paper 1 metodología de la investigación (1)

Grupo 1 Metodología de la investigación.

Modificación de la composición de la leche materna respecto del ácido

docosahexaenoico en mujeres nodrizas que recibieron ácido alfa linolénico

en aceite de chía durante la gestación y lactancia. Rodrigo Valenzuela 1,2,*, Karla A. Bascuñán 1 , Rodrigo Chamorro 1 , Cynthia Barrera 1 , Jorge

Sandoval 3 , Claudia Puigrredon 3 , Gloria Parraguez 1 , Paula Orellana 1 , Valeria Gonzalez 1

and Alfonso Valenzuela 2

Resumen

ácido α-linolénico (ALA) es el precursor de ácido docosahexaenoico (DHA) en los seres

humanos, que es fundamental para el cerebro y la función visual. Dieta occidental ofrece

bajo ALA y DHA, que se refleja en bajos de DHA en la leche materna. Aceite de Chía extraído

de chía (Salvia hispanica L.), una planta nativa de algunos países de América Latina, es alta

en ALA (hasta 60%) y por lo tanto es una alternativa para ofrecer ALA con el objetivo de

reducir el déficit de DHA. Se evaluó la modificación del perfil de ácidos grasos de la leche

obtenida de las madres chilenas que recibieron aceite de chía durante la gestación y la

lactancia. Cuarenta mujeres embarazadas sanas (22-35 años de edad) tabulados para el

consumo de alimentos, se separaron aleatoriamente en dos grupos: un grupo de control con

la alimentación normal (n = 21) y un grupo chía (n = 19), que recibió 16 ml de aceite de chía

todos los días del tercer trimestre del embarazo hasta los primeros seis meses de lactancia. El

perfil de ácidos grasos de los fosfolípidos de eritrocitos, medido a los seis meses de embarazo,

en el momento de la entrega ya los seis meses de lactancia, y el perfil de ácidos grasos de la

leche recogida durante los primeros seis meses de lactancia fueron evaluados por

cromatografía de gases. El grupo de chía, en comparación con el grupo control, mostró un

aumento significativo de la ingestión de ALA y una reducción significativa de la ingestión de

ácido linoleico, ninguna modificación proyección de ácido araquidónico (AA), ácido

eicosapentaenoico (EPA) y DHA; un aumento significativo de eritrocitos ALA y EPA y una

reducción de LA. AA y DHA no se modificaron; un aumento del contenido de la leche de ALA

durante los seis meses de lactancia, mientras que LA mostró una disminución. AA y EPA no se

modificaron, sin embargo DHA aumentó sólo durante los tres primeros meses de lactancia. El

consumo de aceite de chía durante el último trimestre del embarazo y los tres primeros meses

de lactancia aumenta transitoriamente el contenido de la leche de DHA.

Palabras clave: embarazo y la lactancia; aceite de chía; fosfolípidos de eritrocitos; ALA y DHA

en la leche

Introducción

Varios estudios han establecido el papel fisiológico importante de ácidos grasos n-3 en el

crecimiento y el desarrollo infantil, especialmente su importancia para el desarrollo neuronal

y visual [1,2]. Ácidos grasos n-3 son una familia de nutrientes esenciales derivados de ácido

alfa-linolénico (C18: 3 n-3, ALA), el precursor de los ácidos fisiológicamente activos


poliinsaturados de cadena larga grasos n-3 (n-3 LCPUFA), eicosapentaenoico ácido (C20: 5,

EPA) y ácido docosahexaenoico (C22: 6, DHA) [3]. ALA es un nutriente esencial para los seres

humanos, y su deficiencia produce alteraciones neurológicas en los lactantes [4] y trastornos

dermatológicos en adultos [5]. A través de una serie de reacciones enzimáticas de elongación

y desaturación, que se produce principalmente en el hígado, ALA se transforma primero en

EPA y DHA a continuación, que es el principal producto metabólico final. DHA está implicado

en múltiples funciones en el cuerpo humano donde ejerce un papel central en el desarrollo

fisiológico y normal del individuo de la etapa embrionaria en [6].

