Rev. Med. Hosp. Nal. Nios, 4(1): 47-59, 1969

VaJores sricos de cido rico y de creatininaen Costa Rica

Dr. German F. Senz" Dra. Cecilia Beirute"*

INTRODUCCION

La mayora de los mtodos para la determinacin del ddo rico, se basanen la facilidad con que ste se oxida tanto en medio cido como alcalino. Algu-nos de los mtodos tienen como fundamento, la reduccin de ciertos complejos delcido fosfotn~stico por cl- cido rico en presencia de cianuro, para dar uncolor azul. El procedimiento ms usado en nuestro medio es el de BROWN (3),en' d que se efecta una oxidacin alcalina en un filtrado libre de protenas.El a~ente oxidante es cido fosfotngstico en presencia de cianuro de sodio amor-tiguado con urea. Muchas crticas se han apuntado a los mtodos que utilizancianuro para iI;1tensificar d color de la reaccin final; eotre ellas la de ql1C lassoluciones de cianuro son venenosas e incstables y la reaccin final tiende a nu-blarse o.empaarse (5). Otros autores han sustituido el cianu.ro por silicato (6).Por otra part~, cuando se utiliza sangre total o plasma obtenid.o con oxalato depotasio, el exceso de ste precipita con el cido rico, por lo que en las determinadones de la uricemia se recomendaba usar oxa lato de litio. Sin embargo, puededecirse, que en general todos lo.' oxalatos provocan, en mayor o menor grado, elmismo problema.

En 1955 CARAWAY (5) demostr la pO'Sibilidad de sustituir tanto el silicato como el cianuro por el In carbonato y propuso un li1todo nuevo, simple yfactible de reproducir, para la determinacin de cido rico en suero. El cidorico. se determina por su acci6n reductora sobre lLlla solucin de cido fosfotngstico, en la que la intensidad del color es directamente proporcional a w con-centracin. El procedimiento requiere nicamente dos .'oluciunes reactivas esta-bles (carbonato de sodio y cido fosforungstico), que son agregadas directamentea un filtrado de suero libcrado de protenas para el desarrollo de color. Poste-

Departamento de Anlisis Clnicos, Facultad de Microbiologa, Universidad deCosta Rica.

Laboratorio CHni

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riormente, BUCHANAN el. al. (4), introdujeron el hidrxido de sodio en vez delcarbonato y eliminaron la influencia de cromgenos interferer:-tes al almacenarpor tres semanas lo? ,sueros en estudio. Luego ISDALE e/. al. (12) modificaronligeramente el procedimiento para aplicarlo de rutina en el laboratorio clnico.En ambos trabajos se seala el marcado paralelismo de los resultado:, obtenidoscon el mtodo dd cido fosfotngstico y el de la uricasa. El mtodo de la uri-casa se -considera el ms especfico para la- determinacin- de cido rico. Sinembargo el procedimiento es lento y exige: un espcctrofotmetro ultravioleta (13).Otros autores han determinado cido rico, bajo un procedimiento directo CJueutiliza la mieasa (8).

Como los eritrocitos contienen sustancias que interfieren con la reaccind,:l fO'sfotungstato, es preferible llevar a cabo la determinacin en el suero(1, 5, 15, 20, 21, 23). Se ha sealado que el reactivo de cido fosfNngsticono es especfico para el cido rico y puede ser reducido por sales ferrosas, glu-tati6n, fenoles, acido' ascrbico, glucosa, tirosina, triptofano, cistina y cisrena.Sin embargo, en el perodo de tiempo que se especifica para el desarrollo de color,a la temperatura ambiente las sustancias como la glucosa y los fenoles no inter-fieren (9). Entre las sustancias eritroctarias se citan eS!Jecialmente los com-puestO'S sulfurados reductores (19), el glutatin y la ergotionena (20).

Se han introducido muchas modificaciones en los procedimientos par~reducir la interferencia de estas sustancias que tienen efecto reductor.

Dado que la gran mayora de estas sustancias se encuentran fundamen-talmente en los eritrocitos, se logran mejores resultados sobre ~l verdadero nivelde la uricemia, con el uso de suero o plasma en vez de sangre total. En el mtodoque se ha seguido en el presente trabajo, se ha introducido una pequea modifi-cacin tcnica, al dejar en reposo una alalOta del filtrado libre de protenas apH alcalino antes de la adicin del cido fosfotngstico, para eliminar an ms.por oxidacin, algunas de las sustancias que interfieren con la reaccin final decolor, particularmente el cido ascrbico y los catecoles (20).

En la literatura vieja los valores de la uricemia fueron siempre para sangretotal. Sin embargo, ahora sabemos que los niveles de cido rico dep:::nden, entreotras cosas, de la dist"ribucin del mismo entre las clulas y el pl2.sma y del ndicehematocrito (1). El suero y el plasma contienen alrededor de dos veces mscido rico que la sang~e total; en otras palabras, para la sangre total los valoresde cido rico son algo i.nferiores, lo cual se debe a que los eritrocitos contienencerca de la mitad de ciElo rico que -el suero o el plasma (16, 20). Con baseen el hecho ya comentado, de que las clulas sanguneas contienen la mayorade las sustancias que interfieren, se destaca una vez ms la importancia de de-terminar la uricemia en plasma o suero.

