UNIVERSIDAD PRIVADA NORBERT WIENER

PROGRAMA ACADMICO DE ESTUDIOS GENERALES

CARRERA: FARMACIA Y BIOQUIMICA

ASIGNATURA: BIOQUIMICA I

SECCIN: FB5N1

Trabajo N 09

Tema: AISLAMIENTO DE GLUCOGENO DEL HIGADO DE POLLO

Docente de la Asignatura: Elena Rafaela Benavides

Estudiantes:Celestino Ramirez FiorelaIzaguirre Orihuela Blanca

LIMA - PER

2014

INTRODUCCION

En este trabajo practico experimental daremos a conocer el tema de aislamiento de glucgeno de hgado de pollo, se dice que el glucgeno es el principal polisacrido de reserva de las clulas animales y al igual que la amilopectina es un polisacrido ramificado de la D-glucosa con enlaces alfa-1,4 y alfa-1,6 en los puntos de ramificacin, pero es mucho ms ramificado y compacto que sta.El glucgeno es abundante en el hgado, donde puede alcanzar hasta el 7% del peso hmedo, pero tambin se le halla en msculo esqueltico.En las clulas hepticas el glucgeno se encuentra almacenado en grnulos grandes que contienen adems las enzimas responsables de su sntesis y degradacin.El glucgeno puede hidrolizarse por la accin de alfa-amilasa que se encuentra en la saliva y jugo pancretico, las cuales rompen los enlaces alfa-1,4 en las ramas exteriores del glucgeno para dar glucosa, una pequea cantidad de maltosa y un ncleo resistente llamado dextrina limite.OBJETIVOS

Realizar el aislamiento del glucgeno a partir de hgado de pollo y su purificacin, as como su identificacin como polisacrido ramificado.

Observar las caractersticas del glucgeno obtenido del hgado de pollo, despus de la centrifugacin.

Conocer las propiedades de cada reactivo agregado en la muestra de hgado de pollo, para as concluir nuestros resultados.

MARCO TEORICO

El glucgeno es la forma de almacenamiento de la glucosa en los tejidos animales. Se encuentra principalmente en el hgado y en el msculo representando hasta un 10% y un 1-2% de su peso hmedo, respectivamente. Est formado por unidades de glucosa unidas por enlaces (1-4) y ramificaciones (1-6).

El glucgeno acta como regulador de la glucosa sangunea, almacenndola como glucgeno durante una buena alimentacin (glucogenognesis) y liberndola por fosforolisis (glucogenolisis) durante el ayuno, ya que en esta situacin no hay absorcin intestinal. La duracin del glucgeno heptico en ayunas es de aproximadamente 24 h. A partir de este momento, la concentracin en sangre se mantiene por sntesis de glucosa a partir de sustancias distintas a los carbohidratos (gluconeognesis). En estosmecanismos de control, actan la adrenalina y el cortisol.

El glucgeno se libera de los tejidos que lo contienen por calentamiento con una base fuerte (KOH) hasta la destruccin total del tejido.ESTRUCTURA DEL GLUCGENOPresenta cadenas muy ramificadas de glucosa con un nico extremo reductor (no qumicamente activo), y el resto todo extremos no reductores. Cuanto ms ramificado est mejor, pues ser ms soluble o menos insoluble (aunque tenga muchas glucosas polares y por tanto solubles, debido al aumento de su peso molecular a consecuencia del mayor n de ramificaciones se hace todava ms soluble), y adems se favorece tanto su degradacin como su sntesis (ms rpido su catabolismo y su anabolismo).Enlaces (14) glucosdico entre las glucosas de la misma rama y enlaces (16) glucosdico entre la glucosa de una rama y la glucosa de otra (en el punto de ramificacin).En resumen, el glucgeno tendr: Cadenas de AMILOSA (1- 4) no ramificadas Cadenas de AMILOPECTINA (1- 6) muy ramificadas c/ 8-10 molculas de glucosaLo que nos convendr fisiolgicamente es tener muchos extremos no reductores, porque es el lugar por donde se agrega el glucgeno (el extremo reductor no estar qumicamente activo, es decir, no tendr enzimas que lo reconozcan), y al ser estos muchos, la captacin de glucosa podr dar comienzo en muchos lugares a la vez. Y, por tanto, este gran n de ramificaciones y extremos no reductores es el que permite que el glucgeno acte como tal, de almacn energtico.La importancia de que el glucgeno sea una molcula tan ramificada es debido a que:

La ramificacin aumenta su solubilidad.

