citometría de flujo con fluorescencia en urianálisis

Citometría de flujo

con fluorescencia

en urianálisis

10.03.16• XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano

Agenda

01

02

03

04

05

Tecnología

Beneficios automatización

Aplicaciones

Estudios

Innovación – UN-series

Tecnología

XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 310.03.2016

CFF en URI (I)

La orina marcada es transportada através del canal mediante un fluidoenvolvente.

Las partículas presentes en la orina sedisponen una detrás de la otra,gracias a la fuerza hidrodinámicaque ejerce el fluido transportador através del canal.

La disposición en fila de a uno de laspartículas, permite un recuento yclasificación precisos.

La velocidad del flujo está en el rangode metros por segundo, consiguiendouna elevada velocidad de recuento(miles de partículas por segundo).


CFF en URI (II)

Uso de Marcadores de Polimetina en la CFF:

Gracias a la amplia capacidad de absorción y a la potente fluorescencia

de los marcadores, se pueden detectar incluso a niveles de “ultratrazas“,

permitiendo un elevado ratio de detección de las partículas de orina

marcadas selectivamente.

Marcaje óptimo y selectivo de las distintas partículas de la orina, gracias

a los distintos grupos moleculares reactivos presentes en los distintos

marcadores.

El sistema de reactivos empleado permite una tinción óptima,

gracias a:


Valor de pH óptimo

Pretratamiento de las

membranas celulares

Previene tinciones

inespecíficas

Acelera la tinción selectiva

Disuelve las sales presentes

Temperatura óptima para la

tinción

Al atravesar el haz láser, las partículas

marcadas emiten un pulso momentáneo de

fluorescencia.

Este pulso de fluorescencia se mide

mediante fotomultiplicadores.

Dispersión frontal (FSC) tamaño de la

partícula.

Dispersión lateral (SSC) superficie y la

complejidad interna de la partícula.

Intensidad de fluorescencia (FI) capacidad de

tinción de cada partícula.

CFF en URI (III)


La características ópticas son diferentes entre cada partícula – patrón

único que permite su clasificación y recuento.

CFF en URI (IV)


CFF en URI (V)


Caso clínico

Pielonefritis

Hombre, 91 años

Molestias: fiebre

<Hallazgos Clínicos>

El paciente presentaba una fiebre de 38ºC y no había tenido apetito

desde hacía 2 días. Al momento de la revisión, su recuento de

leucocitos fue de 16500 WBC/µL y proteína C reactiva de 11,45

mg/dL. El examen de orina mostró piuria evidente y fue hospitalizado

para su tratamiento. El cultivo de orina fue positivo para Escherichia

Colii (106 /mL). La condición del paciente mejoró con los antibióticos.

caso clinico pielonefritis.pdf

Beneficios automatización del urianálisis


Beneficios

La automatización cambia el urianálisis

aportando:

Mayor rapidez en la obtención de resultados:

Ofrece un mejor servicio a los facultativos

Diagnóstico prematuro tratamiento o no desde el

inicio

Menor carga de trabajo manual

Disminución errores de manipulación

Ahorro de costes

Mejora en la calidad y la estandarización

Mayor facilidad de conseguir los requisitos de

acreditación

Resultados de alta calidad


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Aplicaciones


Aplicaciones de la CFF (I)


Sistemático y Sedimento urinario

● Discriminar muestras negativas

● Ahorro de tiempo de FEA en muestras negativas

● Augmento de disponibilidad de tiempo para muestras positivas

● Mejor indicación de las muestras patológicas

o Infecciones de tracto urinario

o Hematuria

URINOGRAMA (sedimento)

Aplicaciones de la CFF (II)

• Posibilidad de análisis de los siguientes líquidos:

• Líquido cefaloraquídeo

• Líquido pleural

• Líquido ascítico

• CAPD (diálisis peritoneal)

• Líquido sinovial

• No requiere ningún pretratamiento – se evitan errores de preparación

• Capacidad de detección en rangos bajos – relevancia clínica

• Rápido procesamiento y fácil recuento celular. Preparación de citospin

directamente después del análisis.

• No requiere recuento manual.


