treball de recerca 2017-18 -...
TRANSCRIPT
Treball de
recerca
2017-18
Pagraveg
Introduccioacute 5
Quegrave eacutes el cagravencer 6
Origen del cagravencer La carcinogegravenesi 7
Propagacioacute del cagravencer en fase de progressioacute 9
Classificacioacute Carcinoma 10
Sarcoma 11
Leucegravemia 12
Limfoma 13
El cagravencer de progravestata 14
Cures per el cagravencer de progravestata 16
Tractament amb vacunes 17
Les vacunes de DNA 18
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
1 Liposomes 19
2 Electroporacioacute 20
Experimentacioacute animal 21
El model animal 22
El principi de les 3 Rrsquos 23
AMM ndash Declaracioacute de Helsinki 24
Legislacioacute EspanyolaEuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute 25
El Model Humanitzat ldquoNude Mouserdquo 26
ldquoNude Mouserdquo 27
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals 28
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute 29
A 1) Memograveria del projecte 30
A 2) Memograveria dels procediments 31
Criteris de Punt final 32
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre 33 A 4) Resum no tegravecnic 34
Pagraveg
Pragravectica 35
Documents ndash Comitegrave drsquoegravetica -Primer i segon document 36
- Tercer document 37
- Quart document 38
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari (1 2 3) 39
4 El vestidor 40
5 Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute) 41
Cabina de flux laminar 42
Magravequina drsquoanestegravesia 43
Electroporador 44
Megravetode experimental basat en la investigacioacute (1 2 3) 45
4 Experimentacioacute 46
5 Disseny de lrsquoexperiment 49
51 Control ndash 52 Regraveplica 53
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute 54
Eutanagravesia dels ratolins 57
7 Conclusions de lrsquoestudi 60
Entrevista 62
Conclusioacute 64
Annexos 66
Bibliografia ndash webgrafia 68
Agraiumlments 70
This project reports on two topics
The first topic is about cancer and the different types of cancer that exist After the
introduction to know about cancer that is done in this project it is emphasized with
prostate cancer and it is explained how it is and the treatments that are currently
used
The second topic is about the importance of experimentation animals when doing
research for example for a new treatment of prostate cancer But a certain process
must be carried out in order to start an investigation Here it is explained the process
that must be done before beginning an experimentation the processes that must be
followed during the study and what is done after finishing the investigation
Vaig decidir fer aquest tema per el meu Treball de Recerca perquegrave mrsquoagrada tot el que
estagrave relacionat amb els animals i la biologia ja que trobo que soacuten temes molt
interessants i importants per entendre realment quegrave som i d`on venim i tambeacute perquegrave
crec que srsquoha de donar especial importagravencia a la natura ja que gragravecies a ella eacutes possible
la vida i per uacuteltim perquegrave vull estudiar i dedicar-me a la veterinagraveria
Des del moment en el que em van dir que havia de fer el treball de Recerca vaig tenir
clar que seria de biologia Despreacutes el meu tutor del treball em va parlar sobre el
projecte Argoacute que porta la UAB projecte en el qual la universitat ofereix uns certs
temes per a fer el Treball de Recerca i srsquoencarreguen de que trsquoassessorin en el treball
especialistes en el tema que srsquoelegeix A meacutes a meacutes es teacute acceacutes a informacioacute
privilegiada i a una part pragravectica meacutes desenvolupada i rica El meu tutor em va animar
a que mires el temes i que em presentes com a voluntagraveria Vaig veure que hi havia un
tema de veterinagraveria que tractava la discussioacute actual que hi ha en la utilitzacioacute drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute Tema el qual trobo molt interessant ja que tindria la possibilitat
drsquoinformar-me dels dos punts de vista els dels investigadors i els dels defensors dels
drets animals i aixiacute poder arribar jo a la meva progravepia conclusioacute despreacutes drsquohaver conegut
els dos punts de vista i les seves respectives premisses
5
na de les malalties meacutes antiga i mortiacutefera que ha existit a la Terra ha sigut i eacutes el
cagravencer
El cagravencer ha estat present sempre en les nostres vides drsquouna manera meacutes o menys
propera Aquesta malaltia afecta tant a persones com animals i es pot manifestar a
qualsevol edat i es poden presentar meacutes de cent tipus diferents de cagravencer uns meacutes
mortiacutefers que drsquoaltres
El cagravencer eacutes una de les primeres causes de mort mundial i aquesta malaltia va afectar
aproximadament a meacutes de 32 milions de persones en el moacuten lrsquoany 2016 i 82 milions
van morir de cagravencer
Un dels cagravencers meacutes comuns eacutes el de progravestata que el pateixen meacutes drsquoun milioacute drsquohomes
cada any i del qual encara no srsquoha trobat una cura eficaccedil del tot
Gragravecies a la medicina moderna i la investigacioacute biomegravedica ha augmentat la qualitat i
lrsquoesperanccedila de vida dels afectats i tambeacute srsquohan pogut fer avanccedilos importants per
arribar a possibles cures per al cagravencer Per poder seguir avanccedilant srsquoha de seguir
experimentant perograve es va crear una llei (Declaracioacute de Helsinki 1944) on es dicta que
abans de provar un tractament megravedic amb humans primer srsquoha de fer amb animals
per la seguretat dels primers I eacutes aquiacute on entra en joc el paper dels animals
drsquoexperimentacioacute
Aquest treball tractaragrave els diferents tipus de cagravencer concretant amb el cagravencer de
progravestata ja que gragravecies al Projecte Argoacute de la UAB vaig poder assistir a una investigacioacute
real per al desenvolupament drsquoun tractament per al cagravencer de progravestata
Per un altre costat el treball tambeacute tractaragrave el tema de la legislacioacute que defensa els
animals drsquoexperimentacioacute La hipogravetesi principal del treball era Potser lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute no eacutes egravetic Tenia aquesta hipogravetesi perquegrave pensava que no hi havia
cap llei que regulava lrsquoexperimentacioacute animal i els animals patien de manera
innecessagraveria
Els objectius del treball soacuten comprovar segons la meva experiegravencia viscuda en la
investigacioacute si realment es compleix o no la meva hipogravetesi i arribar a una conclusioacute
raonada respecte la meva pregunta
Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
U
6
Quegrave eacutes el cagravencer
Tots els eacutessers vius estem formats per una o meacutes cegravelmiddotlules
Aquestes cegravelmiddotlules es divideixen contiacutenuament i de forma regular per reemplaccedilar a les
cegravelmiddotlules que ja soacuten mortes o velles perquegrave ja no compleixen les seves funcions Aixiacute es
manteacute la integritat i un funcionament correcte de tots el ogravergans
El proceacutes de divisioacute de les cegravelmiddotlules estagrave regulat per uns mecanismes que indiquen a la
cegravelmiddotlula quan ha de comenccedilar a dividir-se i quan no Quan es
produeix un dany en el DNA drsquouna cegravelmiddotlula que no pot ser
reparat es porta a terme lrsquoautodestruccioacute drsquoaquesta cegravelmiddotlula
aquest proceacutes tambeacute srsquoanomena mort celmiddotlular programada o
apoptosi
Per tant el cagravencer eacutes un tipus de malaltia que afecta als eacutessers
pluricelmiddotlulars en que un grup de cegravelmiddotlules desenvolupen un
creixement descontrolat i es multiplica el nombre de divisions
celmiddotlulars normals perquegrave per un dany celmiddotlular no es porta a
terme la apoptosi Aquestes cegravelmiddotlules envaeixen i destrueixen
teixits i a vegades hi ha una metagravestasi que es dona quan les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes sestenen a altres punts del cos a traveacutes
de la limfa o la sang creant altres tumors
Aquestes tres propietats (creixement celmiddotlular descontrolat
invasioacutedestruccioacute de teixitsogravergans i metagravestasi) soacuten las que
defineixen a un tumor maligne
Tambeacute existeixen els tumors benignes que tenen la manca de
metagravestasi alguns poden ser perjudicials per a la salut i ni ha
drsquoaltres que no (berrugues)
La majoria de cagravencers formen un tumor perograve alguns no ho fan
com per exemple la leucegravemia
El cagravencer pot afectar a animals a plantes i a humans es pot patir a qualsevol edat i fins
hi tot pot afectar als fetus El risc de patir cagravencer augmenta amb lrsquoedat
Avui en dia es poden trobar meacutes de cent tipus de cagravencer
La branca de la medicina que socupa de lestudi el diagnogravestic el tractament i la
prevencioacute del cagravencer eacutes loncologia
Divisioacute celmiddotlular normal
Divisioacute de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
Dany celmiddotlular
sense reparacioacute
Apoptosi
No hi ha
apoptosi
7
Origen del cagravencer
Gairebeacute tots els cagravencers soacuten provocats per anormalitats en el material genegravetic de les
cegravelmiddotlules afectades Aquestes anormalitats solen ser degudes als carcinogravegens que soacuten
agents fiacutesics (radiacions) quiacutemics o biologravegics potencialment capaccedilos de produir cagravencer
al exposar-se a teixits vius com per exemple el fum de tabac radiacions substagravencies
quiacutemiquesetc Altres anormalitats genegravetiques que provoquen cagravencer es poden
adquirir aleatograveriament per culpa derrors en la replicacioacute de lADN o soacuten heretades
dels progenitors i per tant estan presents a totes les cegravelmiddotlules del nou individu des del
naixement
Una vegada una cegravelmiddotlula presenti anomalies en el seu material genegravetic aquesta
adquiriragrave la capacitat de multiplicar-se descontroladament i drsquoenvair teixits i altres
ogravergans Aquest proceacutes es denominaragrave carcinogegravenesi
La carcinogegravenesi pot durar anys i passa per diferents fases
La primera fase comenccedila amb la mutacioacute de la primera cegravelmiddotlula succeeix a nivell
del genoma i les alteracions poden trobar-se
tant en tumors benignes com en malignes
Una sola mutacioacute no eacutes suficient per a que es
generi un cagravencer perograve aquesta cegravelmiddotlula
mutada eacutes la que pot iniciar el proceacutes La
condicioacute meacutes important per a lrsquoevolucioacute drsquoun
cagravencer eacutes que la cegravelmiddotlula mutada sigui capaccedil
de dividir-se Una vegada aquesta primera
cegravelmiddotlula es divideix com a resultat les
cegravelmiddotlules filles mutades comencen a
multiplicar-se a una velocitat superior a lo
normal transmetent als seus descendents lrsquoanomalia genegravetica de la cegravelmiddotlula
mare
Aquesta fase srsquoanomena fase drsquoiniciacioacute tumoral i les cegravelmiddotlules involucrades
en aquesta fase es diuen cegravelmiddotlules iniciades Lrsquoalteracioacute que han produiumlt les
cegravelmiddotlules iniciades eacutes irreversible perograve es insuficient per desenvolupar un
cagravencer
Carcinogravegens
meacutes
comuns
8
La segona fase comenccedila quan els agents carcinogravegens actuen de nou i
repetidament sobre les cegravelmiddotlules iniciades Aquest fet provoca que la divisioacute
celmiddotlular sigui meacutes ragravepida encara i com a consequumlegravencia es multipliquin
cegravelmiddotlules mutades amb meacutes probabilitat de que es produeixin noves
mutacions Aixiacute comenccedila la creacioacute drsquoun tumor i tambeacute pot passar tan en
tumors malignes com de benignes
Aquesta fase es coneix com la fase de promocioacute i les cegravelmiddotlules que hi
participen srsquoanomenen cegravelmiddotlules promocionades Alguns factors que actuen
en aquesta fase serien el tabac la mala alimentacioacute beure alcohol etc
La tercera fase srsquoinicia quan les cegravelmiddotlules iniciades i les promocionades
pateixen noves mutacions per culpa de carcinogravegens i les divisions
descontrolades entre cegravelmiddotlules cada vegada meacutes mutades
Cada vegada hi ha meacutes anomalies en el seu codi genegravetic en el seu creixement
i en el seu comportament com a cegravelmiddotlula
Aquesta tercera fase nomeacutes es pateix si es tracta drsquoun tumor maligne
Aquesta fase srsquoanomena fase de progressioacute ja que les cegravelmiddotlules adquireixen la
capacitat drsquoinvasioacute infiltrant-se en teixits propers o en drsquoaltres situats a certa
distancia viatjant a traveacutes del sistema sanguini o limfagravetic provocant aixiacute les
metagravestasis
Fase drsquoiniciacioacute
tumoral
Fase de
promocioacute
Fase de
progressioacute
9
Propagacioacute del cagravencer en fase de progressioacute
Els cagravencers soacuten capaccedilos de propagar-se per el cos a partir de dos mecanismes
invasioacute i metagravestasi
Lrsquo invasioacute eacutes la migracioacute i la penetracioacute directa de les cegravelmiddotlules mutades en teixits o
ogravergans propers al tumor drsquoorigen
La metagravestasi eacutes el proceacutes de propagacioacute drsquoun tumor cancerigen a un altre ogravergan
diferent al que es va iniciar Succeeix per mitjagrave dels vasos sanguinis o limfagravetics
Primer algunes de les
cegravelmiddotlules malignes se
separen del tumor
inicial i a continuacioacute
penetren el vasos
sanguinis o limfagravetics
viatgen a traveacutes de la
circulacioacute sanguiacutenia i
finalment creixen i es
divideixen en un nou
teixit o ogravergan creant
un nou tumor maligne
El nou tumor
metastagravetic eacutes del
mateix tipus de cagravencer
que el del tumor
drsquoorigen
La metagravestasi eacutes la
causa principal de
mort drsquoun eacutesser viu
amb cagravencer
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen els teixits i
vasos sanguinis propers
Les cegravelmiddotlules soacuten
transportades
per el sistema
circulatori a
ogravergans i teixits
llunyans
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen un nou ogravergan i creix un
nou tumor en ell
10
Classificacioacute
Els cagravencers es classifiquen segons la histologia (lrsquoestructura i les caracteriacutestiques dels
teixits) i la ubicacioacute del teixit on es troba el tumor
Carcinoma Eacutes el tipus de cagravencer meacutes comuacute el 80 de cagravencers soacuten
carcinomes Aquest cagravencer comenccedila a la pell o als teixits que cobreixen els
ogravergans interns (cegravelmiddotlules epitelials)
Algunes drsquoaquestes cegravelmiddotlules tenen diferents caracteriacutestiques i per aquest
motiu tenen un nom especial Les meacutes importants soacuten
Adenocarcinoma cagravencer del teixit glandular (mames progravestata)
Carcinoma de cegravelmiddotlules escamoses cagravencer de les cegravelmiddotlules no glandulars
(esogravefag coll del uacuteter)
Carcinoma de cegravelmiddotlules basals (Basalioma) avarca un 78 de tots els
cagravencers cagravencer de pell meacutes comuacute Rarament produeix metagravestasi
Melanoma cagravencer de les cegravelmiddotlules que produeixen la coloracioacute de la pell
eacutes el meacutes perilloacutes per quegrave porta a terme la metagravestasi
Els cagravencers de tipus carcinoma meacutes comuns soacuten el cagravencer de pit de progravestata
de pulmoacute i de cogravelon
11
Sarcoma Aquest tipus de cagravencer comenccedila en els teixits connectius
com els cartiacutelags el greix els muacutesculs els vasos sanguinis els ossos etc Dependent de la cegravelmiddotlula on srsquoorigina el cagravencer es poden diferenciar amb
diferents noms els meacutes comuns soacuten els seguumlents
Osteosarcoma Cagravencer que deriva de lrsquoos
Sol aparegraveixer en ossos llargs
Eacutes el sarcoma meacutes frequumlent i eacutes el vuitegrave cagravencer infantil meacutes frequumlent
Condrosarcoma Lrsquoorigen del tumor es troba en
els cartiacutelags Eacutes el segon tipus de sarcoma meacutes
comuacute Els tumors solen estar en les costelles la
pelvis el fegravemur i llsquohuacutemer
Liposarcoma Cagravencer que teacute origen
en el greix (teixit adipoacutes)
Sol apareixeragrave en les extremitats
inferiors braccedilos pit i coll
Angiosarcoma Sarcoma que deriva dels
vasos sanguinis o limfagravetics de qualsevol
teixit drsquoun organisme
12
Leucegravemia Es coneix com el cagravencer de sang aquest cagravencer comenccedila en
els teixits que formen la sang com la medulmiddotla ogravessia Aquesta anomalia
provoca un augment descontrolat de glogravebuls blancs (cegravelmiddotlules que es troben en
la sang i soacuten les responsables de les respostes immunes)
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes impedeixen que es produeixin glogravebuls vermells
plaquetes (encarregades de tancar ferides) i glogravebuls blancs madurs normals
Eacutes el cagravencer diagnosticat meacutes frequumlentment en nens
Aquest cagravencer es va tornant cada vegada meacutes mortal a mesura que
disminueixen les cegravelmiddotlules sanguiacutenies normals
Les cegravelmiddotlules mutades es poden propagar al torrent sanguini i tambeacute poden
viatjar al cervell a la medulmiddotla espinal i altres parts del cos
-En les leucegravemies hi ha caregravencia de tumoracioacute srsquoafecta la sang i la medulmiddotla
ogravessia
La leucegravemia es pot classificar en diferents tipus Segons el tipus de funcioacute de la cegravelmiddotlula alterada Leucegravemia mieloide Leucegravemia limfoide
Segons lrsquoestat de maduracioacute de les cegravelmiddotlules leucegravemiques
Aguda cegravelmiddotlules immadures Aquestes no realitzen les funcions
Crogravenica es produeixen masses glogravebuls blancs madurs perograve soacuten
anormals La seva progressioacute eacutes meacutes lenta
13
Limfoma Aquest cagravencer comenccedila a les cegravelmiddotlules del sistema limfagravetic
(sistema que teacute com a funcioacute combatre infeccions i malalties i forma part del
sistema immunitari) El sistema limfagravetic transporta en els vasos limfagravetics
(semblants als sanguinis) un liacutequid anomenat Limfa La limfa conteacute limfogravecits
(que soacuten un tipus de glogravebuls blancs) Les cegravelmiddotlules afectades en aquest cas soacuten
els glogravebuls blancs i degut a que el sistema limfagravetic es troba per tot el cos el
limfoma es pot presentar a gairebeacute qualsevol part de cos Aquest tipus de
cagravencer es pot presentar tant en nens com en adults
-Hi ha dos tipus de limfomes
El limfoma de Hodgkin
El limfoma de NO Hodgkin
-Els dos tipus de limfoma es poden diferenciar a partir de les diverses
caracteriacutestiques de les cegravelmiddotlules malignes (que abans eren limfogravecits)
Caracteriacutestiques com per exemple el seu comportament la seva propagacioacute i
la seva resposta al tractament
El limfoma de NO Hodgkin eacutes el tipus meacutes comuacute
El tipus de limfoma es determina amb la biogravepsia i lrsquo examen de les cegravelmiddotlules
canceriacutegenes amb un microscopi per observar de quin tipus soacuten les cegravelmiddotlules
que han mutat
Quan srsquoobserven les cegravelmiddotlules canceriacutegenes i
aquestes soacuten un tipus de cegravelmiddotlules anomenades
ldquoCegravelmiddotlules de Reed-Sternbergrdquo (cegravelmiddotlules gegants
malignes que inicialment eren limfogravecits de
tipus B) el limfoma eacutes de tipus Limfoma
Hodgkin
Quan aquestes cegravelmiddotlules no es troben presents el cagravencer es classifica com a
Limfoma de NO Hodgkin
ldquoCegravelmiddotlules Limfoma de NO Hodgkinrdquo
14
El cagravencer de progravestata
El cagravencer de progravestata a nivell mundial eacutes el segon cagravencer meacutes diagnosticat en homes
despreacutes del cagravencer de pell perograve en Europa des de fa uns anys el cagravencer de progravestata
srsquoha convertit en el primer cagravencer meacutes diagnosticat A meacutes a meacutes eacutes una de les
primeres causes de mort en homes
El cagravencer de progravestata comenccedila quan algunes cegravelmiddotlules prostagravetiques de la progravestata
muten i comencen a multiplicar-se descontroladament Encara no se sap quegrave eacutes el
que causa aquest cagravencer perograve siacute es coneixen alguns factors a tenir en compte per al
desenvolupament drsquoaquest cagravencer com la genegravetica i la dieta Les cegravelmiddotlules mutades
poden fer metagravestasi especialment als ossos
El cagravencer de progravestata afecta meacutes frequumlentment a homes duns cinquanta anys
El creixement tumoral eacutes moderadament lent hi encara havent-trsquohi hagut metagravestasi
hi pot haver una supervivegravencia prolongada
El tumor maligne pot creacuteixer de tres maneres
Creixement local Es produeix per el creixement del tumor cancerigen que
envaeix la cagravepsula prostagravetica
Meacutes tard el tumor eacutes capaccedil de trencar la
capa prostagravetica degut la seva mida i aixiacute
el tumor segueix creixent envaint altres
teixits i ogravergans propers a la progravestata
Que les cegravelmiddotlules mutades envaeixin la
bufeta i el recte eacutes un proceacutes lent
La progravestata eacutes una glagravendula
sexual que nomeacutes presenta el
sexe masculiacute aquesta glagravendula
eacutes lrsquoencarregada drsquoelaborar un
liacutequid que forma part del
semen
La progravestata es troba sota de la
bufeta i envolta la uretra
Cagravepsula protagravestica
Bufeta
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
Pagraveg
Introduccioacute 5
Quegrave eacutes el cagravencer 6
Origen del cagravencer La carcinogegravenesi 7
Propagacioacute del cagravencer en fase de progressioacute 9
Classificacioacute Carcinoma 10
Sarcoma 11
Leucegravemia 12
Limfoma 13
El cagravencer de progravestata 14
Cures per el cagravencer de progravestata 16
Tractament amb vacunes 17
Les vacunes de DNA 18
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
1 Liposomes 19
2 Electroporacioacute 20
Experimentacioacute animal 21
El model animal 22
El principi de les 3 Rrsquos 23
AMM ndash Declaracioacute de Helsinki 24
Legislacioacute EspanyolaEuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute 25
El Model Humanitzat ldquoNude Mouserdquo 26
ldquoNude Mouserdquo 27
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals 28
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute 29
A 1) Memograveria del projecte 30
A 2) Memograveria dels procediments 31
Criteris de Punt final 32
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre 33 A 4) Resum no tegravecnic 34
Pagraveg
Pragravectica 35
Documents ndash Comitegrave drsquoegravetica -Primer i segon document 36
- Tercer document 37
- Quart document 38
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari (1 2 3) 39
4 El vestidor 40
5 Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute) 41
Cabina de flux laminar 42
Magravequina drsquoanestegravesia 43
Electroporador 44
Megravetode experimental basat en la investigacioacute (1 2 3) 45
4 Experimentacioacute 46
5 Disseny de lrsquoexperiment 49
51 Control ndash 52 Regraveplica 53
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute 54
Eutanagravesia dels ratolins 57
7 Conclusions de lrsquoestudi 60
Entrevista 62
Conclusioacute 64
Annexos 66
Bibliografia ndash webgrafia 68
Agraiumlments 70
This project reports on two topics
The first topic is about cancer and the different types of cancer that exist After the
introduction to know about cancer that is done in this project it is emphasized with
prostate cancer and it is explained how it is and the treatments that are currently
used
The second topic is about the importance of experimentation animals when doing
research for example for a new treatment of prostate cancer But a certain process
must be carried out in order to start an investigation Here it is explained the process
that must be done before beginning an experimentation the processes that must be
followed during the study and what is done after finishing the investigation
Vaig decidir fer aquest tema per el meu Treball de Recerca perquegrave mrsquoagrada tot el que
estagrave relacionat amb els animals i la biologia ja que trobo que soacuten temes molt
interessants i importants per entendre realment quegrave som i d`on venim i tambeacute perquegrave
crec que srsquoha de donar especial importagravencia a la natura ja que gragravecies a ella eacutes possible
la vida i per uacuteltim perquegrave vull estudiar i dedicar-me a la veterinagraveria
Des del moment en el que em van dir que havia de fer el treball de Recerca vaig tenir
clar que seria de biologia Despreacutes el meu tutor del treball em va parlar sobre el
projecte Argoacute que porta la UAB projecte en el qual la universitat ofereix uns certs
temes per a fer el Treball de Recerca i srsquoencarreguen de que trsquoassessorin en el treball
especialistes en el tema que srsquoelegeix A meacutes a meacutes es teacute acceacutes a informacioacute
privilegiada i a una part pragravectica meacutes desenvolupada i rica El meu tutor em va animar
a que mires el temes i que em presentes com a voluntagraveria Vaig veure que hi havia un
tema de veterinagraveria que tractava la discussioacute actual que hi ha en la utilitzacioacute drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute Tema el qual trobo molt interessant ja que tindria la possibilitat
drsquoinformar-me dels dos punts de vista els dels investigadors i els dels defensors dels
drets animals i aixiacute poder arribar jo a la meva progravepia conclusioacute despreacutes drsquohaver conegut
els dos punts de vista i les seves respectives premisses
5
na de les malalties meacutes antiga i mortiacutefera que ha existit a la Terra ha sigut i eacutes el
cagravencer
El cagravencer ha estat present sempre en les nostres vides drsquouna manera meacutes o menys
propera Aquesta malaltia afecta tant a persones com animals i es pot manifestar a
qualsevol edat i es poden presentar meacutes de cent tipus diferents de cagravencer uns meacutes
mortiacutefers que drsquoaltres
El cagravencer eacutes una de les primeres causes de mort mundial i aquesta malaltia va afectar
aproximadament a meacutes de 32 milions de persones en el moacuten lrsquoany 2016 i 82 milions
van morir de cagravencer
Un dels cagravencers meacutes comuns eacutes el de progravestata que el pateixen meacutes drsquoun milioacute drsquohomes
cada any i del qual encara no srsquoha trobat una cura eficaccedil del tot
Gragravecies a la medicina moderna i la investigacioacute biomegravedica ha augmentat la qualitat i
lrsquoesperanccedila de vida dels afectats i tambeacute srsquohan pogut fer avanccedilos importants per
arribar a possibles cures per al cagravencer Per poder seguir avanccedilant srsquoha de seguir
experimentant perograve es va crear una llei (Declaracioacute de Helsinki 1944) on es dicta que
abans de provar un tractament megravedic amb humans primer srsquoha de fer amb animals
per la seguretat dels primers I eacutes aquiacute on entra en joc el paper dels animals
drsquoexperimentacioacute
Aquest treball tractaragrave els diferents tipus de cagravencer concretant amb el cagravencer de
progravestata ja que gragravecies al Projecte Argoacute de la UAB vaig poder assistir a una investigacioacute
real per al desenvolupament drsquoun tractament per al cagravencer de progravestata
Per un altre costat el treball tambeacute tractaragrave el tema de la legislacioacute que defensa els
animals drsquoexperimentacioacute La hipogravetesi principal del treball era Potser lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute no eacutes egravetic Tenia aquesta hipogravetesi perquegrave pensava que no hi havia
cap llei que regulava lrsquoexperimentacioacute animal i els animals patien de manera
innecessagraveria
Els objectius del treball soacuten comprovar segons la meva experiegravencia viscuda en la
investigacioacute si realment es compleix o no la meva hipogravetesi i arribar a una conclusioacute
raonada respecte la meva pregunta
Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
U
6
Quegrave eacutes el cagravencer
Tots els eacutessers vius estem formats per una o meacutes cegravelmiddotlules
Aquestes cegravelmiddotlules es divideixen contiacutenuament i de forma regular per reemplaccedilar a les
cegravelmiddotlules que ja soacuten mortes o velles perquegrave ja no compleixen les seves funcions Aixiacute es
manteacute la integritat i un funcionament correcte de tots el ogravergans
El proceacutes de divisioacute de les cegravelmiddotlules estagrave regulat per uns mecanismes que indiquen a la
cegravelmiddotlula quan ha de comenccedilar a dividir-se i quan no Quan es
produeix un dany en el DNA drsquouna cegravelmiddotlula que no pot ser
reparat es porta a terme lrsquoautodestruccioacute drsquoaquesta cegravelmiddotlula
aquest proceacutes tambeacute srsquoanomena mort celmiddotlular programada o
apoptosi
Per tant el cagravencer eacutes un tipus de malaltia que afecta als eacutessers
pluricelmiddotlulars en que un grup de cegravelmiddotlules desenvolupen un
creixement descontrolat i es multiplica el nombre de divisions
celmiddotlulars normals perquegrave per un dany celmiddotlular no es porta a
terme la apoptosi Aquestes cegravelmiddotlules envaeixen i destrueixen
teixits i a vegades hi ha una metagravestasi que es dona quan les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes sestenen a altres punts del cos a traveacutes
de la limfa o la sang creant altres tumors
Aquestes tres propietats (creixement celmiddotlular descontrolat
invasioacutedestruccioacute de teixitsogravergans i metagravestasi) soacuten las que
defineixen a un tumor maligne
Tambeacute existeixen els tumors benignes que tenen la manca de
metagravestasi alguns poden ser perjudicials per a la salut i ni ha
drsquoaltres que no (berrugues)
La majoria de cagravencers formen un tumor perograve alguns no ho fan
com per exemple la leucegravemia
El cagravencer pot afectar a animals a plantes i a humans es pot patir a qualsevol edat i fins
hi tot pot afectar als fetus El risc de patir cagravencer augmenta amb lrsquoedat
Avui en dia es poden trobar meacutes de cent tipus de cagravencer
La branca de la medicina que socupa de lestudi el diagnogravestic el tractament i la
prevencioacute del cagravencer eacutes loncologia
Divisioacute celmiddotlular normal
Divisioacute de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
Dany celmiddotlular
sense reparacioacute
Apoptosi
No hi ha
apoptosi
7
Origen del cagravencer
Gairebeacute tots els cagravencers soacuten provocats per anormalitats en el material genegravetic de les
cegravelmiddotlules afectades Aquestes anormalitats solen ser degudes als carcinogravegens que soacuten
agents fiacutesics (radiacions) quiacutemics o biologravegics potencialment capaccedilos de produir cagravencer
al exposar-se a teixits vius com per exemple el fum de tabac radiacions substagravencies
quiacutemiquesetc Altres anormalitats genegravetiques que provoquen cagravencer es poden
adquirir aleatograveriament per culpa derrors en la replicacioacute de lADN o soacuten heretades
dels progenitors i per tant estan presents a totes les cegravelmiddotlules del nou individu des del
naixement
Una vegada una cegravelmiddotlula presenti anomalies en el seu material genegravetic aquesta
adquiriragrave la capacitat de multiplicar-se descontroladament i drsquoenvair teixits i altres
ogravergans Aquest proceacutes es denominaragrave carcinogegravenesi
La carcinogegravenesi pot durar anys i passa per diferents fases
La primera fase comenccedila amb la mutacioacute de la primera cegravelmiddotlula succeeix a nivell
del genoma i les alteracions poden trobar-se
tant en tumors benignes com en malignes
Una sola mutacioacute no eacutes suficient per a que es
generi un cagravencer perograve aquesta cegravelmiddotlula
mutada eacutes la que pot iniciar el proceacutes La
condicioacute meacutes important per a lrsquoevolucioacute drsquoun
cagravencer eacutes que la cegravelmiddotlula mutada sigui capaccedil
de dividir-se Una vegada aquesta primera
cegravelmiddotlula es divideix com a resultat les
cegravelmiddotlules filles mutades comencen a
multiplicar-se a una velocitat superior a lo
normal transmetent als seus descendents lrsquoanomalia genegravetica de la cegravelmiddotlula
mare
Aquesta fase srsquoanomena fase drsquoiniciacioacute tumoral i les cegravelmiddotlules involucrades
en aquesta fase es diuen cegravelmiddotlules iniciades Lrsquoalteracioacute que han produiumlt les
cegravelmiddotlules iniciades eacutes irreversible perograve es insuficient per desenvolupar un
cagravencer
Carcinogravegens
meacutes
comuns
8
La segona fase comenccedila quan els agents carcinogravegens actuen de nou i