La acreción de DHA es crítico durante el embarazo y durante el primer año de la vida en los

seres humanos, debido a que el ácido graso es esencial para la formación y la función de los

sistemas nervioso y visuales [7]. DHA comprende 10% del peso seco del cerebro humano, el

ácido graso que constituye 35% -40% de la total del cerebro AGPICL [8]. En el tejido nervioso,

y en particular en el cerebro, el DHA es esencial para todos los aspectos de desarrollo

neurológico y la función cerebral, incluyendo la neurogénesis, la proliferación de las neuritas

y el crecimiento, la transmisión del impulso nervioso a través de la bomba de sodio-potasio, la

integridad neuronal y la vitalidad, el transporte de glucosa en sangre y la expresión génica en

el cerebro [9-11]. La mujer embarazada y en lactancia tiene un requisito fisiológico de n-3

AGPICL, y en concreto de DHA, para asegurar el crecimiento y desarrollo adecuado y normal

del niño [12]. Transformación de ALA en sus productos metabólicos (EPA y DHA) se produce

principalmente en el tejido hepático a través de procesos enzimáticos de elongación y

desaturación [13]. EPA se dirige principalmente a la formación de derivados de eicosanoides,

que tienen acciones anti-inflamatorias y efectos reguladores sobre la actividad vascular

endotelial [14]. Casi todo el DHA es transportado a la placenta durante el embarazo y

acreción activamente en el cerebro fetal y los tejidos visuales [15]. Después del nacimiento,

DHA se proporciona al recién nacido a través de la leche materna, que contiene una

pequeña pero significativa cantidad de DHA (0,30% -0,32%) [16]. La dieta occidental ofrece

muy bajas cantidades de DHA, ya que sólo cuenta con pequeñas cantidades de los

principales proveedores de este ácido graso (alimentos marinos) [17]. Por lo tanto la

suplementación con DHA para las mujeres durante el embarazo y la lactancia se ha sugerido

[18]. Sin embargo, esta suplementación no es fácilmente aceptado en el período perinatal,

ya que algunos suplementos nutricionales de DHA se derivan de aceite de pescado de los

cuales las madres pueden mostrar baja tolerancia [19]. Debido a que el ALA es el precursor

nutricional de DHA, se ha propuesto que la ingestión de alimentos que contienen ALA puede

compensar crónicamente la baja ingesta de DHA en la mujer durante el período perinatal,

proporcionando la ingestión de ALA en cantidades suficientemente altas debido a su

transformación metabólica baja a DHA (menos de 1%) [20]. Una amplia variedad de aceites

vegetales que tienen un alto contenido de ALA (30% -65%) están disponibles en la actualidad,

tal como aceite de camelina (camelina sativa L., 36%), aceite de perilla (Perilla frutescens L.,

53%), aceite de chía (Salvia hispánica L., 60% -65%), aceite de linaza (Linum usitatissimun L.,

57%), aceite de sacha inchi (Plukenetia volubilis L., 49%) [3]. Estos aceites, que son producidos

y disponibles en el mercado en muchos países, especialmente en América del Sur, son

posibilidades para la suplementación dietética de ALA con el objetivo de aumentar los niveles


de DHA en la leche materna. La investigación anterior de nuestro grupo ha demostrado que

el suministro de ALA a partir de aceite de chía a ratas adultas resultados en un aumento de la

acumulación de DHA en varios tejidos, especialmente en el hígado y el cerebro [21], lo que

sugiere una transformación eficiente de ALA en DHA. La semilla de chía y su aceite han sido

muy bien caracterizado en su composición química y el valor antioxidante [22]. En el presente

informe se evaluó el efecto del aceite de chía como la principal fuente diaria de ALA

midiendo el contenido de DHA de los fosfolípidos de eritrocitos y la leche materna obtenida

de mujeres que recibieron el aceite durante un período de la gestación y la lactancia.

