INSTITUTO POLITECNICO NACIONALESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICASDEPARTAMENTO DE BIOQUIMICADR. GUILLERMO CARVAJAL SANDOVAL

4QM1 SECCION 1 *LOPEZ RAMIREZ STEPHANY *MENDOZA GARCES DANIA FERNANDA

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PRACTICA 7: OBTENCIN DE GLUCGENO A PARTIR DE HGADO DE RATA Y SU CARACTERIZACIN QUMICA

*OBJETIVOSSe realizar el aislamiento y purificacin del glucgeno a partir del hgado de un organismo vivo y se identificar la composicin de los productos por medio de hidrlisis cida y enzimtica por medio de reacciones qumicas caractersticas.

*INTRODUCCIONEl glucgeno es la forma de almacenamiento de la glucosa en los tejidos animales. Se encuentra principalmente en el hgado y en el msculo representando hasta un 10% y un 1-2% de su peso hmedo, respectivamente. Est formado por unidades de glucosa unidas por enlaces (1-4) y ramificaciones (1-6).

El glucgeno acta como regulador de la glucosa sangunea, almacenndola como glucgeno durante una buena alimentacin (glucogenognesis) y liberndola por fosforolisis (glucogenolisis) durante el ayuno, ya que en esta situacin no hay absorcin intestinal. La duracin del glucgeno heptico en ayunas es de aproximadamente 24 h. A partir de este momento, la concentracin en sangre se mantiene por sntesis de glucosa a partir de sustancias distintas a los carbohidratos

*Explicacin de cada paso:

1.- La rata no debe excitarse puesto que si esto sucede esta empezara a segregar glucgeno lo que ocasionara que obtengamos menos de lo estimado.

2.- El Hgado debe extraerse de manera rpida puesto que entre ms nos tardemos se producirn enzimas que degraden el glucgeno esta se tiene que lavar para quitar la sangre pues esta es una impureza para nuestra extraccin de glucgeno.

3.- Se debe pesar el hgado pues necesitamos este dato para el clculo de rendimiento, se cortara en pedazos pequeos para que sea ms sencillo triturarlo.

4 y 5.- El tratamiento posterior con cido tricloroactico (TCA) hace que precipiten las protenas y cidos nucleicos de la mezcla.

6.-Se centrifuga para que todos los componentes que no necesitas queden en el precipitado que se formara como protenas, mezcla de clulas y la arena que se utiliz para triturar.

7.- Se decanta el sobrenadante para que en el obtengamos el glucgeno, y de igual manera se encontraran en esta agua y TCA.

8.- Se lava el mortero y el pistilo con el TCA para que recolectemos la pasta homognea que quedo en ellos.

9.- se centrifuga de nuevo por la misma razn del paso 6.

10.- se decanta el sobrenadante para juntarlo con el sobrenadante inicial para poder obtener la mayor cantidad de glucgeno posible.

11.-Se le agrega etanol para que se separe el glucgeno del sobrenadante y se precipite.

12.- Se centrifuga para que el glucogeno quede precipitado.

13.- El sobrenadante se desecha pues no contiene ningn compuesto de inters.

14 y 15.- se repite el procedimiento para que el precipitado sea el mayor posible y obtengamos mayor cantidad de glucgeno.

16.- Se decanta el precipitado en una charolita y se le agrega etanol para deshidratarlo y este cristalice.

*Caracterizacin qumica del glucgeno.a) Preparar 15mL de una solucin de glucgeno de 5mg/ml.b) Preparar una serie de tubos segn la tabla.TUBO123456

Glucgeno (ml)222222

HCl 1N (ml)2

HCl 2N (ml)2

HCl 4N (ml)2

Amilasa con. (ml)2

Amilasa 1:2 (ml)2

NaCl al 5%1gota1gota

Agua dest.2

Incubar 30min92C37C

*RESULTADOSRendimiento, Porcentaje de glucgeno presente en la rata.Charola= 1.3851gCharola con Glucgeno= 1.9114gGlucgeno= (1.9114g-1.3851g)= 0.5263g peso secoPeso de Hgado= 14g 100%Peso de hgado X % de glucgeno14g 100%0.5263g X X= 3.75% de glucgeno presente en el hgado de nuestra rata Caracterizacin qumica.PruebaObservacionesImagen

NinhidrinaNegativo Nos indica que nuestro problema no hay aminocidos, ya que es una reaccin caracterstica para grupos amino libres.

BiuretNegativo En nuestro problema no hay presencia de protenas debido a q la reaccin es para identificar protenas y pptidos de cadena menor a 3 unidades de a.a.

MolishPositivo Se identifico que nuestro problema es un carbohidrato. La reaccin de Molish es general para carbohidratos.

HidrolisisAcidaTestigoEnzimticaBlanco

1 N2 N4 NGlucgeno sin hidrolizarConc.1:2Agua

Fehling+++-++-

Lugol---+---

Seliwanoff+++-++-

*ANALISIS DE RESULTADOSPrueba de FehlingEn la hidrlisis cida como en la hidrlisis enzimtica se obtuvieron resultados positivos en los tubos hidrolizados, esta prueba se realiza para identificar los carbonilos potencialmente libres que estn involucrados en enlaces glucosidicos (azucares reductores) gracias a esto podemos decir que en nuestra muestra probablemente hay presencia de glucosa, maltosa o fructosa. En el tubo testigo del glucgeno sin hidrolizar dio negativo, debido a que sus grupos estn bloqueados debido a los enlaces alfa-1,4 y alfa-1,6; no posee iones libres par que se lleve a cabo la reaccin.

Prueba de SeliwanoffLos resultados fueron positivos para 5 tubos, el tubo testigo del glucgeno dio negativo debido a que no se hidrolizo. En esta prueba podemos diferenciar aldosas de cetosas, las cetosas dan rpido y las aldosas lento, por lo tanto podemos decir que el azcar presente es una aldosa (glucosa).Prueba del lugolDio positivo en el tubo testigo del glucgeno, debido a que al no ser hidrolizado el glucgeno es capaz de atrapar al lugol por ser un polisacrido lineal, formando caltratos.*CONCLUSIONES-Los seres vivos almacenan glcidos en forma de polisacridos, que sirven como materiales de reserva como es el caso del glucgeno en los animales.-El glucgeno contiene unidades de glucosa unidas por enlaces glicosdicos alfa-1,4 y alfa-1,6.-Se caracteriz al problema por reacciones qumicas, dando como resultado la identificacin del glucgeno.

*BIBLIOGRAFIA*Lehninger, Albert, Nelson, David L. (1993). Principios de Bioqumica. Segunda Edicin, Ediciones Omega, Barcelona, Espaa.