repetidament sobre les cegravelmiddotlules iniciades Aquest fet provoca que la divisioacute
celmiddotlular sigui meacutes ragravepida encara i com a consequumlegravencia es multipliquin
cegravelmiddotlules mutades amb meacutes probabilitat de que es produeixin noves
mutacions Aixiacute comenccedila la creacioacute drsquoun tumor i tambeacute pot passar tan en
tumors malignes com de benignes
Aquesta fase es coneix com la fase de promocioacute i les cegravelmiddotlules que hi
participen srsquoanomenen cegravelmiddotlules promocionades Alguns factors que actuen
en aquesta fase serien el tabac la mala alimentacioacute beure alcohol etc
La tercera fase srsquoinicia quan les cegravelmiddotlules iniciades i les promocionades
pateixen noves mutacions per culpa de carcinogravegens i les divisions
descontrolades entre cegravelmiddotlules cada vegada meacutes mutades
Cada vegada hi ha meacutes anomalies en el seu codi genegravetic en el seu creixement
i en el seu comportament com a cegravelmiddotlula
Aquesta tercera fase nomeacutes es pateix si es tracta drsquoun tumor maligne
Aquesta fase srsquoanomena fase de progressioacute ja que les cegravelmiddotlules adquireixen la
capacitat drsquoinvasioacute infiltrant-se en teixits propers o en drsquoaltres situats a certa
distancia viatjant a traveacutes del sistema sanguini o limfagravetic provocant aixiacute les
metagravestasis
Fase drsquoiniciacioacute
tumoral
Fase de
promocioacute
Fase de
progressioacute
9
Propagacioacute del cagravencer en fase de progressioacute
Els cagravencers soacuten capaccedilos de propagar-se per el cos a partir de dos mecanismes
invasioacute i metagravestasi
Lrsquo invasioacute eacutes la migracioacute i la penetracioacute directa de les cegravelmiddotlules mutades en teixits o
ogravergans propers al tumor drsquoorigen
La metagravestasi eacutes el proceacutes de propagacioacute drsquoun tumor cancerigen a un altre ogravergan
diferent al que es va iniciar Succeeix per mitjagrave dels vasos sanguinis o limfagravetics
Primer algunes de les
cegravelmiddotlules malignes se
separen del tumor
inicial i a continuacioacute
penetren el vasos
sanguinis o limfagravetics
viatgen a traveacutes de la
circulacioacute sanguiacutenia i
finalment creixen i es
divideixen en un nou
teixit o ogravergan creant
un nou tumor maligne
El nou tumor
metastagravetic eacutes del
mateix tipus de cagravencer
que el del tumor
drsquoorigen
La metagravestasi eacutes la
causa principal de
mort drsquoun eacutesser viu
amb cagravencer
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen els teixits i
vasos sanguinis propers
Les cegravelmiddotlules soacuten
transportades
per el sistema
circulatori a
ogravergans i teixits
llunyans
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen un nou ogravergan i creix un
nou tumor en ell
10
Classificacioacute
Els cagravencers es classifiquen segons la histologia (lrsquoestructura i les caracteriacutestiques dels
teixits) i la ubicacioacute del teixit on es troba el tumor
Carcinoma Eacutes el tipus de cagravencer meacutes comuacute el 80 de cagravencers soacuten
carcinomes Aquest cagravencer comenccedila a la pell o als teixits que cobreixen els
ogravergans interns (cegravelmiddotlules epitelials)
Algunes drsquoaquestes cegravelmiddotlules tenen diferents caracteriacutestiques i per aquest
motiu tenen un nom especial Les meacutes importants soacuten
Adenocarcinoma cagravencer del teixit glandular (mames progravestata)
Carcinoma de cegravelmiddotlules escamoses cagravencer de les cegravelmiddotlules no glandulars
(esogravefag coll del uacuteter)
Carcinoma de cegravelmiddotlules basals (Basalioma) avarca un 78 de tots els
cagravencers cagravencer de pell meacutes comuacute Rarament produeix metagravestasi
Melanoma cagravencer de les cegravelmiddotlules que produeixen la coloracioacute de la pell
eacutes el meacutes perilloacutes per quegrave porta a terme la metagravestasi
Els cagravencers de tipus carcinoma meacutes comuns soacuten el cagravencer de pit de progravestata
de pulmoacute i de cogravelon
11
Sarcoma Aquest tipus de cagravencer comenccedila en els teixits connectius
com els cartiacutelags el greix els muacutesculs els vasos sanguinis els ossos etc Dependent de la cegravelmiddotlula on srsquoorigina el cagravencer es poden diferenciar amb
diferents noms els meacutes comuns soacuten els seguumlents
Osteosarcoma Cagravencer que deriva de lrsquoos
Sol aparegraveixer en ossos llargs
Eacutes el sarcoma meacutes frequumlent i eacutes el vuitegrave cagravencer infantil meacutes frequumlent
Condrosarcoma Lrsquoorigen del tumor es troba en
els cartiacutelags Eacutes el segon tipus de sarcoma meacutes
comuacute Els tumors solen estar en les costelles la
pelvis el fegravemur i llsquohuacutemer
Liposarcoma Cagravencer que teacute origen
en el greix (teixit adipoacutes)
Sol apareixeragrave en les extremitats
inferiors braccedilos pit i coll
Angiosarcoma Sarcoma que deriva dels
vasos sanguinis o limfagravetics de qualsevol
teixit drsquoun organisme
12
Leucegravemia Es coneix com el cagravencer de sang aquest cagravencer comenccedila en
els teixits que formen la sang com la medulmiddotla ogravessia Aquesta anomalia
provoca un augment descontrolat de glogravebuls blancs (cegravelmiddotlules que es troben en
la sang i soacuten les responsables de les respostes immunes)
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes impedeixen que es produeixin glogravebuls vermells
plaquetes (encarregades de tancar ferides) i glogravebuls blancs madurs normals
Eacutes el cagravencer diagnosticat meacutes frequumlentment en nens
Aquest cagravencer es va tornant cada vegada meacutes mortal a mesura que
disminueixen les cegravelmiddotlules sanguiacutenies normals
Les cegravelmiddotlules mutades es poden propagar al torrent sanguini i tambeacute poden
viatjar al cervell a la medulmiddotla espinal i altres parts del cos
-En les leucegravemies hi ha caregravencia de tumoracioacute srsquoafecta la sang i la medulmiddotla
ogravessia
La leucegravemia es pot classificar en diferents tipus Segons el tipus de funcioacute de la cegravelmiddotlula alterada Leucegravemia mieloide Leucegravemia limfoide
Segons lrsquoestat de maduracioacute de les cegravelmiddotlules leucegravemiques
Aguda cegravelmiddotlules immadures Aquestes no realitzen les funcions
Crogravenica es produeixen masses glogravebuls blancs madurs perograve soacuten
anormals La seva progressioacute eacutes meacutes lenta
13
Limfoma Aquest cagravencer comenccedila a les cegravelmiddotlules del sistema limfagravetic
(sistema que teacute com a funcioacute combatre infeccions i malalties i forma part del
sistema immunitari) El sistema limfagravetic transporta en els vasos limfagravetics
(semblants als sanguinis) un liacutequid anomenat Limfa La limfa conteacute limfogravecits
(que soacuten un tipus de glogravebuls blancs) Les cegravelmiddotlules afectades en aquest cas soacuten
els glogravebuls blancs i degut a que el sistema limfagravetic es troba per tot el cos el
limfoma es pot presentar a gairebeacute qualsevol part de cos Aquest tipus de
cagravencer es pot presentar tant en nens com en adults
-Hi ha dos tipus de limfomes
El limfoma de Hodgkin
El limfoma de NO Hodgkin
-Els dos tipus de limfoma es poden diferenciar a partir de les diverses
caracteriacutestiques de les cegravelmiddotlules malignes (que abans eren limfogravecits)
Caracteriacutestiques com per exemple el seu comportament la seva propagacioacute i
la seva resposta al tractament
El limfoma de NO Hodgkin eacutes el tipus meacutes comuacute
El tipus de limfoma es determina amb la biogravepsia i lrsquo examen de les cegravelmiddotlules
canceriacutegenes amb un microscopi per observar de quin tipus soacuten les cegravelmiddotlules
que han mutat
Quan srsquoobserven les cegravelmiddotlules canceriacutegenes i
aquestes soacuten un tipus de cegravelmiddotlules anomenades
ldquoCegravelmiddotlules de Reed-Sternbergrdquo (cegravelmiddotlules gegants
malignes que inicialment eren limfogravecits de
tipus B) el limfoma eacutes de tipus Limfoma
Hodgkin
Quan aquestes cegravelmiddotlules no es troben presents el cagravencer es classifica com a
Limfoma de NO Hodgkin
ldquoCegravelmiddotlules Limfoma de NO Hodgkinrdquo
14
El cagravencer de progravestata
El cagravencer de progravestata a nivell mundial eacutes el segon cagravencer meacutes diagnosticat en homes
despreacutes del cagravencer de pell perograve en Europa des de fa uns anys el cagravencer de progravestata
srsquoha convertit en el primer cagravencer meacutes diagnosticat A meacutes a meacutes eacutes una de les
primeres causes de mort en homes
El cagravencer de progravestata comenccedila quan algunes cegravelmiddotlules prostagravetiques de la progravestata
muten i comencen a multiplicar-se descontroladament Encara no se sap quegrave eacutes el
que causa aquest cagravencer perograve siacute es coneixen alguns factors a tenir en compte per al
desenvolupament drsquoaquest cagravencer com la genegravetica i la dieta Les cegravelmiddotlules mutades
poden fer metagravestasi especialment als ossos
El cagravencer de progravestata afecta meacutes frequumlentment a homes duns cinquanta anys
El creixement tumoral eacutes moderadament lent hi encara havent-trsquohi hagut metagravestasi
hi pot haver una supervivegravencia prolongada
El tumor maligne pot creacuteixer de tres maneres
Creixement local Es produeix per el creixement del tumor cancerigen que
envaeix la cagravepsula prostagravetica
Meacutes tard el tumor eacutes capaccedil de trencar la
capa prostagravetica degut la seva mida i aixiacute
el tumor segueix creixent envaint altres
teixits i ogravergans propers a la progravestata
Que les cegravelmiddotlules mutades envaeixin la
bufeta i el recte eacutes un proceacutes lent
La progravestata eacutes una glagravendula
sexual que nomeacutes presenta el
sexe masculiacute aquesta glagravendula
eacutes lrsquoencarregada drsquoelaborar un
liacutequid que forma part del
semen
La progravestata es troba sota de la
bufeta i envolta la uretra
Cagravepsula protagravestica
Bufeta
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
Pagraveg
Pragravectica 35
Documents ndash Comitegrave drsquoegravetica -Primer i segon document 36
- Tercer document 37
- Quart document 38
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari (1 2 3) 39
4 El vestidor 40
5 Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute) 41
Cabina de flux laminar 42
Magravequina drsquoanestegravesia 43
Electroporador 44
Megravetode experimental basat en la investigacioacute (1 2 3) 45
4 Experimentacioacute 46
5 Disseny de lrsquoexperiment 49
51 Control ndash 52 Regraveplica 53
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute 54
Eutanagravesia dels ratolins 57
7 Conclusions de lrsquoestudi 60
Entrevista 62
Conclusioacute 64
Annexos 66
Bibliografia ndash webgrafia 68
Agraiumlments 70
This project reports on two topics
The first topic is about cancer and the different types of cancer that exist After the
introduction to know about cancer that is done in this project it is emphasized with
prostate cancer and it is explained how it is and the treatments that are currently
used
The second topic is about the importance of experimentation animals when doing
research for example for a new treatment of prostate cancer But a certain process
must be carried out in order to start an investigation Here it is explained the process
that must be done before beginning an experimentation the processes that must be
followed during the study and what is done after finishing the investigation
Vaig decidir fer aquest tema per el meu Treball de Recerca perquegrave mrsquoagrada tot el que
estagrave relacionat amb els animals i la biologia ja que trobo que soacuten temes molt
interessants i importants per entendre realment quegrave som i d`on venim i tambeacute perquegrave
crec que srsquoha de donar especial importagravencia a la natura ja que gragravecies a ella eacutes possible
la vida i per uacuteltim perquegrave vull estudiar i dedicar-me a la veterinagraveria
Des del moment en el que em van dir que havia de fer el treball de Recerca vaig tenir
clar que seria de biologia Despreacutes el meu tutor del treball em va parlar sobre el
projecte Argoacute que porta la UAB projecte en el qual la universitat ofereix uns certs
temes per a fer el Treball de Recerca i srsquoencarreguen de que trsquoassessorin en el treball
especialistes en el tema que srsquoelegeix A meacutes a meacutes es teacute acceacutes a informacioacute
privilegiada i a una part pragravectica meacutes desenvolupada i rica El meu tutor em va animar
a que mires el temes i que em presentes com a voluntagraveria Vaig veure que hi havia un
tema de veterinagraveria que tractava la discussioacute actual que hi ha en la utilitzacioacute drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute Tema el qual trobo molt interessant ja que tindria la possibilitat
drsquoinformar-me dels dos punts de vista els dels investigadors i els dels defensors dels
drets animals i aixiacute poder arribar jo a la meva progravepia conclusioacute despreacutes drsquohaver conegut
els dos punts de vista i les seves respectives premisses
5
na de les malalties meacutes antiga i mortiacutefera que ha existit a la Terra ha sigut i eacutes el
cagravencer
El cagravencer ha estat present sempre en les nostres vides drsquouna manera meacutes o menys
propera Aquesta malaltia afecta tant a persones com animals i es pot manifestar a
qualsevol edat i es poden presentar meacutes de cent tipus diferents de cagravencer uns meacutes
mortiacutefers que drsquoaltres
El cagravencer eacutes una de les primeres causes de mort mundial i aquesta malaltia va afectar
aproximadament a meacutes de 32 milions de persones en el moacuten lrsquoany 2016 i 82 milions
van morir de cagravencer
Un dels cagravencers meacutes comuns eacutes el de progravestata que el pateixen meacutes drsquoun milioacute drsquohomes
cada any i del qual encara no srsquoha trobat una cura eficaccedil del tot
Gragravecies a la medicina moderna i la investigacioacute biomegravedica ha augmentat la qualitat i
lrsquoesperanccedila de vida dels afectats i tambeacute srsquohan pogut fer avanccedilos importants per
arribar a possibles cures per al cagravencer Per poder seguir avanccedilant srsquoha de seguir
experimentant perograve es va crear una llei (Declaracioacute de Helsinki 1944) on es dicta que
abans de provar un tractament megravedic amb humans primer srsquoha de fer amb animals
per la seguretat dels primers I eacutes aquiacute on entra en joc el paper dels animals
drsquoexperimentacioacute
Aquest treball tractaragrave els diferents tipus de cagravencer concretant amb el cagravencer de
progravestata ja que gragravecies al Projecte Argoacute de la UAB vaig poder assistir a una investigacioacute
real per al desenvolupament drsquoun tractament per al cagravencer de progravestata
Per un altre costat el treball tambeacute tractaragrave el tema de la legislacioacute que defensa els
animals drsquoexperimentacioacute La hipogravetesi principal del treball era Potser lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute no eacutes egravetic Tenia aquesta hipogravetesi perquegrave pensava que no hi havia
cap llei que regulava lrsquoexperimentacioacute animal i els animals patien de manera
innecessagraveria
Els objectius del treball soacuten comprovar segons la meva experiegravencia viscuda en la
investigacioacute si realment es compleix o no la meva hipogravetesi i arribar a una conclusioacute
raonada respecte la meva pregunta
Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
U
6
Quegrave eacutes el cagravencer
Tots els eacutessers vius estem formats per una o meacutes cegravelmiddotlules
Aquestes cegravelmiddotlules es divideixen contiacutenuament i de forma regular per reemplaccedilar a les
cegravelmiddotlules que ja soacuten mortes o velles perquegrave ja no compleixen les seves funcions Aixiacute es
manteacute la integritat i un funcionament correcte de tots el ogravergans
El proceacutes de divisioacute de les cegravelmiddotlules estagrave regulat per uns mecanismes que indiquen a la
cegravelmiddotlula quan ha de comenccedilar a dividir-se i quan no Quan es
produeix un dany en el DNA drsquouna cegravelmiddotlula que no pot ser
reparat es porta a terme lrsquoautodestruccioacute drsquoaquesta cegravelmiddotlula
aquest proceacutes tambeacute srsquoanomena mort celmiddotlular programada o
apoptosi
Per tant el cagravencer eacutes un tipus de malaltia que afecta als eacutessers
pluricelmiddotlulars en que un grup de cegravelmiddotlules desenvolupen un
creixement descontrolat i es multiplica el nombre de divisions
celmiddotlulars normals perquegrave per un dany celmiddotlular no es porta a
terme la apoptosi Aquestes cegravelmiddotlules envaeixen i destrueixen
teixits i a vegades hi ha una metagravestasi que es dona quan les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes sestenen a altres punts del cos a traveacutes
de la limfa o la sang creant altres tumors
Aquestes tres propietats (creixement celmiddotlular descontrolat
invasioacutedestruccioacute de teixitsogravergans i metagravestasi) soacuten las que
defineixen a un tumor maligne
Tambeacute existeixen els tumors benignes que tenen la manca de
metagravestasi alguns poden ser perjudicials per a la salut i ni ha
drsquoaltres que no (berrugues)
La majoria de cagravencers formen un tumor perograve alguns no ho fan
com per exemple la leucegravemia
El cagravencer pot afectar a animals a plantes i a humans es pot patir a qualsevol edat i fins
hi tot pot afectar als fetus El risc de patir cagravencer augmenta amb lrsquoedat
Avui en dia es poden trobar meacutes de cent tipus de cagravencer
La branca de la medicina que socupa de lestudi el diagnogravestic el tractament i la
prevencioacute del cagravencer eacutes loncologia
Divisioacute celmiddotlular normal
Divisioacute de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
Dany celmiddotlular
sense reparacioacute
Apoptosi
No hi ha
apoptosi
7
Origen del cagravencer
Gairebeacute tots els cagravencers soacuten provocats per anormalitats en el material genegravetic de les
cegravelmiddotlules afectades Aquestes anormalitats solen ser degudes als carcinogravegens que soacuten
agents fiacutesics (radiacions) quiacutemics o biologravegics potencialment capaccedilos de produir cagravencer
al exposar-se a teixits vius com per exemple el fum de tabac radiacions substagravencies
quiacutemiquesetc Altres anormalitats genegravetiques que provoquen cagravencer es poden
adquirir aleatograveriament per culpa derrors en la replicacioacute de lADN o soacuten heretades
dels progenitors i per tant estan presents a totes les cegravelmiddotlules del nou individu des del
naixement
Una vegada una cegravelmiddotlula presenti anomalies en el seu material genegravetic aquesta
adquiriragrave la capacitat de multiplicar-se descontroladament i drsquoenvair teixits i altres
ogravergans Aquest proceacutes es denominaragrave carcinogegravenesi
La carcinogegravenesi pot durar anys i passa per diferents fases
La primera fase comenccedila amb la mutacioacute de la primera cegravelmiddotlula succeeix a nivell
del genoma i les alteracions poden trobar-se
tant en tumors benignes com en malignes
Una sola mutacioacute no eacutes suficient per a que es
generi un cagravencer perograve aquesta cegravelmiddotlula
mutada eacutes la que pot iniciar el proceacutes La
condicioacute meacutes important per a lrsquoevolucioacute drsquoun
cagravencer eacutes que la cegravelmiddotlula mutada sigui capaccedil
de dividir-se Una vegada aquesta primera
cegravelmiddotlula es divideix com a resultat les
cegravelmiddotlules filles mutades comencen a
multiplicar-se a una velocitat superior a lo
normal transmetent als seus descendents lrsquoanomalia genegravetica de la cegravelmiddotlula
mare
Aquesta fase srsquoanomena fase drsquoiniciacioacute tumoral i les cegravelmiddotlules involucrades
en aquesta fase es diuen cegravelmiddotlules iniciades Lrsquoalteracioacute que han produiumlt les
cegravelmiddotlules iniciades eacutes irreversible perograve es insuficient per desenvolupar un
cagravencer
Carcinogravegens
meacutes
comuns
8
La segona fase comenccedila quan els agents carcinogravegens actuen de nou i
repetidament sobre les cegravelmiddotlules iniciades Aquest fet provoca que la divisioacute
celmiddotlular sigui meacutes ragravepida encara i com a consequumlegravencia es multipliquin
cegravelmiddotlules mutades amb meacutes probabilitat de que es produeixin noves
mutacions Aixiacute comenccedila la creacioacute drsquoun tumor i tambeacute pot passar tan en
tumors malignes com de benignes
Aquesta fase es coneix com la fase de promocioacute i les cegravelmiddotlules que hi
participen srsquoanomenen cegravelmiddotlules promocionades Alguns factors que actuen
en aquesta fase serien el tabac la mala alimentacioacute beure alcohol etc
La tercera fase srsquoinicia quan les cegravelmiddotlules iniciades i les promocionades
pateixen noves mutacions per culpa de carcinogravegens i les divisions
descontrolades entre cegravelmiddotlules cada vegada meacutes mutades
Cada vegada hi ha meacutes anomalies en el seu codi genegravetic en el seu creixement
i en el seu comportament com a cegravelmiddotlula
Aquesta tercera fase nomeacutes es pateix si es tracta drsquoun tumor maligne
Aquesta fase srsquoanomena fase de progressioacute ja que les cegravelmiddotlules adquireixen la
capacitat drsquoinvasioacute infiltrant-se en teixits propers o en drsquoaltres situats a certa
distancia viatjant a traveacutes del sistema sanguini o limfagravetic provocant aixiacute les
metagravestasis
Fase drsquoiniciacioacute
tumoral
Fase de
promocioacute
Fase de
progressioacute
9
Propagacioacute del cagravencer en fase de progressioacute
Els cagravencers soacuten capaccedilos de propagar-se per el cos a partir de dos mecanismes
invasioacute i metagravestasi
Lrsquo invasioacute eacutes la migracioacute i la penetracioacute directa de les cegravelmiddotlules mutades en teixits o
ogravergans propers al tumor drsquoorigen
La metagravestasi eacutes el proceacutes de propagacioacute drsquoun tumor cancerigen a un altre ogravergan
diferent al que es va iniciar Succeeix per mitjagrave dels vasos sanguinis o limfagravetics
Primer algunes de les
cegravelmiddotlules malignes se
separen del tumor
inicial i a continuacioacute
penetren el vasos
sanguinis o limfagravetics
viatgen a traveacutes de la
circulacioacute sanguiacutenia i
finalment creixen i es
divideixen en un nou
teixit o ogravergan creant
un nou tumor maligne
El nou tumor
metastagravetic eacutes del
mateix tipus de cagravencer
que el del tumor
drsquoorigen
La metagravestasi eacutes la
causa principal de
mort drsquoun eacutesser viu
amb cagravencer
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen els teixits i
vasos sanguinis propers
Les cegravelmiddotlules soacuten
transportades
per el sistema
circulatori a
ogravergans i teixits
llunyans
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen un nou ogravergan i creix un
nou tumor en ell
10
Classificacioacute
Els cagravencers es classifiquen segons la histologia (lrsquoestructura i les caracteriacutestiques dels
teixits) i la ubicacioacute del teixit on es troba el tumor
Carcinoma Eacutes el tipus de cagravencer meacutes comuacute el 80 de cagravencers soacuten
carcinomes Aquest cagravencer comenccedila a la pell o als teixits que cobreixen els
ogravergans interns (cegravelmiddotlules epitelials)
Algunes drsquoaquestes cegravelmiddotlules tenen diferents caracteriacutestiques i per aquest
motiu tenen un nom especial Les meacutes importants soacuten
Adenocarcinoma cagravencer del teixit glandular (mames progravestata)
Carcinoma de cegravelmiddotlules escamoses cagravencer de les cegravelmiddotlules no glandulars
(esogravefag coll del uacuteter)
Carcinoma de cegravelmiddotlules basals (Basalioma) avarca un 78 de tots els
cagravencers cagravencer de pell meacutes comuacute Rarament produeix metagravestasi
Melanoma cagravencer de les cegravelmiddotlules que produeixen la coloracioacute de la pell
eacutes el meacutes perilloacutes per quegrave porta a terme la metagravestasi
Els cagravencers de tipus carcinoma meacutes comuns soacuten el cagravencer de pit de progravestata
de pulmoacute i de cogravelon
11
Sarcoma Aquest tipus de cagravencer comenccedila en els teixits connectius
com els cartiacutelags el greix els muacutesculs els vasos sanguinis els ossos etc Dependent de la cegravelmiddotlula on srsquoorigina el cagravencer es poden diferenciar amb
diferents noms els meacutes comuns soacuten els seguumlents
Osteosarcoma Cagravencer que deriva de lrsquoos
Sol aparegraveixer en ossos llargs
Eacutes el sarcoma meacutes frequumlent i eacutes el vuitegrave cagravencer infantil meacutes frequumlent
Condrosarcoma Lrsquoorigen del tumor es troba en
els cartiacutelags Eacutes el segon tipus de sarcoma meacutes
comuacute Els tumors solen estar en les costelles la
pelvis el fegravemur i llsquohuacutemer
Liposarcoma Cagravencer que teacute origen
en el greix (teixit adipoacutes)
Sol apareixeragrave en les extremitats
inferiors braccedilos pit i coll
Angiosarcoma Sarcoma que deriva dels
vasos sanguinis o limfagravetics de qualsevol
teixit drsquoun organisme
12
Leucegravemia Es coneix com el cagravencer de sang aquest cagravencer comenccedila en
els teixits que formen la sang com la medulmiddotla ogravessia Aquesta anomalia
provoca un augment descontrolat de glogravebuls blancs (cegravelmiddotlules que es troben en
la sang i soacuten les responsables de les respostes immunes)
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes impedeixen que es produeixin glogravebuls vermells
plaquetes (encarregades de tancar ferides) i glogravebuls blancs madurs normals
Eacutes el cagravencer diagnosticat meacutes frequumlentment en nens
Aquest cagravencer es va tornant cada vegada meacutes mortal a mesura que
disminueixen les cegravelmiddotlules sanguiacutenies normals
Les cegravelmiddotlules mutades es poden propagar al torrent sanguini i tambeacute poden
viatjar al cervell a la medulmiddotla espinal i altres parts del cos
-En les leucegravemies hi ha caregravencia de tumoracioacute srsquoafecta la sang i la medulmiddotla
ogravessia
La leucegravemia es pot classificar en diferents tipus Segons el tipus de funcioacute de la cegravelmiddotlula alterada Leucegravemia mieloide Leucegravemia limfoide
Segons lrsquoestat de maduracioacute de les cegravelmiddotlules leucegravemiques
Aguda cegravelmiddotlules immadures Aquestes no realitzen les funcions
Crogravenica es produeixen masses glogravebuls blancs madurs perograve soacuten
anormals La seva progressioacute eacutes meacutes lenta
13
Limfoma Aquest cagravencer comenccedila a les cegravelmiddotlules del sistema limfagravetic
(sistema que teacute com a funcioacute combatre infeccions i malalties i forma part del
sistema immunitari) El sistema limfagravetic transporta en els vasos limfagravetics
(semblants als sanguinis) un liacutequid anomenat Limfa La limfa conteacute limfogravecits
(que soacuten un tipus de glogravebuls blancs) Les cegravelmiddotlules afectades en aquest cas soacuten
els glogravebuls blancs i degut a que el sistema limfagravetic es troba per tot el cos el
limfoma es pot presentar a gairebeacute qualsevol part de cos Aquest tipus de
cagravencer es pot presentar tant en nens com en adults
-Hi ha dos tipus de limfomes
El limfoma de Hodgkin
El limfoma de NO Hodgkin
-Els dos tipus de limfoma es poden diferenciar a partir de les diverses
caracteriacutestiques de les cegravelmiddotlules malignes (que abans eren limfogravecits)
Caracteriacutestiques com per exemple el seu comportament la seva propagacioacute i
la seva resposta al tractament
El limfoma de NO Hodgkin eacutes el tipus meacutes comuacute
El tipus de limfoma es determina amb la biogravepsia i lrsquo examen de les cegravelmiddotlules
canceriacutegenes amb un microscopi per observar de quin tipus soacuten les cegravelmiddotlules
que han mutat
Quan srsquoobserven les cegravelmiddotlules canceriacutegenes i
aquestes soacuten un tipus de cegravelmiddotlules anomenades
ldquoCegravelmiddotlules de Reed-Sternbergrdquo (cegravelmiddotlules gegants
malignes que inicialment eren limfogravecits de
tipus B) el limfoma eacutes de tipus Limfoma
Hodgkin
Quan aquestes cegravelmiddotlules no es troben presents el cagravencer es classifica com a
Limfoma de NO Hodgkin
ldquoCegravelmiddotlules Limfoma de NO Hodgkinrdquo
14
El cagravencer de progravestata
El cagravencer de progravestata a nivell mundial eacutes el segon cagravencer meacutes diagnosticat en homes
despreacutes del cagravencer de pell perograve en Europa des de fa uns anys el cagravencer de progravestata
srsquoha convertit en el primer cagravencer meacutes diagnosticat A meacutes a meacutes eacutes una de les
primeres causes de mort en homes
El cagravencer de progravestata comenccedila quan algunes cegravelmiddotlules prostagravetiques de la progravestata
muten i comencen a multiplicar-se descontroladament Encara no se sap quegrave eacutes el
que causa aquest cagravencer perograve siacute es coneixen alguns factors a tenir en compte per al
desenvolupament drsquoaquest cagravencer com la genegravetica i la dieta Les cegravelmiddotlules mutades
poden fer metagravestasi especialment als ossos
El cagravencer de progravestata afecta meacutes frequumlentment a homes duns cinquanta anys
El creixement tumoral eacutes moderadament lent hi encara havent-trsquohi hagut metagravestasi
hi pot haver una supervivegravencia prolongada
El tumor maligne pot creacuteixer de tres maneres
Creixement local Es produeix per el creixement del tumor cancerigen que
envaeix la cagravepsula prostagravetica
Meacutes tard el tumor eacutes capaccedil de trencar la
capa prostagravetica degut la seva mida i aixiacute
el tumor segueix creixent envaint altres
teixits i ogravergans propers a la progravestata
Que les cegravelmiddotlules mutades envaeixin la
bufeta i el recte eacutes un proceacutes lent
La progravestata eacutes una glagravendula
sexual que nomeacutes presenta el
sexe masculiacute aquesta glagravendula
eacutes lrsquoencarregada drsquoelaborar un
liacutequid que forma part del
semen
La progravestata es troba sota de la
bufeta i envolta la uretra
Cagravepsula protagravestica
Bufeta
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
This project reports on two topics
The first topic is about cancer and the different types of cancer that exist After the
introduction to know about cancer that is done in this project it is emphasized with
prostate cancer and it is explained how it is and the treatments that are currently
used
The second topic is about the importance of experimentation animals when doing
research for example for a new treatment of prostate cancer But a certain process
must be carried out in order to start an investigation Here it is explained the process
that must be done before beginning an experimentation the processes that must be
followed during the study and what is done after finishing the investigation
Vaig decidir fer aquest tema per el meu Treball de Recerca perquegrave mrsquoagrada tot el que
estagrave relacionat amb els animals i la biologia ja que trobo que soacuten temes molt
interessants i importants per entendre realment quegrave som i d`on venim i tambeacute perquegrave
crec que srsquoha de donar especial importagravencia a la natura ja que gragravecies a ella eacutes possible
la vida i per uacuteltim perquegrave vull estudiar i dedicar-me a la veterinagraveria
Des del moment en el que em van dir que havia de fer el treball de Recerca vaig tenir
clar que seria de biologia Despreacutes el meu tutor del treball em va parlar sobre el
projecte Argoacute que porta la UAB projecte en el qual la universitat ofereix uns certs
temes per a fer el Treball de Recerca i srsquoencarreguen de que trsquoassessorin en el treball
especialistes en el tema que srsquoelegeix A meacutes a meacutes es teacute acceacutes a informacioacute
privilegiada i a una part pragravectica meacutes desenvolupada i rica El meu tutor em va animar
a que mires el temes i que em presentes com a voluntagraveria Vaig veure que hi havia un
tema de veterinagraveria que tractava la discussioacute actual que hi ha en la utilitzacioacute drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute Tema el qual trobo molt interessant ja que tindria la possibilitat
drsquoinformar-me dels dos punts de vista els dels investigadors i els dels defensors dels
drets animals i aixiacute poder arribar jo a la meva progravepia conclusioacute despreacutes drsquohaver conegut