LÍQUIDOS BIOLÓGICOS

Aplicaciones de la CFF (III)

• Tecnología reconocida por la guías clínicas de la SEIMC

• Punto de corte para bacteriuria y leucocituria

• Otros parámetros de interés: EC, SRC, Levaduras

• Ventajas:

Informar el paciente negativo en minutos

Ayudar a la lucha contra la resistencia a antibioticos

Disminución de siembra

Posible asociación a MALDI-TOF - Ahorro tiempo


CRIBADO UROCULTIVOS

Estudios


Evaluación del UF-500i (I)

•XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano • 1610.03.2016

Hospital Santa Bárbara (Puertollano)

Objetivos:

Se pretende validar las características del contador de partículas en

orina, UF-500i, en comparación con el método de referencia

recomendado.

• Repetitividad (precisión) para hematíes y leucocitos

• Linealidad: diluciones en serie de muestras de orina con una alta

concentración de hematíes y leucocitos.

• Comparación del recuento de partículas en la orina con el método

de rutina usado en el laboratorio, así como con el método de

referencia según ISLH (cámara Fuchs Rosenthal). Se estudia la

correlación entre el UF-500i y el método de referencia de contaje

de partículas en el microscopio.

Evaluación del UF-500i (II)


Objetivos (II):

¿Puede el UF-500i ser usado como un sistema de cribado previo al

urocultivo, descartando aquellas muestras que no tengan indicaciones

de infección de tracto urinario como indican las guidelines

internacionales?

• Comparación con el método de rutina usado en microbiología.

Correlación entre el UF-500i y el urocultivo.

Evaluación del UF-500i (III)

Punto de corte UF-500i: LEUCOS > 15/µl y BACT > 100/µl

Total analizados = 97 Cultivos negativos = 60 Cultivos positivos = 37

Cultivos positivos UF: 45

FP= 8 TP=37

Cultivos negativos UF: 52

FN= 0 TN=52

Sensibilidad = 100% Valor predictivo negativo = 100%

Especificidad = 86,67 % Valor predictivo positivo = 82,22%

Reducción de siembra (cultivos) = 53,60%


Evaluación del UF-500i (IV)


La reducción de siembra de orinas es de 53,60%

La correlación del contaje de Hematíes y Leucocitos

en el UF-500i y en la cámara de Fuchs Rosenthal

es muy buena. (RBC r= 0,999 y WBC r=0,950)

La linealidad del contaje de Hematíes y Leucocitos

es muy buena (RBC R2=0,997 y WBC R2= 0,999)

La precisión del contaje de Hematíes y Leucocitos

es muy buena (cv% RBC=1,55 y cv% WBC = 0,99)

Conclusiones

Estudio URISCAM (I)

Estudio multicéntrico en 6 hospitales del SESCAM

Servicios de Microbiología participantes:

Hospital La Mancha Centro

Hospital Santa Bárbara

Hospital General de Guadalajara

Hospital Universitario de Ciudad Real

Hospital Nuestra Señora del Prado

Hospital Universitario Virgen de la Salud

Objetivo

Determinar la validez y precisión de la citometría en la detección de las

infecciones del tracto urinario y/o bacteriurias asintomáticas para ser usado como

método de cribado previo al urocultivo.

XV Reunión Científica LABCAM • Anna Corominas, Sysmex España • Puertollano •2010.03.2016

Variables predictivas significativas ITU/BA:

Bacterias, Morfoflogia, Leucocitos y

Edad

Incidencia ITU/BA 15,6%, 156‰


Estudio URISCAM (II)

Tamaño muestral pequeño para bolsas colectoras

y orinas de sondaje

Mala concordancia morfología UF vs cultivo

Sin influencia del conservante

Conclusiones (I)

El 69% de los FN eran orinas contaminadas

Errores diagnósticos: 1,17% (0,36%)


Estudio URISCAM (III)

Punto de corte 21 bacterias

BUEN MÉTODO DIAGNÓSTICO

El método seleccionado permite un ahorro

de siembras del 38% de las muestras

Algoritmo predictivo (reglas de decisión):

S=94,9%, E= 47,4%, VPP=35%, VPN=97%,

Kappa=0,289 VÁLIDO PARA CRIBADO

Conclusiones (II)

Innovación – UN-series


UN-series

UF-5000 UC-3500UD-10


UN-series

UCUC

UFUF

UFUFUD


UCUC UF

UFUF

UF

UD

UN-series

UCUC

UFUF

UFUFUD


SISTEMA MODULAR DE

AUTOMATIZACIÓN COMPLETA DEL URINÁLISIS

La innovación constante es la única forma de mantenerse competitivo, porqué ninguna ventaja es sostenible en el largo plazo. – Jorge González Moore

Gracias por su atención

·Anna Corominas·

Sysmex España, S. L.

[email protected]

citometría de flujo con fluorescencia en urianálisis

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