En nuestro medio, las determinaciones de creatinina se hacen usualmente ensangre total. Sin embargo, con frecuencia encontramos en la literatura, datossobre valores normales de creatinina determinada en suero o plasma. Este esuno de los motivos para la discrepancia en torno a cules son las cifras normales.

La creatinina, en un filtrado desproteinizado y segn la tcnica clsica, sedetermina por su reaccin con un picrato alcalino COn el que forma un complejoamarillo rojizo: es la reaccin llamada de Jaff. En esta reaccin intervienen las

SAE8Z & eEC/L1A BE/RUTE; CIDO CRICO y CREATININA 49

"sustancias cromgenas qe cr~atinina", por ]0 que se dice que sta no es especfica para la creatinina (1, 2, 7, 14, 15, 18, 23). Se h~. deIne-sttado Jor mtodO$ enzimticos, que la mayora del materiai plasmtico "loe da color en Jareaccin de Ja es crcatinina, al contrario de lo que sucede (Un los. eritrocitosen los que mt'nos de un ')0% es creatinina (1). Ahora bien, como casi todaslas smtancias: que pueden dar- reacdones positivas falsas (en especial ergotioncnay glutatin) .. se encuentran en forma jntracelular, se obtiene un re:ultado msexacto si se>trabaja con ~ucr.o o plasma. libre ele. hemoglobina que si se utiliza :;an-

- gre complda (15), de ta'! suerte que prcticamente todo el material cromognicodel suero parece ser creatini"na (7,8,.10,15; 21, 23). Por otra parte, (01110 aparentemente la creatinina 'sq ,cncu:entra distribuida igualmc'nte en el. plasma y enlas clulas, es ms lgico dderminar fa creatinina en plasma o suero (1). Diversos reactivos se- han emple--J.do, para reducir el efecto de las sustndas que ejercenun influjo perturbador en la. reaccin de Jaff. La jnterferenc:ia. de algunas deellas, entre las que se enruentra el cidu ascrbico, se intensifica grandementecuando se determina crcatina, dcbido a la necesidad de calentar los filtrados demina o suero en .'iolucin cida para .conye-rtir la creatiqa en creatnioa (1, 23).A fin de lograr una rc."3.ccjn ms espc:."Cfica, se ha empleado el reactivo de Lloyd,que es un silicato de aluminio, para absorber la Cff'atinina y separarla de estem()do de las s.ustancias c.romognica.'5" nu ES!ledficas (8, 18).

TAUSSKY' (23) hamcj'ora

so KEVIST .i\1EDICA O'ELHOSPITAL NACIONAl, DE NI~OS

frico al 8516. Se conecta el frasc a 1lO condensador de reflujo y se herve moderadam,ente por- dos horas. Luego se enfra a t(;mpctatura i1rribien~(y se diluye y mezcla con 1.000 ml de agua destilada. El reactivo as preparadd, estable indefinidamente, Se guarda en (ma 'botella mbar",

2. Acido jo,rjot1;g,rtico diluido

Se diluyen 10 mI del reactivo de Folin-Denis en 100 mI de ?-gua destiladaEstE\ reactivo se mantiene estable hasta por un ao, cuando se guarda enbo,tella mbar.

3. Cdrbonato de sodioul 10%Se disnlven lOO g de' carbonato de sodianhidr en agua dcstilad,t y s(diluyen a 1,000 mi enup fq,sco, vh..lmtrico. Esta es un.) solucin estable:si se guarda en una botella bien cerrada.

4. RitlC/o flrepitclllte (cido tngstico)

A 700' mi ,de agua destilada 'se agregan 100 mI de la solucin de tungstatode sodioal109, y ioo mI de cido sulfr-ico 2/3N. Este ,reactivo s estabi1izl por la adicin de 0,05 mI de cido fosfqrico al 85(;'.

s, Solucin madre de 4c/do rico (20mg por 10D mI)

En un frasco v61mtrcd de 500 mI se POhfl1 0,10 j!, de cido ri'Co 'puro,,Por separado se disuelven 2,30 g de fosfato disdico anhidro en 300 mIde agua destilada caliente. Se transfiere, esta solucin al frasco volum'trico Y' se: mezc1ahasta que el cido rico est completamente disuelto. Unavez' fra, se aadn 0,90 mI d:cido actico glacial y se dluye con aguadcstilad,t hasta la marCa,

Se diluyen aUcuotas de la solucin madre ch agua destilada, para proveersolciones patro1ies cubr'i'end los vaJores dE; 0,1 mg' a 1,6 mgde cido dcopor 100 mI. Deben prc1Jararse el dia que se van a usar.