els dos punts de vista i les seves respectives premisses
5
na de les malalties meacutes antiga i mortiacutefera que ha existit a la Terra ha sigut i eacutes el
cagravencer
El cagravencer ha estat present sempre en les nostres vides drsquouna manera meacutes o menys
propera Aquesta malaltia afecta tant a persones com animals i es pot manifestar a
qualsevol edat i es poden presentar meacutes de cent tipus diferents de cagravencer uns meacutes
mortiacutefers que drsquoaltres
El cagravencer eacutes una de les primeres causes de mort mundial i aquesta malaltia va afectar
aproximadament a meacutes de 32 milions de persones en el moacuten lrsquoany 2016 i 82 milions
van morir de cagravencer
Un dels cagravencers meacutes comuns eacutes el de progravestata que el pateixen meacutes drsquoun milioacute drsquohomes
cada any i del qual encara no srsquoha trobat una cura eficaccedil del tot
Gragravecies a la medicina moderna i la investigacioacute biomegravedica ha augmentat la qualitat i
lrsquoesperanccedila de vida dels afectats i tambeacute srsquohan pogut fer avanccedilos importants per
arribar a possibles cures per al cagravencer Per poder seguir avanccedilant srsquoha de seguir
experimentant perograve es va crear una llei (Declaracioacute de Helsinki 1944) on es dicta que
abans de provar un tractament megravedic amb humans primer srsquoha de fer amb animals
per la seguretat dels primers I eacutes aquiacute on entra en joc el paper dels animals
drsquoexperimentacioacute
Aquest treball tractaragrave els diferents tipus de cagravencer concretant amb el cagravencer de
progravestata ja que gragravecies al Projecte Argoacute de la UAB vaig poder assistir a una investigacioacute
real per al desenvolupament drsquoun tractament per al cagravencer de progravestata
Per un altre costat el treball tambeacute tractaragrave el tema de la legislacioacute que defensa els
animals drsquoexperimentacioacute La hipogravetesi principal del treball era Potser lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute no eacutes egravetic Tenia aquesta hipogravetesi perquegrave pensava que no hi havia
cap llei que regulava lrsquoexperimentacioacute animal i els animals patien de manera
innecessagraveria
Els objectius del treball soacuten comprovar segons la meva experiegravencia viscuda en la
investigacioacute si realment es compleix o no la meva hipogravetesi i arribar a una conclusioacute
raonada respecte la meva pregunta
Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
U
6
Quegrave eacutes el cagravencer
Tots els eacutessers vius estem formats per una o meacutes cegravelmiddotlules
Aquestes cegravelmiddotlules es divideixen contiacutenuament i de forma regular per reemplaccedilar a les
cegravelmiddotlules que ja soacuten mortes o velles perquegrave ja no compleixen les seves funcions Aixiacute es
manteacute la integritat i un funcionament correcte de tots el ogravergans
El proceacutes de divisioacute de les cegravelmiddotlules estagrave regulat per uns mecanismes que indiquen a la
cegravelmiddotlula quan ha de comenccedilar a dividir-se i quan no Quan es
produeix un dany en el DNA drsquouna cegravelmiddotlula que no pot ser
reparat es porta a terme lrsquoautodestruccioacute drsquoaquesta cegravelmiddotlula
aquest proceacutes tambeacute srsquoanomena mort celmiddotlular programada o
apoptosi
Per tant el cagravencer eacutes un tipus de malaltia que afecta als eacutessers
pluricelmiddotlulars en que un grup de cegravelmiddotlules desenvolupen un
creixement descontrolat i es multiplica el nombre de divisions
celmiddotlulars normals perquegrave per un dany celmiddotlular no es porta a
terme la apoptosi Aquestes cegravelmiddotlules envaeixen i destrueixen
teixits i a vegades hi ha una metagravestasi que es dona quan les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes sestenen a altres punts del cos a traveacutes
de la limfa o la sang creant altres tumors
Aquestes tres propietats (creixement celmiddotlular descontrolat
invasioacutedestruccioacute de teixitsogravergans i metagravestasi) soacuten las que
defineixen a un tumor maligne
Tambeacute existeixen els tumors benignes que tenen la manca de
metagravestasi alguns poden ser perjudicials per a la salut i ni ha
drsquoaltres que no (berrugues)
La majoria de cagravencers formen un tumor perograve alguns no ho fan
com per exemple la leucegravemia
El cagravencer pot afectar a animals a plantes i a humans es pot patir a qualsevol edat i fins
hi tot pot afectar als fetus El risc de patir cagravencer augmenta amb lrsquoedat
Avui en dia es poden trobar meacutes de cent tipus de cagravencer
La branca de la medicina que socupa de lestudi el diagnogravestic el tractament i la
prevencioacute del cagravencer eacutes loncologia
Divisioacute celmiddotlular normal
Divisioacute de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
Dany celmiddotlular
sense reparacioacute
Apoptosi
No hi ha
apoptosi
7
Origen del cagravencer
Gairebeacute tots els cagravencers soacuten provocats per anormalitats en el material genegravetic de les
cegravelmiddotlules afectades Aquestes anormalitats solen ser degudes als carcinogravegens que soacuten
agents fiacutesics (radiacions) quiacutemics o biologravegics potencialment capaccedilos de produir cagravencer
al exposar-se a teixits vius com per exemple el fum de tabac radiacions substagravencies
quiacutemiquesetc Altres anormalitats genegravetiques que provoquen cagravencer es poden
adquirir aleatograveriament per culpa derrors en la replicacioacute de lADN o soacuten heretades
dels progenitors i per tant estan presents a totes les cegravelmiddotlules del nou individu des del
naixement
Una vegada una cegravelmiddotlula presenti anomalies en el seu material genegravetic aquesta
adquiriragrave la capacitat de multiplicar-se descontroladament i drsquoenvair teixits i altres
ogravergans Aquest proceacutes es denominaragrave carcinogegravenesi
La carcinogegravenesi pot durar anys i passa per diferents fases
La primera fase comenccedila amb la mutacioacute de la primera cegravelmiddotlula succeeix a nivell
del genoma i les alteracions poden trobar-se
tant en tumors benignes com en malignes
Una sola mutacioacute no eacutes suficient per a que es
generi un cagravencer perograve aquesta cegravelmiddotlula
mutada eacutes la que pot iniciar el proceacutes La
condicioacute meacutes important per a lrsquoevolucioacute drsquoun
cagravencer eacutes que la cegravelmiddotlula mutada sigui capaccedil
de dividir-se Una vegada aquesta primera
cegravelmiddotlula es divideix com a resultat les
cegravelmiddotlules filles mutades comencen a
multiplicar-se a una velocitat superior a lo
normal transmetent als seus descendents lrsquoanomalia genegravetica de la cegravelmiddotlula
mare
Aquesta fase srsquoanomena fase drsquoiniciacioacute tumoral i les cegravelmiddotlules involucrades
en aquesta fase es diuen cegravelmiddotlules iniciades Lrsquoalteracioacute que han produiumlt les
cegravelmiddotlules iniciades eacutes irreversible perograve es insuficient per desenvolupar un
cagravencer
Carcinogravegens
meacutes
comuns
8
La segona fase comenccedila quan els agents carcinogravegens actuen de nou i
repetidament sobre les cegravelmiddotlules iniciades Aquest fet provoca que la divisioacute
celmiddotlular sigui meacutes ragravepida encara i com a consequumlegravencia es multipliquin
cegravelmiddotlules mutades amb meacutes probabilitat de que es produeixin noves
mutacions Aixiacute comenccedila la creacioacute drsquoun tumor i tambeacute pot passar tan en
tumors malignes com de benignes
Aquesta fase es coneix com la fase de promocioacute i les cegravelmiddotlules que hi
participen srsquoanomenen cegravelmiddotlules promocionades Alguns factors que actuen
en aquesta fase serien el tabac la mala alimentacioacute beure alcohol etc
La tercera fase srsquoinicia quan les cegravelmiddotlules iniciades i les promocionades
pateixen noves mutacions per culpa de carcinogravegens i les divisions
descontrolades entre cegravelmiddotlules cada vegada meacutes mutades
Cada vegada hi ha meacutes anomalies en el seu codi genegravetic en el seu creixement
i en el seu comportament com a cegravelmiddotlula
Aquesta tercera fase nomeacutes es pateix si es tracta drsquoun tumor maligne
Aquesta fase srsquoanomena fase de progressioacute ja que les cegravelmiddotlules adquireixen la
capacitat drsquoinvasioacute infiltrant-se en teixits propers o en drsquoaltres situats a certa
distancia viatjant a traveacutes del sistema sanguini o limfagravetic provocant aixiacute les
metagravestasis
Fase drsquoiniciacioacute
tumoral
Fase de
promocioacute
Fase de
progressioacute
9
Propagacioacute del cagravencer en fase de progressioacute
Els cagravencers soacuten capaccedilos de propagar-se per el cos a partir de dos mecanismes
invasioacute i metagravestasi
Lrsquo invasioacute eacutes la migracioacute i la penetracioacute directa de les cegravelmiddotlules mutades en teixits o
ogravergans propers al tumor drsquoorigen
La metagravestasi eacutes el proceacutes de propagacioacute drsquoun tumor cancerigen a un altre ogravergan
diferent al que es va iniciar Succeeix per mitjagrave dels vasos sanguinis o limfagravetics
Primer algunes de les
cegravelmiddotlules malignes se
separen del tumor
inicial i a continuacioacute
penetren el vasos
sanguinis o limfagravetics
viatgen a traveacutes de la
circulacioacute sanguiacutenia i
finalment creixen i es
divideixen en un nou
teixit o ogravergan creant
un nou tumor maligne
El nou tumor
metastagravetic eacutes del
mateix tipus de cagravencer
que el del tumor
drsquoorigen
La metagravestasi eacutes la
causa principal de
mort drsquoun eacutesser viu
amb cagravencer
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen els teixits i
vasos sanguinis propers
Les cegravelmiddotlules soacuten
transportades
per el sistema
circulatori a
ogravergans i teixits
llunyans
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen un nou ogravergan i creix un
nou tumor en ell
10
Classificacioacute
Els cagravencers es classifiquen segons la histologia (lrsquoestructura i les caracteriacutestiques dels
teixits) i la ubicacioacute del teixit on es troba el tumor
Carcinoma Eacutes el tipus de cagravencer meacutes comuacute el 80 de cagravencers soacuten
carcinomes Aquest cagravencer comenccedila a la pell o als teixits que cobreixen els
ogravergans interns (cegravelmiddotlules epitelials)
Algunes drsquoaquestes cegravelmiddotlules tenen diferents caracteriacutestiques i per aquest
motiu tenen un nom especial Les meacutes importants soacuten
Adenocarcinoma cagravencer del teixit glandular (mames progravestata)
Carcinoma de cegravelmiddotlules escamoses cagravencer de les cegravelmiddotlules no glandulars
(esogravefag coll del uacuteter)
Carcinoma de cegravelmiddotlules basals (Basalioma) avarca un 78 de tots els
cagravencers cagravencer de pell meacutes comuacute Rarament produeix metagravestasi
Melanoma cagravencer de les cegravelmiddotlules que produeixen la coloracioacute de la pell
eacutes el meacutes perilloacutes per quegrave porta a terme la metagravestasi
Els cagravencers de tipus carcinoma meacutes comuns soacuten el cagravencer de pit de progravestata
de pulmoacute i de cogravelon
11
Sarcoma Aquest tipus de cagravencer comenccedila en els teixits connectius
com els cartiacutelags el greix els muacutesculs els vasos sanguinis els ossos etc Dependent de la cegravelmiddotlula on srsquoorigina el cagravencer es poden diferenciar amb
diferents noms els meacutes comuns soacuten els seguumlents
Osteosarcoma Cagravencer que deriva de lrsquoos
Sol aparegraveixer en ossos llargs
Eacutes el sarcoma meacutes frequumlent i eacutes el vuitegrave cagravencer infantil meacutes frequumlent
Condrosarcoma Lrsquoorigen del tumor es troba en
els cartiacutelags Eacutes el segon tipus de sarcoma meacutes
comuacute Els tumors solen estar en les costelles la
pelvis el fegravemur i llsquohuacutemer
Liposarcoma Cagravencer que teacute origen
en el greix (teixit adipoacutes)
Sol apareixeragrave en les extremitats
inferiors braccedilos pit i coll
Angiosarcoma Sarcoma que deriva dels
vasos sanguinis o limfagravetics de qualsevol
teixit drsquoun organisme
12
Leucegravemia Es coneix com el cagravencer de sang aquest cagravencer comenccedila en
els teixits que formen la sang com la medulmiddotla ogravessia Aquesta anomalia
provoca un augment descontrolat de glogravebuls blancs (cegravelmiddotlules que es troben en
la sang i soacuten les responsables de les respostes immunes)
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes impedeixen que es produeixin glogravebuls vermells
plaquetes (encarregades de tancar ferides) i glogravebuls blancs madurs normals
Eacutes el cagravencer diagnosticat meacutes frequumlentment en nens
Aquest cagravencer es va tornant cada vegada meacutes mortal a mesura que
disminueixen les cegravelmiddotlules sanguiacutenies normals
Les cegravelmiddotlules mutades es poden propagar al torrent sanguini i tambeacute poden
viatjar al cervell a la medulmiddotla espinal i altres parts del cos
-En les leucegravemies hi ha caregravencia de tumoracioacute srsquoafecta la sang i la medulmiddotla
ogravessia
La leucegravemia es pot classificar en diferents tipus Segons el tipus de funcioacute de la cegravelmiddotlula alterada Leucegravemia mieloide Leucegravemia limfoide
Segons lrsquoestat de maduracioacute de les cegravelmiddotlules leucegravemiques
Aguda cegravelmiddotlules immadures Aquestes no realitzen les funcions
Crogravenica es produeixen masses glogravebuls blancs madurs perograve soacuten
anormals La seva progressioacute eacutes meacutes lenta
13
Limfoma Aquest cagravencer comenccedila a les cegravelmiddotlules del sistema limfagravetic
(sistema que teacute com a funcioacute combatre infeccions i malalties i forma part del
sistema immunitari) El sistema limfagravetic transporta en els vasos limfagravetics
(semblants als sanguinis) un liacutequid anomenat Limfa La limfa conteacute limfogravecits
(que soacuten un tipus de glogravebuls blancs) Les cegravelmiddotlules afectades en aquest cas soacuten
els glogravebuls blancs i degut a que el sistema limfagravetic es troba per tot el cos el
limfoma es pot presentar a gairebeacute qualsevol part de cos Aquest tipus de
cagravencer es pot presentar tant en nens com en adults
-Hi ha dos tipus de limfomes
El limfoma de Hodgkin
El limfoma de NO Hodgkin
-Els dos tipus de limfoma es poden diferenciar a partir de les diverses
caracteriacutestiques de les cegravelmiddotlules malignes (que abans eren limfogravecits)
Caracteriacutestiques com per exemple el seu comportament la seva propagacioacute i
la seva resposta al tractament
El limfoma de NO Hodgkin eacutes el tipus meacutes comuacute
El tipus de limfoma es determina amb la biogravepsia i lrsquo examen de les cegravelmiddotlules
canceriacutegenes amb un microscopi per observar de quin tipus soacuten les cegravelmiddotlules
que han mutat
Quan srsquoobserven les cegravelmiddotlules canceriacutegenes i
aquestes soacuten un tipus de cegravelmiddotlules anomenades
ldquoCegravelmiddotlules de Reed-Sternbergrdquo (cegravelmiddotlules gegants
malignes que inicialment eren limfogravecits de
tipus B) el limfoma eacutes de tipus Limfoma
Hodgkin
Quan aquestes cegravelmiddotlules no es troben presents el cagravencer es classifica com a
Limfoma de NO Hodgkin
ldquoCegravelmiddotlules Limfoma de NO Hodgkinrdquo
14
El cagravencer de progravestata
El cagravencer de progravestata a nivell mundial eacutes el segon cagravencer meacutes diagnosticat en homes
despreacutes del cagravencer de pell perograve en Europa des de fa uns anys el cagravencer de progravestata
srsquoha convertit en el primer cagravencer meacutes diagnosticat A meacutes a meacutes eacutes una de les
primeres causes de mort en homes
El cagravencer de progravestata comenccedila quan algunes cegravelmiddotlules prostagravetiques de la progravestata
muten i comencen a multiplicar-se descontroladament Encara no se sap quegrave eacutes el
que causa aquest cagravencer perograve siacute es coneixen alguns factors a tenir en compte per al
desenvolupament drsquoaquest cagravencer com la genegravetica i la dieta Les cegravelmiddotlules mutades
poden fer metagravestasi especialment als ossos
El cagravencer de progravestata afecta meacutes frequumlentment a homes duns cinquanta anys
El creixement tumoral eacutes moderadament lent hi encara havent-trsquohi hagut metagravestasi
hi pot haver una supervivegravencia prolongada
El tumor maligne pot creacuteixer de tres maneres
Creixement local Es produeix per el creixement del tumor cancerigen que
envaeix la cagravepsula prostagravetica
Meacutes tard el tumor eacutes capaccedil de trencar la
capa prostagravetica degut la seva mida i aixiacute
el tumor segueix creixent envaint altres
teixits i ogravergans propers a la progravestata
Que les cegravelmiddotlules mutades envaeixin la
bufeta i el recte eacutes un proceacutes lent
La progravestata eacutes una glagravendula
sexual que nomeacutes presenta el
sexe masculiacute aquesta glagravendula
eacutes lrsquoencarregada drsquoelaborar un
liacutequid que forma part del
semen
La progravestata es troba sota de la
bufeta i envolta la uretra
Cagravepsula protagravestica
Bufeta
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
5
na de les malalties meacutes antiga i mortiacutefera que ha existit a la Terra ha sigut i eacutes el
cagravencer
El cagravencer ha estat present sempre en les nostres vides drsquouna manera meacutes o menys
propera Aquesta malaltia afecta tant a persones com animals i es pot manifestar a
qualsevol edat i es poden presentar meacutes de cent tipus diferents de cagravencer uns meacutes
mortiacutefers que drsquoaltres
El cagravencer eacutes una de les primeres causes de mort mundial i aquesta malaltia va afectar
aproximadament a meacutes de 32 milions de persones en el moacuten lrsquoany 2016 i 82 milions
van morir de cagravencer
Un dels cagravencers meacutes comuns eacutes el de progravestata que el pateixen meacutes drsquoun milioacute drsquohomes
cada any i del qual encara no srsquoha trobat una cura eficaccedil del tot
Gragravecies a la medicina moderna i la investigacioacute biomegravedica ha augmentat la qualitat i
lrsquoesperanccedila de vida dels afectats i tambeacute srsquohan pogut fer avanccedilos importants per
arribar a possibles cures per al cagravencer Per poder seguir avanccedilant srsquoha de seguir
experimentant perograve es va crear una llei (Declaracioacute de Helsinki 1944) on es dicta que
abans de provar un tractament megravedic amb humans primer srsquoha de fer amb animals
per la seguretat dels primers I eacutes aquiacute on entra en joc el paper dels animals
drsquoexperimentacioacute
Aquest treball tractaragrave els diferents tipus de cagravencer concretant amb el cagravencer de
progravestata ja que gragravecies al Projecte Argoacute de la UAB vaig poder assistir a una investigacioacute
real per al desenvolupament drsquoun tractament per al cagravencer de progravestata
Per un altre costat el treball tambeacute tractaragrave el tema de la legislacioacute que defensa els
animals drsquoexperimentacioacute La hipogravetesi principal del treball era Potser lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute no eacutes egravetic Tenia aquesta hipogravetesi perquegrave pensava que no hi havia
cap llei que regulava lrsquoexperimentacioacute animal i els animals patien de manera
innecessagraveria
Els objectius del treball soacuten comprovar segons la meva experiegravencia viscuda en la
investigacioacute si realment es compleix o no la meva hipogravetesi i arribar a una conclusioacute
raonada respecte la meva pregunta
Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
U
6
Quegrave eacutes el cagravencer
Tots els eacutessers vius estem formats per una o meacutes cegravelmiddotlules
Aquestes cegravelmiddotlules es divideixen contiacutenuament i de forma regular per reemplaccedilar a les
cegravelmiddotlules que ja soacuten mortes o velles perquegrave ja no compleixen les seves funcions Aixiacute es
manteacute la integritat i un funcionament correcte de tots el ogravergans
El proceacutes de divisioacute de les cegravelmiddotlules estagrave regulat per uns mecanismes que indiquen a la
cegravelmiddotlula quan ha de comenccedilar a dividir-se i quan no Quan es
produeix un dany en el DNA drsquouna cegravelmiddotlula que no pot ser
reparat es porta a terme lrsquoautodestruccioacute drsquoaquesta cegravelmiddotlula
aquest proceacutes tambeacute srsquoanomena mort celmiddotlular programada o
apoptosi
Per tant el cagravencer eacutes un tipus de malaltia que afecta als eacutessers
pluricelmiddotlulars en que un grup de cegravelmiddotlules desenvolupen un
creixement descontrolat i es multiplica el nombre de divisions
celmiddotlulars normals perquegrave per un dany celmiddotlular no es porta a
terme la apoptosi Aquestes cegravelmiddotlules envaeixen i destrueixen
teixits i a vegades hi ha una metagravestasi que es dona quan les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes sestenen a altres punts del cos a traveacutes
de la limfa o la sang creant altres tumors
Aquestes tres propietats (creixement celmiddotlular descontrolat
invasioacutedestruccioacute de teixitsogravergans i metagravestasi) soacuten las que
defineixen a un tumor maligne
Tambeacute existeixen els tumors benignes que tenen la manca de
metagravestasi alguns poden ser perjudicials per a la salut i ni ha
drsquoaltres que no (berrugues)
La majoria de cagravencers formen un tumor perograve alguns no ho fan
com per exemple la leucegravemia
El cagravencer pot afectar a animals a plantes i a humans es pot patir a qualsevol edat i fins
hi tot pot afectar als fetus El risc de patir cagravencer augmenta amb lrsquoedat
Avui en dia es poden trobar meacutes de cent tipus de cagravencer
La branca de la medicina que socupa de lestudi el diagnogravestic el tractament i la
prevencioacute del cagravencer eacutes loncologia
Divisioacute celmiddotlular normal
Divisioacute de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
Dany celmiddotlular
sense reparacioacute
Apoptosi
No hi ha
apoptosi
7
Origen del cagravencer
Gairebeacute tots els cagravencers soacuten provocats per anormalitats en el material genegravetic de les
cegravelmiddotlules afectades Aquestes anormalitats solen ser degudes als carcinogravegens que soacuten
agents fiacutesics (radiacions) quiacutemics o biologravegics potencialment capaccedilos de produir cagravencer
al exposar-se a teixits vius com per exemple el fum de tabac radiacions substagravencies
quiacutemiquesetc Altres anormalitats genegravetiques que provoquen cagravencer es poden
adquirir aleatograveriament per culpa derrors en la replicacioacute de lADN o soacuten heretades
dels progenitors i per tant estan presents a totes les cegravelmiddotlules del nou individu des del
naixement
Una vegada una cegravelmiddotlula presenti anomalies en el seu material genegravetic aquesta
adquiriragrave la capacitat de multiplicar-se descontroladament i drsquoenvair teixits i altres
ogravergans Aquest proceacutes es denominaragrave carcinogegravenesi
La carcinogegravenesi pot durar anys i passa per diferents fases
La primera fase comenccedila amb la mutacioacute de la primera cegravelmiddotlula succeeix a nivell
del genoma i les alteracions poden trobar-se
tant en tumors benignes com en malignes
Una sola mutacioacute no eacutes suficient per a que es
generi un cagravencer perograve aquesta cegravelmiddotlula
mutada eacutes la que pot iniciar el proceacutes La
condicioacute meacutes important per a lrsquoevolucioacute drsquoun
cagravencer eacutes que la cegravelmiddotlula mutada sigui capaccedil
de dividir-se Una vegada aquesta primera
cegravelmiddotlula es divideix com a resultat les
cegravelmiddotlules filles mutades comencen a
multiplicar-se a una velocitat superior a lo
normal transmetent als seus descendents lrsquoanomalia genegravetica de la cegravelmiddotlula
mare
Aquesta fase srsquoanomena fase drsquoiniciacioacute tumoral i les cegravelmiddotlules involucrades
en aquesta fase es diuen cegravelmiddotlules iniciades Lrsquoalteracioacute que han produiumlt les
cegravelmiddotlules iniciades eacutes irreversible perograve es insuficient per desenvolupar un
cagravencer
Carcinogravegens
meacutes
comuns
8
La segona fase comenccedila quan els agents carcinogravegens actuen de nou i
repetidament sobre les cegravelmiddotlules iniciades Aquest fet provoca que la divisioacute
celmiddotlular sigui meacutes ragravepida encara i com a consequumlegravencia es multipliquin
cegravelmiddotlules mutades amb meacutes probabilitat de que es produeixin noves
mutacions Aixiacute comenccedila la creacioacute drsquoun tumor i tambeacute pot passar tan en
tumors malignes com de benignes
Aquesta fase es coneix com la fase de promocioacute i les cegravelmiddotlules que hi
participen srsquoanomenen cegravelmiddotlules promocionades Alguns factors que actuen
en aquesta fase serien el tabac la mala alimentacioacute beure alcohol etc
La tercera fase srsquoinicia quan les cegravelmiddotlules iniciades i les promocionades
pateixen noves mutacions per culpa de carcinogravegens i les divisions
descontrolades entre cegravelmiddotlules cada vegada meacutes mutades
Cada vegada hi ha meacutes anomalies en el seu codi genegravetic en el seu creixement
i en el seu comportament com a cegravelmiddotlula
Aquesta tercera fase nomeacutes es pateix si es tracta drsquoun tumor maligne
Aquesta fase srsquoanomena fase de progressioacute ja que les cegravelmiddotlules adquireixen la
capacitat drsquoinvasioacute infiltrant-se en teixits propers o en drsquoaltres situats a certa
distancia viatjant a traveacutes del sistema sanguini o limfagravetic provocant aixiacute les
metagravestasis
Fase drsquoiniciacioacute
tumoral
Fase de
promocioacute
Fase de
progressioacute
9
Propagacioacute del cagravencer en fase de progressioacute
Els cagravencers soacuten capaccedilos de propagar-se per el cos a partir de dos mecanismes
invasioacute i metagravestasi
Lrsquo invasioacute eacutes la migracioacute i la penetracioacute directa de les cegravelmiddotlules mutades en teixits o
ogravergans propers al tumor drsquoorigen
La metagravestasi eacutes el proceacutes de propagacioacute drsquoun tumor cancerigen a un altre ogravergan
diferent al que es va iniciar Succeeix per mitjagrave dels vasos sanguinis o limfagravetics
Primer algunes de les
cegravelmiddotlules malignes se
separen del tumor
inicial i a continuacioacute
penetren el vasos
sanguinis o limfagravetics
viatgen a traveacutes de la
circulacioacute sanguiacutenia i
finalment creixen i es
divideixen en un nou
teixit o ogravergan creant
un nou tumor maligne
El nou tumor
metastagravetic eacutes del
mateix tipus de cagravencer
que el del tumor
drsquoorigen
La metagravestasi eacutes la
causa principal de
mort drsquoun eacutesser viu
amb cagravencer
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen els teixits i
vasos sanguinis propers
Les cegravelmiddotlules soacuten
transportades
per el sistema
circulatori a
ogravergans i teixits
llunyans
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen un nou ogravergan i creix un
nou tumor en ell
10
Classificacioacute
Els cagravencers es classifiquen segons la histologia (lrsquoestructura i les caracteriacutestiques dels
teixits) i la ubicacioacute del teixit on es troba el tumor
Carcinoma Eacutes el tipus de cagravencer meacutes comuacute el 80 de cagravencers soacuten
carcinomes Aquest cagravencer comenccedila a la pell o als teixits que cobreixen els
ogravergans interns (cegravelmiddotlules epitelials)
Algunes drsquoaquestes cegravelmiddotlules tenen diferents caracteriacutestiques i per aquest
motiu tenen un nom especial Les meacutes importants soacuten
Adenocarcinoma cagravencer del teixit glandular (mames progravestata)
Carcinoma de cegravelmiddotlules escamoses cagravencer de les cegravelmiddotlules no glandulars
(esogravefag coll del uacuteter)
Carcinoma de cegravelmiddotlules basals (Basalioma) avarca un 78 de tots els
cagravencers cagravencer de pell meacutes comuacute Rarament produeix metagravestasi
Melanoma cagravencer de les cegravelmiddotlules que produeixen la coloracioacute de la pell
eacutes el meacutes perilloacutes per quegrave porta a terme la metagravestasi
Els cagravencers de tipus carcinoma meacutes comuns soacuten el cagravencer de pit de progravestata
de pulmoacute i de cogravelon
11
Sarcoma Aquest tipus de cagravencer comenccedila en els teixits connectius
com els cartiacutelags el greix els muacutesculs els vasos sanguinis els ossos etc Dependent de la cegravelmiddotlula on srsquoorigina el cagravencer es poden diferenciar amb
diferents noms els meacutes comuns soacuten els seguumlents
Osteosarcoma Cagravencer que deriva de lrsquoos
Sol aparegraveixer en ossos llargs
Eacutes el sarcoma meacutes frequumlent i eacutes el vuitegrave cagravencer infantil meacutes frequumlent
Condrosarcoma Lrsquoorigen del tumor es troba en
els cartiacutelags Eacutes el segon tipus de sarcoma meacutes
comuacute Els tumors solen estar en les costelles la
pelvis el fegravemur i llsquohuacutemer
Liposarcoma Cagravencer que teacute origen
en el greix (teixit adipoacutes)
Sol apareixeragrave en les extremitats
inferiors braccedilos pit i coll
Angiosarcoma Sarcoma que deriva dels
vasos sanguinis o limfagravetics de qualsevol
teixit drsquoun organisme
12
Leucegravemia Es coneix com el cagravencer de sang aquest cagravencer comenccedila en
els teixits que formen la sang com la medulmiddotla ogravessia Aquesta anomalia
provoca un augment descontrolat de glogravebuls blancs (cegravelmiddotlules que es troben en
la sang i soacuten les responsables de les respostes immunes)
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes impedeixen que es produeixin glogravebuls vermells
plaquetes (encarregades de tancar ferides) i glogravebuls blancs madurs normals
Eacutes el cagravencer diagnosticat meacutes frequumlentment en nens
Aquest cagravencer es va tornant cada vegada meacutes mortal a mesura que
disminueixen les cegravelmiddotlules sanguiacutenies normals
Les cegravelmiddotlules mutades es poden propagar al torrent sanguini i tambeacute poden
viatjar al cervell a la medulmiddotla espinal i altres parts del cos
-En les leucegravemies hi ha caregravencia de tumoracioacute srsquoafecta la sang i la medulmiddotla
ogravessia
La leucegravemia es pot classificar en diferents tipus Segons el tipus de funcioacute de la cegravelmiddotlula alterada Leucegravemia mieloide Leucegravemia limfoide
Segons lrsquoestat de maduracioacute de les cegravelmiddotlules leucegravemiques
Aguda cegravelmiddotlules immadures Aquestes no realitzen les funcions
Crogravenica es produeixen masses glogravebuls blancs madurs perograve soacuten
anormals La seva progressioacute eacutes meacutes lenta
13
Limfoma Aquest cagravencer comenccedila a les cegravelmiddotlules del sistema limfagravetic
(sistema que teacute com a funcioacute combatre infeccions i malalties i forma part del
sistema immunitari) El sistema limfagravetic transporta en els vasos limfagravetics
(semblants als sanguinis) un liacutequid anomenat Limfa La limfa conteacute limfogravecits
(que soacuten un tipus de glogravebuls blancs) Les cegravelmiddotlules afectades en aquest cas soacuten
els glogravebuls blancs i degut a que el sistema limfagravetic es troba per tot el cos el
limfoma es pot presentar a gairebeacute qualsevol part de cos Aquest tipus de
cagravencer es pot presentar tant en nens com en adults
-Hi ha dos tipus de limfomes
El limfoma de Hodgkin
El limfoma de NO Hodgkin
-Els dos tipus de limfoma es poden diferenciar a partir de les diverses
caracteriacutestiques de les cegravelmiddotlules malignes (que abans eren limfogravecits)
Caracteriacutestiques com per exemple el seu comportament la seva propagacioacute i
la seva resposta al tractament
El limfoma de NO Hodgkin eacutes el tipus meacutes comuacute
El tipus de limfoma es determina amb la biogravepsia i lrsquo examen de les cegravelmiddotlules
canceriacutegenes amb un microscopi per observar de quin tipus soacuten les cegravelmiddotlules
que han mutat
Quan srsquoobserven les cegravelmiddotlules canceriacutegenes i
aquestes soacuten un tipus de cegravelmiddotlules anomenades
ldquoCegravelmiddotlules de Reed-Sternbergrdquo (cegravelmiddotlules gegants
malignes que inicialment eren limfogravecits de
tipus B) el limfoma eacutes de tipus Limfoma
Hodgkin
Quan aquestes cegravelmiddotlules no es troben presents el cagravencer es classifica com a
Limfoma de NO Hodgkin
ldquoCegravelmiddotlules Limfoma de NO Hodgkinrdquo
14
