PRÁCTICA N° 08- DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO EN SANGRE

I.- MARCO TEÓRICO:

ACIDO URICO:

El ácido úrico es un compuesto orgánico de carbono, nitrógeno, oxígeno e hidrógeno. Su fórmula química es C5H4N4O3. Es el producto del desecho terminal del metabolismo purinico. Las dos purinas, adenina y guanina, se encuentran en el organismo principalmente como componentes de los ácidos nucleicos, ácido ribonucleico (ARN) y ácido desoxirribonucleico (ADN). Normalmente existen dos fuentes de purinas, las que se obtienen por la hidrólisis de los ácidos nucleicos ingeridos o por los endógenos. El ácido úrico ó 2-6-8-trioxipurina, se forman por la oxidación enzimática de la adenina y guanina.

Valores normales de Ácido Úrico en sangre :ideal menor a 6 mg% .

Mujeres : hasta 5.5 mg%.

Hombres : hasta 6.5mg%

Clínica y Lesiones por Ácido Úrico Alto :

Un ataque agudo de gota, pie hinchado, rojizo y doloroso y en la vejez artritis crónica tofácea(destrucción) impotencia y complicaciones. La gota en una alteración hereditaria del ácido úrico que se caracteriza por episodios artríticos agudos, y con el tiempo, por la formación de depósitos de cristales en varios tejidos.

Dos mecanismos son responsables : una superproducción de ácido úrico, y un mecanismos anormal de eliminación renal que pueden actuar independiente o en forma conjunta. A menudo no se diagnostica la gota en sus estadios tempranos, antes de que aparezcan los cambios destructivos de la gota tofosa crónica. Su aparición se caracteriza por ataques agudos de dolor articular con intervalos de bienestar completo. Estos intervalos se van acortando hasta que se llega a una artritis deformante persistente. La artritis aguda anuncia la enfermedad, aunque

ocasionalmente un cólico nefrítico puede ser la manifestación inicial. Ataca la articulación metatarsofalángica del primer dedo del pie, empeine del pie, tobillo, talón, rodilla y mano.

Gota crónica :se presenta después de periodos variables y se caracteriza por cambios irreversibles y deformantes de los espacios, cápsulas, tendones y bolsas articulares. Generalmente se encuentran tofos en las estructuras cartilaginosas y los tejidos subcutáneos.

Los tofos (inflaciones nodulares): pueden aparecer en las orejas, codos, muñecas, rodillas, articulaciones de los pies. Son acumulo de cristales de ácido úrico y lleva a destrucción articular. Puede depositarse en los riñones y ocasionar nefritis intersticial que puede originarinsuficiencia renal y cálculos renales, sobre todo cuando alcanza niveles superiores de 8 a 10mg%. mantenidos por largo tiempo.

La artritis gotosa no se correlaciona con el grado de hiperuricemia, ni se presenta en las personas normales en quienes se eleva el ácido úrico en forma artificial, al parecer existe una presencia evanescente de un producto del metabolismo de las purinas que no ha sido identificado hasta la fecha.

Factores que ayudan a elevar el Ácido Úrico :

Aumenta por varios mecanismo: por defecto enzimáticos, por destrucción celular (casos cáncer) traumas y por el metabolismo de proteínas(purinas). Muy poco por alimentación.

• El alcohol en cualquiera de sus tipos impide su eliminación, por ello la gota es más fre- cuente en alcoholizados.

• Tomar café en exceso (mayor de 2 tácitas)

• Consumir muchas calorías.

• Exceso de grasas saturadas y purinas

. • Someterse a periodos de ayuno.

• Falta de ingesta de líquidos.

• Consumo crónico de aspirina y diuréticos tiazidicos.

Metabolismo del Ácido Úrico :

Eliminamos 750 mg. diarios de ácido úrico, de los cuales 500 mg. son eliminados por vía renal y 250 mg. por las heces. Todo exceso de esta cantidad permite su acumulación. Los humanos no disponemos de uricasa, única enzima que destruye el ácido úrico, sin embargo se ha descrito una uricolisis a nivel intestinal. Se ha visto hiperuricemias asintomáticas frecuentes en familias de pacientes gotosos.

El defecto en el metabolismo de ácido úrico se debe probablemente a un solo gen autosómico dominante ya que la gota clínica se presentaen un porcentaje pequeño de heterocigotos. En las mujeres la gota clínica es más rara antes dela menopausia, mientras que en hombre aparece con más frecuencia entre el tercero y cuarto decenio. No existen bases para el concepto tan generalizado de que la gota se presenta comúnmente en personas que beben vino en exceso o en aquellas que acostumbran ingerir una alimentación abundante. La acumulación de ácido úrico en pacientes con gota puede realizarse a través de varios mecanismos posibles: se ha excluido la ingestión aumentada de ácidos nucleicos en la dieta; se ha descartado como causa primaria de la gota en aumento de ladegradación constante de ácido nucleicos endógenos, como ocurre en pacientes con gota secundaria. Por lo tanto, quedan como posibles mecanismos la sobreproducción del ácido úrico a partir de las purinas precursoras o una alteración en los procesos de eliminación.

