citogenetica molecular
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CITOGENÉTICA MOLECULAR
DIAGNÓSTICO POR FISH
Luz Mery Bernal Parra Ph.D
UNAD
2014 II
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DE LA MOLECULA DE ADN AL CROMOSOMA: NIVELES DE OBSERVACION
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CITOGENETICA MOLECULAR
Identificación y aislamiento de genes específicos
Diseño de sondas moleculares
Técnica de FISH (hibridización “in situ”por fluorescencia)
Núcleos interfásicos y/o metafásicos
Análisis de alteraciones cromosómicas numéricas y estructurales e identificación de cromosomas marcadores
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CITOGENETICA MOLECULAR FISH
HIBRIDIZACION DE SECUENCIAS COMPLEMENTARIAS DE DNA
sonda marcada (biotina o digoxigenina)
⇓hidridiza con el DNA en estudio (secuencia diana)
⇓sitios de hibridización son visualizados como puntos
fluorescentes
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CITOGENETICA MOLECULAR FISH
Tipos de sondas
centroméricas: específicas de regiones de DNA repetitivo⇓
identificar el numero de copias de un determinado cromosoma⇓
detección rápida de las trisomias cromosómicas mas frecuentes (13, 18, 21) y anormalidades de X - Y
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CITOGENETICA MOLECULAR FISH
Tipos de sondasespecíficas para regiones no repetitivas
⇓evidencian un loci cuya alteración produce un determinado
cuadro clínico⇓
sindrome de Prader-Willi (15q11)sindrome de Cri du Chat (5p15.2)sindrome de Williams (7q11.23)sindrome de Kallmann (Xp22.3)
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CITOGENETICA MOLECULAR FISH
Tipos de sondas
“chromosome painting”⇓
permiten evidenciar el material genético perteneciente a un determinado cromosoma
⇓anomalías cromosómicas estructurales complejas
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CITOGENETICA MOLECULAR FISH
Diagnóstico
Preimplantacional: blastómeros, corpúsculo polar
Prenatal: vellosidad corial, líquido amniótico, sangre fetal
Postnatal: linfocitos, médula ósea, tejidos sólidos (tumores) material de aborto
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CITOGENETICA MOLECULAR FISH
Diagnóstico preimplantacional (DPI)
Es una técnica que puede ser usada durante los procedimentos de fertilización in vitro, para el análisis genético de los embriones antes de la transferencia a el útero.
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IGMIGM FISH EN EL DIAGNOSTICO FISH EN EL DIAGNOSTICO PREIMPLANTACIONALPREIMPLANTACIONAL
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FISH EN DIAGNÓSTICO DE PREIMPLANTACIÓN
Reproducción Asistida⇓
procedimientos de micromanipulación ⇓
biopsia embrionaria⇓
técnicas de genética molecular aplicables en una única célula
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FISH EN DIAGNÓSTICO DE PREIMPLANTACIÓN
DNA para el estudo es obtenido por biopsia :
del primer corpúsculo polar de ovocitos no fertilizados
de uno o mas blastómeros de un embrión en el estadio de clivage (usualmente 3 dias despues de la FIV: de 6-10 células)
de células del trofoectodermo en el estadio de blastocisto
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FISH EN DIAGNÓSTICO DE PREIMPLANTACIÓN
Dos tipos de sondas son utilizadas 1- AneuScreen (Vysis) para la marcación de los cromosomas X, Y e 18 cromosomas 13 y 21
2- MultiVysion (Vysis) para la marcación de los cromosomas X, Y, 13, 18 e 21 (16)
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FISH EN DIAGNOSTICOPREIMPLANTACIONAL
AneuScreen
(p4)
XXY, 1818
XY, 1818XXX, 181818
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FISH multicolorida permite analizar simultaneamente en un único blastómero las aneuploidias mas comunes
(X, Y, 13, 18, 21 e 16)
.
FISH EM DIAGNOSTICOPREIMPLANTACIONAL
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FISH EN DIAGNOSTICO PREIMPLANTACIONAL
Blastómeros
XX, 1313, 18, 2121
X
18
21
13
MONOSOMIA 18
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FISH EN DIAGNOSTICO PREIMPLANTACIONAL DE SEXO
INDICACION
SINDROME X-FRAGIL
DPI : XX,1818
DPN : 46,XX (vellosidad)
18
X
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FISH EN FISH EN DIAGNOSTICO
PREIMPLANTACIONAL DE SEXO
X
18
INDICACION
DISTROFIA MUSCULAR
DE DUCHENNE
DPI : XX, 1818
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CARIOTIPO MULTICOLOR (SKY-FISH / M-FISH)
el espectro de emisión de
cada cromosoma es único y
diferenciable de los demás
⇓
neoplasias hematológicas
⇓translocaciones complejas
alteraciones cromosómicas crípticas
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HIBRIDIZACION GENOMICA COMPARADA (CGH)
ADNs (tumoral y control normal)⇓
marcados con distintos fluorocromos)⇓
hibridizacion competitiva sobre cromosomas normales ↓ ↓ normales patológicas cromosomas amarillos detección de ganacia o perdida
⇓
COMPARACION DE LAS INTENSIDADES DE LAS SEÑALES DE HIBRIDIZACION
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HIBRIDIZACION GENOMICA COMPARADA (CGH)
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HIBRIDIZACION GENOMICA COMPARADA (CGH)