El cagravencer de progravestata
El cagravencer de progravestata a nivell mundial eacutes el segon cagravencer meacutes diagnosticat en homes
despreacutes del cagravencer de pell perograve en Europa des de fa uns anys el cagravencer de progravestata
srsquoha convertit en el primer cagravencer meacutes diagnosticat A meacutes a meacutes eacutes una de les
primeres causes de mort en homes
El cagravencer de progravestata comenccedila quan algunes cegravelmiddotlules prostagravetiques de la progravestata
muten i comencen a multiplicar-se descontroladament Encara no se sap quegrave eacutes el
que causa aquest cagravencer perograve siacute es coneixen alguns factors a tenir en compte per al
desenvolupament drsquoaquest cagravencer com la genegravetica i la dieta Les cegravelmiddotlules mutades
poden fer metagravestasi especialment als ossos
El cagravencer de progravestata afecta meacutes frequumlentment a homes duns cinquanta anys
El creixement tumoral eacutes moderadament lent hi encara havent-trsquohi hagut metagravestasi
hi pot haver una supervivegravencia prolongada
El tumor maligne pot creacuteixer de tres maneres
Creixement local Es produeix per el creixement del tumor cancerigen que
envaeix la cagravepsula prostagravetica
Meacutes tard el tumor eacutes capaccedil de trencar la
capa prostagravetica degut la seva mida i aixiacute
el tumor segueix creixent envaint altres
teixits i ogravergans propers a la progravestata
Que les cegravelmiddotlules mutades envaeixin la
bufeta i el recte eacutes un proceacutes lent
La progravestata eacutes una glagravendula
sexual que nomeacutes presenta el
sexe masculiacute aquesta glagravendula
eacutes lrsquoencarregada drsquoelaborar un
liacutequid que forma part del
semen
La progravestata es troba sota de la
bufeta i envolta la uretra
Cagravepsula protagravestica
Bufeta
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
6
Quegrave eacutes el cagravencer
Tots els eacutessers vius estem formats per una o meacutes cegravelmiddotlules
Aquestes cegravelmiddotlules es divideixen contiacutenuament i de forma regular per reemplaccedilar a les
cegravelmiddotlules que ja soacuten mortes o velles perquegrave ja no compleixen les seves funcions Aixiacute es
manteacute la integritat i un funcionament correcte de tots el ogravergans
El proceacutes de divisioacute de les cegravelmiddotlules estagrave regulat per uns mecanismes que indiquen a la
cegravelmiddotlula quan ha de comenccedilar a dividir-se i quan no Quan es
produeix un dany en el DNA drsquouna cegravelmiddotlula que no pot ser
reparat es porta a terme lrsquoautodestruccioacute drsquoaquesta cegravelmiddotlula
aquest proceacutes tambeacute srsquoanomena mort celmiddotlular programada o
apoptosi
Per tant el cagravencer eacutes un tipus de malaltia que afecta als eacutessers
pluricelmiddotlulars en que un grup de cegravelmiddotlules desenvolupen un
creixement descontrolat i es multiplica el nombre de divisions
celmiddotlulars normals perquegrave per un dany celmiddotlular no es porta a
terme la apoptosi Aquestes cegravelmiddotlules envaeixen i destrueixen
teixits i a vegades hi ha una metagravestasi que es dona quan les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes sestenen a altres punts del cos a traveacutes
de la limfa o la sang creant altres tumors
Aquestes tres propietats (creixement celmiddotlular descontrolat
invasioacutedestruccioacute de teixitsogravergans i metagravestasi) soacuten las que
defineixen a un tumor maligne
Tambeacute existeixen els tumors benignes que tenen la manca de
metagravestasi alguns poden ser perjudicials per a la salut i ni ha
drsquoaltres que no (berrugues)
La majoria de cagravencers formen un tumor perograve alguns no ho fan
com per exemple la leucegravemia
El cagravencer pot afectar a animals a plantes i a humans es pot patir a qualsevol edat i fins
hi tot pot afectar als fetus El risc de patir cagravencer augmenta amb lrsquoedat
Avui en dia es poden trobar meacutes de cent tipus de cagravencer
La branca de la medicina que socupa de lestudi el diagnogravestic el tractament i la
prevencioacute del cagravencer eacutes loncologia
Divisioacute celmiddotlular normal
Divisioacute de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
Dany celmiddotlular
sense reparacioacute
Apoptosi
No hi ha
apoptosi
7
Origen del cagravencer
Gairebeacute tots els cagravencers soacuten provocats per anormalitats en el material genegravetic de les
cegravelmiddotlules afectades Aquestes anormalitats solen ser degudes als carcinogravegens que soacuten
agents fiacutesics (radiacions) quiacutemics o biologravegics potencialment capaccedilos de produir cagravencer
al exposar-se a teixits vius com per exemple el fum de tabac radiacions substagravencies
quiacutemiquesetc Altres anormalitats genegravetiques que provoquen cagravencer es poden
adquirir aleatograveriament per culpa derrors en la replicacioacute de lADN o soacuten heretades
dels progenitors i per tant estan presents a totes les cegravelmiddotlules del nou individu des del
naixement
Una vegada una cegravelmiddotlula presenti anomalies en el seu material genegravetic aquesta
adquiriragrave la capacitat de multiplicar-se descontroladament i drsquoenvair teixits i altres
ogravergans Aquest proceacutes es denominaragrave carcinogegravenesi
La carcinogegravenesi pot durar anys i passa per diferents fases
La primera fase comenccedila amb la mutacioacute de la primera cegravelmiddotlula succeeix a nivell
del genoma i les alteracions poden trobar-se
tant en tumors benignes com en malignes
Una sola mutacioacute no eacutes suficient per a que es
generi un cagravencer perograve aquesta cegravelmiddotlula
mutada eacutes la que pot iniciar el proceacutes La
condicioacute meacutes important per a lrsquoevolucioacute drsquoun
cagravencer eacutes que la cegravelmiddotlula mutada sigui capaccedil
de dividir-se Una vegada aquesta primera
cegravelmiddotlula es divideix com a resultat les
cegravelmiddotlules filles mutades comencen a
multiplicar-se a una velocitat superior a lo
normal transmetent als seus descendents lrsquoanomalia genegravetica de la cegravelmiddotlula
mare
Aquesta fase srsquoanomena fase drsquoiniciacioacute tumoral i les cegravelmiddotlules involucrades
en aquesta fase es diuen cegravelmiddotlules iniciades Lrsquoalteracioacute que han produiumlt les
cegravelmiddotlules iniciades eacutes irreversible perograve es insuficient per desenvolupar un
cagravencer
Carcinogravegens
meacutes
comuns
8
La segona fase comenccedila quan els agents carcinogravegens actuen de nou i
repetidament sobre les cegravelmiddotlules iniciades Aquest fet provoca que la divisioacute
celmiddotlular sigui meacutes ragravepida encara i com a consequumlegravencia es multipliquin
cegravelmiddotlules mutades amb meacutes probabilitat de que es produeixin noves
mutacions Aixiacute comenccedila la creacioacute drsquoun tumor i tambeacute pot passar tan en
tumors malignes com de benignes
Aquesta fase es coneix com la fase de promocioacute i les cegravelmiddotlules que hi
participen srsquoanomenen cegravelmiddotlules promocionades Alguns factors que actuen
en aquesta fase serien el tabac la mala alimentacioacute beure alcohol etc
La tercera fase srsquoinicia quan les cegravelmiddotlules iniciades i les promocionades
pateixen noves mutacions per culpa de carcinogravegens i les divisions
descontrolades entre cegravelmiddotlules cada vegada meacutes mutades
Cada vegada hi ha meacutes anomalies en el seu codi genegravetic en el seu creixement
i en el seu comportament com a cegravelmiddotlula
Aquesta tercera fase nomeacutes es pateix si es tracta drsquoun tumor maligne
Aquesta fase srsquoanomena fase de progressioacute ja que les cegravelmiddotlules adquireixen la
capacitat drsquoinvasioacute infiltrant-se en teixits propers o en drsquoaltres situats a certa
distancia viatjant a traveacutes del sistema sanguini o limfagravetic provocant aixiacute les
metagravestasis
Fase drsquoiniciacioacute
tumoral
Fase de
promocioacute
Fase de
progressioacute
9
Propagacioacute del cagravencer en fase de progressioacute
Els cagravencers soacuten capaccedilos de propagar-se per el cos a partir de dos mecanismes
invasioacute i metagravestasi
Lrsquo invasioacute eacutes la migracioacute i la penetracioacute directa de les cegravelmiddotlules mutades en teixits o
ogravergans propers al tumor drsquoorigen
La metagravestasi eacutes el proceacutes de propagacioacute drsquoun tumor cancerigen a un altre ogravergan
diferent al que es va iniciar Succeeix per mitjagrave dels vasos sanguinis o limfagravetics
Primer algunes de les
cegravelmiddotlules malignes se
separen del tumor
inicial i a continuacioacute
penetren el vasos
sanguinis o limfagravetics
viatgen a traveacutes de la
circulacioacute sanguiacutenia i
finalment creixen i es
divideixen en un nou
teixit o ogravergan creant
un nou tumor maligne
El nou tumor
metastagravetic eacutes del
mateix tipus de cagravencer
que el del tumor
drsquoorigen
La metagravestasi eacutes la
causa principal de
mort drsquoun eacutesser viu
amb cagravencer
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen els teixits i
vasos sanguinis propers
Les cegravelmiddotlules soacuten
transportades
per el sistema
circulatori a
ogravergans i teixits
llunyans
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen un nou ogravergan i creix un
nou tumor en ell
10
Classificacioacute
Els cagravencers es classifiquen segons la histologia (lrsquoestructura i les caracteriacutestiques dels
teixits) i la ubicacioacute del teixit on es troba el tumor
Carcinoma Eacutes el tipus de cagravencer meacutes comuacute el 80 de cagravencers soacuten
carcinomes Aquest cagravencer comenccedila a la pell o als teixits que cobreixen els
ogravergans interns (cegravelmiddotlules epitelials)
Algunes drsquoaquestes cegravelmiddotlules tenen diferents caracteriacutestiques i per aquest
motiu tenen un nom especial Les meacutes importants soacuten
Adenocarcinoma cagravencer del teixit glandular (mames progravestata)
Carcinoma de cegravelmiddotlules escamoses cagravencer de les cegravelmiddotlules no glandulars
(esogravefag coll del uacuteter)
Carcinoma de cegravelmiddotlules basals (Basalioma) avarca un 78 de tots els
cagravencers cagravencer de pell meacutes comuacute Rarament produeix metagravestasi
Melanoma cagravencer de les cegravelmiddotlules que produeixen la coloracioacute de la pell
eacutes el meacutes perilloacutes per quegrave porta a terme la metagravestasi
Els cagravencers de tipus carcinoma meacutes comuns soacuten el cagravencer de pit de progravestata
de pulmoacute i de cogravelon
11
Sarcoma Aquest tipus de cagravencer comenccedila en els teixits connectius
com els cartiacutelags el greix els muacutesculs els vasos sanguinis els ossos etc Dependent de la cegravelmiddotlula on srsquoorigina el cagravencer es poden diferenciar amb
diferents noms els meacutes comuns soacuten els seguumlents
Osteosarcoma Cagravencer que deriva de lrsquoos
Sol aparegraveixer en ossos llargs
Eacutes el sarcoma meacutes frequumlent i eacutes el vuitegrave cagravencer infantil meacutes frequumlent
Condrosarcoma Lrsquoorigen del tumor es troba en
els cartiacutelags Eacutes el segon tipus de sarcoma meacutes
comuacute Els tumors solen estar en les costelles la
pelvis el fegravemur i llsquohuacutemer
Liposarcoma Cagravencer que teacute origen
en el greix (teixit adipoacutes)
Sol apareixeragrave en les extremitats
inferiors braccedilos pit i coll
Angiosarcoma Sarcoma que deriva dels
vasos sanguinis o limfagravetics de qualsevol
teixit drsquoun organisme
12
Leucegravemia Es coneix com el cagravencer de sang aquest cagravencer comenccedila en
els teixits que formen la sang com la medulmiddotla ogravessia Aquesta anomalia
provoca un augment descontrolat de glogravebuls blancs (cegravelmiddotlules que es troben en
la sang i soacuten les responsables de les respostes immunes)
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes impedeixen que es produeixin glogravebuls vermells
plaquetes (encarregades de tancar ferides) i glogravebuls blancs madurs normals
Eacutes el cagravencer diagnosticat meacutes frequumlentment en nens
Aquest cagravencer es va tornant cada vegada meacutes mortal a mesura que
disminueixen les cegravelmiddotlules sanguiacutenies normals
Les cegravelmiddotlules mutades es poden propagar al torrent sanguini i tambeacute poden
viatjar al cervell a la medulmiddotla espinal i altres parts del cos
-En les leucegravemies hi ha caregravencia de tumoracioacute srsquoafecta la sang i la medulmiddotla
ogravessia
La leucegravemia es pot classificar en diferents tipus Segons el tipus de funcioacute de la cegravelmiddotlula alterada Leucegravemia mieloide Leucegravemia limfoide
Segons lrsquoestat de maduracioacute de les cegravelmiddotlules leucegravemiques
Aguda cegravelmiddotlules immadures Aquestes no realitzen les funcions
Crogravenica es produeixen masses glogravebuls blancs madurs perograve soacuten
anormals La seva progressioacute eacutes meacutes lenta
13
Limfoma Aquest cagravencer comenccedila a les cegravelmiddotlules del sistema limfagravetic
(sistema que teacute com a funcioacute combatre infeccions i malalties i forma part del
sistema immunitari) El sistema limfagravetic transporta en els vasos limfagravetics
(semblants als sanguinis) un liacutequid anomenat Limfa La limfa conteacute limfogravecits
(que soacuten un tipus de glogravebuls blancs) Les cegravelmiddotlules afectades en aquest cas soacuten
els glogravebuls blancs i degut a que el sistema limfagravetic es troba per tot el cos el
limfoma es pot presentar a gairebeacute qualsevol part de cos Aquest tipus de
cagravencer es pot presentar tant en nens com en adults
-Hi ha dos tipus de limfomes
El limfoma de Hodgkin
El limfoma de NO Hodgkin
-Els dos tipus de limfoma es poden diferenciar a partir de les diverses
caracteriacutestiques de les cegravelmiddotlules malignes (que abans eren limfogravecits)
Caracteriacutestiques com per exemple el seu comportament la seva propagacioacute i
la seva resposta al tractament
El limfoma de NO Hodgkin eacutes el tipus meacutes comuacute
El tipus de limfoma es determina amb la biogravepsia i lrsquo examen de les cegravelmiddotlules
canceriacutegenes amb un microscopi per observar de quin tipus soacuten les cegravelmiddotlules
que han mutat
Quan srsquoobserven les cegravelmiddotlules canceriacutegenes i
aquestes soacuten un tipus de cegravelmiddotlules anomenades
ldquoCegravelmiddotlules de Reed-Sternbergrdquo (cegravelmiddotlules gegants
malignes que inicialment eren limfogravecits de
tipus B) el limfoma eacutes de tipus Limfoma
Hodgkin
Quan aquestes cegravelmiddotlules no es troben presents el cagravencer es classifica com a
Limfoma de NO Hodgkin
ldquoCegravelmiddotlules Limfoma de NO Hodgkinrdquo
14
El cagravencer de progravestata
El cagravencer de progravestata a nivell mundial eacutes el segon cagravencer meacutes diagnosticat en homes
despreacutes del cagravencer de pell perograve en Europa des de fa uns anys el cagravencer de progravestata
srsquoha convertit en el primer cagravencer meacutes diagnosticat A meacutes a meacutes eacutes una de les
primeres causes de mort en homes
El cagravencer de progravestata comenccedila quan algunes cegravelmiddotlules prostagravetiques de la progravestata
muten i comencen a multiplicar-se descontroladament Encara no se sap quegrave eacutes el
que causa aquest cagravencer perograve siacute es coneixen alguns factors a tenir en compte per al
desenvolupament drsquoaquest cagravencer com la genegravetica i la dieta Les cegravelmiddotlules mutades
poden fer metagravestasi especialment als ossos
El cagravencer de progravestata afecta meacutes frequumlentment a homes duns cinquanta anys
El creixement tumoral eacutes moderadament lent hi encara havent-trsquohi hagut metagravestasi
hi pot haver una supervivegravencia prolongada
El tumor maligne pot creacuteixer de tres maneres
Creixement local Es produeix per el creixement del tumor cancerigen que
envaeix la cagravepsula prostagravetica
Meacutes tard el tumor eacutes capaccedil de trencar la
capa prostagravetica degut la seva mida i aixiacute
el tumor segueix creixent envaint altres
teixits i ogravergans propers a la progravestata
Que les cegravelmiddotlules mutades envaeixin la
bufeta i el recte eacutes un proceacutes lent
La progravestata eacutes una glagravendula
sexual que nomeacutes presenta el
sexe masculiacute aquesta glagravendula
eacutes lrsquoencarregada drsquoelaborar un
liacutequid que forma part del
semen
La progravestata es troba sota de la
bufeta i envolta la uretra
Cagravepsula protagravestica
Bufeta
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
7
Origen del cagravencer
Gairebeacute tots els cagravencers soacuten provocats per anormalitats en el material genegravetic de les
cegravelmiddotlules afectades Aquestes anormalitats solen ser degudes als carcinogravegens que soacuten
agents fiacutesics (radiacions) quiacutemics o biologravegics potencialment capaccedilos de produir cagravencer
al exposar-se a teixits vius com per exemple el fum de tabac radiacions substagravencies
quiacutemiquesetc Altres anormalitats genegravetiques que provoquen cagravencer es poden
adquirir aleatograveriament per culpa derrors en la replicacioacute de lADN o soacuten heretades
dels progenitors i per tant estan presents a totes les cegravelmiddotlules del nou individu des del
naixement
Una vegada una cegravelmiddotlula presenti anomalies en el seu material genegravetic aquesta
adquiriragrave la capacitat de multiplicar-se descontroladament i drsquoenvair teixits i altres
ogravergans Aquest proceacutes es denominaragrave carcinogegravenesi
La carcinogegravenesi pot durar anys i passa per diferents fases
La primera fase comenccedila amb la mutacioacute de la primera cegravelmiddotlula succeeix a nivell
del genoma i les alteracions poden trobar-se
tant en tumors benignes com en malignes
Una sola mutacioacute no eacutes suficient per a que es
generi un cagravencer perograve aquesta cegravelmiddotlula
mutada eacutes la que pot iniciar el proceacutes La
condicioacute meacutes important per a lrsquoevolucioacute drsquoun
cagravencer eacutes que la cegravelmiddotlula mutada sigui capaccedil
de dividir-se Una vegada aquesta primera
cegravelmiddotlula es divideix com a resultat les
cegravelmiddotlules filles mutades comencen a
multiplicar-se a una velocitat superior a lo
normal transmetent als seus descendents lrsquoanomalia genegravetica de la cegravelmiddotlula
mare
Aquesta fase srsquoanomena fase drsquoiniciacioacute tumoral i les cegravelmiddotlules involucrades
en aquesta fase es diuen cegravelmiddotlules iniciades Lrsquoalteracioacute que han produiumlt les
cegravelmiddotlules iniciades eacutes irreversible perograve es insuficient per desenvolupar un
cagravencer
Carcinogravegens
meacutes
comuns
8
La segona fase comenccedila quan els agents carcinogravegens actuen de nou i
repetidament sobre les cegravelmiddotlules iniciades Aquest fet provoca que la divisioacute
celmiddotlular sigui meacutes ragravepida encara i com a consequumlegravencia es multipliquin
cegravelmiddotlules mutades amb meacutes probabilitat de que es produeixin noves
mutacions Aixiacute comenccedila la creacioacute drsquoun tumor i tambeacute pot passar tan en
tumors malignes com de benignes
Aquesta fase es coneix com la fase de promocioacute i les cegravelmiddotlules que hi
participen srsquoanomenen cegravelmiddotlules promocionades Alguns factors que actuen
en aquesta fase serien el tabac la mala alimentacioacute beure alcohol etc
La tercera fase srsquoinicia quan les cegravelmiddotlules iniciades i les promocionades
pateixen noves mutacions per culpa de carcinogravegens i les divisions
descontrolades entre cegravelmiddotlules cada vegada meacutes mutades
Cada vegada hi ha meacutes anomalies en el seu codi genegravetic en el seu creixement
i en el seu comportament com a cegravelmiddotlula
Aquesta tercera fase nomeacutes es pateix si es tracta drsquoun tumor maligne
Aquesta fase srsquoanomena fase de progressioacute ja que les cegravelmiddotlules adquireixen la
capacitat drsquoinvasioacute infiltrant-se en teixits propers o en drsquoaltres situats a certa
distancia viatjant a traveacutes del sistema sanguini o limfagravetic provocant aixiacute les
metagravestasis
Fase drsquoiniciacioacute
tumoral
Fase de
promocioacute
Fase de
progressioacute
9
Propagacioacute del cagravencer en fase de progressioacute
Els cagravencers soacuten capaccedilos de propagar-se per el cos a partir de dos mecanismes
invasioacute i metagravestasi
Lrsquo invasioacute eacutes la migracioacute i la penetracioacute directa de les cegravelmiddotlules mutades en teixits o
ogravergans propers al tumor drsquoorigen
La metagravestasi eacutes el proceacutes de propagacioacute drsquoun tumor cancerigen a un altre ogravergan
diferent al que es va iniciar Succeeix per mitjagrave dels vasos sanguinis o limfagravetics
Primer algunes de les
cegravelmiddotlules malignes se
separen del tumor
inicial i a continuacioacute
penetren el vasos
sanguinis o limfagravetics
viatgen a traveacutes de la
circulacioacute sanguiacutenia i
finalment creixen i es
divideixen en un nou
teixit o ogravergan creant
un nou tumor maligne
El nou tumor
metastagravetic eacutes del
mateix tipus de cagravencer
que el del tumor
drsquoorigen
La metagravestasi eacutes la
causa principal de
mort drsquoun eacutesser viu
amb cagravencer
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen els teixits i
vasos sanguinis propers
Les cegravelmiddotlules soacuten
transportades
per el sistema
circulatori a
ogravergans i teixits
llunyans
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen un nou ogravergan i creix un
nou tumor en ell
10
Classificacioacute
Els cagravencers es classifiquen segons la histologia (lrsquoestructura i les caracteriacutestiques dels
teixits) i la ubicacioacute del teixit on es troba el tumor
Carcinoma Eacutes el tipus de cagravencer meacutes comuacute el 80 de cagravencers soacuten
carcinomes Aquest cagravencer comenccedila a la pell o als teixits que cobreixen els
ogravergans interns (cegravelmiddotlules epitelials)
Algunes drsquoaquestes cegravelmiddotlules tenen diferents caracteriacutestiques i per aquest
motiu tenen un nom especial Les meacutes importants soacuten
Adenocarcinoma cagravencer del teixit glandular (mames progravestata)
Carcinoma de cegravelmiddotlules escamoses cagravencer de les cegravelmiddotlules no glandulars
(esogravefag coll del uacuteter)
Carcinoma de cegravelmiddotlules basals (Basalioma) avarca un 78 de tots els
cagravencers cagravencer de pell meacutes comuacute Rarament produeix metagravestasi
Melanoma cagravencer de les cegravelmiddotlules que produeixen la coloracioacute de la pell
eacutes el meacutes perilloacutes per quegrave porta a terme la metagravestasi
Els cagravencers de tipus carcinoma meacutes comuns soacuten el cagravencer de pit de progravestata
de pulmoacute i de cogravelon
11
Sarcoma Aquest tipus de cagravencer comenccedila en els teixits connectius
com els cartiacutelags el greix els muacutesculs els vasos sanguinis els ossos etc Dependent de la cegravelmiddotlula on srsquoorigina el cagravencer es poden diferenciar amb
diferents noms els meacutes comuns soacuten els seguumlents
Osteosarcoma Cagravencer que deriva de lrsquoos
Sol aparegraveixer en ossos llargs
Eacutes el sarcoma meacutes frequumlent i eacutes el vuitegrave cagravencer infantil meacutes frequumlent
Condrosarcoma Lrsquoorigen del tumor es troba en
els cartiacutelags Eacutes el segon tipus de sarcoma meacutes
comuacute Els tumors solen estar en les costelles la
pelvis el fegravemur i llsquohuacutemer
Liposarcoma Cagravencer que teacute origen
en el greix (teixit adipoacutes)
Sol apareixeragrave en les extremitats
inferiors braccedilos pit i coll
Angiosarcoma Sarcoma que deriva dels
vasos sanguinis o limfagravetics de qualsevol
teixit drsquoun organisme
12
Leucegravemia Es coneix com el cagravencer de sang aquest cagravencer comenccedila en
els teixits que formen la sang com la medulmiddotla ogravessia Aquesta anomalia
provoca un augment descontrolat de glogravebuls blancs (cegravelmiddotlules que es troben en
la sang i soacuten les responsables de les respostes immunes)
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes impedeixen que es produeixin glogravebuls vermells
plaquetes (encarregades de tancar ferides) i glogravebuls blancs madurs normals
Eacutes el cagravencer diagnosticat meacutes frequumlentment en nens
Aquest cagravencer es va tornant cada vegada meacutes mortal a mesura que
disminueixen les cegravelmiddotlules sanguiacutenies normals
Les cegravelmiddotlules mutades es poden propagar al torrent sanguini i tambeacute poden
viatjar al cervell a la medulmiddotla espinal i altres parts del cos
-En les leucegravemies hi ha caregravencia de tumoracioacute srsquoafecta la sang i la medulmiddotla
ogravessia
La leucegravemia es pot classificar en diferents tipus Segons el tipus de funcioacute de la cegravelmiddotlula alterada Leucegravemia mieloide Leucegravemia limfoide
Segons lrsquoestat de maduracioacute de les cegravelmiddotlules leucegravemiques
Aguda cegravelmiddotlules immadures Aquestes no realitzen les funcions
Crogravenica es produeixen masses glogravebuls blancs madurs perograve soacuten
anormals La seva progressioacute eacutes meacutes lenta
13
Limfoma Aquest cagravencer comenccedila a les cegravelmiddotlules del sistema limfagravetic
(sistema que teacute com a funcioacute combatre infeccions i malalties i forma part del
sistema immunitari) El sistema limfagravetic transporta en els vasos limfagravetics
(semblants als sanguinis) un liacutequid anomenat Limfa La limfa conteacute limfogravecits
(que soacuten un tipus de glogravebuls blancs) Les cegravelmiddotlules afectades en aquest cas soacuten
els glogravebuls blancs i degut a que el sistema limfagravetic es troba per tot el cos el
limfoma es pot presentar a gairebeacute qualsevol part de cos Aquest tipus de
cagravencer es pot presentar tant en nens com en adults
-Hi ha dos tipus de limfomes
El limfoma de Hodgkin
El limfoma de NO Hodgkin
-Els dos tipus de limfoma es poden diferenciar a partir de les diverses
caracteriacutestiques de les cegravelmiddotlules malignes (que abans eren limfogravecits)
Caracteriacutestiques com per exemple el seu comportament la seva propagacioacute i
la seva resposta al tractament
El limfoma de NO Hodgkin eacutes el tipus meacutes comuacute
El tipus de limfoma es determina amb la biogravepsia i lrsquo examen de les cegravelmiddotlules
canceriacutegenes amb un microscopi per observar de quin tipus soacuten les cegravelmiddotlules
que han mutat
Quan srsquoobserven les cegravelmiddotlules canceriacutegenes i
aquestes soacuten un tipus de cegravelmiddotlules anomenades
ldquoCegravelmiddotlules de Reed-Sternbergrdquo (cegravelmiddotlules gegants
malignes que inicialment eren limfogravecits de
tipus B) el limfoma eacutes de tipus Limfoma
Hodgkin
Quan aquestes cegravelmiddotlules no es troben presents el cagravencer es classifica com a
Limfoma de NO Hodgkin
ldquoCegravelmiddotlules Limfoma de NO Hodgkinrdquo
14
El cagravencer de progravestata
El cagravencer de progravestata a nivell mundial eacutes el segon cagravencer meacutes diagnosticat en homes
despreacutes del cagravencer de pell perograve en Europa des de fa uns anys el cagravencer de progravestata
srsquoha convertit en el primer cagravencer meacutes diagnosticat A meacutes a meacutes eacutes una de les
primeres causes de mort en homes
El cagravencer de progravestata comenccedila quan algunes cegravelmiddotlules prostagravetiques de la progravestata
muten i comencen a multiplicar-se descontroladament Encara no se sap quegrave eacutes el
que causa aquest cagravencer perograve siacute es coneixen alguns factors a tenir en compte per al
desenvolupament drsquoaquest cagravencer com la genegravetica i la dieta Les cegravelmiddotlules mutades
poden fer metagravestasi especialment als ossos
El cagravencer de progravestata afecta meacutes frequumlentment a homes duns cinquanta anys
El creixement tumoral eacutes moderadament lent hi encara havent-trsquohi hagut metagravestasi
hi pot haver una supervivegravencia prolongada
El tumor maligne pot creacuteixer de tres maneres
Creixement local Es produeix per el creixement del tumor cancerigen que
envaeix la cagravepsula prostagravetica
Meacutes tard el tumor eacutes capaccedil de trencar la
capa prostagravetica degut la seva mida i aixiacute
el tumor segueix creixent envaint altres
teixits i ogravergans propers a la progravestata
Que les cegravelmiddotlules mutades envaeixin la
bufeta i el recte eacutes un proceacutes lent
La progravestata eacutes una glagravendula
sexual que nomeacutes presenta el
sexe masculiacute aquesta glagravendula
eacutes lrsquoencarregada drsquoelaborar un
liacutequid que forma part del
semen
La progravestata es troba sota de la
bufeta i envolta la uretra
Cagravepsula protagravestica
Bufeta
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
8
La segona fase comenccedila quan els agents carcinogravegens actuen de nou i
repetidament sobre les cegravelmiddotlules iniciades Aquest fet provoca que la divisioacute
celmiddotlular sigui meacutes ragravepida encara i com a consequumlegravencia es multipliquin
cegravelmiddotlules mutades amb meacutes probabilitat de que es produeixin noves
mutacions Aixiacute comenccedila la creacioacute drsquoun tumor i tambeacute pot passar tan en
tumors malignes com de benignes
Aquesta fase es coneix com la fase de promocioacute i les cegravelmiddotlules que hi
participen srsquoanomenen cegravelmiddotlules promocionades Alguns factors que actuen
en aquesta fase serien el tabac la mala alimentacioacute beure alcohol etc
La tercera fase srsquoinicia quan les cegravelmiddotlules iniciades i les promocionades
pateixen noves mutacions per culpa de carcinogravegens i les divisions
descontrolades entre cegravelmiddotlules cada vegada meacutes mutades
Cada vegada hi ha meacutes anomalies en el seu codi genegravetic en el seu creixement
i en el seu comportament com a cegravelmiddotlula
Aquesta tercera fase nomeacutes es pateix si es tracta drsquoun tumor maligne
Aquesta fase srsquoanomena fase de progressioacute ja que les cegravelmiddotlules adquireixen la
capacitat drsquoinvasioacute infiltrant-se en teixits propers o en drsquoaltres situats a certa
distancia viatjant a traveacutes del sistema sanguini o limfagravetic provocant aixiacute les
metagravestasis
Fase drsquoiniciacioacute
tumoral
Fase de
promocioacute
Fase de
progressioacute
9
Propagacioacute del cagravencer en fase de progressioacute
Els cagravencers soacuten capaccedilos de propagar-se per el cos a partir de dos mecanismes
invasioacute i metagravestasi
Lrsquo invasioacute eacutes la migracioacute i la penetracioacute directa de les cegravelmiddotlules mutades en teixits o
ogravergans propers al tumor drsquoorigen
La metagravestasi eacutes el proceacutes de propagacioacute drsquoun tumor cancerigen a un altre ogravergan
diferent al que es va iniciar Succeeix per mitjagrave dels vasos sanguinis o limfagravetics
Primer algunes de les
cegravelmiddotlules malignes se
separen del tumor
inicial i a continuacioacute
penetren el vasos
sanguinis o limfagravetics
viatgen a traveacutes de la
circulacioacute sanguiacutenia i
finalment creixen i es
divideixen en un nou
teixit o ogravergan creant
un nou tumor maligne
El nou tumor
metastagravetic eacutes del
mateix tipus de cagravencer
que el del tumor
drsquoorigen
La metagravestasi eacutes la
causa principal de
mort drsquoun eacutesser viu
amb cagravencer
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen els teixits i
vasos sanguinis propers
Les cegravelmiddotlules soacuten
transportades
per el sistema
circulatori a
ogravergans i teixits
llunyans
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen un nou ogravergan i creix un
nou tumor en ell
10
Classificacioacute
Els cagravencers es classifiquen segons la histologia (lrsquoestructura i les caracteriacutestiques dels
teixits) i la ubicacioacute del teixit on es troba el tumor
Carcinoma Eacutes el tipus de cagravencer meacutes comuacute el 80 de cagravencers soacuten
carcinomes Aquest cagravencer comenccedila a la pell o als teixits que cobreixen els
ogravergans interns (cegravelmiddotlules epitelials)
Algunes drsquoaquestes cegravelmiddotlules tenen diferents caracteriacutestiques i per aquest
motiu tenen un nom especial Les meacutes importants soacuten
Adenocarcinoma cagravencer del teixit glandular (mames progravestata)
Carcinoma de cegravelmiddotlules escamoses cagravencer de les cegravelmiddotlules no glandulars
