pruebas bioquimicas
TRANSCRIPT
![Page 1: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/1.jpg)
MICROBIOLOGÍA GENERAL
HERNÁNDEZ GONZÁLEZ ISRAEL
GRUPO 93 (8R)
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DEL ESTADO DE MÉXICOUNIVERSIDAD AUTÓNOMA DEL ESTADO DE MÉXICO
FACULTAD DE QUÍMICAFACULTAD DE QUÍMICA
![Page 2: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/2.jpg)
PRUEBAS DE IDENTIFICACION BIOQUIMICA• Se pueden hacer las pruebas de la galería IMVIC ( son pruebas
bioquímicas), muy útiles para identificar bacterias. La palabra IMVIC, corresponde con diversas pruebas:
• I Indol si utiliza triptófano, se forma anillo rojo en agua de peptona.• M Rojo de metilo.• VP prueba de Voges Proskauer.• C Si necesita citrato o no como única fuente de carbono.
Si la bacteria tiene una fermentación:• · Butilenglicólica VP es (+).• · Ácido mixta Rojo de Metilo (+).Prueba de la - galactosidasa (ONPG) identificar fermentadores de
lactosa.
![Page 3: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/3.jpg)
• Con frecuencia, la identidad de una especie requiere que se conozca de manera detallada su actividad bioquímica, porque otras características no son suficientemente distintivas o diferenciales
• Además de los productos finales de los procesos metabólicos, también se necesita conocer con detalle como se producen estos cambios
• Como ocurren paso a paso las reacciones químicas, cuáles enzimas intervienen, cuales son los productos intermediarios
![Page 4: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/4.jpg)
• En general el microorganismo se cultiva en medios que contienen una sustancia nutritiva específica o sustrato y después de la incubación del cultivos examina para ver los cambios químicos que hayan ocurrido.
![Page 5: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/5.jpg)
![Page 6: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/6.jpg)
![Page 7: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/7.jpg)
![Page 8: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/8.jpg)
![Page 9: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/9.jpg)
![Page 10: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/10.jpg)
![Page 11: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/11.jpg)
EJEMPLOS
![Page 12: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/12.jpg)
![Page 13: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/13.jpg)
TSI AGAR
• En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano.
• La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables.
![Page 14: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/14.jpg)
• El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro.
• El rojo de fenol es el indicador de pH,y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
![Page 15: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/15.jpg)
![Page 16: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/16.jpg)
EJEMPLOS
![Page 17: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/17.jpg)
![Page 18: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/18.jpg)
![Page 19: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/19.jpg)
EJEMPLOS
![Page 20: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/20.jpg)
![Page 21: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/21.jpg)
![Page 22: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/22.jpg)
![Page 23: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/23.jpg)
![Page 24: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/24.jpg)
EJEMPLOS
![Page 25: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/25.jpg)
![Page 26: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/26.jpg)
![Page 27: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/27.jpg)
![Page 28: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/28.jpg)
EJEMPLOS
![Page 29: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/29.jpg)
![Page 30: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/30.jpg)
![Page 31: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/31.jpg)
EJEMPLOS
![Page 32: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/32.jpg)
![Page 33: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/33.jpg)
![Page 34: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/34.jpg)
EJEMPLOS
![Page 35: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/35.jpg)
![Page 36: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/36.jpg)
![Page 37: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/37.jpg)
EJEMPLOS
![Page 38: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/38.jpg)
![Page 39: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/39.jpg)
![Page 40: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/40.jpg)
![Page 41: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/41.jpg)
EJEMPLOS
![Page 42: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/42.jpg)
CATALASA• Bacterias que viven en ambientes aerobios
necesitan un equipo enzimático capaz de neutralizar las formas toxicas del oxigeno.
• Esta enzima convierte el H2O2 en agua y oxigeno molecular.
• Se emplea para diferenciar • Staphylococcus (Catalasa +)• Streptococcus (Catalasa -)
![Page 43: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/43.jpg)
• El mecanismo completo de la catalasa no se conoce, aun así la reacción química se produce en dos etapas:
H2O2 + Fe(III)-E → H2O + O=Fe(IV)-EH2O2 + O=Fe(IV)-E → H2O + Fe(III)-E + O2
• Donde Fe-E representa el núcleo de hierro del grupo hemo unido a la enzima que actuán como cofactores.
![Page 44: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/44.jpg)
• La catalasa, es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas.
• El peróxido de hidrógeno es uno de los productos finales del metabolismo oxidativo de los carbohidratos y si se acumula es letal para el microorganismo.
• La catalasa convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno
![Page 45: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/45.jpg)
OXIDASA• Una oxidasa es una enzima que cataliza una reacción
de oxidación/reducción empleando oxígeno molecular (O2) como aceptor de electrones.
