práctica 6 : hidrólisis de una proteína y ensayos para proteínas y aminoácidos
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PRÁCTICA 6 : HIDRÓLISIS DE UNA PROTEÍNA Y ENSAYOS PARA PROTEÍNAS Y
AMINOÁCIDOS
Aminoácido
El grupo R define la diferencia entre
cada aminoácido. Se consideran zwitteriones.
(ANFÓTEROS)
Se unen mediante enlaces peptídicos
para formas las PROTEINAS
Moléculas orgánicas constituidas por un grupo amino y un grupo carboxilo
ENLACE PEPTÍDICO
Proteína
Polímeros largos de α-
aminoácidos, unidos por enlaces
petídicos.
Primaria Secundaria Terciaria Cuaternaria
La desnaturalización es un cambio
estructural de las proteínas.
Funciones
Estructural
Transporte
De reserva
De defensa
OBJETIVOS1. Conocer las características de las proteínas.
2. Realizar la hidrólisis de una proteína denominada grenetina.
3. Aplicar reacciones de identificación para aminoácidos y proteínas.
4. Identificar los aminoácidos presentes en la grenetina por medio de una cromatografía en placa fina.
REACTIVOSÁcido clorhídrico HCl
Ácido nítrico
Hidróxido de sodio
Fenolftaleína
Ninhidrina
Nitrito de sodio
Rojo Congo
HIDRÓLISIS DE GRENETINA (SOLUCIÓN “A”). Cantida
dReactivo
1 g Grenetina10 mL Ácido clorhídrico
concentrado
10 mL Agua destilada0.5g Carbón Activado.1 g de grenetina
10 mL de HCl10 mL de agua destilada
0.5 g de carbón activado y continuar calentado
Filtrar35 minutos
Continuar calentado por 2 minutos
REACCIÓN DE HIDRÓLISIS
SOLUCIÓN NEUTRALIZADA DE HIDROLIZADO DE GRENETINA (SOLUCIÓN “B”).
5 ml Solución A
Neutralizar con NaOH
Se Ocupara en la cromatografía, la prueba con Ninhidrina y Acción reguladora de Aminoacidos
CANTIDAD REACTIVO5 mL Solución A ( G.
Hidrolizada)La necesaria Hidróxido de sodioEl necesario Papel pH
SOLUCIÓN DE GRENETINA SIN HIDROLIZAR.(SOLUCIÓN “C”).
Grenetina 0.5gAgua destilada
SOLUCIÓN DE ALBÚMINA (SOLUCIÓN “D”)
Cantidad Reactivo1 huevo La clara100 mL Agua destiladaUn trozo Manta de cielo
Utilizar filtrado.
•Reacciones de identificación
REACCIÓN XANTOPROTEÍCA. • La reacción es dada por los aminoácidos que
contienen de grupos, compuestos aromáticos. • Se presentará una coloración amarilla.
REACCIÓN XANTOPROTÉICA. CANTIDAD REACTIVO20 mL. Solución “A” (G.
hidrolizada)2.0 mL Solución “D” (Albúmina)10 mL Ácido nítrico
concentrado- Hidróxido de sodio al
10% 2mL de solución A
2mL de albúmina
Agregar a cada tubo 5 mL de ácido nítrico
Calentar suavemente a baño Maria
Observar coloración
Enfriar, y agregar NaOH al 10%
Observar cambio de coloración
MECANISMO
Reacción de Precipitación• 2ml
Solución A• 2ml
Solución D• 2ml H2O
5ml NAOH 10%
1.0ml Pb(C2H3O2)2
Cantidad Reactivos2 mL Solución A ( G. Hidrolizada)
2mL Solución D (Albúmina)
2 mL Agua destilada
15 mL Hidróxido de sodio al 10%
1 mL Acetato de Plomo al 10%
MECANISMO
Reacción de Biuret
-0.5ml agua destilada + -0.5ml de sol. de NaOH al 10%(testigo)
-0.5ml sol. C + 0.5 mL de NaOH al 10%
-A cada tubo adicionar 2ml de solución de sulfato de cobre al 2%-Agitar, observar y concluir
-0.5ml sol. D
-0.5ml sol A + 0.5 mL de NaOH al 10 %
-0.5ml sol. D + 0.5 mL de NaOH al 10%
0.5 mL de sol. A
Reacción general
CuSO4 + NaOH +NHR
O NH
O
R R
O
HNO
RHNO
NH
R
R
H2NHN
O R
O
OH
REACCIÓN CON NINHIDRINA
• La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) reacciona con aminoácidos que tengan el grupo amino libre.
• Una reacción positiva es en la cual se presenta un color violeta intenso.
O
OHR
NH2
O
OOH
OH+
O
O
N
O
O
+ RCHO + CO2
Reacción general
O
OOH
OH
O
O
OH2O
O
OO
OH
H
O
OHR
NH2
O
O
O +
O
O
O
NR
OHO
HH
O
O
OH
NR
OHO
H
NH2
RO
O
H O
O
OH2
NR
OHO
H
O
O
N
R O
OH
H
+ H2O
O
OR
NH2
O
O
N
R O
OH
O
O
N
R O
OH
O
O
N
R
+ CO2
HO
H
O
O
NH
RO
H
H
O
O
NH
RO
HH
O
O
NR
O
H
H+
H
O
O
NR
O
H+
H
H
O
O
OO
O
N
O
O
REACCIÓN CON ÁCIDO NITROSO CANTIDAD REACTIVO
3.0 mL Ácido clorhídrico concentrado
2.0 mL Solución A ( G. hidrolizada)
2.0 mL Solución “C” (son hidrolizar)
2.0 mL Solución “D” (Albúmina)
2.0 mL Agua destilada
4.0 mL Nitrito de sodio al 5%
Reacción de Acido Nitroso3ml de HCl concentrado
• 2ml solución A• 2ml solución C• 2ml solución D• Tubo testigo sin
proteína
Enfriar1ml Solución acuosa de Nitrito de Sodio 5%
MECANISMO
ACCIÓN REGULADORA DE AMINOÁCIDOS.
Cromatografía en Placa Fina
• Solución B• Solución patrón de
aminoácido 1• Solución patrón de
aminoácido 2
Dejamos secar
Fase-Móvil: Alcohol terbutilico-Agua 3:1
Secar en Estufa
Solución Ninhidrina