(esogravefag coll del uacuteter)
Carcinoma de cegravelmiddotlules basals (Basalioma) avarca un 78 de tots els
cagravencers cagravencer de pell meacutes comuacute Rarament produeix metagravestasi
Melanoma cagravencer de les cegravelmiddotlules que produeixen la coloracioacute de la pell
eacutes el meacutes perilloacutes per quegrave porta a terme la metagravestasi
Els cagravencers de tipus carcinoma meacutes comuns soacuten el cagravencer de pit de progravestata
de pulmoacute i de cogravelon
11
Sarcoma Aquest tipus de cagravencer comenccedila en els teixits connectius
com els cartiacutelags el greix els muacutesculs els vasos sanguinis els ossos etc Dependent de la cegravelmiddotlula on srsquoorigina el cagravencer es poden diferenciar amb
diferents noms els meacutes comuns soacuten els seguumlents
Osteosarcoma Cagravencer que deriva de lrsquoos
Sol aparegraveixer en ossos llargs
Eacutes el sarcoma meacutes frequumlent i eacutes el vuitegrave cagravencer infantil meacutes frequumlent
Condrosarcoma Lrsquoorigen del tumor es troba en
els cartiacutelags Eacutes el segon tipus de sarcoma meacutes
comuacute Els tumors solen estar en les costelles la
pelvis el fegravemur i llsquohuacutemer
Liposarcoma Cagravencer que teacute origen
en el greix (teixit adipoacutes)
Sol apareixeragrave en les extremitats
inferiors braccedilos pit i coll
Angiosarcoma Sarcoma que deriva dels
vasos sanguinis o limfagravetics de qualsevol
teixit drsquoun organisme
12
Leucegravemia Es coneix com el cagravencer de sang aquest cagravencer comenccedila en
els teixits que formen la sang com la medulmiddotla ogravessia Aquesta anomalia
provoca un augment descontrolat de glogravebuls blancs (cegravelmiddotlules que es troben en
la sang i soacuten les responsables de les respostes immunes)
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes impedeixen que es produeixin glogravebuls vermells
plaquetes (encarregades de tancar ferides) i glogravebuls blancs madurs normals
Eacutes el cagravencer diagnosticat meacutes frequumlentment en nens
Aquest cagravencer es va tornant cada vegada meacutes mortal a mesura que
disminueixen les cegravelmiddotlules sanguiacutenies normals
Les cegravelmiddotlules mutades es poden propagar al torrent sanguini i tambeacute poden
viatjar al cervell a la medulmiddotla espinal i altres parts del cos
-En les leucegravemies hi ha caregravencia de tumoracioacute srsquoafecta la sang i la medulmiddotla
ogravessia
La leucegravemia es pot classificar en diferents tipus Segons el tipus de funcioacute de la cegravelmiddotlula alterada Leucegravemia mieloide Leucegravemia limfoide
Segons lrsquoestat de maduracioacute de les cegravelmiddotlules leucegravemiques
Aguda cegravelmiddotlules immadures Aquestes no realitzen les funcions
Crogravenica es produeixen masses glogravebuls blancs madurs perograve soacuten
anormals La seva progressioacute eacutes meacutes lenta
13
Limfoma Aquest cagravencer comenccedila a les cegravelmiddotlules del sistema limfagravetic
(sistema que teacute com a funcioacute combatre infeccions i malalties i forma part del
sistema immunitari) El sistema limfagravetic transporta en els vasos limfagravetics
(semblants als sanguinis) un liacutequid anomenat Limfa La limfa conteacute limfogravecits
(que soacuten un tipus de glogravebuls blancs) Les cegravelmiddotlules afectades en aquest cas soacuten
els glogravebuls blancs i degut a que el sistema limfagravetic es troba per tot el cos el
limfoma es pot presentar a gairebeacute qualsevol part de cos Aquest tipus de
cagravencer es pot presentar tant en nens com en adults
-Hi ha dos tipus de limfomes
El limfoma de Hodgkin
El limfoma de NO Hodgkin
-Els dos tipus de limfoma es poden diferenciar a partir de les diverses
caracteriacutestiques de les cegravelmiddotlules malignes (que abans eren limfogravecits)
Caracteriacutestiques com per exemple el seu comportament la seva propagacioacute i
la seva resposta al tractament
El limfoma de NO Hodgkin eacutes el tipus meacutes comuacute
El tipus de limfoma es determina amb la biogravepsia i lrsquo examen de les cegravelmiddotlules
canceriacutegenes amb un microscopi per observar de quin tipus soacuten les cegravelmiddotlules
que han mutat
Quan srsquoobserven les cegravelmiddotlules canceriacutegenes i
aquestes soacuten un tipus de cegravelmiddotlules anomenades
ldquoCegravelmiddotlules de Reed-Sternbergrdquo (cegravelmiddotlules gegants
malignes que inicialment eren limfogravecits de
tipus B) el limfoma eacutes de tipus Limfoma
Hodgkin
Quan aquestes cegravelmiddotlules no es troben presents el cagravencer es classifica com a
Limfoma de NO Hodgkin
ldquoCegravelmiddotlules Limfoma de NO Hodgkinrdquo
14
El cagravencer de progravestata
El cagravencer de progravestata a nivell mundial eacutes el segon cagravencer meacutes diagnosticat en homes
despreacutes del cagravencer de pell perograve en Europa des de fa uns anys el cagravencer de progravestata
srsquoha convertit en el primer cagravencer meacutes diagnosticat A meacutes a meacutes eacutes una de les
primeres causes de mort en homes
El cagravencer de progravestata comenccedila quan algunes cegravelmiddotlules prostagravetiques de la progravestata
muten i comencen a multiplicar-se descontroladament Encara no se sap quegrave eacutes el
que causa aquest cagravencer perograve siacute es coneixen alguns factors a tenir en compte per al
desenvolupament drsquoaquest cagravencer com la genegravetica i la dieta Les cegravelmiddotlules mutades
poden fer metagravestasi especialment als ossos
El cagravencer de progravestata afecta meacutes frequumlentment a homes duns cinquanta anys
El creixement tumoral eacutes moderadament lent hi encara havent-trsquohi hagut metagravestasi
hi pot haver una supervivegravencia prolongada
El tumor maligne pot creacuteixer de tres maneres
Creixement local Es produeix per el creixement del tumor cancerigen que
envaeix la cagravepsula prostagravetica
Meacutes tard el tumor eacutes capaccedil de trencar la
capa prostagravetica degut la seva mida i aixiacute
el tumor segueix creixent envaint altres
teixits i ogravergans propers a la progravestata
Que les cegravelmiddotlules mutades envaeixin la
bufeta i el recte eacutes un proceacutes lent
La progravestata eacutes una glagravendula
sexual que nomeacutes presenta el
sexe masculiacute aquesta glagravendula
eacutes lrsquoencarregada drsquoelaborar un
liacutequid que forma part del
semen
La progravestata es troba sota de la
bufeta i envolta la uretra
Cagravepsula protagravestica
Bufeta
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
9
Propagacioacute del cagravencer en fase de progressioacute
Els cagravencers soacuten capaccedilos de propagar-se per el cos a partir de dos mecanismes
invasioacute i metagravestasi
Lrsquo invasioacute eacutes la migracioacute i la penetracioacute directa de les cegravelmiddotlules mutades en teixits o
ogravergans propers al tumor drsquoorigen
La metagravestasi eacutes el proceacutes de propagacioacute drsquoun tumor cancerigen a un altre ogravergan
diferent al que es va iniciar Succeeix per mitjagrave dels vasos sanguinis o limfagravetics
Primer algunes de les
cegravelmiddotlules malignes se
separen del tumor
inicial i a continuacioacute
penetren el vasos
sanguinis o limfagravetics
viatgen a traveacutes de la
circulacioacute sanguiacutenia i
finalment creixen i es
divideixen en un nou
teixit o ogravergan creant
un nou tumor maligne
El nou tumor
metastagravetic eacutes del
mateix tipus de cagravencer
que el del tumor
drsquoorigen
La metagravestasi eacutes la
causa principal de
mort drsquoun eacutesser viu
amb cagravencer
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen els teixits i
vasos sanguinis propers
Les cegravelmiddotlules soacuten
transportades
per el sistema
circulatori a
ogravergans i teixits
llunyans
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
envaeixen un nou ogravergan i creix un
nou tumor en ell
10
Classificacioacute
Els cagravencers es classifiquen segons la histologia (lrsquoestructura i les caracteriacutestiques dels
teixits) i la ubicacioacute del teixit on es troba el tumor
Carcinoma Eacutes el tipus de cagravencer meacutes comuacute el 80 de cagravencers soacuten
carcinomes Aquest cagravencer comenccedila a la pell o als teixits que cobreixen els
ogravergans interns (cegravelmiddotlules epitelials)
Algunes drsquoaquestes cegravelmiddotlules tenen diferents caracteriacutestiques i per aquest
motiu tenen un nom especial Les meacutes importants soacuten
Adenocarcinoma cagravencer del teixit glandular (mames progravestata)
Carcinoma de cegravelmiddotlules escamoses cagravencer de les cegravelmiddotlules no glandulars
(esogravefag coll del uacuteter)
Carcinoma de cegravelmiddotlules basals (Basalioma) avarca un 78 de tots els
cagravencers cagravencer de pell meacutes comuacute Rarament produeix metagravestasi
Melanoma cagravencer de les cegravelmiddotlules que produeixen la coloracioacute de la pell
eacutes el meacutes perilloacutes per quegrave porta a terme la metagravestasi
Els cagravencers de tipus carcinoma meacutes comuns soacuten el cagravencer de pit de progravestata
de pulmoacute i de cogravelon
11
Sarcoma Aquest tipus de cagravencer comenccedila en els teixits connectius
com els cartiacutelags el greix els muacutesculs els vasos sanguinis els ossos etc Dependent de la cegravelmiddotlula on srsquoorigina el cagravencer es poden diferenciar amb
diferents noms els meacutes comuns soacuten els seguumlents
Osteosarcoma Cagravencer que deriva de lrsquoos
Sol aparegraveixer en ossos llargs
Eacutes el sarcoma meacutes frequumlent i eacutes el vuitegrave cagravencer infantil meacutes frequumlent
Condrosarcoma Lrsquoorigen del tumor es troba en
els cartiacutelags Eacutes el segon tipus de sarcoma meacutes
comuacute Els tumors solen estar en les costelles la
pelvis el fegravemur i llsquohuacutemer
Liposarcoma Cagravencer que teacute origen
en el greix (teixit adipoacutes)
Sol apareixeragrave en les extremitats
inferiors braccedilos pit i coll
Angiosarcoma Sarcoma que deriva dels
vasos sanguinis o limfagravetics de qualsevol
teixit drsquoun organisme
12
Leucegravemia Es coneix com el cagravencer de sang aquest cagravencer comenccedila en
els teixits que formen la sang com la medulmiddotla ogravessia Aquesta anomalia
provoca un augment descontrolat de glogravebuls blancs (cegravelmiddotlules que es troben en
la sang i soacuten les responsables de les respostes immunes)
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes impedeixen que es produeixin glogravebuls vermells
plaquetes (encarregades de tancar ferides) i glogravebuls blancs madurs normals
Eacutes el cagravencer diagnosticat meacutes frequumlentment en nens
Aquest cagravencer es va tornant cada vegada meacutes mortal a mesura que
disminueixen les cegravelmiddotlules sanguiacutenies normals
Les cegravelmiddotlules mutades es poden propagar al torrent sanguini i tambeacute poden
viatjar al cervell a la medulmiddotla espinal i altres parts del cos
-En les leucegravemies hi ha caregravencia de tumoracioacute srsquoafecta la sang i la medulmiddotla
ogravessia
La leucegravemia es pot classificar en diferents tipus Segons el tipus de funcioacute de la cegravelmiddotlula alterada Leucegravemia mieloide Leucegravemia limfoide
Segons lrsquoestat de maduracioacute de les cegravelmiddotlules leucegravemiques
Aguda cegravelmiddotlules immadures Aquestes no realitzen les funcions
Crogravenica es produeixen masses glogravebuls blancs madurs perograve soacuten
anormals La seva progressioacute eacutes meacutes lenta
13
Limfoma Aquest cagravencer comenccedila a les cegravelmiddotlules del sistema limfagravetic
(sistema que teacute com a funcioacute combatre infeccions i malalties i forma part del
sistema immunitari) El sistema limfagravetic transporta en els vasos limfagravetics
(semblants als sanguinis) un liacutequid anomenat Limfa La limfa conteacute limfogravecits
(que soacuten un tipus de glogravebuls blancs) Les cegravelmiddotlules afectades en aquest cas soacuten
els glogravebuls blancs i degut a que el sistema limfagravetic es troba per tot el cos el
limfoma es pot presentar a gairebeacute qualsevol part de cos Aquest tipus de
cagravencer es pot presentar tant en nens com en adults
-Hi ha dos tipus de limfomes
El limfoma de Hodgkin
El limfoma de NO Hodgkin
-Els dos tipus de limfoma es poden diferenciar a partir de les diverses
caracteriacutestiques de les cegravelmiddotlules malignes (que abans eren limfogravecits)
Caracteriacutestiques com per exemple el seu comportament la seva propagacioacute i
la seva resposta al tractament
El limfoma de NO Hodgkin eacutes el tipus meacutes comuacute
El tipus de limfoma es determina amb la biogravepsia i lrsquo examen de les cegravelmiddotlules
canceriacutegenes amb un microscopi per observar de quin tipus soacuten les cegravelmiddotlules
que han mutat
Quan srsquoobserven les cegravelmiddotlules canceriacutegenes i
aquestes soacuten un tipus de cegravelmiddotlules anomenades
ldquoCegravelmiddotlules de Reed-Sternbergrdquo (cegravelmiddotlules gegants
malignes que inicialment eren limfogravecits de
tipus B) el limfoma eacutes de tipus Limfoma
Hodgkin
Quan aquestes cegravelmiddotlules no es troben presents el cagravencer es classifica com a
Limfoma de NO Hodgkin
ldquoCegravelmiddotlules Limfoma de NO Hodgkinrdquo
14
El cagravencer de progravestata
El cagravencer de progravestata a nivell mundial eacutes el segon cagravencer meacutes diagnosticat en homes
despreacutes del cagravencer de pell perograve en Europa des de fa uns anys el cagravencer de progravestata
srsquoha convertit en el primer cagravencer meacutes diagnosticat A meacutes a meacutes eacutes una de les
primeres causes de mort en homes
El cagravencer de progravestata comenccedila quan algunes cegravelmiddotlules prostagravetiques de la progravestata
muten i comencen a multiplicar-se descontroladament Encara no se sap quegrave eacutes el
que causa aquest cagravencer perograve siacute es coneixen alguns factors a tenir en compte per al
desenvolupament drsquoaquest cagravencer com la genegravetica i la dieta Les cegravelmiddotlules mutades
poden fer metagravestasi especialment als ossos
El cagravencer de progravestata afecta meacutes frequumlentment a homes duns cinquanta anys
El creixement tumoral eacutes moderadament lent hi encara havent-trsquohi hagut metagravestasi
hi pot haver una supervivegravencia prolongada
El tumor maligne pot creacuteixer de tres maneres
Creixement local Es produeix per el creixement del tumor cancerigen que
envaeix la cagravepsula prostagravetica
Meacutes tard el tumor eacutes capaccedil de trencar la
capa prostagravetica degut la seva mida i aixiacute
el tumor segueix creixent envaint altres
teixits i ogravergans propers a la progravestata
Que les cegravelmiddotlules mutades envaeixin la
bufeta i el recte eacutes un proceacutes lent
La progravestata eacutes una glagravendula
sexual que nomeacutes presenta el
sexe masculiacute aquesta glagravendula
eacutes lrsquoencarregada drsquoelaborar un
liacutequid que forma part del
semen
La progravestata es troba sota de la
bufeta i envolta la uretra
Cagravepsula protagravestica
Bufeta
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
10
Classificacioacute
Els cagravencers es classifiquen segons la histologia (lrsquoestructura i les caracteriacutestiques dels
teixits) i la ubicacioacute del teixit on es troba el tumor
Carcinoma Eacutes el tipus de cagravencer meacutes comuacute el 80 de cagravencers soacuten
carcinomes Aquest cagravencer comenccedila a la pell o als teixits que cobreixen els
ogravergans interns (cegravelmiddotlules epitelials)
Algunes drsquoaquestes cegravelmiddotlules tenen diferents caracteriacutestiques i per aquest
motiu tenen un nom especial Les meacutes importants soacuten
Adenocarcinoma cagravencer del teixit glandular (mames progravestata)
Carcinoma de cegravelmiddotlules escamoses cagravencer de les cegravelmiddotlules no glandulars
(esogravefag coll del uacuteter)
Carcinoma de cegravelmiddotlules basals (Basalioma) avarca un 78 de tots els
cagravencers cagravencer de pell meacutes comuacute Rarament produeix metagravestasi
Melanoma cagravencer de les cegravelmiddotlules que produeixen la coloracioacute de la pell
eacutes el meacutes perilloacutes per quegrave porta a terme la metagravestasi
Els cagravencers de tipus carcinoma meacutes comuns soacuten el cagravencer de pit de progravestata
de pulmoacute i de cogravelon
11
Sarcoma Aquest tipus de cagravencer comenccedila en els teixits connectius
com els cartiacutelags el greix els muacutesculs els vasos sanguinis els ossos etc Dependent de la cegravelmiddotlula on srsquoorigina el cagravencer es poden diferenciar amb
diferents noms els meacutes comuns soacuten els seguumlents
Osteosarcoma Cagravencer que deriva de lrsquoos
Sol aparegraveixer en ossos llargs
Eacutes el sarcoma meacutes frequumlent i eacutes el vuitegrave cagravencer infantil meacutes frequumlent
Condrosarcoma Lrsquoorigen del tumor es troba en
els cartiacutelags Eacutes el segon tipus de sarcoma meacutes
comuacute Els tumors solen estar en les costelles la
pelvis el fegravemur i llsquohuacutemer
Liposarcoma Cagravencer que teacute origen
en el greix (teixit adipoacutes)
Sol apareixeragrave en les extremitats
inferiors braccedilos pit i coll
Angiosarcoma Sarcoma que deriva dels
vasos sanguinis o limfagravetics de qualsevol
teixit drsquoun organisme
12
Leucegravemia Es coneix com el cagravencer de sang aquest cagravencer comenccedila en
els teixits que formen la sang com la medulmiddotla ogravessia Aquesta anomalia
provoca un augment descontrolat de glogravebuls blancs (cegravelmiddotlules que es troben en
la sang i soacuten les responsables de les respostes immunes)
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes impedeixen que es produeixin glogravebuls vermells
plaquetes (encarregades de tancar ferides) i glogravebuls blancs madurs normals
Eacutes el cagravencer diagnosticat meacutes frequumlentment en nens
Aquest cagravencer es va tornant cada vegada meacutes mortal a mesura que
disminueixen les cegravelmiddotlules sanguiacutenies normals
Les cegravelmiddotlules mutades es poden propagar al torrent sanguini i tambeacute poden
viatjar al cervell a la medulmiddotla espinal i altres parts del cos
-En les leucegravemies hi ha caregravencia de tumoracioacute srsquoafecta la sang i la medulmiddotla
ogravessia
La leucegravemia es pot classificar en diferents tipus Segons el tipus de funcioacute de la cegravelmiddotlula alterada Leucegravemia mieloide Leucegravemia limfoide
Segons lrsquoestat de maduracioacute de les cegravelmiddotlules leucegravemiques
Aguda cegravelmiddotlules immadures Aquestes no realitzen les funcions
Crogravenica es produeixen masses glogravebuls blancs madurs perograve soacuten
anormals La seva progressioacute eacutes meacutes lenta
13
Limfoma Aquest cagravencer comenccedila a les cegravelmiddotlules del sistema limfagravetic
(sistema que teacute com a funcioacute combatre infeccions i malalties i forma part del
sistema immunitari) El sistema limfagravetic transporta en els vasos limfagravetics
(semblants als sanguinis) un liacutequid anomenat Limfa La limfa conteacute limfogravecits
(que soacuten un tipus de glogravebuls blancs) Les cegravelmiddotlules afectades en aquest cas soacuten
els glogravebuls blancs i degut a que el sistema limfagravetic es troba per tot el cos el
limfoma es pot presentar a gairebeacute qualsevol part de cos Aquest tipus de
cagravencer es pot presentar tant en nens com en adults
-Hi ha dos tipus de limfomes
El limfoma de Hodgkin
El limfoma de NO Hodgkin
-Els dos tipus de limfoma es poden diferenciar a partir de les diverses
caracteriacutestiques de les cegravelmiddotlules malignes (que abans eren limfogravecits)
Caracteriacutestiques com per exemple el seu comportament la seva propagacioacute i
la seva resposta al tractament
El limfoma de NO Hodgkin eacutes el tipus meacutes comuacute
El tipus de limfoma es determina amb la biogravepsia i lrsquo examen de les cegravelmiddotlules
canceriacutegenes amb un microscopi per observar de quin tipus soacuten les cegravelmiddotlules
que han mutat
Quan srsquoobserven les cegravelmiddotlules canceriacutegenes i
aquestes soacuten un tipus de cegravelmiddotlules anomenades
ldquoCegravelmiddotlules de Reed-Sternbergrdquo (cegravelmiddotlules gegants
malignes que inicialment eren limfogravecits de
tipus B) el limfoma eacutes de tipus Limfoma
Hodgkin
Quan aquestes cegravelmiddotlules no es troben presents el cagravencer es classifica com a
Limfoma de NO Hodgkin
ldquoCegravelmiddotlules Limfoma de NO Hodgkinrdquo
14
El cagravencer de progravestata
El cagravencer de progravestata a nivell mundial eacutes el segon cagravencer meacutes diagnosticat en homes
despreacutes del cagravencer de pell perograve en Europa des de fa uns anys el cagravencer de progravestata
srsquoha convertit en el primer cagravencer meacutes diagnosticat A meacutes a meacutes eacutes una de les
primeres causes de mort en homes
El cagravencer de progravestata comenccedila quan algunes cegravelmiddotlules prostagravetiques de la progravestata
muten i comencen a multiplicar-se descontroladament Encara no se sap quegrave eacutes el
que causa aquest cagravencer perograve siacute es coneixen alguns factors a tenir en compte per al
desenvolupament drsquoaquest cagravencer com la genegravetica i la dieta Les cegravelmiddotlules mutades
poden fer metagravestasi especialment als ossos
El cagravencer de progravestata afecta meacutes frequumlentment a homes duns cinquanta anys
El creixement tumoral eacutes moderadament lent hi encara havent-trsquohi hagut metagravestasi
hi pot haver una supervivegravencia prolongada
El tumor maligne pot creacuteixer de tres maneres
Creixement local Es produeix per el creixement del tumor cancerigen que
envaeix la cagravepsula prostagravetica
Meacutes tard el tumor eacutes capaccedil de trencar la
capa prostagravetica degut la seva mida i aixiacute
el tumor segueix creixent envaint altres
teixits i ogravergans propers a la progravestata
Que les cegravelmiddotlules mutades envaeixin la
bufeta i el recte eacutes un proceacutes lent
La progravestata eacutes una glagravendula
sexual que nomeacutes presenta el
sexe masculiacute aquesta glagravendula
eacutes lrsquoencarregada drsquoelaborar un
liacutequid que forma part del
semen
La progravestata es troba sota de la
bufeta i envolta la uretra
Cagravepsula protagravestica
Bufeta
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
11
Sarcoma Aquest tipus de cagravencer comenccedila en els teixits connectius
com els cartiacutelags el greix els muacutesculs els vasos sanguinis els ossos etc Dependent de la cegravelmiddotlula on srsquoorigina el cagravencer es poden diferenciar amb
diferents noms els meacutes comuns soacuten els seguumlents
Osteosarcoma Cagravencer que deriva de lrsquoos
Sol aparegraveixer en ossos llargs
Eacutes el sarcoma meacutes frequumlent i eacutes el vuitegrave cagravencer infantil meacutes frequumlent
Condrosarcoma Lrsquoorigen del tumor es troba en
els cartiacutelags Eacutes el segon tipus de sarcoma meacutes
comuacute Els tumors solen estar en les costelles la
pelvis el fegravemur i llsquohuacutemer
Liposarcoma Cagravencer que teacute origen
en el greix (teixit adipoacutes)
Sol apareixeragrave en les extremitats
inferiors braccedilos pit i coll
Angiosarcoma Sarcoma que deriva dels
vasos sanguinis o limfagravetics de qualsevol
teixit drsquoun organisme
12
Leucegravemia Es coneix com el cagravencer de sang aquest cagravencer comenccedila en
els teixits que formen la sang com la medulmiddotla ogravessia Aquesta anomalia
provoca un augment descontrolat de glogravebuls blancs (cegravelmiddotlules que es troben en
la sang i soacuten les responsables de les respostes immunes)
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes impedeixen que es produeixin glogravebuls vermells
plaquetes (encarregades de tancar ferides) i glogravebuls blancs madurs normals
Eacutes el cagravencer diagnosticat meacutes frequumlentment en nens
Aquest cagravencer es va tornant cada vegada meacutes mortal a mesura que
disminueixen les cegravelmiddotlules sanguiacutenies normals
Les cegravelmiddotlules mutades es poden propagar al torrent sanguini i tambeacute poden
viatjar al cervell a la medulmiddotla espinal i altres parts del cos
-En les leucegravemies hi ha caregravencia de tumoracioacute srsquoafecta la sang i la medulmiddotla
ogravessia
La leucegravemia es pot classificar en diferents tipus Segons el tipus de funcioacute de la cegravelmiddotlula alterada Leucegravemia mieloide Leucegravemia limfoide
Segons lrsquoestat de maduracioacute de les cegravelmiddotlules leucegravemiques
Aguda cegravelmiddotlules immadures Aquestes no realitzen les funcions
Crogravenica es produeixen masses glogravebuls blancs madurs perograve soacuten
anormals La seva progressioacute eacutes meacutes lenta
13
Limfoma Aquest cagravencer comenccedila a les cegravelmiddotlules del sistema limfagravetic
(sistema que teacute com a funcioacute combatre infeccions i malalties i forma part del
sistema immunitari) El sistema limfagravetic transporta en els vasos limfagravetics
(semblants als sanguinis) un liacutequid anomenat Limfa La limfa conteacute limfogravecits
(que soacuten un tipus de glogravebuls blancs) Les cegravelmiddotlules afectades en aquest cas soacuten
els glogravebuls blancs i degut a que el sistema limfagravetic es troba per tot el cos el
limfoma es pot presentar a gairebeacute qualsevol part de cos Aquest tipus de
cagravencer es pot presentar tant en nens com en adults
-Hi ha dos tipus de limfomes
El limfoma de Hodgkin
El limfoma de NO Hodgkin
-Els dos tipus de limfoma es poden diferenciar a partir de les diverses
caracteriacutestiques de les cegravelmiddotlules malignes (que abans eren limfogravecits)
Caracteriacutestiques com per exemple el seu comportament la seva propagacioacute i
la seva resposta al tractament
El limfoma de NO Hodgkin eacutes el tipus meacutes comuacute
El tipus de limfoma es determina amb la biogravepsia i lrsquo examen de les cegravelmiddotlules
canceriacutegenes amb un microscopi per observar de quin tipus soacuten les cegravelmiddotlules
que han mutat
Quan srsquoobserven les cegravelmiddotlules canceriacutegenes i
aquestes soacuten un tipus de cegravelmiddotlules anomenades
ldquoCegravelmiddotlules de Reed-Sternbergrdquo (cegravelmiddotlules gegants
malignes que inicialment eren limfogravecits de
tipus B) el limfoma eacutes de tipus Limfoma
Hodgkin
Quan aquestes cegravelmiddotlules no es troben presents el cagravencer es classifica com a
Limfoma de NO Hodgkin
ldquoCegravelmiddotlules Limfoma de NO Hodgkinrdquo
14
El cagravencer de progravestata
El cagravencer de progravestata a nivell mundial eacutes el segon cagravencer meacutes diagnosticat en homes
despreacutes del cagravencer de pell perograve en Europa des de fa uns anys el cagravencer de progravestata
srsquoha convertit en el primer cagravencer meacutes diagnosticat A meacutes a meacutes eacutes una de les
primeres causes de mort en homes
El cagravencer de progravestata comenccedila quan algunes cegravelmiddotlules prostagravetiques de la progravestata
muten i comencen a multiplicar-se descontroladament Encara no se sap quegrave eacutes el
que causa aquest cagravencer perograve siacute es coneixen alguns factors a tenir en compte per al
desenvolupament drsquoaquest cagravencer com la genegravetica i la dieta Les cegravelmiddotlules mutades
poden fer metagravestasi especialment als ossos
El cagravencer de progravestata afecta meacutes frequumlentment a homes duns cinquanta anys
El creixement tumoral eacutes moderadament lent hi encara havent-trsquohi hagut metagravestasi
hi pot haver una supervivegravencia prolongada
El tumor maligne pot creacuteixer de tres maneres
Creixement local Es produeix per el creixement del tumor cancerigen que
envaeix la cagravepsula prostagravetica
Meacutes tard el tumor eacutes capaccedil de trencar la
capa prostagravetica degut la seva mida i aixiacute
el tumor segueix creixent envaint altres
teixits i ogravergans propers a la progravestata
Que les cegravelmiddotlules mutades envaeixin la
bufeta i el recte eacutes un proceacutes lent
La progravestata eacutes una glagravendula
sexual que nomeacutes presenta el
sexe masculiacute aquesta glagravendula
eacutes lrsquoencarregada drsquoelaborar un
liacutequid que forma part del
semen
La progravestata es troba sota de la
bufeta i envolta la uretra
Cagravepsula protagravestica
Bufeta
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
12
Leucegravemia Es coneix com el cagravencer de sang aquest cagravencer comenccedila en
els teixits que formen la sang com la medulmiddotla ogravessia Aquesta anomalia
provoca un augment descontrolat de glogravebuls blancs (cegravelmiddotlules que es troben en
la sang i soacuten les responsables de les respostes immunes)
Les cegravelmiddotlules canceriacutegenes impedeixen que es produeixin glogravebuls vermells
plaquetes (encarregades de tancar ferides) i glogravebuls blancs madurs normals
Eacutes el cagravencer diagnosticat meacutes frequumlentment en nens
Aquest cagravencer es va tornant cada vegada meacutes mortal a mesura que
disminueixen les cegravelmiddotlules sanguiacutenies normals
Les cegravelmiddotlules mutades es poden propagar al torrent sanguini i tambeacute poden
viatjar al cervell a la medulmiddotla espinal i altres parts del cos
-En les leucegravemies hi ha caregravencia de tumoracioacute srsquoafecta la sang i la medulmiddotla
ogravessia
La leucegravemia es pot classificar en diferents tipus Segons el tipus de funcioacute de la cegravelmiddotlula alterada Leucegravemia mieloide Leucegravemia limfoide
Segons lrsquoestat de maduracioacute de les cegravelmiddotlules leucegravemiques
Aguda cegravelmiddotlules immadures Aquestes no realitzen les funcions
Crogravenica es produeixen masses glogravebuls blancs madurs perograve soacuten
anormals La seva progressioacute eacutes meacutes lenta
13
Limfoma Aquest cagravencer comenccedila a les cegravelmiddotlules del sistema limfagravetic
(sistema que teacute com a funcioacute combatre infeccions i malalties i forma part del
sistema immunitari) El sistema limfagravetic transporta en els vasos limfagravetics
(semblants als sanguinis) un liacutequid anomenat Limfa La limfa conteacute limfogravecits
(que soacuten un tipus de glogravebuls blancs) Les cegravelmiddotlules afectades en aquest cas soacuten
els glogravebuls blancs i degut a que el sistema limfagravetic es troba per tot el cos el
limfoma es pot presentar a gairebeacute qualsevol part de cos Aquest tipus de
cagravencer es pot presentar tant en nens com en adults
-Hi ha dos tipus de limfomes
El limfoma de Hodgkin
El limfoma de NO Hodgkin
-Els dos tipus de limfoma es poden diferenciar a partir de les diverses
caracteriacutestiques de les cegravelmiddotlules malignes (que abans eren limfogravecits)
Caracteriacutestiques com per exemple el seu comportament la seva propagacioacute i
la seva resposta al tractament
El limfoma de NO Hodgkin eacutes el tipus meacutes comuacute
El tipus de limfoma es determina amb la biogravepsia i lrsquo examen de les cegravelmiddotlules
canceriacutegenes amb un microscopi per observar de quin tipus soacuten les cegravelmiddotlules
que han mutat
Quan srsquoobserven les cegravelmiddotlules canceriacutegenes i
aquestes soacuten un tipus de cegravelmiddotlules anomenades
ldquoCegravelmiddotlules de Reed-Sternbergrdquo (cegravelmiddotlules gegants
malignes que inicialment eren limfogravecits de
tipus B) el limfoma eacutes de tipus Limfoma
Hodgkin
Quan aquestes cegravelmiddotlules no es troben presents el cagravencer es classifica com a
Limfoma de NO Hodgkin
ldquoCegravelmiddotlules Limfoma de NO Hodgkinrdquo
14
El cagravencer de progravestata
El cagravencer de progravestata a nivell mundial eacutes el segon cagravencer meacutes diagnosticat en homes
despreacutes del cagravencer de pell perograve en Europa des de fa uns anys el cagravencer de progravestata
srsquoha convertit en el primer cagravencer meacutes diagnosticat A meacutes a meacutes eacutes una de les
primeres causes de mort en homes
El cagravencer de progravestata comenccedila quan algunes cegravelmiddotlules prostagravetiques de la progravestata
muten i comencen a multiplicar-se descontroladament Encara no se sap quegrave eacutes el
que causa aquest cagravencer perograve siacute es coneixen alguns factors a tenir en compte per al
desenvolupament drsquoaquest cagravencer com la genegravetica i la dieta Les cegravelmiddotlules mutades