• En estas reacciones el oxígeno se reduce a agua (H2O) o a peróxido de hidrógeno (H2O2). Las oxidasas son una subclase de las oxidorreductasas.
• Discos con N,N,N,N-tetrametil-p fenilendiamina
![Page 46: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/46.jpg)
• Esta prueba es sumamente importante en la identificación de bacterias Gram negativas y en la diferenciación de cocos Gram positivos de importancia clínica:
• Micrococcus (prueba positiva)
• Staphylococcus (prueba negativa excepto S.Sciuri).
![Page 47: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/47.jpg)
REACCIONES
![Page 48: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/48.jpg)
NITRATOS• Sirve para determinar la capacidad de un
organismo de reducir el nitrato en nitritos.
• Algunas bacterias pueden usar nitratos como aceptor final de e- en la respiración. el nitrato puede ser reducido a nitrito o en un paso más a gases (óxidos de nitrógeno). Las enterobacterias y Pseudomonas son usualmente positivos.
![Page 49: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/49.jpg)
• Las bacterias se inoculan en medios conteniendo nitrato potásico. El nitrito procedente de la reducción de células puede detectarse añadiendo alfanalfilamina y ácido sulfanílico produciendose un color rojo.
• Se puede saber si el nitrato puede haberse reducido a más que a nitritos produciendose gas. Si al añadir zinc en polvo no hay color rojo es que no hay nitrato porque se ha reducido a gas (desnitrificación)
![Page 50: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/50.jpg)
![Page 51: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/51.jpg)
LICUEFACCIÓN GELATINA
COMPOSICIÓN
Consistencia: semisólido
Inoculación: picadura
Aspecto: semitransparente
![Page 52: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/52.jpg)
FUNDAMENTO
• Determina la capacidad de un organismo de producir enzimas de tipo proteolítico (gelatinasas) que licuan la gelatina.
• Son secretadas por ciertas bacterias para desdoblar a las proteínas, permitiendo su identificación
![Page 53: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/53.jpg)
![Page 54: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/54.jpg)
EJEMPLOSMicroorganismo Desarrollo Gelatinasa
Bacillus subtilis Satisfactorio +
Clostridium perfringens Satisfactorio +
Escherichia coli Satisfactorio -
Staphylococcus aureus Satisfactorio +
![Page 55: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/55.jpg)
LECHE TORNASOLADA
• COMPOSICIÓN LECHE DESCREMADAAGUA DESTILADA
TORNASOL
![Page 56: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/56.jpg)
• Permite diferenciar organismos sobre la base de sus múltiples reacciones metabólicas en un medio lácteo como:
• fermentación de lactosa• caseólisis• coagulación de la caseína
![Page 57: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/57.jpg)
• La leche contiene lactosa, caseína, lactalbúmina y lactoglobulina, por lo tanto, un organismo puede mostrar una o varias propiedades metabólicas en la leche tornasolada ayudando así a la identificación bacteriana:
• 1. Fermentación de lactosa• 2. Reducción del tornasol• 3. Formación de coágulo• 4. Peptonización (digestión)• 5. Formación de gas
![Page 58: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/58.jpg)
FERMENTCIÓN LACTOSA
• Cuando un organismo es capaz de fermentar lactosa, produce principalmente ácido láctico, con una condición ácida indicada por el cambio de color del medio que se vuelve rojo rosado.
![Page 59: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/59.jpg)
REDUCCION TORNASOL
• El tornasol es un indicador de pH y un indicador de oxidación reducción; algunos organismos son capaces de reducir el tornasol a una leucobase.
![Page 60: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/60.jpg)
FORMACIÓN DE COAGULO
• Las enzimas proteolíticas provocan la hidrólisis de las proteínas de la leche lo que da como resultado su coagulación. La principal enzima responsable de la formación de coágulo es la renina.
![Page 61: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/61.jpg)
VIAS DE FORMACIÓN DEL COÁGULO
Coágulo ácido
Cuajado
![Page 62: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/62.jpg)
PEPTONIZACIÓN• La hidrólisis de la caseína por la actividad
enzimática produce una conversión final del precipitado caseinógeno en un líquido claro
• El proceso se denomina peptonización y se manifiesta por una aclaración acuosa del medio causada por una digestión del precipitado (coágulo) y las proteínas de la leche por las enzimas proteolíticas de las bacterias
![Page 63: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/63.jpg)
![Page 64: PRUEBAS BIOQUIMICAS](https://reader033.vdocumento.com/reader033/viewer/2022052311/5571fa654979599169921e36/html5/thumbnails/64.jpg)
BIBLIOGRAFÍA
• PRESCOTT 9ª edición• BROCK 12ª edición• http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Seminario
PruebasBioquimicas.htm