Sujetos y Métodos

Diseño del estudio y sujetos

El estudio fue un ensayo clínico aleatorizado que incluyó a 40 mujeres embarazadas que

asisten actualmente al servicio de salud del Hospital Obstétrico y Ginecologico de la

Universidad de Chile. El estudio fue llevado a cabo durante el período comprendido entre

enero de 2012 y diciembre de 2013. Los criterios de inclusión fueron: edad de 22-35 años, una

edad gestacional de al menos 22 a 25 semanas de acuerdo a la fecha de la última

menstruación y confirmados por ultrasonido, 1 a 4 hijos y una historia clínica sana. Las mujeres

reclutadas pertenecían principalmente al nivel socioeconómico bajo y medio según la

ESOMAR (ESOMAR) [23], todas de origen hispano. Las mujeres con historia de consumo de

drogas o alcohol, una dieta que incluye ácidos grasos poliinsaturados (PUFA, los suplementos

de ALA) o AGPICL (EPA y o suplementos de DHA), con bajo peso según la definición de la

tabla de Chile para las mujeres embarazadas [24], con hijos gemelos o que padecieran

enfermedades crónicas como la diabetes, hipertensión arterial, obesidad u otras

enfermedades que pudieran afectar el crecimiento fetal, fueron excluidos del estudio. En el

momento de la contratación, a todas las mujeres que cumplan los criterios de inclusión se les

dio información general sobre el estudio, y un dietista explicó los objetivos y las principales

características de diseño del estudio. El protocolo de estudio fue revisado y aprobado por la

Junta de Revisión Institucional de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile

(Protocolo # 073 a 2.011) y por el Comité de Ética del Hospital Clínico de la Universidad de

Chile (Protocolo ° 507/11). Toda la información sobre el estudio fue dada a las participantes

que voluntariamente aceptaron participar y firmar el consentimiento informado.

Durante la primera cita para las evaluaciones nutricionales, las mujeres embarazadas fueron

asignadas al azar a los grupos de control (n = 21) o al grupo experimental (que recibió la

suplementación de la dieta con aceite de chía) (grupo de chía, n = 19). El perfil de ácidos

grasos y el contenido de ALA (65% -68%) del aceite fueron previamente por nuestro grupo [21].

A todas las mujeres embarazadas se les realizó una entrevista nutricional completa, incluyendo

el diagnóstico nutricional y asesoramiento de acuerdo con las directrices dietéticas para las

mujeres embarazadas. Ambos grupos fueron aconsejados para tener una ingesta controlada

de aceite vegetal (girasol / aceite de soja, 80:20 v / v) en casa. Cada mujer recibió cucharillas

de plástico (4 ml) que permitieron medir su consumo de aceite vegetal. Un estudio anterior

había demostrado una buena tolerancia de las mujeres embarazadas de aceite de chia [25].


La indicación específica para el grupo control fue de consumir cuatro cucharaditas de aceite

vegetal crudo por día (16 ml / día), principalmente en ensaladas en el almuerzo y la cena. El

grupo de Chia fue instruido para reemplazar su ingesta de aceite usual con aceite de chía

(16 mL / día; 10,1 g ALA / día). A las mujeres pertenecientes a cada grupo se les dio 4,500 ml

de cada aceite en 250 ml botellas. El control y los grupos de chía consumen los respectivos

aceites del sexto mes del embarazo hasta el sexto mes de lactancia (intervención en total: 9

meses). Todas las mujeres recibieron un registro dietético para registrar el consumo diario de

aceite vegetal y se visitaron semanalmente para evaluar el consumo de petróleo. Aceite de

Chia obtenido por presión en frío de las semillas de chía era un regalo de Benexia Co.

(Santiago, Chile).