poden fer metagravestasi especialment als ossos
El cagravencer de progravestata afecta meacutes frequumlentment a homes duns cinquanta anys
El creixement tumoral eacutes moderadament lent hi encara havent-trsquohi hagut metagravestasi
hi pot haver una supervivegravencia prolongada
El tumor maligne pot creacuteixer de tres maneres
Creixement local Es produeix per el creixement del tumor cancerigen que
envaeix la cagravepsula prostagravetica
Meacutes tard el tumor eacutes capaccedil de trencar la
capa prostagravetica degut la seva mida i aixiacute
el tumor segueix creixent envaint altres
teixits i ogravergans propers a la progravestata
Que les cegravelmiddotlules mutades envaeixin la
bufeta i el recte eacutes un proceacutes lent
La progravestata eacutes una glagravendula
sexual que nomeacutes presenta el
sexe masculiacute aquesta glagravendula
eacutes lrsquoencarregada drsquoelaborar un
liacutequid que forma part del
semen
La progravestata es troba sota de la
bufeta i envolta la uretra
Cagravepsula protagravestica
Bufeta
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
13
Limfoma Aquest cagravencer comenccedila a les cegravelmiddotlules del sistema limfagravetic
(sistema que teacute com a funcioacute combatre infeccions i malalties i forma part del
sistema immunitari) El sistema limfagravetic transporta en els vasos limfagravetics
(semblants als sanguinis) un liacutequid anomenat Limfa La limfa conteacute limfogravecits
(que soacuten un tipus de glogravebuls blancs) Les cegravelmiddotlules afectades en aquest cas soacuten
els glogravebuls blancs i degut a que el sistema limfagravetic es troba per tot el cos el
limfoma es pot presentar a gairebeacute qualsevol part de cos Aquest tipus de
cagravencer es pot presentar tant en nens com en adults
-Hi ha dos tipus de limfomes
El limfoma de Hodgkin
El limfoma de NO Hodgkin
-Els dos tipus de limfoma es poden diferenciar a partir de les diverses
caracteriacutestiques de les cegravelmiddotlules malignes (que abans eren limfogravecits)
Caracteriacutestiques com per exemple el seu comportament la seva propagacioacute i
la seva resposta al tractament
El limfoma de NO Hodgkin eacutes el tipus meacutes comuacute
El tipus de limfoma es determina amb la biogravepsia i lrsquo examen de les cegravelmiddotlules
canceriacutegenes amb un microscopi per observar de quin tipus soacuten les cegravelmiddotlules
que han mutat
Quan srsquoobserven les cegravelmiddotlules canceriacutegenes i
aquestes soacuten un tipus de cegravelmiddotlules anomenades
ldquoCegravelmiddotlules de Reed-Sternbergrdquo (cegravelmiddotlules gegants
malignes que inicialment eren limfogravecits de
tipus B) el limfoma eacutes de tipus Limfoma
Hodgkin
Quan aquestes cegravelmiddotlules no es troben presents el cagravencer es classifica com a
Limfoma de NO Hodgkin
ldquoCegravelmiddotlules Limfoma de NO Hodgkinrdquo
14
El cagravencer de progravestata
El cagravencer de progravestata a nivell mundial eacutes el segon cagravencer meacutes diagnosticat en homes
despreacutes del cagravencer de pell perograve en Europa des de fa uns anys el cagravencer de progravestata
srsquoha convertit en el primer cagravencer meacutes diagnosticat A meacutes a meacutes eacutes una de les
primeres causes de mort en homes
El cagravencer de progravestata comenccedila quan algunes cegravelmiddotlules prostagravetiques de la progravestata
muten i comencen a multiplicar-se descontroladament Encara no se sap quegrave eacutes el
que causa aquest cagravencer perograve siacute es coneixen alguns factors a tenir en compte per al
desenvolupament drsquoaquest cagravencer com la genegravetica i la dieta Les cegravelmiddotlules mutades
poden fer metagravestasi especialment als ossos
El cagravencer de progravestata afecta meacutes frequumlentment a homes duns cinquanta anys
El creixement tumoral eacutes moderadament lent hi encara havent-trsquohi hagut metagravestasi
hi pot haver una supervivegravencia prolongada
El tumor maligne pot creacuteixer de tres maneres
Creixement local Es produeix per el creixement del tumor cancerigen que
envaeix la cagravepsula prostagravetica
Meacutes tard el tumor eacutes capaccedil de trencar la
capa prostagravetica degut la seva mida i aixiacute
el tumor segueix creixent envaint altres
teixits i ogravergans propers a la progravestata
Que les cegravelmiddotlules mutades envaeixin la
bufeta i el recte eacutes un proceacutes lent
La progravestata eacutes una glagravendula
sexual que nomeacutes presenta el
sexe masculiacute aquesta glagravendula
eacutes lrsquoencarregada drsquoelaborar un
liacutequid que forma part del
semen
La progravestata es troba sota de la
bufeta i envolta la uretra
Cagravepsula protagravestica
Bufeta
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
14
El cagravencer de progravestata
El cagravencer de progravestata a nivell mundial eacutes el segon cagravencer meacutes diagnosticat en homes
despreacutes del cagravencer de pell perograve en Europa des de fa uns anys el cagravencer de progravestata
srsquoha convertit en el primer cagravencer meacutes diagnosticat A meacutes a meacutes eacutes una de les
primeres causes de mort en homes
El cagravencer de progravestata comenccedila quan algunes cegravelmiddotlules prostagravetiques de la progravestata
muten i comencen a multiplicar-se descontroladament Encara no se sap quegrave eacutes el
que causa aquest cagravencer perograve siacute es coneixen alguns factors a tenir en compte per al
desenvolupament drsquoaquest cagravencer com la genegravetica i la dieta Les cegravelmiddotlules mutades
poden fer metagravestasi especialment als ossos
El cagravencer de progravestata afecta meacutes frequumlentment a homes duns cinquanta anys
El creixement tumoral eacutes moderadament lent hi encara havent-trsquohi hagut metagravestasi
hi pot haver una supervivegravencia prolongada
El tumor maligne pot creacuteixer de tres maneres
Creixement local Es produeix per el creixement del tumor cancerigen que
envaeix la cagravepsula prostagravetica
Meacutes tard el tumor eacutes capaccedil de trencar la
capa prostagravetica degut la seva mida i aixiacute
el tumor segueix creixent envaint altres
teixits i ogravergans propers a la progravestata
Que les cegravelmiddotlules mutades envaeixin la
bufeta i el recte eacutes un proceacutes lent
La progravestata eacutes una glagravendula
sexual que nomeacutes presenta el
sexe masculiacute aquesta glagravendula
eacutes lrsquoencarregada drsquoelaborar un
liacutequid que forma part del
semen
La progravestata es troba sota de la
bufeta i envolta la uretra
Cagravepsula protagravestica
Bufeta
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
15
Disseminacioacute limfagravetica es dona quan es produeix la invasioacute dels capilmiddotlars limfagravetics
per les cegravelmiddotlules tumorals i
aquestes es propaguen
per la resta de lrsquoorganisme
a traves del sistema
limfagravetic La frequumlegravencia amb que
es produeixi una
disseminacioacute limfagravetica
teacute relacioacute directa amb la
mida del tumor inicial i
el grau de malignitat
Disseminacioacute hematogravegenahemagravetica Aquesta disseminacioacute comenccedila quan les
cegravelmiddotlules mutades entren
en contacte amb els
vasos sanguinis
traspassen la paret del
vas sanguini i les cegravelmiddotlules
comencen a viatjar per el
sistema sanguini i
aquestes envaeixen altres
teixits o ogravergans En el cas
del cagravencer de progravestata el
teixit ossi eacutes el meacutes
afectat per les cegravelmiddotlules
tumorals
Eacutes la via de propagacioacute
meacutes important per a la
majoria de tumors
malignes
Envaeix altres ogravergans
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
16
Cures per el cagravencer de progravestata
Com ja srsquoha citat anteriorment el cagravencer de progravestata encara no teacute una cura eficaccedil
del tot i actualment les cures nomeacutes allarguen la vida de lrsquoafectat
Segons lrsquoetapa del cagravencer lrsquoestadi la situacioacute i altres factors soacuten meacutes
recomanables alguns tractaments que altres
Els possibles tractaments soacuten els seguumlents
Lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia activa Aquest tractament srsquoutilitza
amb homes amb una avanccedilada edat i problemes de salut greus ja que
normalment en aquestes situacions el cagravencer no els mata gragravecies al seu
lent desenvolupament Consisteix en controlar i observar lrsquoestat del cagravencer
amb proves de sang i biogravepsies de la progravestata
[Annex 1]
La cirurgia Eacutes una de les opcions meacutes comunes si es creu que no hi ha
presencia de metagravestasi cap a altres teixits i ogravergans Consisteix en lrsquoextirpacioacute
total de la progravestata i les vesiacutecules seminals
[Annex 2]
La Radioteragravepia En aquest tractament srsquoutilitzen rajos drsquoalta energia per
aixiacute disminuir el nombre de cegravelmiddotlules canceriacutegenes
[Annex 3]
Crioteragravepia Utilitza temperatures molt fredes per a congelar i eliminar les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes que es troben a la progravestata
[Annex 4]
Teragravepia hormonal Aquesta teragravepia teacute com a objectiu el reduir el nivell de
les hormones masculines anomenades androgravegens i aixiacute evitar que aquestes
hormones afectin a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes ja que els androgravegens
estimulen al creixement de cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
[Annex 5]
Quimioteragravepia Consisteix en utilitzar medicaments contra el cagravencer que
srsquoinjecten a partir de via intravenosa o oral Aquests medicaments entren al
torrent sanguini i per aquesta raoacute aquest tractament eacutes bastant eficaccedil per
als cagravencer que ja srsquohan propagat a altres ogravergans
[Annex 6]
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
17
Tractament amb vacunes
Primer fer un inciacutes per explicar que eacutes una vacuna
Una vacuna eacutes una medicina que conteacute una substagravencia composta per
microorganismes atenuats morts o derivats drsquoaquests microorganismes
Aquesta substagravencia sol ser injectada per via intravenosa per arribar a
lrsquoorganisme i aixiacute prevenir algunes malalties infeccioses
Al entrar aquesta substagravencia en contacte amb lrsquoorganisme aquest uacuteltim activa
els anticossos del nostre sistema immunitari per poder desfer-se de la infeccioacute
Despreacutes el sintema immune es torna immune a aquesta infeccioacute ja que si el
sistema immunitari torna a estar en contacte amb aquests microorganismes els
nostres anticossos ja sabran com actuar per eliminar-los del nostre organisme
Les vacunes contra el cagravencer estan compostes per modificadors de resposta
biologravegica Aquests modificadors de resposta fan que srsquoactivi el sistema
immunitari per a que estimuli o es restauri lhabilitat per combatre malalties
Hi ha dos tipus de vacunes contra el cagravencer
Vacunes preventives les quals intenten impedir que es presenti el cagravencer en
gent sana
Vacunes de tractament aquestes vacunes han de tractar un cagravencer ja
existent i reforccedilar la resposta immunitagraveria natural del cos per a que aixiacute els
anticossos puguin atacar el cagravencer
La primera i uacutenica vacuna de tractament per al cagravencer de progravestata que va ser
aprovada per la FBA (Administracioacute de Aliments i Medicaments) va ser la
Provenge (sipuleucel-T) lrsquoany 2010 Aquesta vacuna reforccedila al sistema
immunitari per ajudar-lo a atacar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes de la progravestata
La vacuna estagrave aprovada per a utilitzar-se amb alguns homes amb cagravencer
metagravestasic de progravestata
Provenge activa a les cegravelmiddotlules immunes
Cegravelmiddotlules immunes Les cegravelmiddotlules immunes
activades es multipliquen Finalment ataquen
al cagravencer prostagravetic
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
18
Les vacunes DNA
Per comenccedilar quegrave eacutes una vacuna de DNA
Una vacuna DNA eacutes un tipus de vacuna que va ser desenvolupada fa relativament poc
meacutes concretament a prop de lrsquoany 1990
La vacuna conteacute DNA modificat genegraveticament per a que al comenccedilament una petita
quantitat de les cegravelmiddotlules drsquoun eacutesser viu tinguin acceacutes a aquest DNA i les cegravelmiddotlules siguin
capaces de produir els nous ldquoproductesrdquo dels quals informen els gens del DNA injectat
La informacioacute del DNA eacutes codificada i traduiumlda i es produiran unes proteiumlnes antiacutegens
drsquointeregraves que fan possible lrsquoactivacioacute drsquouna resposta immune per part de les cegravelmiddotlules
sanes que atacaran directament al tumor maligne
Les vacunes de DNA tenen importants avantatges sobre les vacunes convencionals
com ara la capacitat drsquoobtenir meacutes tipus de respostes immunes tambeacute es perd el risc
de patir la malaltia que provoquen els microorganismes atenuats de les vacunes
convencionals ja que les vacunes de DNA nomeacutes contenen el codi genegravetic que
produeix antiacutegens drsquoaquests microorganismes i soacuten meacutes ragravepides i barates drsquoelaborar i
transportar
Actualment hi han diferents maneres drsquoadministrar la vacuna de DNA
1Injeccioacute intramuscular o
subcutagravenia La meacutes habitual srsquoinjecta
la vacuna amb una agulla que
entrebesa la pell o el muacutescul segons
la situacioacute
2Pistola de gens Eacutes un tipus de pistola que amb heli dispara DNA a les cegravelmiddotlules de
plantes i animals
3Injeccioacute Jet Eacutes un tipus de xeringa que utilitza alta pressioacute per penetrar la pell amb la vacuna substituint la agulla
Injeccioacute subcutaacutenia Injeccioacute
intramuscular
2 3
1
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
19
Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
Actualment encara no hi ha molta informacioacute sobre com srsquoimplanta i srsquoexpressa el
DNA despreacutes de ser injectat als teixits ( mitjanccedilant les possibles alternatives
esmentades a la pagravegina anterior )
La transfeccioacute consisteix en la introduccioacute de material genegravetic extern en cegravelmiddotlules
eucariotes [Annex 7]
-Hi ha dues maneres per fer meacutes efectiva la transfeccioacute i implantacioacute del DNA a les
cegravelmiddotlules
1 A partir de Liposomes Un liposoma eacutes una vesiacutecula amb forma drsquoesfera que
teacute com a membrana una bicapa lipiacutedica (semblant a la membrana celmiddotlular)
composta per fosfoliacutepids (un tipus de liacutepid) i colesterol Aquests liposomes
soacuten capaccedilos de transportar petites substagravencies
Srsquohan desenvolupat tegravecniques per a que els liposomes serveixin com a
transportadors dels gens que es volen implantar al nucli de les cegravelmiddotlules
Quiacutemicament srsquoinsereixen els gens drsquointeregraves dins dels liposomes i
srsquointrodueixen amb algun dels megravetodes esmentats abans perograve el lloc on
srsquointrodueixin aquests liposomes teacute una funcioacute molt important ja que se sap
que nomes drsquo1 a 10 del total del DNA inoculat eacutes implantat al nucli de les
cegravelmiddotlules que interessen (En tractaments per al cagravencer cegravelmiddotlules del sistema
immunitari)
- Una vegada srsquohan injectat els liposomes amb la informacioacute genegravetica
aquests es fusionen amb la membrana plasmagravetica permetent aixiacute lrsquoentrada
dels gens dins la cegravelmiddotlula
- Per aquesta raoacute les investigacions en les qual estudien les vacunes de DNA
i la seva eficagravecia contra el cagravencer obtenen millors resultats si les vacunes
soacuten injectades meacutes drsquouna vegada
[Annex 8]
-
El liposoma srsquouneix quiacutemicament amb el DNA drsquointeregraves creant un lipoplex Les estructures es fusionen amb la membrana celmiddotlular El liposoma eacutes introduiumlt per endocitosi (proceacutes drsquoentrar a la cegravelmiddotlula passant per la membrana celmiddotlular) i es forma un endosoma unit amb un liposoma Durant el proceacutes de maduracioacute de lrsquo endosoma en un liposoma la paret de lrsquo endosoma es pot trencar alliberant el DNA contingut al citoplasma i potencialment cap al nucli A vegades el DNA es degrada dins del liposoma
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
20
2 Lrsquoelectroporacioacute
- Lrsquo electroporacioacute consisteix en provocar un augment significatiu de la
conductivitat elegravectrica i la permeabilitat de la membrana plasmagravetica
celmiddotlular mitjanccedilant electricitat aplicada externament (normalment amb
unes agulles que srsquoinsereixen a la pell)
Segons el tipus de cegravelmiddotlula que es vol electroporar el voltatge de la
descagraverrega elegravectrica varia
En altres paraules lrsquoelectroporacioacute eacutes un proceacutes que es porta a terme
utilitzant una magravequina anomenada electroporador Aquesta magravequina
srsquoencarrega drsquoobrir els porus que es troben en la membrana celmiddotlular de les
cegravelmiddotlules per a que sigui meacutes eficaccedil lrsquoentrada drsquoalgun tipus de substagravencia
molecular Per provocar lrsquoobertura drsquoaquests porus lrsquoelectroporador
provoca unes petites descagraverregues elegravectriques
Si el voltatge de lrsquoelectricitat eacutes lrsquoadient provoca l`obertura temporal dels
porus celmiddotlulars perograve si no eacutes lrsquoadequada pot provocar lrsquo apoptosi de les
cegravelmiddotlules electroporades
Aquest proceacutes eacutes habitual en biologia molecular i en investigacions
biomegravediques per aixiacute poder introduir diferents substagravencies en cegravelmiddotlules drsquoun
animal o humagrave com per exemple sondes moleculars un fagravermac que pot
canviar les funcions celmiddotlulars o un fragment de DNA
- La nucleofeccioacute eacutes una variant de lrsquoelectroporacioacute La nucleofeccioacute eacutes un
megravetode de transfeccioacute de DNA que el porta a terme una magravequina
anomenada ldquoNucleofectorrdquo
La nucleofeccioacute fa la mateixa funcioacute que la de lrsquoelectroporador perograve en
comptes de provocar lrsquoobertura dels porus de la membrana plasmagravetica
drsquouna cegravelmiddotlula provoca lrsquoobertura dels porus de la membrana del nucli
celmiddotlular
[Annex 9]
Nucli
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
21
Experimentacioacute animal
Des dels comenccedilaments de la vida humana els animals han tingut un paper molt
important per a la nostra evolucioacute ja que han ajudat a arribar a comprendre la nostra
ldquocreacioacuterdquo o com funciona el nostre cos des drsquoun punt de vista biologravegic
Lrsquoexperimentacioacute amb animals actualment eacutes una de les
bases per a la investigacioacute en el moacuten de la medicina Perograve
aquestes pragravectiques sempre han rebut una oposicioacute per
part del colmiddotlectiu que estagrave a favor dels drets animals a
lrsquoigual que els dels humans ja que els animals soacuten sotmesos
a processos dolorosos io estressants entre altres coses
trencant aixiacute el seu cicle vital i condemnant-los a una futura
mort o una vida sense qualitat
Lrsquoexperimentacioacute animal consisteix en practicar diversos
experiments que poden ser meacutes o menys agressius amb
animals amb lrsquoobjectiu drsquoaconseguir noves dades sobre el
que srsquoestagrave investigant desenvolupar noves teories
aprendre nous conceptes o simplement per treure algun
benefici de profit per als humans com nous medicaments
Aquests experiments comencen quan srsquoinicia la preparacioacute del animal per a la seva
utilitzacioacute (model animalhumanitzat) i acaba quan srsquoaconsegueixen totes les
observacions i resultats desitjats sobre lrsquoanimalexperiment
Lrsquoexperimentacioacute amb animals aporta grans beneficis ja que gragravecies a aquests
experiments srsquohan pogut fer molts avanccedilos en la prevencioacute i tractament de moltes
malalties A meacutes a meacutes la medicina ha pogut evolucionar molt ragravepidament en poc
temps augmentant aixiacute lrsquoesperanccedila de vida de lrsquoeacutesser humagrave gragravecies tambeacute a la
possibilitat drsquoexperimentar amb animals
Actualment lrsquoexperimentacioacute animal segueix tenint un paper molt important i eacutes uacutetil
en agravembits com
-El comerccedil de lrsquoalimentacioacute i la produccioacute agriacutecola
-La sanitat humana i animal (medicines oncologia)
-La biotecnologia neurologia genegravetica etc
ldquoCampanya contra lrsquoexperimentacioacute animalrdquo
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
22
El Model Animal
Els models animals soacuten una de les parts meacutes importants i fonamentals de la
biomedicina
Abans de vendre qualsevol medicament sempre srsquoha drsquohaver provat abans en un
laboratori amb un model animal Els models animals soacuten utilitzats per investigar i
entendre les causes el diagnogravestic i el tractament drsquouna malaltia
Perograve quegrave eacutes un model animal
-Un model animal es coneix com a qualsevol espegravecie no humana que srsquoutilitzi en la
investigacioacute biomegravedica Eacutes molt important que els models animals compleixin els
requisits adequats que estiguin sans i que no
puguin patir cap malaltia biologravegica abans
drsquoiniciar el procediments drsquoinvestigacioacute
Per aquesta raoacute soacuten criats en un medi
controlat perograve que respecta el seu medi
natural amb el compliment dels principis
egravetics de lrsquoanimal Soacuten vigilats i tractats amb
molt de compte per a que no hi hagi
possibilitat de malalties en els animals (per a
que no afectin despreacutes al resultat de lrsquoexperiment on sigui utilitzat el model
animal)
Lrsquoespegravecie del model animal pot variar segons el tipus drsquoexperiment que es vol fer o
segons el tipus o quantitat de similitud que interessa que tingui el model animal
amb lrsquoeacutesser humagrave
En els paiumlsos meacutes desenvolupats srsquohan creat estructures com ldquoldquoLrsquoorganitzacioacute
Mundial de la Salutrdquo que protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute tant de tipus
governamental com privat
Srsquohan creat lleis com la ldquoDeclaracioacute de Helsinkirdquo o ldquoEl principi de las tres Rrsquosrdquo
que regulen lrsquoexperimentacioacute amb animals i pauten com han de ser aquests
experiments per a que respectin els principis egravetics
A partir de 1940 es van anant creant diferents institucions relacionades amb la
biomedicina i la veterinagraveria les quals han anat publicant guies conegudes
internacionalment on es detallen les normes principis i recomanacions per el
cuidat i lrsquouacutes dels animals de la manera meacutes humanitagraveria possible
ldquoLrsquoorganitzacioacute Mundial de la
Salutrdquoltlogotipgt
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
23
El principi de las tres Rrsquos
En 1959 William Russell (zoograveleg i psicograveleg) i Rex Burch (microbiograveleg) en el seu
famoacutes llibre ldquoThe principles of the humane animal experimental techniquesrdquo van
exposar el seu pensament sobre que lrsquoexcelmiddotlegravencia cientiacutefica estagrave lligada
directament a lrsquouacutes humanitari dels animals drsquoexperimentacioacute En el seu llibre
defineixen clarament un principi egravetic anomenat ldquoEl principi de les tres Rrsquosrdquo on
es diu que lrsquoexperimentacioacute per a que sigui egravetica srsquoha de basar en tres
fonaments reduir reemplaccedilar i refinar
Aquests fonaments informen drsquouna manera de reduir lrsquouacutes dels animals
drsquoexperimentacioacute i les causes de dolor i estreacutes
Fonaments del principi
Reduir Els experiments que requereixin
de lrsquouacutes de models animals han de ser
realitzats amb el nuacutemero miacutenim
drsquoanimals que permetin obtenir resultats
vagravelids cientiacuteficament
Reemplaccedilar Lrsquo utilitzacioacute drsquoanimals en
laboratoris ha de ser sempre
reemplaccedilada quan siguin possibles altres
megravetodes alternatius que no requereixin
lrsquouacutes drsquoanimals vius com models
matemagravetics o simuladors
Refinar Sempre srsquohan de portar a terme
tots el procediments per a minimitzar i
eliminar el dolor i patiment dels animals
-El disseny de lrsquoexperiment i la seleccioacute
del model que es decideixi ha de ser
perfeccionat i el meacutes adequat
-Qualitat de lrsquoambient on soacuten criats i
mantinguts els animals abans i durant
lrsquoexperimentacioacute
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
24
AMM- Declaracioacute de Helsinki
Lrsquo AMM (Associacioacute Megravedica Mundial) eacutes una associacioacute professional internacional
de metges drsquoarreu del moacuten Aquesta va ser creada lrsquoany 1947 i el seu objectiu eacutes
arribar a acords sobre lrsquoegravetica en la medicina i ajudar a la humanitat utilitzant els
coneixements meacutes avanccedilats i els nivells meacutes alts possibles de medicina i egravetica
megravedica
La declaracioacute de Helsinki va ser creada en lrsquoany 1964 a Hegravelsinki Finlagravendia i ha sigut
publicada de forma oficial per lrsquo AMM Des de llavors srsquoha sotmegraves a cinc revisions que
han fet que aquesta declaracioacute presenti 37 principis bagravesics per a que la medicina sigui
egravetica
Eacutes un document amb molt de pes en la histograveria de la investigacioacute egravetica ja que regula la
investigacioacute en la medicina
El seu principi bagravesic eacutes el respecte per lrsquoindividu i que el benestar del pacient ha drsquoestar
per sobre dels interessos de la ciegravencia
Aquesta declaracioacute en un dels principis que numera diu que la investigacioacute en humans
ha drsquoestar primerament basada en una experimentacioacute animal per assegurar la
seguretat dels primers perograve tambeacute exigeix que es respecti el benestar dels animals
utilitzats en la investigacioacute
Un altre principi eacutes el que els animals empleats en investigacions biomegravediques han de
rebre un tracte compassiu i que els investigadors han de complir totes les normes
egravetiques imposades per les lleis i declaracions (que srsquohan drsquoensenyar a tots els
investigadors en formacioacute)
-A part de la ldquoDeclaracioacute de Hegravelsinkirdquo lrsquoAMM ha publicat de manera oficial altres
declaracions com ldquoLa declaracioacute sobre lrsquouacutes drsquoanimals en lrsquo investigacioacute biomegravedicardquo
[Annex 10]
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
25
1
Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals
drsquoexperimentacioacute
Reial Decret 53-2013
Eacutes una norma juriacutedica de caragravecter general decidida per el Consell de
Ministres
Aquest document estableix les normes bagravesiques aplicables per a la
proteccioacute dels animals utilitzats en experimentacioacute i altres fins cientiacutefics
incloent la docegravencia regula entre daltres lavaluacioacute i autoritzacioacute de
projectes en els procediments on sutilitzin animals
El Reial Decret nomeacutes transposa la Directiva Europea 201063 UE sobre
benestar animal
[Annex 11]
Directiva 76768CEE
Eacutes una llei que estableix leliminacioacute gradual dels assaigs amb animals per a
lrsquo elaboracioacute de cosmegravetics
- Prohibeix experimentar amb animals tant per productes cosmegravetics acabats com els seus ingredients
- Prohibeix la comercialitzacioacute de
productes cosmegravetics acabats experimentats en animals o que continguin ingredients experimentats en animals [Annex 12]
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
26
El Model HumanitzatldquoNude mouserdquo
En una investigacioacute quan es vol investigar sobre lrsquoefecte que tindragrave un tractament
drsquouna determinada malaltia amb un model animal seragrave necessari trasplantar
cegravelmiddotlules humanes al model animal que srsquoutilitzi (normalment ratolins) Perograve si aquest proceacutes es porta a terme el sistema immune del model animal
provocaria un rebuig cap a les cegravelmiddotlules humanes i per tant no serviria de res haver-
lrsquohi implantat les cegravelmiddotlules humanes al model animal
Per aquesta raoacute el model animal ha de ser immunodeprimit eacutes ha dir se lrsquoha de
ldquodesactivarrdquo el seu sistema immune per a que no reconegui a les cegravelmiddotlules humanes
com estranyes
Model Humanitzat
Els models humanitzats soacuten els models animals transgegravenics eacutes a dir soacuten
animals que srsquoutilitzen per a lrsquoexperimentacioacute humana perograve a aquests sersquols
implanta determinats gens cegravelmiddotlules teixits io ogravergans humans per
lrsquoaprofitament humagrave
Aquest fet eacutes possible gragravecies a que els animals han sigut pregraveviament
modificats per a que siguin immunodeficients i no rebutgin els ogravergans
humans
La implantacioacute de gens humans als models animals fa que siguin capaccedilos de
produir proteiumlnes humanes que poden ser beneficioses per crear
medicaments o fins i tot per a que els animals pugin donar els seus ogravergans a
humans
Perograve encara que els animals que
soacuten modificats genegraveticament
tambeacute es consideren
humanitzats lo meacutes normal al
parlar drsquoanimals humanitzats eacutes
referir-se als animals els quals
sersquols introdueixen cegravelmiddotlules del
sistema immune humanes per a
que el sistema immune dels
animals respongui com
respondria un humagrave
ldquoExemple de ratoliacute humanitzat ratoliacute amb un ogravergan humagraverdquo
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
27
ldquoNude Mouserdquo
Un ratoliacute conegut com a ldquoNude Mouserdquo eacutes un tipus de ratoliacute que presenta un tipus de mutacioacute la qual provoca que aquests tipus de ratolins siguin immunodeficients degut al seu reduiumlt nombre de glogravebuls blancs i per aquesta raoacute i perquegrave no presenten pel en la pell sersquols coneix com ratolins nus
Aquests ratolins soacuten molt importants per les investigacions ja que poden rebre molts tipus de cegravelmiddotlules humanes ja que no provoquen cap resposta de rebuig per part del seu sistema immunologravegic
Aquests ratolins srsquoutilitzen especialment en les investigacions del cagravencer en les qual es busquen possibles tractaments o obtenir meacutes coneixements del cagravencer que srsquoinvestiga Eacutes molt important veure i conegraveixer com podria reaccionar un tractament contra el cagravencer contra cegravelmiddotlules tumorals humanes i com que nomeacutes es pot investigar primerament amb animals eacutes molt important el paper dels ratolins nus
Per tant a aquests ratolins sersquols implanten cegravelmiddotlules tumorals humanes i es proven tractaments (com fagravermacs antitumorals) que no requereixen de resposta immune per veure si aquets tractaments compleixen adequadament la seva funcioacute
ldquoNude Mouse ndash Ratoliacute nurdquo
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
28
Passos previs a lrsquoexperimentacioacute amb animals
-Comenccedilar a una investigacioacute no eacutes un proceacutes ragravepid i menys si srsquoempren animals
drsquoexperimentacioacute ja que es necessiten unes determinades instalmiddotlacions i a partir drsquouns
documents que demana El Comitegrave drsquoEgravetica de cada paiacutes srsquoha drsquoexplicar com seragrave la
investigacioacute i demostrar que la investigacioacute que es portaragrave a terme compleix la
directiva adequadament
Abans de comenccedilar qualsevol investigacioacute on srsquoemprin animals drsquoexperimentacioacute srsquohan
de tenir acceacutes a unes determinades instalmiddotlacions anomenades Estabularis
En els estabularis nomeacutes hi poden treballar investigadors amb coneixements de
veterinagraveria o aquests investigadors han de tenir el suport i lrsquoassessorament de
veterinaris per garantir el benestar dels animals
Estabulari Un estabulari eacutes un agraverea dedicada a la produccioacute i manteniment danimals
dexperimentacioacute amb sales per a lrsquoallotjament drsquoaquests animals (normalment
rosegadors) i cada sala amb el seu respectiu laboratori
La instalmiddotlacioacute ha de comptar amb un equip veterinari que garanteixi lrsquouacutes adequat
dels animals i una correcta atencioacute dels mateixos Aquests veterinaris poden ser
tant els investigadors del seu propi estudi com tambeacute poden donar suport a
investigadors que no soacuten veterinaris
Lrsquoestabulari tambeacute teacute un protocol drsquohigiene i seguretat molt estricte per evitar
qualsevol transferegravencia de substagravencies(microorganismes) de lrsquoexterior cap a