II.-OBJETIVOS

Determinar la cantidad de ácido úrico en sangre de nuestros compañeros en

nuestro salón

III.-MATERIALES Y REACTIVOS

3.1 Materiales

Tubos de ensayosGradillaMicroPipetasEspectrofotometroCentrifugadora

3.2Reactivos

Kick para analizar acido urico en sangre

IV.-PARTE EXPERIMENTAL:

Pedimos voluntarios para que donen sangre, para dicho análisis

Extraemos aproximadamente 2mL de sangre

A la sangre extraída dejamos reposar por 5 minutos aprox.Luego llevamos a la

centrifugadora por 3 min.

Una vez centrifugada la muestra, añadimos 1mL del reactivo (calibrador)

Después llevamos al espectrofotómetro y anotamos los datos de absorbancia para su

posterior análisis

V.- RESULTADOS:

ABSORVANCIA

BLANCO 0.053ESTANDAR 0.608

TUBO 0.137

VI.- CÁLCULOS:

Au%= Lectura del ProblemaLectura del Estandar

x 10

TUBO : Au%=0.1370.608

x10 = 2.25%

El valor normal de acido urico en mujeres es de 2 % - 6 %, por eso concluimos que la sangre estudiada se encuentra dentro de los valores normales.

Fórmula General

VI.- CONCLUSIONES:

Se determinó las concentraciones de acidourico en sangre de 5 personas, las cuales no están en el rango deseable, por lo que estos análisis se hacen en ayunas.

CUESTIONARIO

1) Explique a que se debe la coloración azul que se obtiene al final de la reacción, ocurrida en la determinación de ácido úrico.

El método químico clásico para la determinación de ácido úrico se basa en la reducción del ácido fosfotungstico por el ácido úrico para formar un complejo defosfotungstato azul. El método no es específico para ácido úrico debido a que otros agentes reductores presentes en el suero o plasma también producen un complejo de fosfotungstatoazul.En 1980, Fossati y col. (3) describieron un procedimiento para el análisis de ácido úrico utilizando uricasa, la cual produce peróxido de hidrógeno a partir de ácido úrico. El peróxido de hidrógeno reacciona entonces con un compuesto fenólico para producir un colorante rojo que puede medirse espectrofotométricamente en el rango visible. El procedimiento es más específico y el compuesto fenólicosulfonato de 3,5-dicloro-2-hidroxibenceno (DHBS) aumenta la sensibilidad debido al alto coeficiente de absorbancia del colorante quinoneimina producido. Este procedimiento de ácido úrico es una modificación del de Fossati

2) Enumere las causas de un incremento elevado de ácido úrico, no debidas a una patología.

1.Sobrepeso

El aumento de peso se asocia directamente al aumento de los niveles de ácido úrico. La obesidad favorece que aumente la producción y también disminuye la excreción. Por el contrario, disminuir el peso favorece la disminución del ácido úrico

2. Cerveza y otros licoresAntes de dejar de comerse la ensalada, lo primero que debe de hacer es dejar las latas de cerveza. El consumo de cerveza y otros licores, es lo que tiene mayor efecto en los niveles de ácido úrico.

Con solo el equivalente a una cerveza de 350 ml o 30 ml de otros licores, el riesgo de aumentarse el ácido úrico se puede hasta casi duplicar. Así que definitivamente si ha presentado el ácido úrico alto, decirle adiós la cerveza y otros licores debe ser lo primero en su lista. Sin embargo, no necesita

abstenerse por completo del alcohol. El vino no tiene ningún efecto en los niveles de ácido úrico, así que una buena estrategia puede ser cambiar la cerveza por una copa de vino. Por supuesto, con moderación, lo cual equivale a una copa de vino al día para mujeres y dos copas para los hombres (1 copa = 150 ml).

3. Carnes rojas, pescado y mariscos.La cantidad de proteína total de la dieta no tiene efecto en los niveles de ácido úrico, pero sí la fuente de proteína. La carne roja y el pescado son los únicos que sí van a favorecer el aumento. Reducir el consumo de éstos es una de las principales acciones a tomar para prevenir la hiperuricemia y gota. La carne roja además es la principal fuente de grasa saturada en la dieta, la cual se asocia a resistencia a insulina y enfermedad del corazón, por lo que definitivamente es mejor que la eviten, en especial los embutidos derivados del cerdo (jamón, mortadela, salchichón, tocineta, etc.).El pescado es la mejor fuente en la dieta de omega - 3, los ácidos grasos protectores del corazón, pero desafortunadamente si usted tiene el ácido úrico alto más bien puede resultar contraproducente. Lo que se recomienda es que en lugar de consumir pescado, consuma suplementos de los aceites de pescado y aumente sus fuentes vegetales de omega - 3. Para protección se recomienda un suplemento que le aporte 1 gramo de omega - 3 al día. La mayoría de los suplementos en el mercado aportan por cápsula 300 mg de omega - 3 y 1 gramo total de aceite, por lo que debería de consumir 3 cápsulas al día. Las mejores fuentes vegetales de omega - 3 son la linaza y las nueces. Estas últimas también han demostrado beneficios en ayudar a controlar los niveles de azúcar en sangre, eso sí deben consumirse con moderación, ya que son altas en calorías, unas dos cucharadas al día es lo que se recomienda. De linaza también se recomienda el consumo de dos cucharadas al día de la semilla molida, ya que así es como el cuerpo mejor la aprovecha.