PROCEDIMIENTO

Staadeti 5)',0 ;mI del reactivo precipital1te -a ljD mi de suero y se niezdan:. Esta inezcla debe ser centrifugada O fltrada. A) Se transfier.en 5.,0 mIdel sobrenadantc' claro 0 del filtrado, aun tubo de pru-:ba. -Debe usarse 5;0 mide, agua:eu un se,gundo tubo para un blanco. B) Se 'agrega 1,0 mIde la solucinde' carbonato de sodio al 10S~b a cada uno y se rnezcl

SAF.NZ & CEClUA Bf:IRUTl:: CIDO tJRICO y CREATINlt-:h 51

linO y s~ mezcla al instante. Se deja en reposo treinta minutos a lenlperatura ambiente;, Contra el blanco en un fotocoJormctro, usando un filtro de 50 mu semide in dtn~jdad ptica. Por medio de la cu.rva de calibracin, se obt(~ne la Lon-centran de cido rico en el sucro.

Si se quiere ...da.pt

52 REVISTA MEDICA DEL HSPITAL NACTNAL DE NI:fJOS

reposo toda una ,noche y de nUC:V0se ajusta el pI-I a 2,0 ~ll da sigulente.A tontiul&'icin se diluye hasta 1 'litro.

4. Hidr6xido de sodio

Se prepara una. solucin 2,5 N (al 109-(;).

s. So!tlrt alcalina de picrdto

Se mezCLan nUVe partes de amortiguador de picrato de SGd~o C

SAENZ & et-:C/L1tf BElRUTE: CIDO }{rcO y CREATlNJNA 53

gue se sospeche que la creatini.nemia va ti ser elevada, en la rulina eJ patrn bajoes usualmente suficiente. En todo caso, cuando los valores de creatinina sean misaJtos de 8 mg% es preferible hacer una dilucin conveniente- del suero (1).

CALIBRACION.

Se diluyen .1, 2, :;, 4 Y 5 mi de la solucin ~e trabajo de crcatinina hasta5 ml, con ~ua destilada y se tratan segn se indica anteriormente para el filtradode suero libre d!Z protenas.

Mtodo del rido 3J 5-di1litmbellzoiro p(lra O'(!({lliu(/ JrlCfl de Bl3lledifl ) Be/He,citddo en Br(!)' (2).

REACTIVOS.

1. Soltln de cido 3,5dn;/fobenzoico tll lOr;{

A 25 mI de solucin de carbonato de sodio al 10';/(: sc agregaQ. 'i mezclan10 g de cido 3,S-dinitroben:toico. Se adicionan 75 mI de agua destiladapara disolver totalmente. Se calienta si esncccsario y 'se deja enfriar a latemperatura ambientc. Se ajusta con glla dcsLiiada ha~ta 100 ml y se filtra.Sc debe obtel1eruna solucin co)or amarillo plido.

A 1.000 mI de agua destilada se. 1

54 RIVISTA .MEDICA DEL HOSPITAL NAU!\AL DE NIOS

Se agrega llna~ gotas de cloroformo y se mezcla. 5 mL de esta solucin, eglli.valen a 0,10 mg de creatinu;

PROCEDIMIENTO.

A 6 mI de agua destilada, colocados en un tubo de tnsayo largo, se leaaden 2 mL de sangre completa o suero y se mezclan bien. Se agrega gObl agota 1 mi de cido sulfrico 1,333 N con agitacin constante, y a continuacine igu.almentr: gota a gota, 1 mI de tungstato de sodio al 20;{;, haciendo girar ,1 lavez el tubo y agitando despus enrgicamente. Se centrifuga a 2.500 r.p.m.. Secolocan 5 mI del lquido sobrenadante en una cubeta y 5 mI de agua destitada enotra, para utilizarla como blanco. A cada cubeta se le aade una gota de hidr-xido de sodio 2,5N y a contiouacin , 5 mI de reactivo cido 3,5-dinitrobcn2oico,mezclando perfectamente. Se agregan despus 0,25 mI de hidrxido de sodio2,5N Y se vuelve a mezclar; finalmente se deja en reposo en la oscuridad durantediez minutos. Se utiliza la cubda del blanco para fijar la transmisin en elfotmetro af 100

5AT:NZ & r.t:C1UA BEIRUTE: CIDO vRleo y CREATJNII\'A 55

de suero, se obtuvo un 15,1.39:'(, ms alto con el procedimiento del picrato alcalino,

REVI$TJ\ MEOfCA [,1E1. HOSPiTAL NAOOi\.-AL DI'- l\'L'l:OS

DISCUSION y CONCLUSIONES

De los dittos de la literatura se desprende que :l.s determinaciones de ~cidorico en s.angre:, deben hac

SAENZ & ~EGl1}A BEIRUTE:CIDO RICO y CREAT1NINA 57

0,9 a 1;7 mg~/( (14); 0,61 a 1,10 mg?o (19); 0,5 a 1,0 n1g') (23). En sangretot,tj la:; cifras citadas varan entre 0,73 y 1,30 mg% (17); 1 a .2 mg)'f:(14); 0,73 a 1,3 mg')1 (19); 1,2 " 1,5 mg 7< (21). Aqu poden1osobservar, que los valores en sat'l'gre total son ms altos

5:8 REVIstA },1EmCA DEI HoSJi'i'AT NACIONAl- DE;'II&OS

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