lrsquointerior i viceversa per garantir la seguretat de les persones tant com la dels
animals drsquoexperimentacioacute
A meacutes a meacutes lrsquoestabulari ha de complir totes les normes del Comitegrave Egravetic
dExperimentacioacute Animal de cada paiacutes
--Perograve per a que comenci una investigacioacute amb animals drsquoexperimentacioacute primer lrsquoha
drsquoautoritzar el Comitegrave drsquoEgravetica
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
29
El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
La comissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute teacute com a objectiu assegurar-se del
compliment de la normativa (Espanyola Real Decret 532013) en totes les
investigacions amb animals drsquoexperimentacioacute que es realitzin [Annex 13]
El Comitegrave es preocupa per el benestar animal el desenvolupament i la fabricacioacute de
productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes
Srsquoassegura de comprovar la qualitat leficagravecia i la seguretat de totes les investigacions
que utilitzen animals i srsquoencarrega de fer inspeccions drsquoaquestes investigacions per
garantir el compliment de totes les lleis respecte els animals drsquoexperimentacioacute
Com srsquoassegura el Comitegrave de que una investigacioacute eacutes apta
-Quan un centre drsquoinvestigacioacute vol comenccedilar una investigacioacute amb animals
drsquoexperimentacioacute ha de passar un proceacutes de tragravemits on aquest
centreinvestigador hauragrave drsquoomplir uns determinats documents
A Srsquoha drsquoomplir un solmiddotlicitud drsquoautoritzacioacute en la qual es demana
adjuntar uns determinats documents
Els quatre
documents (un
no obligatori) que
srsquohan drsquoadjuntar
per a que el
Comitegrave drsquoegravetica
autoritzi la
investigacioacute
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
30
A 1) Memograveria del projecte -En aquest document es troben les dades de lrsquoinvestigador responsable del
projecte i del personal que hi participaragrave Tambeacute es presenten les dades
generals del projecte com el tiacutetol i la hipogravetesi Seguit es presenten els objectius
que es volen aconseguir amb la investigacioacute i a meacutes a meacutes de lrsquoobjectiu
srsquoexplica perquegrave no eacutes possible arribar als objectius esmentats anteriorment
sense la utilitzacioacute drsquoanimals
Tambeacute en el document es troben les paraules claus que srsquoutilitzaran en la
investigacioacute i la finalitat drsquoaquesta
Per finalitzar en el document es troba la justificacioacute on es donen les raons per
lrsquoestudi del problema i els possibles beneficis que pot tenir aquesta
investigacioacute [Annex 14]
4 Dades generals del projecte
Tiacutetol del projecte
1 Dades de lusuari (persona fiacutesica o juriacutedica que utilitza animals en procediments)
2 Dades didentificacioacute de la persona responsable del projecte
3 Dades del personal que participa en el projecte
6 Finalitat
5 Objectius del projecte
Objectius del projecte
Justifiqueu per quegrave no eacutes possible assolir aquests objectius sense utilitzar animals Indiqueu la cerca que heu realitzat indicant quan quines fonts i les paraules claus utilitzades Avantatges i beneficis cientiacutefics que es deriven daquest projecte o valor docent en cas dassolir els objectius
ldquoEsquema del document original per adjuntar Memograveria del projecte de la Generalitat
de Catalunyardquo
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
31
A 2) Memograveries dels procediments -Eacutes el segon document per adjuntar en la solmiddotlicitud Aquest document ha
drsquoinformar del proceacutes que se seguiragrave els materials que srsquoutilitzaran i dels
animals drsquoexperimentacioacute Hi ha informacioacute que no es troba en lrsquoaltra memograveria
com les dades dels animals que srsquoutilitzaran i les condicions en les quals es
trobaran el disseny i la metodologia els criteris de punt final i la finalitzacioacute de
la investigacioacute
En general aquest document es centra meacutes en com es portaragrave a terme la
investigacioacute i tot lo relacionat amb els animals que formaran part drsquoaquesta
[Annex 15]
1 Dades drsquoidentificacioacute del projecte
7 Disseny i metodologia
4 Finalitats del procediment
5 Dades dels animals que srsquoutilitzaran (espegravecie i nombre)
8 Anestegravesia i analgegravesia
10 Condicions drsquoallotjament zootegravecniques i cura dels animals
11 Protocol de supervisioacute del patiment el dolor o angoixa que puguin
experimentar els animals
12 Criteris de punt final
13 Finalitzacioacute del procediment
14 Grau de severitat del procediment
ldquoEsquema resumit del document original per adjuntar ltMemograveria descriptiva drsquoun
procediment drsquoexperimentacioacute amb animalgt de la Generalitat de Catalunyardquo
4 Finalitats del procediment
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
32
Criteris de Punt Final -Reconegraveixer que un animal de laboratori estagrave patint dolor eacutes molt important per al
compliment de les Tres Rrsquos
Perograve saber identificar que un animal estagrave patint dolor no eacutes tan fagravecil com sembla
El Dr Jeffrey Mogil va demostrar que els canvis en lrsquoexpressioacute facial soacuten un megravetode
eficaccedil i ragravepid per detectar que un rosegador
pateix dolor
Actualment en les investigacions amb animals
drsquoexperimentacioacute existeixen unes taules (per a
rosegadors) anomenades Escales de Grimace
(mouse Grimace scale)
Aquestes escales estan basades en canvis drsquounes
determinades accions facials que determinen si
lrsquoanimal pateix dolor o no Per a que el ratoliacute
presenti dolor
1 El ratoliacute ha de mostrar un estrenyiment en
els ulls (els muacutesculs es contrauen) o les
parpelles tancades Qualsevol tancament
drsquoull que redueixi la mida dels ulls meacutes de la
meitat es considera com a ldquo2rdquo (Dolor intens)
2 El ratoliacute ha de tenir un protuberagravencia al
damunt del nas i hi hauragrave una contraccioacute
dels muacutesculs i la pell
3 El muacutescul de la galta del ratoliacute srsquoha de
contraurersquos i hi apareix una protuberagravencia
4 Les orelles del ratoliacute srsquohan de moure de la
seva posicioacute inicial colmiddotlocant-se contra el
cap Les orelles tendeixen a girar cap a fora i
enrere (lluny de la cara)
5 Srsquoha de presentar un canvi de posicioacute dels
bigotis en comparacioacute de la posicioacute natural
Normalment canvien posant-se
en direccioacute contragraveria a la galta
El criteri de punt final eacutes un indicador necessari en un experiment amb animals
Indica quan un animal estagrave patint un nivell de dolor intens Independentment de
lrsquoobjectiu de lrsquoexperiment es busca una solucioacute per evitar aquest dolor com retirar
de lrsquoestudi a lrsquoanimal o com a uacuteltim cas sacrificar-lo humanitagraveriament (sense
dolor) El seu objectiu eacutes limitar el patiment dels animals al que eacutes estrictament
necessari per aixiacute fer un uacutes egravetic moral i adequat dels animals drsquoexperimentacioacute
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
33
A 3) Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
Eacutes un document del comitegrave egravetic del centre on es portaragrave a terme la investigacioacute
en aquest cas El Comitegrave Egravetic de la UAB
En aquest document srsquoexplica per sobre com seragrave la investigacioacute la finalitat i
objectius drsquoaquesta i emfatitza especialment en que srsquoexpliqui per quegrave eacutes
necessagraveria la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en la investigacioacute en
quines condicions es trobaran els animals quant patiran i com srsquoevitaragrave el
patiment
Aquest document en general informa de com seran les condicions en les que es
trobaran els animals i que es faragrave un uacutes egravetics dels mateixos
1Tiacutetol
2 Procediment drsquoexperimentacioacute animal
5 Justificar la no existegravencia de megravetodes alternatius 7 Supogravesits que drsquoacord amb el que estableix lrsquoarticle de la Llei 51995 obliguen a tenir autoritzacioacute expressa de la Comissioacute drsquoExperimentacioacute Animal de la Generalitat (CEA)
8 Objectius del procediment drsquoexperimentacioacute
18 Idoneiumltat de les espegravecies seleccionades
Reutilitzacioacute drsquoanimals
19 Grau severitat
21 Supervisioacute animal Evitacioacute de patiments innecessaris
ldquoEsquema resumit per proteccioacute de dades del tercer document Informe
del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
34
A 4) Resum no tegravecnic document que resumeix la investigacioacute sense tecnicismes
Tiacutetol del projecte
Durada del projecte
Paraules claus (magravex 5)
Finalitat prioritagraveria o meacutes rellevant del
projecte
Recerca fonamental
Recerca translacional o aplicada
El desenvolupament i la fabricacioacute de productes farmacegraveutics aliments pinsos i altres substagravencies o productes aixiacute com la realitzacioacute de proves per comprovar-ne la qualitat lrsquoeficagravecia i la seguretat
La proteccioacute del medi natural en interegraves de la salut o el benestar dels eacutessers humans o els animals
La recerca adreccedilada a la conservacioacute de les espegravecies
Lrsquoensenyament superior o la formacioacute per a lrsquoadquisicioacute o millora de les aptituds professionals
La medicina legal i forense
El manteniment drsquouna cologravenia drsquoanimals genegraveticament alterats (drsquoacord amb lrsquoart 31f
del RD 532013)no utilitzats en altres procediments
Descripcioacute dels objectius del projecte (p ex aclariments de quumlestions cientiacutefiques o resolucioacute de necessitats cliacuteniques)
Quins soacuten els beneficis potencials que es podrien derivar drsquoaquest projecte (avenccedilos cientiacutefics prevists o de quina manera les personesanimals es podrien beneficiar del projecte)
Quines espegravecies i nombre danimals estagrave previst utilitzar
Tenint en compte el disseny experimental quins perjudicis es preveuen quin grau de severitat eacutes meacutes probable i quin seragrave el destiacute
dels animals
Aplicacioacute de les tres erres (3R)
1Reemplaccedilament Expliqueu per quegrave eacutes necessari utilitzar animals i per quegrave no es poden utilitzar megravetodes alternatius
2Reduccioacute Expliqueu de quina manera srsquoassegura que sutilitzen el miacutenim nombre danimals possibles sense comprometre els objectius del projecte
3Refinament Tenint en compte els objectius
cientiacutefics del projecte expliqueu leleccioacute de les espegravecies i per quegrave el model o models animals soacuten
els meacutes adients Expliqueu les mesures generals que estagrave previst aplicar per minimitzar lafectacioacute del benestar dels animals
ldquoVersioacute original per omplir del document Resum no tegravecnicrdquo
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
35
Gragravecies al Programa Argoacute de la UAB vaig tenir lrsquooportunitat de tenir lrsquoassessorament de
veterinaris experts en el tema del meu Treball de Recerca i a meacutes a meacutes per a la meva
part pragravectica vaig poder assistir a la primera fase drsquouna investigacioacute real que teacute com a
objectiu la recerca drsquouna vacuna de DNA que serveixi com a una possible cura per al
cagravencer de progravestata
Primerament vaig haver de informar-me de quegrave eacutes el cagravencer dels diferents tipus que
existeixen i despreacutes vaig haver de concretar amb el cagravencer de progravestata els diferents
tractaments i lrsquoactual tractament amb el qual srsquoestagrave investigant la Vacuna de DNA
Aixiacute pretenia poder entendre realment el motiu de lrsquoinici drsquoaquesta investigacioacute
biomegravedica
La investigacioacute teacute com a objectiu trobar una vacuna de DNA amb la sequumlegravencia de
nucleogravetids adequats per a que quan el DNA de la vacuna srsquoimplanti (amb lrsquoajuda de
lrsquoelectroporacioacute) al DNA del nucli drsquouna cegravelmiddotlula normal aquest DNA implantat informi
per a que les cegravelmiddotlules del sistema immune humagrave ataquin al cagravencer prostagravetic Quan
aquesta cegravelmiddotlula sintetitzi proteiumlnes durant el proceacutes de traduccioacute es traduiran els
triplets de nucleogravetids ja presents anteriorment i tambeacute es traduiragrave la nova sequumlegravencia
implantada de DNA de la vacuna Aquest DNA conteacute la informacioacute necessagraveria per a
quan la informacioacute genegravetica sigui traduiumlda aquesta cegravelmiddotlula modificada sintetitzi una
proteiumlna que activi un petit grup de cegravelmiddotlules del sistema immunologravegic amb la funcioacute
drsquoatacar el tumor i evitar el creixement drsquoaquest
Perograve per veure si realment funciona aquest tractament srsquoha de provar la seva eficagravecia i
gracies a la nostra legislatura actual abans de provar qualsevol medicament amb
humans primer srsquoha de provar amb animals i assegurar la seva efectivitat
Eacutes aquiacute on entra en joc el paper tan important que tenen els animals drsquoexperimentacioacute
en les investigacions biomegravediques
Per tant en aquesta investigacioacute srsquoestagrave provant lrsquoeficagravecia drsquoaquesta vacuna de DNA
amb animals drsquoexperimentacioacute meacutes concretament ratolins
Lrsquoexperimentacioacute animal drsquoaquest estudi srsquoha portat i es porta a terme en lrsquoestabulari
de la UAB (encara no ha acabat lrsquoestudi) on tambeacute es porten a terme altres recerques
drsquoempreses i drsquoinvestigadors de la universitat
Perograve abans de comenccedilar la investigacioacute srsquoha de passar el proceacutes drsquoafirmacioacute per part
del Comitegrave drsquoegravetica
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
36
Documents - Comitegrave drsquoegravetica
- Gragravecies a lrsquoacceacutes a documents de la universitat ha sigut possible fer una petita
representacioacute dels documents reals que srsquohan presentat al comitegrave drsquoegravetica de la
UAB i de la generalitat de Catalunya per realitzar aquesta investigacioacute
- Per mantenir la privacitat de noms i dades personals nomes srsquohan resumit en
els dos punts meacutes importants els documents Memograveries del procediment i
Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute animal del centre
ldquoPrimer i segon document Memograveries del procediment i Informe del comitegrave egravetic
drsquoexperimentacioacute animal del centrerdquo
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
37
ldquoTercer document Informe del comitegrave egravetic drsquoexperimentacioacute
animal del centrerdquo
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
38
Resumen no teacutecnico
Tiacutetulo del proyecto Evaluacioacuten comparativa de la eficacia de diferentes plaacutesmidos
vacunales en la regresioacuten tumoral en un modelo murino
Duracioacuten del proyecto 2 antildeos
Palabras clave (maacutex 5) Vacuna plaacutesmido tumor
Finalidad del proyecto (Artiacuteculo 5) Investigacioacuten baacutesica Investigacioacuten traslacional o aplicada X Desarrollo y fabricacioacuten de prod farmaceacuteuticos
alimentos piensos y otras sustancias o productos asiacute como la realizacioacuten de pruebas para comprobar su calidad eficacia y seguridad
Proteccioacuten del medio natural en intereacutes de la salud o el bienestar de los seres humanos o los animales
Investigacioacuten dirigida a la conservacioacuten de las especies Ensentildeanza superior o formacioacuten para la adquisicioacuten o
mejora de las aptitudes profesionales
Medicina legal y forense Mantenimiento de colonias o animales geneacuteticamente modificados no utilizados en otros procedimientos
Descripcioacuten de los objetivos (ej aclaracioacuten de cuestiones cientiacuteficas o
resolucioacuten de necesidades cliacutenicas)
Valorar la eficacia protectora de una vacuna de ADN en el tratamiento del caacutencer de proacutestata en un modelo de ratoacuten
iquestCuaacuteles son los beneficios potenciales que se
esperan de este proyecto (avances
cientiacuteficos previstos o manera en que las
personasanimales se pueden beneficiar del
proyecto)
Ampliar nuestro conocimiento sobre la inmunoterapia como estrategia
en el tratamiento contra el caacutencer
iquestQueacute especies y nordm aprox se espera utilizar
Ratoacuten 132 animales
Teniendo en cuenta lo que se va a hacer con
los animales iquestqueacute efectos adversos se
esperan queacute grado de severidad es maacutes probable y cuaacutel seraacute el destino de los
animales
El animal podriacutea manifestar estreacutesmalestardolor como consecuencia
de la administracioacuten intramuscular del tratamiento No obstante se
minimizaraacute esta situacioacuten puesto que la administracioacuten intramuscular se haraacute con el animal anestesiado Consideramos que el grado de severidad de este estudio es ldquoseverordquo
por la induccioacuten del tumor en el animal que seraacuten eutanasiados al
finalizar el estudio
Application de las 3R
1 Reemplazo
Explique por queacute se necesita el uso de animales y porqueacute no se pueden utilizar
meacutetodos alternativos
Valorar la eficacia protectora de una vacuna implica evaluar la
respuesta del organismo vivo en cuanto a la produccioacuten de anticuerpo Por lo tanto la obtencioacuten de datos en estudios en animales van a
permitir dirigir los resultados al problema cliacutenico humano
2 Reduccioacuten
Explique coacutemo se asegura la utilizacioacuten de
un nordm miacutenimo de animales
Basaacutendonos en nuestra experiencia y los buenos resultados obtenidos
en estudios anteriores el nuacutemero de animales requerido es el
necesario para alcanzar los objetivos
3 Refinamiento
Explique en funcioacuten de queacute se ha elegido el
tipo de especies y porqueacute el modelo o modelos utilizado son los maacutes adecuados en
cuanto al Refinamiento teniendo en cuenta
los objetivos cientiacuteficos Explique tambieacuten
las medidas legales que se van a tomar para
minimizar los dantildeos al bienestar de los animales
Disponemos de mucha informacioacuten sobre la fisiologiacutea de esta especie
ademaacutes de ser una animal faacutecil de manipular
Los animales seraacuten sometidos a una supervisioacuten exhaustiva cada 15 minutos durante las primeras 2 horas despueacutes de la administracioacuten de
la vacuna para continuar con 1 vez al diacutea a lo largo de la primera
semana y despueacutes 1 vez cada semana hasta la eutanasia (finalizacioacuten
del estudio)
Los criterios de supervisioacuten permitiraacuten detectar alteraciones significativas que justificaraacuten la aplicacioacuten de pautas de punto final y
la eutanasia humanitaria de los animales
ldquoQuart document Resum no tegravecnic (Versioacute original)rdquo
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
39
Lrsquoentrada a lrsquoestabulari
Com ja srsquoha esmentat anteriorment en un estabulari es teacute molta cura amb la
higiene i se segueix un protocol molt estricte per evitar possibles contagis als
investigadors i animals
Vaig poder entrar a lrsquoestabulari de la UAB i fer el seguiment de la primera etapa de
la investigacioacute i per consequumlegravencia vaig conegraveixer i portar a terme el protocol de
seguretat seguumlent
1) Abans drsquoentrar a la zona de lrsquoestabulari on es fan les experimentacions srsquoha
drsquoanar a fer un petit curset drsquounes hores on srsquoexplica com soacuten les instalmiddotlacions
per dintre les diferents sales de lrsquoestabulari per a quegrave serveixen i les normes
que srsquohan de complir
-En el cas drsquoaquest estabulari es divideix pragravecticament en tres zones
La zona bruta la zona que estagrave meacutes en contacte amb els microorganismes
de lrsquoexterior on es troba la porta principal i els despatxos
Els vestidors on els investigadors es canvien la roba deixen les seves
propietats i es renten
La zona Biologravegica 12 que eacutes on es troben tots els laboratoris els
rosegadors i tota la maquinaria i objectes necessaris En la zona 1 (on es
porta a terme la investigacioacute drsquoaquest treball) no hi ha tantes normes de
precaucioacute i vestimenta per contra a la 2 les normes soacuten molt meacutes estrictes
ja que hi ha meacutes perill de ldquocontaminacioacuterdquo
2) Despregraves drsquoassistir al curs se signen uns documents on lrsquoimplicat es compromet a
seguir el protocol de seguretat i totes les normes vigents
Una premissa interessant de les normes eacutes que si srsquoestagrave en contacte amb
rosegadors que no siguin de lrsquoestabulari no es pot entrar a lrsquoestabulari fins
passades 72 hores per precaucioacute
3) Abans drsquoentrar als vestidors en la zona bruta qui vol entrar a la zona biologravegica
srsquoha de registrar en un paper on srsquoha de posar el nom lrsquohora drsquoentrada el nom
del grup drsquoinvestigacioacute Al sortir del vestidor per marxar de lrsquoestabulari srsquoha de
repetir el procediment
Data Hora entrada Nom i Cognom Grup Investigacioacute Signa Hora sortida Signa
12-12-17 830 H UAB
1345 H
ldquoRepresentacioacute de la fitxa de registrerdquo
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
40
4) En el vestidor Un cop srsquoentra al vestidor srsquoha de deixar qualsevol objecte que
hagi estat a lrsquoexterior que no sigui roba per exemple el mogravebil motxilles etc
Si es vol entrar qualsevol objecte de lrsquoexterior ha de passar per un proceacutes de
desintoxicacioacute en una cagravemera amb productes quiacutemics
-Una vegada nomeacutes es teacute la roba posada srsquoha de posar la vestimenta seguumlent
Si es teacute el cabell llarg srsquoha de recollir
En el vestidor es posa el gorro la mascara facial la bata de roba un parell de
guants i un parell de peuumlcs(els peuumlcs en els peus no poden tocar el terra del
vestuari han de tocar directament el terra de la zona biologravegica)
Seguidament abans drsquoentrar a la sala on es troben els animals i
srsquoexperimenta srsquoha de posar la segona bata de paper i el segon parell de
peuumlcs (aquests nomeacutes poden tocar el terra del la sala drsquoexperimentacioacute)
Una vegada dintre nomeacutes srsquoha de posar el segon parell de guants
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
41
5) Lrsquoequip de lrsquoestabulari (sala drsquoexperimentacioacute)
-Ja dins de la sala drsquoexperimentacioacute srsquoha de desinfectar els guants i tots els
materials que srsquoutilitzin amb el CR-36 (bactericida-fungicida)
Aquesta sala compte amb la maquinaria seguumlent
Racks Ventilats Eacutes una maquina que ventila totes les gagravebies del ratolins i
manteacute estable el flux i la humitat drsquoaire Aquesta magravequina eacutes com un
filtre agafa aire de lrsquoexterior i el neteja de microorganismes i drsquoalgunes
partiacutecules per a que els ratolins no respirin aire que els pugui perjudicar
IVC (Individual ventilated cage) Soacuten unes gagravebies amb ventilacioacute individual que
sutilitzen per mantenir un animal o un determinat grup separat daltres
animals o grups Aquestes gagravebies tenen als animals aiumlllats a lrsquoexposicioacute drsquoaire
ldquobrutrdquo gragravecies a la connexioacute amb lrsquoaire que filtra el Rack Ventilat i per que les
gagravebies tenen una entrada drsquoaire amb filtrador que tambeacute neteja lrsquoaire que
entra
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
42
Cabina de flux laminar Eacutes una campana de flux laminar eacutes a dir eacutes una
campana que utilitza un ventilador per a forccedilar el pas de lrsquoaire de lrsquoexterior
traves drsquoun filtre i gragravecies al filtre es proporciona aire net i una zona per a
treballar amb els animals de lrsquoexperiment lliure de partiacutecules de fins 01
micres
Filtre
Entrada drsquoaire brut que
eacutes netejat per el filtre Sortida drsquoaire que srsquoha
contaminat per estar en
contacte amb lrsquoexterior
Zona de
treball neta
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
Caixa que estagrave connectada a
la maquina drsquoanestegravesia a partir
drsquouns tubs on passa lrsquoaire amb
vapor drsquoanestegravesia i arriba a la
caixa Els ratolins soacuten tancats
en la caixa inhalen lrsquoanestegravesia
i srsquoadormen
43
Magravequina drsquoanestegravesia
Eacutes un equip compost per diferents elements
La magravequina drsquoanestegravesia en aquesta investigacioacute
teacute com a finalitat lrsquoadministracioacute per via
pulmonar drsquo O2 (procedent drsquouna bombona
connectada a lrsquoequip) meacutes un vapor inhalador
anestesiant (isoflurane)
Recipient on es barreja lrsquoO2 i
el Isoflurane liacutequid que es
torna vapor per la pressioacute en
la que eacutes sotmegraves
On es veu
la pressioacute
de lrsquooxigen
Indicador de la
pressioacute de lrsquo O2
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
44
Electroporador
Lrsquoelectroporador eacutes una magravequina que teacute com a objectiu provocar lrsquoobertura
del porus celmiddotlulars que es troben en les membranes plasmagravetiques de les
cegravelmiddotlules Lrsquoelectroporador ho porta a terme mitjanccedilant un camp elegravectric
(zona de lrsquoespai en la que hi ha forccedila elegravectrica) que srsquoaplica externament a
traveacutes de dues agulles
Doble agulla que
srsquointrodueix a la zona del
cos del ratoliacute on es vol que
els porus celmiddotlulars es
dilatin
La agulla eacutes reutilitzables
eacutes pot utilitzar meacutes de 10
vegades
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
45
Megravetode experimental basat en la
investigacioacute
-A meacutes a meacutes de poder veure les instalmiddotlacions de lrsquoestabulari per dintre tambeacute
vaig tenir la oportunitat de veure el desenvolupament de la investigacioacute la
metodologia que utilitzaven i com els investigadors manipulaven als ratolins i
seguidament comprovar si realment se segueixen les lleis imposades que
protegeixen als animals drsquoexperimentacioacute i si es teacute uacutes egravetic dels animals
1 Com ja srsquoha esmentat anteriorment en el treball el problema que va fer iniciar
aquesta investigacioacute va ser que en la actualitat el cagravencer de progravestata eacutes un dels
cagravencers en homes meacutes comuns a escala mundial i encara no teacute una cura totalment
eficaccedil Perograve el recent desenvolupament de la vacuna de DNA va fer preguntar-se
Pot ser la vacuna de DNA una possible cura per el cagravencer de progravestata
2 Un cop establert quin eacutes el problema del qual es vol trobar una solucioacute es va
formular una possible hipogravetesi eacutes a dir una possible resposta per al problema
que eacutes la seguumlent Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA
pot evitar o disminuir el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
3 Per saber cap a quina direccioacute dirigir la investigacioacute es va fer una deduccioacute dels
possibles resultats
Si alguna vacuna amb una determinada sequumlegravencia de DNA evita el creixement
drsquoun tumor prostagravetic llavors si provem diferents sequumlegravencies de DNA amb ratolins
drsquoexperimentacioacute trobarem la sequumlegravencia meacutes adequada
-Per explicar tot el
procediment de
lrsquoexperiment el treball
seguiragrave lrsquoestructura del
megravetode experimental
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
46
4 Experimentacioacute
-Com es volia provar diferents vacunes amb diferents sequumlegravencies de DNA i aquestes
vacunes soacuten un possible tractament per al cagravencer de progravestata humagrave com dicta la
Declaracioacute de Helsinki explicada anteriorment abans de provar qualsevol medicament
amb persones primer srsquoha de fer amb animals drsquoexperimentacioacute
Aquesta investigacioacute estagrave dividida en dues parts i actualment nomeacutes srsquoha portat a
terme la primera
-La primera part ha consistit en provar diferents vacunes de DNA amb ratolins als quals
sersquols hi va injectar subcutagraveniament cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute a la
part dreta del tronc
-La segona part consistiragrave en injectar-li a un grup de ratolins les vacunes amb millors
respostes Perograve aquests ratolins tindran cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes drsquohumans
per aixiacute poder veure com reaccionen les sequumlegravencies de DNA amb cegravelmiddotlules humanes
-Com nomeacutes srsquoha portat a terme la primera part de la investigacioacute nomeacutes aquesta seragrave
explicada en aquest treball
La primera part de lrsquoexperimentestudi va consistir en
Per fer les proves es van escollir ratolins mascle de tipus C57BL6
Els ratolins en aquesta investigacioacute nomes van ser models animals ja que no tenien cap
cegravelmiddotlula humana
Aquest tipus de ratoliacute de color negre eacutes el meacutes frequumlent en experimentacions i soacuten els
meacutes utilitzats en modificacions genegravetiques per utilitzar-los com a models de malalties
humanes
Nomeacutes es van utilitzar ratolins mascles en lrsquoexperimentacioacute ja que nomeacutes el sexe
maculiacute teacute progravestata i per tant nomeacutes els mascles poden presentar cagravencer de progravestata
ldquoRatoliacute de tipus C57BL6rdquo
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
ldquoEtiquetes drsquoidentificacioacute de les gagravebies i ratolinsrdquo
Esquema de la
distribucioacute de
les gagravebies
47
En la primera part de la investigacioacute primerament es van utilitzar en total 64
ratolins mascles Aquests estaven organitzats de la manera seguumlent
Les gagravebies srsquoordenaven de manera alfabegravetica de la ldquoArdquo fins a la ldquoPrdquo setze
gagravebies i quatre ratolins per gagravebia
Per poder identificar als ratolins adequadament a lrsquohora de treballar amb ells
sersquols hi va fer uns determinats forats en les orelles els qual no es repetia en la
seva distribucioacute entre els quatre ratolins per no haver-hi cap confusioacute
Per enrecordar-se de quin ratoliacute tenia cada forat en cada gagravebia hi havia unes
etiquetes on srsquoespecificava la informacioacute bagravesica dels ratolins el grup
drsquoinvestigacioacute i la distribucioacute dels forats amb uns triangles que simulen les
orelles dels ratolins (^^)
A ndash 4 E ndash 4 I - 4 M ndash 4
B ndash 4 F ndash 4 J ndash 4 N ndash 4
C ndash 4 G ndash 4 K ndash 4 O ndash 4
D ndash 4 H ndash 4 L ndash 4 P ndash 4
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
ldquoPinso dels ratolinsrdquo ldquoEnriquiment Ambientalrdquo
48
En aquesta investigacioacute la variable controlada (variable que modifiquen els
investigadors durant lrsquoexperiment) va ser les diferents vacunes amb la seva
respectiva sequumlegravencia de DNA
Per consequumlegravencia la variable dependent (variable que srsquoobserva durant
lrsquoexperiment) va ser disminucioacute dels tumors prostagravetics dels ratolins
Perograve durant la investigacioacute tambeacute es van tenir en compte altres tipus de
variables que poden afectar als resultats finals de lrsquoestudi les variables
controlades
Era molt important la qualitat de lrsquoaire (la humitat i la temperatura) per a
que els ratolins no srsquoinfectessin amb cap microorganisme de lrsquoexterior i
alteressin els resultats finals
Altre variable molt important era lrsquoalimentacioacute El menjar dels ratolins era
un pinso comprimit passat per una olla de pressioacute per eliminar qualsevol
microorganisme perjudicial per als animals tenia tots els nutrients
necessaris i tenia una forma especial per a que el ratolins haguessin de
rossegar el pinso (fet que fan els ratolins per instint) Lrsquoaigua tambeacute era
especial era tractada abans per a que no tingues cap tipus de partiacutecula
ndashTambeacute tenien en compte lrsquoenriquiment ambiental Sersquols hi posaven rotllos
petits de paper en funcioacute de nius per a que els ratolins se sentissin meacutes
cogravemodes i no srsquoestressessin ja que lrsquoestregraves tambeacute pot afectar la salut dels
ratolins i per tant els resultats de la investigacioacute
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
ldquoAnestesia dels ratolinsrdquo ldquoAplicacioacute de les llagravegrimes artificialsrdquo
49
5 Disseny de lrsquoexperiment
- Una vegada es va tenir als ratolins identificats i en les condicions adequades el
seguumlent pas va ser injectar als ratolins cegravelmiddotlules prostagravetiques canceriacutegenes de ratoliacute
de manera subcutagravenia per aixiacute poder seguir amb meacutes facilitat els canvis dels
tumors
Aquest proceacutes va comenccedilar 10 dies abans de que srsquoapliqueacutes la vacuna de DNA per a