Evaluación del Estado Nutricional

Los participantes fueron sometidos a una evaluación clínica cuando se incorporaron en el

estudio. Un médico y una enfermera evaluaron cada participante respecto a la salud

siguiendo el enfoque clínico estándar para las mujeres embarazadas. Los datos

antropométricos de peso (kg) y la altura (m) se evaluaron para determinar el índice de masa

corporal (IMC, kg / m2). El IMC se utilizó para establecer el estado nutricional materno de

acuerdo a las referencias chilenas para las semanas de gestación [24]. Los requerimientos de

energía y nutrientes se establecieron de acuerdo a criterios de la OMS [26] y de la ingesta

diaria recomendada de acuerdo con el Instituto Americano de Medicina, 2001 [27].

Ingesta Dietética de Madres

Todas las madres fueron entrevistadas por un dietista, el que les pidió incluir todos los grupos

de alimentos que se consumen en la entrada del estudio, durante la primera semana después

del parto y seis meses después del parto, utilizando un cuestionario de frecuencia de

alimentos. Además del cuestionario de frecuencia de alimentos, los nutricionistas utilizaron

datos fotográficos: "Atlas de alimentos de consumo habitual en Chile" [28], un instrumento

gráfico validado que ayuda a estimar la cantidad de cada alimento consumido. Los datos

dietéticos del cuestionario de frecuencia de alimentos se agrupan en nueve grupos de

alimentos (cereales, frutas y verduras, lácteos, carnes y huevos, legumbres, pescado y

mariscos, de alto de lípidos alimentos, aceites y grasas, azúcares y alimentos procesados).

Cereales incluyen todos los cereales y patatas; frutas y verduras incluyen todo tipo de frutas,

jugos de frutas naturales y verduras; productos lácteos incluyen leche, queso, queso fresco y

yogures; carnes y huevos incluyen carne de res, pollo, cerdo y carne de pavo, y todos sus

productos derivados, y huevos; pescados y mariscos incluyen la caballa, el atún, el salmón y

mariscos (fresco y congelado); legumbres incluyen los frijoles, garbanzos y lentejas; alimentos

ricos en lípidos incluyen aceitunas, almendras, cacahuetes, nueces, aguacates, pistachos y

avellanas; aceites y grasas incluyen aceites vegetales (principalmente girasol / soja, canola,

semilla de uva y aceite de oliva) y grasas (manteca de cerdo, mantequilla, margarina,

mayonesa y crema); azúcares y procesos alimentos incluyen azúcar, miel, mermelada,

delicadeza, refrescos, jugos artificiales, chocolates, galletas y aperitivos dulces y salados.


Los datos de la dieta fueron analizados mediante el software SQLr de procesador de alimentos

(ESHA Research, Salem, Oregón, EE.UU.), para el cálculo de la energía y la ingesta de

nutrientes. La composición de la dieta se obtuvo utilizando una base de datos de la National

USDA, Base de Datos de Nutrientes para Referencia Estándar, que también contenía

información de los datos de composición de nutrientes generados localmente.

Recolección de sangre y leche materna Muestras

Las muestras de sangre se obtuvieron en la entrada del estudio, inmediatamente después del

parto y seis meses después del parto. Hidroxitolueno butilado (BHT) se añadió a las muestras

de sangre como antioxidante y las muestras se centrifugaron inmediatamente para obtener

la fracción de eritrocitos (3.000 g durante 10 min a 20 C) y luego se congelaron a 80 C hasta

su posterior análisis. La leche materna (5 ml) se extrajo por las mismas madres después de que

el bebé había sido alimentado durante al menos 2 minutos y se recogió en viales de plástico.

Las muestras de leche se congelaron inmediatamente en 80 C hasta su posterior análisis.

Eritrocitos congelados y muestras de leche fueron trasladados al Laboratorio de Lípidos del

Área de Investigación Bioquímica Nutricional del Departamento de Nutrición de la Facultad

de Medicina de la Universidad de Chile, para los procedimientos analíticos.

