citogenetica molecular

CITOGENÉTICA MOLECULAR

DIAGNÓSTICO POR FISH

Luz Mery Bernal Parra Ph.D

UNAD

2014 II

DE LA MOLECULA DE ADN AL CROMOSOMA: NIVELES DE OBSERVACION

CITOGENETICA MOLECULAR

Identificación y aislamiento de genes específicos

Diseño de sondas moleculares

Técnica de FISH (hibridización “in situ”por fluorescencia)

Núcleos interfásicos y/o metafásicos

Análisis de alteraciones cromosómicas numéricas y estructurales e identificación de cromosomas marcadores

CITOGENETICA MOLECULAR FISH

HIBRIDIZACION DE SECUENCIAS COMPLEMENTARIAS DE DNA

sonda marcada (biotina o digoxigenina)

⇓hidridiza con el DNA en estudio (secuencia diana)

⇓sitios de hibridización son visualizados como puntos

fluorescentes

CITOGENETICA MOLECULAR FISH

Tipos de sondas

centroméricas: específicas de regiones de DNA repetitivo⇓

identificar el numero de copias de un determinado cromosoma⇓

detección rápida de las trisomias cromosómicas mas frecuentes (13, 18, 21) y anormalidades de X - Y

CITOGENETICA MOLECULAR FISH

Tipos de sondasespecíficas para regiones no repetitivas

⇓evidencian un loci cuya alteración produce un determinado

cuadro clínico⇓

sindrome de Prader-Willi (15q11)sindrome de Cri du Chat (5p15.2)sindrome de Williams (7q11.23)sindrome de Kallmann (Xp22.3)

CITOGENETICA MOLECULAR FISH

Tipos de sondas

“chromosome painting”⇓

permiten evidenciar el material genético perteneciente a un determinado cromosoma

⇓anomalías cromosómicas estructurales complejas

CITOGENETICA MOLECULAR FISH

Diagnóstico

Preimplantacional: blastómeros, corpúsculo polar

Prenatal: vellosidad corial, líquido amniótico, sangre fetal

Postnatal: linfocitos, médula ósea, tejidos sólidos (tumores) material de aborto

CITOGENETICA MOLECULAR FISH

Diagnóstico preimplantacional (DPI)

Es una técnica que puede ser usada durante los procedimentos de fertilización in vitro, para el análisis genético de los embriones antes de la transferencia a el útero.

IGMIGM FISH EN EL DIAGNOSTICO FISH EN EL DIAGNOSTICO PREIMPLANTACIONALPREIMPLANTACIONAL

FISH EN DIAGNÓSTICO DE PREIMPLANTACIÓN

Reproducción Asistida⇓

procedimientos de micromanipulación ⇓

biopsia embrionaria⇓

técnicas de genética molecular aplicables en una única célula

FISH EN DIAGNÓSTICO DE PREIMPLANTACIÓN

DNA para el estudo es obtenido por biopsia :

del primer corpúsculo polar de ovocitos no fertilizados

de uno o mas blastómeros de un embrión en el estadio de clivage (usualmente 3 dias despues de la FIV: de 6-10 células)

de células del trofoectodermo en el estadio de blastocisto

FISH EN DIAGNÓSTICO DE PREIMPLANTACIÓN

Dos tipos de sondas son utilizadas 1- AneuScreen (Vysis) para la marcación de los cromosomas X, Y e 18 cromosomas 13 y 21

2- MultiVysion (Vysis) para la marcación de los cromosomas X, Y, 13, 18 e 21 (16)

FISH EN DIAGNOSTICOPREIMPLANTACIONAL

AneuScreen

(p4)

XXY, 1818

XY, 1818XXX, 181818

FISH multicolorida permite analizar simultaneamente en un único blastómero las aneuploidias mas comunes

(X, Y, 13, 18, 21 e 16)

.

FISH EM DIAGNOSTICOPREIMPLANTACIONAL

FISH EN DIAGNOSTICO PREIMPLANTACIONAL

Blastómeros

XX, 1313, 18, 2121

X

18

21

13

MONOSOMIA 18

FISH EN DIAGNOSTICO PREIMPLANTACIONAL DE SEXO

INDICACION

SINDROME X-FRAGIL

DPI : XX,1818

DPN : 46,XX (vellosidad)

18

X

FISH EN FISH EN DIAGNOSTICO

PREIMPLANTACIONAL DE SEXO

X

18

INDICACION

DISTROFIA MUSCULAR

DE DUCHENNE

DPI : XX, 1818

CARIOTIPO MULTICOLOR (SKY-FISH / M-FISH)

el espectro de emisión de

cada cromosoma es único y

diferenciable de los demás

⇓

neoplasias hematológicas

⇓translocaciones complejas

alteraciones cromosómicas crípticas

HIBRIDIZACION GENOMICA COMPARADA (CGH)

ADNs (tumoral y control normal)⇓

marcados con distintos fluorocromos)⇓

hibridizacion competitiva sobre cromosomas normales ↓ ↓ normales patológicas cromosomas amarillos detección de ganacia o perdida

⇓

COMPARACION DE LAS INTENSIDADES DE LAS SEÑALES DE HIBRIDIZACION

HIBRIDIZACION GENOMICA COMPARADA (CGH)

HIBRIDIZACION GENOMICA COMPARADA (CGH)