4. FructosaEl siguiente culpable de aumentar el ácido úrico es la fructuosa. La fructosa es el azúcar principal de las frutas, pero no son precisamente las frutas las que contribuyen al aumento de los niveles de ácido úrico. El principal problema son los alimentos que traen adicionada la fructosa, los cuales de hecho se han señalado

3) ¿Cómo debe proceder para determinar ácido úrico en casos desueros lipémicos?

El ácido úrico es oxidado por la uricasa en alanto El ácido úrico es oxidado por lauricasa en alantoína y peróxido de hidrógeno. DHBS+4 amino antipirina + peróxido de hidrógeno, en presencia de peroxidasa forma un compuesto coloreado que se mide a 520 nm. La intensidad del color es directamente proporcional a la cantidad de ácido úrico en la muestra.

INSTRUMENTOS Use un espectrofotómetro o colorímetro calibrado a 520 nm. (Intervalo aceptable500-540 nm.) Para su uso en instrumentos automatizados consulte el manual de aplicaciones

SUBSTANCIAS INTERFERENTES: Las muestras lipémicas requieren blanco de suero, la bilirrubina y el ácido ascórbico pueden causar niveles bajos falsos.

MATERIAL PROPORCIONADO: Reactivo de uricasa y uricasa ácido úrico calibrador.

CONDICIONES DE LA REACCION:

Longitud de onda 520 nm. Selección de filtros 500-550 nm. Tipo de reacción Punto final Temperatura de incubación 37ºC. Tiempo de incubación 5 minutos Volumen de la muestra 0.025 ml Volumen del reactivo 1.0 ml Volumen total 1.025 ml Normal bajo 1.5 mg/dl Normal alto 7.0 mg/dl Valor de calibrador 5.0 mg/d

PROCEDIMIENTO 

Coloque 1.0 ml. del reactivo de Uricasa dentro de los tubos etiquetados como: Blanco de reactivos, calibrador, control, muestra 1, etc. Precaliente tubos a 37ºC. Por 5 minutos. Añada 0.025 ml. de muestra a los tubos respectivos. Incube los tubos a 37ºC. Por 5 minutos. Ajuste el instrumento a cero de absorbancia a 520 nm usando blanco de reactivos. Lea y registre los valores de absorbancia para cada muestra. NOTA: Para instrumentos de

lectura directa ajuste a cero con el blanco de reactivo y con el calibrador ajuste la mezcla del valor del calibrador. Lea las concentraciones del problema directamente

ESTABILIDAD DE LA REACCION FINAL:

Leer las muestras 10 minutos después de desarrollado el color.

CALIBRACION:El calibrador del ÁcidoÚrico Uricasa es proporcionado. Consulte los valores asignados en la etiqueta. No es necesario hacer curva de calibración, la linealidad del procedimiento se extiende hasta 25 mg/dl. Valores por arriba de 25 mg/dldeberán ser diluidos (1:1) con solución salina y reensayados; el resultado se multiplica por 2.

4) Cómo procedería para determinar ácido úrico utilizando UV.

El método de absorción UV de los ácidos nucleicos. Introducido por Casperson en 1936.Se fundamenta en el hecho de que las bases puricas y pirimidinicas, como consecuencia de lo0s dobles enlaces conjugados de sus anillos, absorben luz ultravioleta en una región que corresponde a los 260nm. Esta absorción, depende en parte del PH debido a las reacciones de ionización de las bases. Este comportamiento de luz UV es extrapolable al ADN y al ARN.

Las proteínas y algunas otras sustancias como: las bases puricas (ácidoúrico, guanina, etc.) y algunos derivados pirimidinicos pueden también absorber la luz ultravioleta en la misma longitud de onda, pero este hecho no debe ser causa de confusión, ya que dicha absorción es débil.

El ARN y el ADN absorben en la misma longitud de onda, por lo que los valores espectrofotométricos obtenidos suministran la cuantía global de los ácidos nucleicos. Mediante extracciones apropiadas del ARN y el ADN se conseguirá discernir la cantidad de un ácido.

VII.- BIBLIOGRAFIA:

http://biosalud.saber.ula.ve/db/ssalud/edocs/articulos/Acurico.pdf http://www.scielo.org.pe/pdf/rmh/v11n1/v11n1ao2.pdf Devlin TM. Bioquímica. 4ª ed. Barcelona. Reverte. 2004. Lehninger. Principios de Bioquímica.4ª ed. Barcelona. Omega. 2006. Mathews CK, Van Holde KE. Bioquímica. 3a ed. Madrid. Addison Wesley. 2002