regulado y previsto. Las actividades que serealizan y la organización del trabajo deben constarpor escrito, así como las responsabilidades de cadamiembro del equipo.
Ciertas medidas confieren una garantía decalidad adicional y contribuyen a enriquecer el sis-
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tema sanitario. Entre ellas figura la autorizaciónconcedida a un centro determinado por las auto-ridades sanitarias, organismos e instituciones res-ponsables para que ejerza las actividades especí-ficas que se solicitan, una vez que aquellas hancomprobado que cumple con los requisitos encuanto a instalaciones adecuadas y bien equipadas,personal idóneo y con los títulos exigidos y la supe-ración de inspecciones periódicas.
CONTROLES DE CALIDAD EXTERNOS
La participación voluntaria en programas decontrol de calidad externos confiere a un centro laoportunidad de someter a revisión periódica los re-sultados que obtiene y de identificar posibles defi-ciencias que debe superar. Se establece así una eva-luación continua.
EL PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDADEXTERNO EN INMUNOHEMATOLOGÍA DE LA OPS Y EL CENTRO DE TRANSFUSIÓNDE LA COMUNIDAD VALENCIANA
En 1996, la OPS, especialmente interesada enmejorar la seguridad transfusional en inmunohe-matología en los países de la Región de las Amé-ricas, solicitó la colaboración de esta autora paradiseñar y establecer un Programa de Control deCalidad Externo en Inmunohematología dirigido atodos los bancos de sangre de los países de la Re-gión que, de forma voluntaria, quisieran participar.Este programa se enmarcó en un plan de actuacio-nes conjuntas de la OPS, la Agencia Española deCooperación Internacional y el Ministerio de Sani-dad y Consumo de España, y su objetivo ha sidoestablecer un control semestral de los procedimien-tos operativos empleados en los laboratorios de in-munohematología participantes, haciendo especialhincapié en las siguientes técnicas:
• Tipificación eritrocitaria de los sistemas de grupo sanguíneo que con más frecuencia setransfunden.
• Escrutinio e identificación de anticuerpos irregu-lares.
• Prueba directa de antiglobulina.
El objetivo final es que cada centro partici-pante identifique sus deficiencias y planifique sumejoramiento. Para cumplir el objetivo previsto,cada centro participante recibe y analiza, dos vecesal año, dos muestras sanguíneas (eritrocitos y suero)elegidas por el coordinador del programa.
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182 Franco • Calidad de los análisis inmunohematológicos
METODOLOGÍA
1. Cada centro participante tiene asignado un có-digo numérico para garantizar la confidenciali-dad de los resultados.
2. Cada centro participante debe analizar las mues-tras del control de calidad utilizando sus técnicashabituales, como si fueran parte de las muestrassometidas a tamizaje en la rutina diaria.
3. Mediante impresos adecuados, cada centro par-ticipante envía los resultados al Coordinador delPrograma.
4. El Coordinador del Programa envía al partici-pante un informe final sobre la idoneidad o faltade ajuste de los resultados obtenidos.
El Programa se inició en 1996 con la participa-ción de 13 bancos de sangre y a finales de 2001 con-taba con 25 bancos de sangre en 18 países (figura 1).
En el diseño inicial se planificó que en el fu-turo cada banco de sangre que participara en el Pro-
grama pudiera a su vez controlar, mediante un sis-tema similar, a los demás bancos de sangre de suzona de influencia.
El cuadro 10 muestra la evolución de los erro-res observados. A lo largo del tiempo se observa no solo un incremento de los resultados correctos,sobre todo en los laboratorios que han participadomás tiempo en el Programa, sino que en la actuali-dad todos los centros participantes realizan todaslas pruebas. Anteriormente algunos no realizabandeterminadas pruebas debido, casi siempre, a quecarecían del reactivo apropiado. En estos años queha funcionado el Programa, el grupo se ha reunidotres veces para valorarlo y tener la posibilidad dedar instrucción acerca de cómo corregir determina-dos fallos técnicos.
Si los resultados obtenidos en un programade control de calidad externo valoran de forma glo-bal la idoneidad de las técnicas, los reactivos utili-zados y la formación de personal, y si dichos resul-tados son, sin duda, un magnífico indicador de lacalidad del laboratorio participante, la integraciónvoluntaria en estos programas representa el com-promiso de la dirección por la calidad asistencial delcentro.
SYNOPSIS
Quality control of immunologic testing of blood in the Region of the Americas
Assuring the best quality in transfusion medicine neces-sarily involves exercising exhaustive control over the entiresystem and developing protocols for procedures and techni-ques, the reagents and equipment used, personnel training,and so on. Additional guarantees can come from adequatelyorganizing the work and perhaps automating processes inorder to avoid errors. Another way to avoid errors in the la-boratory is to register and continuously analyze the mista-kes that do occur, since that makes it necessary to changeprocedures in order to avoid repeating them. External qua-lity control programs (EQCP) make it possible to perform aperiodic overall assessment of the suitability of techniques,reagents, and training of personnel in relation to the vali-dity of the results obtained. By voluntarily participating inan EQCP, the blood center shows its commitment to thequality of care. In the Region of the Americas, the Pan Ame-rican Health Organization’s Immunohematology QualityControl Program has made it possible to objectively quantifythe improvement attained in the formative level reached byparticipating blood banks in the four years the Program hasbeen in operation.
CUADRO 10. Porcentajes de resultados erróneos
Prueba 1998 1999 2000
Escrutinio de anticuerpos irregulares 7,5 6,2 0
Identificación de anticuerpos irregulares 17,5 12,5 5,2
Prueba de antiglobulina directa 5 0 0Fenotipo Rh 2,5 5,8 0Fenotipo Kell 5 6,2 0
FIGURA 1. Evolución del número de centros participantes
2524
20
16
13
0
5
10
15
20
25
30
1997 1998 1999 2000 2001
Año
Cen
tros
(No.
)