Análisis de ácidos grasos

Extracción de lípidos de eritrocitos y leche materna.

La extracción cuantitativa de lípidos totales de los eritrocitos y la leche materna se llevó a

cabo de acuerdo con Bligh y Dyer con la adición de BHT. Los eritrocitos y las muestras de leche

materna se mezclaron por separado con enfriado con hielo cloroformo / metanol (2: 1 v / v,

que contiene 0,01% de BHT), se añadió cloruro de magnesio (0,5 N), y la mezcla se

homogeneizó en un homogeneizador Ultraturrax (Janke y Kunkel, Stufen, Alemania). Los lípidos

totales extraídos de los eritrocitos y la leche se separaron por cromatografía de capa fina (TLC)

(20 láminas de aluminio 20 cm, gel de sílice 60 F-254; Merck?), Utilizando el sistema de

disolvente hexano / éter dietílico / ácido acético (80:20: 1 v / v). Tras el desarrollo de las placas

y la evaporación del disolvente, manchas de lípidos se visualizaron mediante la exposición de

las placas a un lámpara Camag UV (250 nm) diseñado para TLC. El sistema disolvente permite

la separación de fosfolipidos, triglicéridos, ésteres de colesterol y de colesterol de acuerdo con

su movilidad relativa. Manchas correspondientes a los fosfolipidos se rasparon de las placas

de TLC y se extrajeron por elución, ya sea con, éter dietílico o cloroformo / metanol (2: 1 v / v),

de acuerdo con Ruiz-Gutiérrez et al.

Preparación de ésteres metílicos de ácidos grasos (FAMEs)

Ésteres metílicos de ácidos grasos (FAMEs) de los fosfolípidos de eritrocitos y ácidos grasos de

la leche se prepararon según Morrison y Smith. Las muestras habían sido previamente disuelto

en cloroformo / metanol (2: 1 v / v) y luego se evaporaron bajo corriente de nitrógeno hasta

que se redujo a la mitad el volumen, a continuación, trifluoruro de boro (12% de solución


metanólica) e hidróxido de sodio (0,5 N solución metanólica) se añadieron y la mezcla se

enfrió. FAMEs se extrajeron con 0,5 ml de hexano.

Análisis cromatográfiico de gases de FAMEs

FAMEs fueron identificados y cuantificados por cromatografía de gas-líquido en un equipo

Agilent (modelo 7890B, Santa Clara, CA, EE.UU.) equipado con una columna capilar (Agilent

HP-88, 100 m x 0.250 mm; I.D. 0,25 m) y un detector de ionización de llama (FID). La temperatura

del inyector se fijó en 250 C y la temperatura de FID en 300 C. La temperatura del horno en la

inyección de la muestra se fijó inicialmente en 120 °C y se programa para que aumente a 220

°C y a un FID de 5 °C por min. El hidrógeno se utiliza como gas portador a una velocidad de

flujo de 35 cm por segundo en la columna, y la relación de división de entrada se fijó en 20: 1.

La identificación y cuantificación de FAMEs se lograron mediante la comparación de los

tiempos de retención y los valores de % de área de pico de muestras desconocidas a las del

estándar de lípidos comercial (Nu-Chek Prep Inc., Elysian, MN, EE.UU.). C23: 0 fue utilizado

como patrón interno (Nu-Chek Prep Inc., Elysian, MN, EE.UU.) y los datos se procesaron

mediante el sistema de software de Hewlett-Packard Chemstation.