que el cagravencer es desenvolupeacutes Per tant quan van aplicar les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
seragrave el dia -10
El proceacutes drsquoinjectar les vacunes de DNA i avaluar als ratolins va durar 53 dies
Vaig poder veure com va tenir lloc aquest proceacutes que va ser de la seguumlent manera
- DIA 0 Va ser el primer dia en el qual sersquols hi va injectar la vacuna de
DNA als ratolins Els animals ja tenien les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
injectades
Primerament srsquoagafaven les gagravebies en lrsquoordre en que es trobaven i sersquols
hi feia als ratolins un reconeixement fiacutesic Sersquols pesava per veure si
tenien alguna patologia i aixiacute saber si menjaven beacute o si potser es
trobaven malament sersquols hi miraven les punxades que sersquols hi havien fet
per injectar les cegravelmiddotlules tumorals per si presentaven alguna uacutelcera
A continuacioacute sersquols anestesiava per poder mesurar el tumor amb meacutes
facilitat Els tumor dels ratolins es mesuraven amb un Peu de Rei i es
mesurava la longitud (alccedilada) i el transvers (amplitud) dels tumors
Al anestesiar-los sersquols hi posaven llagravegrimes artificials als ulls per a que no els hi
sortissin ulceres
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
ldquoDepilacioacute dels ratolins amb crema depilatograveria per a
persones ja que era el megravetode menys indolor i efectiurdquo
ldquoZona depilada on srsquoinjectaragrave la vacuna de DNArdquo
50
- Una vegada mesurat el tumor sersquols hi mantenia adormits per a depilar-los la
zona de la pota on srsquointroduiria la vacuna de DNA
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
ldquoInjeccioacute de la vacuna de DNArdquo
51
- Despregraves de la depilacioacute seguia el proceacutes drsquoinjeccioacute de les vacunes de DNA als
ratolins
A cada grup de quatre ratolins (per gagravebia) li pertanyia un sequumlegravencia diferent de
DNA en la vacuna La vacuna de DNA era injectada en el mateix lloc per a tots
els ratolins a la pota dreta en un muacutescul proper a la tiacutebia
Els investigadors seguien mantenint adormits als ratolins per a que no
sentissin la punxada de la injeccioacute i per a que no srsquoestressessin
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
ldquoElectroporacioacute drsquoun ratoliacuterdquo
52
- Per uacuteltim es portava a terme lrsquoelectroporacioacute de les cegravelmiddotlules dels ratolins
properes a la zona on srsquohavia injectat la vacuna de DNA per a que aquesta
substagravencia tingueacutes meacutes facilitat per entrar a alguna cegravelmiddotlula electroporada del
ratoliacute a partir dels poros oberts de la membrana celmiddotlular
- Srsquoextreia del ratoliacute la magravescara que el mantenia adormit i el deixaven en la seva
gagravebia per a que es desperteacutes i es recupereacutes de lrsquoanestegravesia
Aquiacute acabaria el proceacutes drsquoobservacioacute i drsquoinjeccioacute de la vacuna de DNA als
ratolins
- Aquest proceacutes es va repetir el 10 i 20 de la investigacioacute Per tant als ratolins
sersquols hi van injectar 3 vegades la seva corresponent vacuna de DNA perquegrave
altres estudis que srsquohavien realitzat sobre la vacuna de DNA anteriorment
informaven que els resultats eren meacutes efectius si srsquoinjectava la vacuna tres
vegades
- Els dies cinc vint-i-cinc trenta dos trenta vuit quaranta sis i cinquanta tres
nomeacutes es va fer una observacioacute fiacutesica dels ratolins per veure si patien algun
dolor i mesuraven els tumors per fer un seguiment de lrsquoevolucioacute drsquoaquests
- La resta dels dies els animals feien vida ldquonormalrdquo es les seves respectives
gagravebies a lrsquoestabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
53
51 Control
El control eacutes una part important dels experiments en les quals un
determinat nombre drsquoanimals que formen part de la investigacioacute
tenen les mateixes variables controlades durant la investigacioacute perograve
no tenen la variable independent
Fer un control serveix per a que a lrsquohora drsquoarribar a una conclusioacute amb
els resultats de lrsquoexperimentacioacute es pugui comparar els resultats de la
part de lrsquoexperimentacioacute amb control i els resultats sense control i
determinar si realment les hipogravetesis es compleixen o no
Aquesta investigacioacute contava amb dos controls
-El control Negatiu quatre ratolins de la investigacioacute sense cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques de ratoliacute Per demostrar que els ratolins no
presenten cap alteracioacute des dels comenccedilament
-El control Positiu quatre ratolins de la investigacioacute amb cegravelmiddotlules
canceriacutegenes prostagravetiques perograve sense la injeccioacute de la vacuna de DNA
Per veure com es lrsquoevolucioacute del cagravencer de progravestata sense la variable
independent (les vacunes de DNA) i veure si la variable independent
realment eacutes efectiva
Per tant vuit ratolins dels seixanta quatre formaven part del control
de lrsquoexperimentacioacute
52 Regraveplica
Eacutes la repeticioacute idegraventica de lrsquoexperimentacioacute amb les mateixes
variables independents dependents controlades i controls
La regraveplica serveix per a comprovar que els resultats dels dos estudis
soacuten relativament semblants i per tant demostrar que no han sigut
altres factors els que han afectat als resultats de lrsquoestudi
-En el cas drsquoaquesta investigacioacute srsquoha fet un regraveplica de la primera part
de la investigacioacute Lrsquoany passat es va fer el primer estudi amb 64
ratolins i aquest any srsquoha fet la regraveplica amb 64 ratolins
Lrsquoexperiment amb la seva respectiva regraveplica va comptar amb 128
ratolins meacutes 4 que tenien de reserva per tant 132 ratolins emprats
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
54
6 Resultats de lrsquoexperimentacioacute
- Aquest gragravefic srsquoha creat a partir de les mides dels tumors dels ratolins de la
investigacioacute real que la UAB em va proporcionar Indica lrsquoevolucioacute de la mitja
(basada en la allargada en mm) de les mides dels tumors prostagravetics dels
diferents grups de ratolins tenint en compte els dos controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut a partir de fer la mitja per dia dlsquoobservacioacute de
les mides en longitud del tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva
respectiva vacuna o control
- Com srsquoha esmentat abans el dia -10 eacutes quan sersquols injecta als ratolins les
cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Durant els dies 0 i 5 es pot observar que tots els valors al principi augmenten
ragravepidament perograve al dia 10 han disminuiumlt Aquest fet eacutes degut a que el que es
mesurava els primers dies no era el tumor ja desenvolupat sinoacute que era la
inflamacioacute de la pell dels ratolins per la injeccioacute de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
- Els dies 38 i 53 en el grup de Control Positiu es determina Criteri de Punt Final
a dos ratolins per tant soacuten eliminats de lrsquoestudi i la mitja de les mides dels
tumors augmenta
- El dia 46 a la vacuna 3 es determina tambeacute Criteri de Punt Final i augmenta la
mitja de la mida dels tumors quedant la segona meacutes alta
- En el gragravefic es pot veure que les vacunes amb la mitja de mides tumorals meacutes
baixa soacuten la 2 i la 4
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 325 325 4125 625 925 11125 1533 1833 20
Vacuna 1 0 5 4375 4125 5375 65 825 95 125 15
Vacuna 2 0 3 5625 375 5375 8375 10 115 13625 1475
Vacuna 3 0 15 3 1125 4 8125 9625 10625 1433 1616
Vacuna 4 0 1975 25 0 1875 675 9 10375 125 1475
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
d (
mm
)
Mitges-Mides tumors Longitud
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
55
- Aquest gragravefic indica lrsquoevolucioacute de la mitja(basada en el transvers en mm) de
les mides dels tumors dels diferents grups de ratolins tenint en compte els dos
controls
- Aquestes dades srsquohan obtingut fent la mitja per dia drsquoobservacioacute de les mides
en transvers dels tumors per cada grup de 4 ratolins amb la seva respectiva
vacuna o control
- Com en lrsquoanterior gragravefic es pot veure que el fet de la inflamacioacute de la pell dels
ratolins tambeacute va afectar a lrsquohora de mesurar el transvers dels tumors Es veu
un clar augment de les mitges en els dies 0 i 5 perograve en el dia 10 les mitges
disminueixen
- Els Criteris de Punt Final soacuten els mateixos que els del anterior gragravefic ja que soacuten
les mesures dels mateixos ratolins per tant el control Positiu i la vacuna 3 el
valor dels seus resultats augmenten
- En aquest cas es pot veure una anomalia que en lrsquoaltre gragravefic no es presentava
La vacuna 4 presenta un augment meacutes dragravestic en la mitja de transvers
quedant la segona mitja meacutes alta despreacutes del Control Positiu
- En aquest cas la vacuna amb la mitja tumoral meacutes baixa ha sigut la vacuna 1
Dia -10 Dia 0 Dia 5 Dia 10 Dia 20 Dia 25 Dia 32 Dia 38 Dia 46 Dia 53
Control Negatiu 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Control Positiu 0 185 25 2375 3125 5 5875 105 13 145
Vacuna 1 0 2625 2875 25 2375 4 4625 575 775 1025
Vacuna 2 0 15 4 2125 3 5 625 7625 10275 11875
Vacuna 3 0 1 2 0625 175 35 5625 6375 1066 115
Vacuna 4 0 175 2 0 15 475 675 725 9875 12875
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15
Mid
es-T
ran
sve
rs (m
m)
Mitges-Mides tumors Transvers
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
56
Aquest gragravefic representa la mitja tumoral de lrsquouacuteltim dia drsquoestudi de cada grup
En color blau es troben les mitges de les mesures tumorals en longitud de lrsquouacuteltim dia
drsquoexperimentacioacute de tots els grups de ratolins
En color vermell soacuten les mitges de les mesures tumorals en transvers de lrsquouacuteltim dia de
la investigacioacute de tots els grups de ratolins
- En aquest gragravefic es veu meacutes clarament que les mitges tumorals en longitud meacutes
baixes soacuten les de las vacunes 2 i 4
- En el cas del transvers es veu que la mitja meacutes baixa eacutes la de la vacuna 1
- Per tant no hi ha cap vacuna que tingui a la vegada les mitges tumorals en longitud i
transvers meacutes baixes Fet que complica lrsquoeleccioacute de decidir quina vacuna podria ser la
meacutes adequada
-Tambeacute es pot veure que en longitud i transvers la mitja meacutes alta en els dos casos es
la del Control Positiu per tant eacutes un signe de que les vacunes de DNA fan algun tipus
drsquoefecte a les cegravelmiddotlules canceriacutegenes prostagravetiques
Control Negatiu Control Positiu Vacuna 1 Vacuna 2 Vacuna 3 Vacuna 4
Longituds-Tumors 0 20 15 1475 1616 1475
Transvers-Tumors 0 145 1025 11875 115 12875
1475 1475
1025
0 2 4 6 8
10 12 14 16 18 20 22
Mid
es-L
on
gitu
dt
ran
sver
s (
mm
) Mitges Finals longitudtransvers tumors- Dia 53
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
57
Eutanagravesia dels ratolins
Despreacutes drsquohaver mesurat els tumors de tots els ratolins de la investigacioacute lrsquouacuteltim dia
drsquoinvestigacioacute aquests soacuten eutanasiats
Lrsquoeutanagravesia eacutes provocar-li la mort a un animal o persona perquegrave aquesta teacute una
malaltia incurable o molt desenvolupada i aquesta malaltia fa patir un mal
innecessari que no es pot tractar i per tant es provoca la mort a lrsquoafectat per a que
no segueixi patint
En aquesta investigacioacute tots els ratolins amb cegravelmiddotlules canceriacutegens van ser
eutanasiats ja que no sersquols podria curar el cagravencer i si sersquols hagueacutes deixat vius nomeacutes
haguessin patit meacutes dolor el qual eacutes incurable
Per tant eacutes meacutes egravetic eutanasiar-los per a que els ratolins deixin de patir un dolor
innecessari A meacutes a meacutes sersquols hi extirpa el tumor per fer unes mesures en tres
dimensions meacutes exactes
ldquoRatoliacute del Control negatiu mort (no presenta cap tumor
exteriorment)rdquo
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
58
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control negatiu (no presenta cap
tumor en el seu interior)rdquo
ldquoRatoliacute eutanasiat del Control Positiu (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
59
ldquoRatoliacute amb la vacuna 1 eutanasiat (presenta un tumor
subcutani)rdquo
Tumor prostagravetic
subcutani amb
els efectes de la
vacuna de DNA
ldquoTumor extirpat del ratoliacute amb la vacuna 1rdquo
ldquoTumor prostagravetic de ratoliacute amb la vacuna 1 extirpatrdquo
rdquo
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
60
7 Conclusions de lrsquoestudi
Eacutes lrsquoultima fase del megravetode experimental on srsquoanalitzen i srsquointerpreten els resultats
obtinguts en lrsquoexperiment
Amb les dades reals que mrsquohan proporcionat els investigadors drsquoaquest estudi he
arribat a la conclusioacute de que no sempre surten resultats positius i clars en les
investigacions tot lo contrari perquegrave sinoacute es tindria la cura de moltes malalties que
encara no en tenen
Moltes vegades els resultats dels estudis soacuten confusos i fins i tot negatius perograve no vol
dir que drsquoaquesta manera no srsquoextregui cap tipus de nou coneixement ja que en el moacuten
de les investigacions molts avenccedilos importants srsquohan descobert gragravecies a prova i error
En el cas drsquoaquest gragravefic srsquoha pogut observar clarament que les vacunes de DNA han
actuat drsquoalguna manera contra el tumor cancerigen perquegrave totes les vacunes tenen les
mitges de les mides tumorals meacutes baixes que les del Control Positiu i que es compleixi
aquest fet ja confirma la hipogravetesi de que
Potser alguna vacuna amb una sequumlegravencia determinada de DNA pot evitar o disminuir
el creixement del tumor i combatre el cagravencer de progravestata
Perograve tambeacute crec que srsquoha drsquoestudiar fins a quin punt val la pena o no aquest petit
percentatge de canvi entre les mides tumorals Ja que potser el cost per a lrsquoelaboracioacute
de la vacuna de DNA es massa alt per al poc percentatge de diferegravencia que provoca
aquesta
Un altre fet important que crec que srsquoha de tenir en compte eacutes que no sempre els
tractaments funcionen de la mateixa durant els diferents estadis drsquouna malaltia eacutes ha
dir potser un determinat tractament eacutes molt eficaccedil durant les primeres fases de
lrsquoevolucioacute drsquouna malaltia perograve quan aquesta ja estagrave desenvolupada lrsquo eficagravecia del
tractament eacutes molt baixa Aquest fet passa especialment amb el cagravencer els
tractaments varien molt segons en lrsquoestadi de lrsquoevolucioacute en el que es trobi aquest
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
61
Per aquesta raoacute he arribat a la conclusioacute de que sembla que per el temps que es porta
amb la investigacioacute drsquoaquestes vacunes de DNA en aquest estudi tenen meacutes efectivitat
durant els primers 25 dies ja que el creixement dels tumors durant els primers 25 dies
eacutes bastant meacutes lent i fins i tot hi han alguns pocs ratolins que no presenten tumor o eacutes
molt petit fins passats els 25 dies
Per contra perograve despreacutes dels primers 25 dies les mitges de les mides tumorals de tots
els ratolins en general augmenten meacutes ragravepidament
Perograve si hagueacutes drsquoescollir la vacuna de DNA que crec que ha sigut la meacutes efectiva a
lrsquohora de reduir o alentir el desenvolupament de les cegravelmiddotlules canceriacutegenes
prostagravetiques amb lrsquoestudi dels resultats i de les dades dels gragravefics creats per mi he
arribat a la conclusioacute de que la vacuna de DNA meacutes efectiva seria la vacuna 1
Per quegrave la vacuna 1 Doncs perquegrave compta amb la mitja tumoral en transvers meacutes
baixa entre la resta de vacunes Tambeacute perquegrave en el grup dels quatre ratolins
drsquoaquesta vacuna un drsquoells no va presentar cap tumor (nomeacutes la inflamacioacute de la pell
abans esmentada en el dia 0) fins el dia 46 A meacutes a meacutes a cap dels quatre ratolins del
grup de la vacuna 1 se li va haver de determinar Criteri de Punt Final
I per uacuteltimla vacuna 1 ha sigut la meacutes eficaccedil perquegrave sumant la mitja tumoral en
longitud amb la mitja tumoral en transvers (les dues mitges soacuten del grup dels 4
ratolins amb la vacuna 1 injectada) la suma de les dues mitges dona la mitja meacutes
petita entre la resta dels tumors
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
62
Per a complementar la meva part pragravectica gragravecies al projecte Argoacute vaig poder
conegraveixer i entrevistar a Patrocinio Vergara
Patrocinio eacutes una llicenciada en veterinagraveria i la seva professioacute actualment eacutes la de
catedragravetica en la facultat de fisiologia de lrsquo UAB i tambeacute forma part drsquoinvestigacions
biomegravediques Patri porta exercint la seva professioacute des de lrsquoany 1978
-Estagraves a favor de lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Eacutes difiacutecil de dir Jo crec que actualment estagrave justificada la utilitzacioacute drsquoanimals
per obtindre coneixements o cures de malalties que encara no tenen tractament
El que siacute crec eacutes quegrave no es poden resoldre aquests dubtes nomeacutes amb megravetodes que no
impliquin la utilitzacioacute drsquoanimals
-Creus que els animals soacuten necessaris per el avenccedil megravedic
-Patri En aquests moments siacute encara
-Creus que lrsquoexperimentacioacute animal teacute un uacutes desmesurat
-Patri Penso que tot pot millorar perograve que amb la legislacioacute Europea que tenim aquest
tema estagrave bastant supervisat
- Lrsquoexperimentacioacute amb animals per elaborar cosmegravetics eacutes legal en Europa
-Patri Estagrave prohibit es creu que encara srsquoutilitzen els animals en productes cosmegravetics
perograve la directiva Europea eacutes molt clara amb aquest tema i en Espanya actualment no
srsquoutilitzen animals per a fins cosmegravetics ja no estagrave autoritzat
- Respecte la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute creus que ha de millorar Per
quegrave
-Patri Sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes molt bona una altra cosa es que
haguem de millorar la manera drsquoimplementar-la i aplicar-la meacutes i millor i fer meacutes
inspeccions perograve tot el que estagrave escrit en la llei penso que estagrave beacute De fet fa poc el
Parlament Europeu va revisar la directiva del 2010 i ha decidit que no requereix de
canvis per tant crec que eacutes correcte
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
63
-Hi ha alguna diferencia entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Espanyola i lrsquo
Europea o eacutes la mateixa
-Patri De fet Espanya ha transferit la directiva Europea i teacute alguna diferencia formal
perograve no de fons ni de filosofia en aquest sentit eacutes exactament equiparable
-Coneixes alguna legislacioacute drsquoaltre paiacutes que protegeixi als animals drsquoexperimentacioacute
que creguis que sigui millor a lrsquoespanyolaeuropea
-Patri No sincerament crec que la legislacioacute Europea eacutes de les millors i meacutes
avanccedilades
-Quines han sigut les pitjors condicions en las que has vist a animals
drsquoexperimentacioacute
-Patri Realment no ho seacute ja que no inspecciono experiments perograve et puc dir que he
format part en lrsquoelaboracioacute de molts experiments i tambeacute nrsquohe vist molts i mai he sortit
amb un sentiment de culpa o amb males sensacions
-Quines diferencies trobes entre la legislacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute de quan vas
comenccedilar el teu ofici a la legislacioacute actual
-Patri Realment quan vaig comenccedilar el meu ofici no hi havia cap legislacioacute que
protegiacutes els animals a lrsquohora drsquoexperimentar amb ells ja que encara no srsquohavia creat la
Constitucioacute Espanyola Per tant que la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute fos egravetica i
mesurada depenia segons el criteri dels investigadors que portaven a terme
lrsquoexperiment En canvi actualment tenim tota una legislacioacute molt correcta que controla
tot aquest tema
-Creus que la vacuna de DNA seragrave la cura del cagravencer
-Patri Crec que seragrave una de les possibles cures del cagravencer en el futur Nrsquohi hauran unes
altres cures perograve la vacuna de DNA en seragrave una segura ja que eacutes un molt bon megravetode
-Coneixes alguna alternativa a lrsquoexperimentacioacute animal
-Patri Bueno considero que ja actualment srsquointenten impartir les alternatives que
coneixem Per exemple el principi de les tres Rrsquos el principi de refinament on es
demana el reemplaccedilament dels animals sempre que es pugui Abans de comenccedilar a
experimentar amb animals sempre srsquoha de tenir una base teograverica on es demostri que
lrsquoexperiment pot ser drsquoutilitat i sempre srsquointenta experimentar primer in vitro i utilitzar
el miacutenim nombre possible drsquoanimals
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
64
Durant lrsquoelaboracioacute del meu treball he apreacutes moltes coses que no sabia abans i tambeacute
he apreacutes que alguns fets que pensava que eren certs despregraves drsquoinformar-me
adequadament mrsquohe adonat de que eren falsos Per exemple pensava que
lrsquoexperimentacioacute animal per a fins cosmegravetics era legal i he acabat assabentant-me de
que en Europa eacutes totalment ilmiddotlegal
He afirmat amb la recerca drsquoinformacioacute que he portat a terme que el cagravencer eacutes una de
les malalties meacutes mortiacuteferes i complexes que existeixen actualment i que encara falta
temps per a que srsquoarribi a trobar una cura totalment eficaccedil per el cagravencer
Per lo contrari he apreacutes que actualment hi ha tractaments molt innovadors i que en
les recerques actuals srsquoestagrave investigant contiacutenuament per a millorar els tractaments ja
existents o crear-ne des nous meacutes efectius
Tambeacute mrsquohe adonat de la desinformacioacute i invisibilitzacioacute que teacute la societat en general
sobre el tema dels animals drsquoexperimentacioacute Mrsquoexplico crec que molta gent no pensa
en lrsquoexistegravencia i la importagravencia que tenen els animals drsquoexperimentacioacute Crec que
lrsquoexperimentacioacute animal eacutes un tema sobre el qual a la gent no li agrada parlar i dels que
en parlen realment pocs estan ben informats ja que srsquoinvisibilitza per part de la
societat lrsquoexistegravencia dels experiments que es portem a terme amb animals cada any
Mrsquohe adonat de la dificultat que es presenta a lrsquohora de voler comenccedilar una
investigacioacute en un centre i que realment hi ha bastants lleis i entitats que protegeixen
els animals drsquoexperimentacioacute i els seus drets Em sembla molt beacute que hi hagi tantes
reglamentacions en forma de documents per veure com seragrave la investigacioacute quegrave es
portaragrave a terme en ella si realment pot aportar alguna cosa positiva si compliragrave el
principi de les 3 Rrsquos adequadament si es compliran totes les normes bagravesiques etc
He apreacutes que estem a prop perograve a la vegada lluny drsquoarribar a trobar una cura per el
cagravencer de progravestata
Tambeacute he apreacutes que en les recerques biomegravediques srsquoha avanccedilat molt amb tema de les
modificacions genegravetiques amb els animals drsquoexperimentacioacute ja que srsquoha aconseguit que
el sistema immunitari dels ratolins actuiacute com el drsquoun humagrave
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
65
Respecte la meva hipogravetesi inicial he canviat drsquoopinioacute ja que gragravecies a lrsquoelaboracioacute del
meu treball mrsquohe informat de com eacutes realment comenccedilar una investigacioacute de manera
legal Tambeacute gragravecies a que he tingut lrsquooportunitat de presenciar en persona el proceacutes
experimental drsquouna investigacioacute real he pogut comprovar que siacute es compleixen tots els
reglaments dictats per la llei i que srsquointenten protegir els animals drsquoexperimentacioacute de
la manera meacutes eficaccedil possible complint estrictament el principi de les 3 Rrsquos i altres
legislacions
He pogut entrar a lrsquoestabulari de la UAB cosa que poca gent poc fer i he tingut la
possibilitat de conegraveixer els reglaments i els protocols drsquohigiene i seguretat que srsquohan de
portar a terme adonant-me de que realment es teacute cura dels animals que srsquoutilitzen en
les experimentacions
Tota investigacioacute acaba amb la presa de dades obtenint uns resultats amb les seves
respectives conclusions
Jo a lrsquo interpretar els resultats de la investigacioacute i arribar a una conclusioacute raonada
mrsquohe adonat de que encara que el percentatge de variacioacute en les mides dels tumors
tractats amb les vacunes de DNA no sigui molt meacutes baix que el percentatge de variacioacute
de les mides dels tumors sense tractament srsquoha presentat igualment una variacioacute Per
aquesta raoacute la utilitzacioacute drsquoanimals drsquoexperimentacioacute en aquesta investigacioacute ha sigut
egravetica ja que lrsquouacutes dels ratolins no ha sigut en va
Sobre el tema dels meus objectius els he pogut complir tots ja que amb la recerca que
he portat a terme he sigut capaccedil de canviar drsquoopinioacute i de negar la meva hipogravetesi inicial
Tambeacute he pogut pensar en la pregunta principal que es fa en el treball i he pogut
arribar a una conclusioacute raonada
- Soacuten realment necessaris els animals drsquoexperimentacioacute
Al principi pensava que no es trobava recompensat el dolor i el sacrifici dels
animals drsquoexperimentacioacute per al desenvolupament de tractaments contra
malalties perograve despreacutes drsquoinformar-me adequadament sobre el tema he vist
que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten necessaris per al desenvolupament de
qualsevol tractament i que srsquointenta que els animals siguin tractats de la
manera meacutes humanitagraveria possible
Per aquesta raoacute crec que els animals drsquoexperimentacioacute soacuten realment
importants ja que gragravecies a ells es pot obtenir informacioacute beneficiosa tant per
als animals com per els humans Perograve trobo que no srsquoha de fer un uacutes excessiu
dels animals drsquoexperimentacioacute i que srsquoha de treballar en la recerca de megravetodes
alternatius per evitar lrsquouacutes dels animals drsquoexperimentacioacute
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
66
Annex 1Tractament - cagravencer de progravestata lrsquoespera en observacioacute i la vigilagravencia
activa
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoespera-en-observacionhtml
Annex 2 Tractament - cagravencer de progravestata la cirurgia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocirugiahtml
Annex 3 Tractament - cagravencer de progravestata la radioteragravepia
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoradioterapiahtml
Annex 4 Tractament - cagravencer de progravestata la crioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientocriocirugiahtml
Annex 5 Tractament - cagravencer de progravestata teragravepia hormonal httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoterapia-hormonalhtml
Annex 6 Tractament - cagravencer de progravestata la quimioteragravepia httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientoquimioterapiahtml
Annex 7Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular la transfeccioacute httpseswikipediaorgwikiTransfecciC3B3nMC3A9todos_BiolC3B3gicos[5]E2808B
Annex 8Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlularels liposomes httpwwwscieloorgmxscielophpscript=sci_arttextamppid=S0036-36342009000900012
Annex 9 Transfeccioacute i implantacioacute del DNA (vacuna) al nucli celmiddotlular
lrsquoelectroporacioacute httpsenwikipediaorgwikiNucleofection
Annex 10 AMM ndash Declaracioacute de Helsinki
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-animales-
en-la-investigacion-biomedica
Annex 11 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Reial Decret
53-2013 httpswwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 12 Legislacioacute espanyolaeuropea drsquoanimals drsquoexperimentacioacute Directiva
76768CEE httpseceuropaeugrowthsectorscosmeticslegislation_en
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
67
Annex 13 El Comitegrave drsquoegraveticaComissioacute Egravetica drsquoanimals drsquoexperimentacioacute
httpwwwboeesboedias20130208pdfsBOE-A-2013-1337pdf
Annex 14 Memograveria del projecte
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_projecte_experimentacio_animalspdf
Annex 15 Memograveries dels procediments
httpwebgencatcatwebsharedOVTDepartamentsTESDocuments9455_Memoria_
descriptiva_procediment_experimentacio_animalsdoc
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
68
httpwwwbbccommundonoticias201602160203_cancer_graficos_impacto_men
httpseswikipediaorgwikiCC3A1ncer
httpswwwnews-medicalnethealthCancer-Classification-(Spanish)aspx
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-la-amm-sobre-el-uso-de-
animales-en-la-investigacion-biomedica
httpswwwwmanetespolicies-postdeclaracion-de-helsinki-de-la-amm-
principios-eticos-para-las-investigaciones-medicas-en-seres-humanos
httpswwwwmanetespoliticaspoliticas-
actualestext=animalesamptype=ampyear_from=1981ampyear_to=2017
httpswwwcancergovespanol
httpswwwseomorg
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasOrigendelaenfermedadaspx
httpswwwaeccesSobreElCancerelcancerPaginasTiposdecanceraspx
PDF Carcinogegravenesis
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=3ampcad=rjaampuact=8
ampved=0ahUKEwj45OOAs_rVAhVCJlAKHdkHAl0QFggvMAIampurl=http3A2F2Fwwwine
nsldpe2Fportal2Fdocumentos2Fpdf2Feducacion2F01102014_CARCINOGENESIS
_IPDFampusg=AFQjCNH_du_E77MMfETNbWqNgrEPHaVDMA
httpswwwcancergovespanoltiposprostataprotratamiento-prostata-
pdqlink_1679_toc
httpwwwactasdermoorgesel-proceso-metastasico-ii-
diseminacionarticulo13003498
httpswwwcancerorgescancercancer-de-prostatatratamientohtml
httpswwwgenomegov
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
69
httpsenwikipediaorgwikiDNA_vaccinationDelivery
httpaltwebjhsphedupubsbookshumane_expforeword
PDF El modelo animal en las investigaciones biomeacutedicas Dra Silvia
httpswwwgoogleesurlsa=tamprct=jampq=ampesrc=sampsource=webampcd=1ampcad=rjaampu
act=8ampved=0ahUKEwiDj5WxzZbYAhVJzxQKHVn1A_4QFggoMAAampurl=http3A2F
2Fwwwumeduuy2Fdocs2Frevistabiomedicina2F2-
32Fmodelopdfampusg=AOvVaw3BlRL1Jmn0nbVxj69bB-PK
httpsesscribdcomdoc95654807Tema-1-Modelos-Animales-1
httpsestabulariuabcatPresentaciC3B3_39_1
httpwwwuibesesrecercaestructurescomissionsceea
httpwebgencatcatcatramitstramits-temesProjectes-dexperimentacio-
amb-animals-autoritzacions-i-comunicacionscategory=75b636d8-a82c-11e3-
a972-000c29052e2campmoda=1
httpswwwnc3rsorgukgrimacescales
PDF MOUSE GRIMACE SCALE (MGS) THE MANUAL
httpswwwnc3rsorguksitesdefaultfilesdocumentsGuidelinesMGS20Manualpdf
httpoepumhestagcriterios-de-punto-final
httpwwwcultekcomaplicacionesaspp=Aplicacion_Flujo_Laminarampopc=tecnicasampidap=68
httpanimec-tokyosakuranejpproductsTECNIPLASTIVCindice1html
httpsenwikipediaorgwikiNude_mouse
httpsenwikipediaorgwikiHumanized_mouse
httpgtt-vihorgbookprint7484
httpwwwagenciasincesNoticiasEntra-en-vigor-en-la-UE-la-prohibicion-de-
experimentacion-animal-con-fines-cosmeticos
Llibres 1r2n Bachillerat Biologia ndash Grup Promotor
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
70
Primerament mrsquoagradaria agrair al tutor del meu treball
de recerca per animar-me a que em presenteacutes al
projecte Argoacute de la UAB Tambeacute agraeixo la seva ajuda la
seva implicacioacute i els seus consells per lrsquoelaboracioacute del
meu treball ja que han sigut de molta ajuda a lrsquohora de
complementar i enllestir el treball
Per un altre banda agraeixo al equip que srsquoencarrega de
dirigir el Projecte Argoacute de la UAB per haver-me
seleccionat i aixiacute poder gaudir drsquoaquesta experiegravencia
Per uacuteltim vull agrair lrsquoajuda que mrsquoha proporcionat la
Patrocinio des del primer dia i per acceptar a ser
entrevistada per mi I vull donar-li les gragravecies a la Sara i al
la resta drsquoinvestigadors de la investigacioacute a la que vaig
poder assistir per tambeacute haver-me ajudat amb tot el
tema dels documents i per explicar-me el funcionament
drsquoun proceacutes drsquoinvestigacioacute en un estabulari