La ramificacin permite la abundancia de residuos deglucosa no reductores quevan a ser los lugares de unin de las enzimas glucgeno fosforilasa y glucgenosintetasa, es decir, las ramificaciones facilitan tanto la velocidad de sntesiscomo la de degradacin del glucgeno.

El glucgeno es el polisacrido de reserva energtica en los animales que se almacena en el hgado (10% de la masa heptica) y en los msculos (1% de la masa muscular) delos vertebrados. Adems, pueden encontrarse pequeas cantidades de glucgeno en ciertas clulas gliales del cerebro. Gracias a la capacidad de almacenamiento de glucgeno, se reducen al mximo los cambios de presin osmtica que la glucosa libre podra ocasionar tanto en el interior dela clula como en el medio extracelular. Cuando el organismo o laclula requieren de un aporte energtico deemergencia, como en los casos de tensin o alerta, el glucgeno se degrada nuevamente a glucosa, que queda disponible para el metabolismo energtico.PARTE EXPERIMENTALAislamiento de glucgeno a partir de hgado de pollo

Colocar en tubo de ensayo 5 g de hgado de pollo y adicionar 4 ml de KOH al 30 % llevarlo a bao mara hirviente durante 20 minutos, agitando

Observacin: se va agitando constantemente para obtener un producto homogneo.

Retirar los tubos y colocarlos en un recipiente con agua helada.

Adicionar 0.4 ml de solucin saturada de sulfato de de sodio y mezclar energticamente, luego adicionar 8 ml de alcohol absoluto., luego dejar en bao de hielo.

Observacin: se observa de color marrn oscuro toda la solucin, el cual se separara en fases, ya que se encuentra el glucgeno y la solucin sobrenadante.

Llevar a centrifugar en el equipo para separar las fases (glucgeno y solucin sobrenadante).

CONCLUSIONES

El glucgeno se puede liberar del hgado por calentamiento con una base fuerte, hasta la destruccin total del tejido.

El glucgeno puede separarse de los monosacridos y otros compuestos hidrosolubles por precipitacin con alcohol, porque los polisacridos son mucho menos solubles en alcohol acuoso que los monosacridos.

La separacin del glucgeno del tejido se consigue mediante la adicin de etanol (precipita polisacridos y elimina los monosacridos solubles) y sulfato de sodio (coprecipitante). As, se produce un precipitado que contiene una mezcla de glucgeno, protenas y cidos nucleicos, que han resistido el calentamiento anterior.

El hgado es un rgano o vscera del cuerpo humano y, a la vez, la glndula ms voluminosa de la anatoma y una de las ms importantes en cuanto a la actividad metablica del organismo. Desempea funciones nicas y vitales como la sntesis deprotenas plasmticas, funcin desintoxicarte, almacn de vitaminas, glucgeno, etc.

En el hgado la conversin de glucosa almacenada en forma de glucgeno a glucosa libre en sangre, est regulada por la hormona glucagn y adrenalina. El glucgeno heptico es la principal fuente de glucosa sangunea, sobre todo entre comidas.

CUESTIONARIO

1. GRAFIQUE LA CASCADA GLUCOGENOLITICA

2. FUNDAMENTE LA CAUSA POR LA QUE LA GLUCOSA NO SE ALMACENA EN EL ORGANISMO

La glucosa se almacena en el higado, donde es transformado en glucogeno (glucosa unida con otras glucosas , unidas por enlases glucocidicos) por un proseso llamado glucogenesis. Cuando el cuerpo nececita azucar (glucosa) , el higado se encarga de manadrla por la sangre. pero para eso, tiene que transformar el glucogeno de vuelta a glucosa por un proseso llamado glucogenolisis.