Analisis estadístico

Los datos dietéticos se comprobaron mediante el contraste de la composición de los datos

de consumo de energía / nutrientes con cuestionarios dietéticos, identificando valores atípicos

potenciales. En el caso de los valores extremos, se hizo una revisión cuidadosa de cada

cuestionario de frecuencia alimentaria. Se realizó un análisis descriptivo y el análisis de la

distribución de la variable se realizó mediante una prueba de Shapiro-Wilk. Los resultados se

expresan como la media ± SD. La ingesta dietética de nutrientes y fosfolípidos de eritrocitos y

la composición de ácidos grasos de la leche materna en los tres puntos de muestreo de la

intervención se compararon a través de una vía ANOVA y Newman-Keuls. Para todas las

comparaciones, significación estadística se fijó a α nivel 0.05. El software estadístico utilizado

fue el SPSS 15.0 (Chicago, IL, EE.UU.) y GraphPad Prism v. 6.0 (GraphPad Software, San Diego,

CA, EE.UU.) para el procesamiento figura.

Resultados

Antecedentes y datos antropométricos de los grupos

La Tabla 1 muestra los antecedentes y datos antropométricos de la muestra total y de cada

grupo. La muestra total se compone de mujeres jóvenes (28,6 ± 5,8 años), principalmente de

nivel socioeconómico medio (70,9%), y teniendo períodos de gestación, sexo, peso al nacer

y estatura de sus hijos muy similares. No se observaron diferencias significativas para el grupo

de chía en comparación al grupo de control para todos los antecedentes y datos

antropométricos.


Los

datos se expresan como la media ± S.D., o porcentaje (%) cuando esté indicado. * SES: nivel

socioeconómico evaluado utilizando los criterios de ESOMAR; IMC: índice de masa corporal =

kg / m2. a Las medidas antropométricas tomadas en el registro del estudio.

Ingesta Dietética

La ingesta dietética de ambos grupos se muestra en la Tabla 2. La energía y la ingesta de

macronutrientes (hidratos de carbono, proteínas y grasas), incluyendo fibra, de ambos grupos

fue similar, sin diferencias significativas. Las excepciones fueron la energía y el consumo de

hidratos de carbono para el grupo control en el inicio (sexto mes de embarazo) y al final del

estudio (sexto mes de lactancia). La ingesta ácidos grasos saturados totales (SFA), ácidos

grasos monoinsaturados (MUFA) y ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) también fueron

similares en ambos grupos experimentales. Sin embargo, como resultado de la intervención,

se observaron diferencias significativas para n-6, n-3 PUFA y algunos ácidos grasos individuales

(LA y ALA). En el momento del parto y al sexto mes de lactancia, en comparación con el sexto

mes de embarazo (inicio de la intervención) se observó un aumento significativo de la ALA y

una reducción significativa de LA en el grupo de chía cómo se espera de la ingesta de aceite

de chía. Relación n-6 / n-3 también fueron significativamente modificadas por la ingesta de

aceite de chía. La ingesta de n-6 AGPICL (AA) y n-3 AGPICL (EPA y DHA) no se modificado

durante la intervención.

Perfil de ácidos grasos de los fosfolípidos de eritrocitos

La Tabla 3 muestra la composición de ácidos grasos de los fosfolípidos de eritrocitos obtenidos

de las mujeres durante el embarazo y el período de lactancia. El primer muestreo (sexto mes

de embarazo) no mostró diferencias en los perfiles de ácidos grasos cuando se compararon

los grupos de control y de chía. Sin embargo, en el segundo muestreo (en el parto) se

observaron algunas diferencias significativas. Aunque el total de SFA, el total de ácidos grasos


monoinsaturados y el total de PUFA no mostraron modificaciones, no se observaron diferencias

cuando se compararon total de n-6 y el total de PUFA n-3 y algunos ácidos grasos individuales.

El grupo de chía, en comparación con el grupo control, mostró una reducción significativa en

el total de n-6 PUFA, como LA y AA no fueron modificados. Total n-3 PUFA, ALA y EPA se

incrementaron en el grupo de chía, pero DHA no se modificó. La relación n-6 / n-3 PUFA fue

significativamente reducida en el grupo de chía. El tercer muestreo (6 meses de lactancia)

mostró niveles similares de ácidos grasos totales e individuales y la relación n-6 / n-3, como se

observó en el segundo muestreo (en el parto).