Elglicgenooglucgenoes unpolmero glcidoramificado de glucosa pero ms compacto que el almidn. Elglicgenooglucgenoes una forma que tiene el cuerpo de acumular energa. Se puede decir que el glicgeno o glucgeno esel "super combustible" o la gasolina del organismo humano.Esel combustible de los esfuerzos intensos; almacenado en los msculos y en el hgado funciona como una reserva de energa.Glicgeno + Oxgeno = energaEl glicgeno est siempre asociado al agua: 1 g de glicgeno se asocia a 2,7 g de agua.El organismo puede almacenar hasta 600 g de glicgeno. Con ejercicio, esta reserva se agota rpidamente, y la falta de glicgeno produce agotamiento. Por ello los deportistas deben reducir el ritmo de entrenamiento cuando eso ocurre.Elglicgeno se forma a partir de la glucosa presente en los glcidos:Azcar, fruta, pan, arroz, cereales, patatas, etc.Se necesitan 48 horas para renovar las reservas, tiempo que se reduce si hay absorcin delpidos.Polmero de muchas ramificacionse, el glicgeno es almacenado sobre todo en elhgadoy parte de l se almacena en losmsculos, pero tambin puede encontrarse en algunas clulas delcerebro, en eltero, y en lavagina.

3. DESCRIBA COMO ACTUAN LAS ENZIMAS QUE INTERVIENEN EN LA GLUCOGENOLISIS.La degradacin a glucosa disponible metablicamente (glc-6-P) precisa de la accin combinada de tres enzimas diferentes:1) Glucgeno fosforilasa2)Enzima desramificante del glucgeno3)Fosfoglucomutasa

1)Glucgeno fosforilasa: Cataliza ladenominadaescisin fosforoltica, que consiste en la salida secuencial de restos de glucosadesde el extremo no reductor, segn la reaccin:

(glucosa)n+ Pi (glucosa)n-1 + glucosa-1-P

Esta reaccin es muy ventajosa para la clula, en comparacin con una de hidrlisis.Laenzimaposee PLP como coenzima, que interviene en elmecanismo de catlisis.

2)Enzima desramificante del glucgeno: La glucgeno fosforilasano puede escidir los enlacesO-glicosdicos ena(1-6). Laenzima desramificante del glucgenoposee dos actividades:

a(1-4) glucosil transfersicaqueTRANSFIEREcada unidad de trisacrido al extremo no reductor, ya(1-6)glicosidsicaque HIDROLIZA el resto de glucosa unido ena(1-6).

3)Fosfoglucomutasa: Se encarga detransformar la glucosa-1-P en glucosa-6-P. Esta reaccin, perfectamente reversible, transcurre mediante unmecanismoen el que se origina glucosa-1,6-bis-fosfato.

glucosa-1-P glucosa-6-P

En el hgado existe otra enzima muy importante, laglucosa-6-fosfatasa, necesaria para que pueda cumplir su funcin de proveedor de glucosa a otros tejidos.

glucosa-6-P + H2O ---------------> glucosa + Pi

4. COMO SE REALIZA LA REGULACION DE LA GLUCOGENOGENESIS

La actividad de la enzima glucgeno sintasa es regulada por modificacin covalente (fosforilacindefosforilacin) en respuesta a la accin hormonal (adrenalina en msculo y glucagon en hgado). La glucgeno sintasa A (activa) es inactivada por fosforilacin en un residuo especfico de SER a glucgeno sintasa B (inactiva) tambin llamada D, por ser dependiente de la [G-6-P]. A la glucgeno sintasa A tambin se la llama (independiente)

1.- activacin de las unidades de glucosa a UDP-glucosa2.- polimerizacin

BIBLIOGRAFA

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