Tabla 2. Energía y composición de la dieta ingerida por madres durante el embarazo y la

lactancia.

Los datos están expresados como la media_ D.S. de n=21 mujeres (Grupo Control) y n=19

(Grupo Chía). Significancia estadística (p<0.05), a: diferencia significativa del Grupo control a

los 6 meses de embarazo; b: diferencia significativa del grupo tratado con Chía a los 6 meses

de embarazo; c: del Grupo Control en el parto; d: diferencia significativa del grupo tratado

con Chía en el parto; e: diferencia significativa del Grupo Control a los 6 meses de lactancia;

f: diferencia significativa del grupo tratado con Chía a los 6 meses. Una cola ANOVA and test

Neuman-Keuls. Ácidos grasos saturados (SFA). Ácidos grasos monoinsaturados (MUFA). Ácidos

grasos poliinsaturados (PUFA).

Tabla 3. Composición de los ácidos grasos de los fosfolípidos de los eritrocitos de madres

durante el embarazo y la lactancia.

Los datos se expresan en g de ácidos grasos por 100 g de ácidos grasos metil esteárico (FAME)

y representan la media_D.S. de n=21 mujeres (Grupo Control) y n=19 (Grupo tratado con

Chía). La significancia estadística (p<0.05), a: diferencia significativa del Grupo Control a los 6

meses de embarazo; b: diferencia significativa del grupo tratado con Chía a los 6 meses de

embarazo; c: diferencia significativa del Grupo Control en el parto; d: diferencia significativa

del grupo tratado con Chía en el parto; e: diferencia significativa del Grupo Control a los 6

meses de lactancia; f: diferencia significativa del grupo tratado con Chía a los 6 meses. Una

cola ANOVA y test de Newman-Keuls. Ácidos saturados (SFA) corresponden a 6:0, 8:0, 10:0,

12:0, 14:0, 16:0, 18:0, 20:0 y 22:0, 24:0. Ácidos monoinsaturados (MUFA) corresponden a 14:1 n-

5, 16:1 n-7 y 18:1, n-9. Ácidos poliinsaturados (PUFA) corresponden a 18:2 n-6, 183 n-3, 20:4 n-6,

20:5 n-3, 22:5 n-3 y 22:6 n-3, n-6/n-3 ratio es 20:4 n-6/ (20:5, n-3 + 22:5, n-3 + 22:6, n-3).

3.4. Perfil de los ácidos grasos de la leche materna.

SFA, MUFA, PUFA totales, y n-6 PUFA y n-3 PUFA totales de la leche materna, se muestran en la

Figura 1E. SFA total (Figura 1A), MUFA total (Fig. 1B) y PUFA total (Fig. 1C), no fueron modificados

durante la intervención dietaria con aceite de chía al ser comparado con el grupo control.

N-6 PUFA (Fig. 1D) se redujo significativamente y el total de n-3 PUFA (Fig. 1E) se incrementó

significativamente después de la ingesta de aceite de chía. Figura 2, muestra la modificación


individual de la los ácidos más relevantes, n-6 y PUFA n-3 y n-6/n-3 ratio después de la ingesta

de aceite de chía. LA disminuyó significativamente en el grupo tratado con chía (Fig. 2A)

mientras que ALA se incrementó significativamente (Fig. 2B) durante todo el período de la

ingesta de aceite de chía. AA (Fig. 2C) y EPA (FIG. 2D) no se vieron modificados en ese grupo.

Sin embargo, DHA (Fig. 2E) se incrementó significativamente en el grupo consumidor de chía

solo durante el primer, segundo y tercer mes de lactancia, retornando hacia valores similares

a los del grupo control después de pasado el período inicial de tres meses. El n-6/n-3 PUFA

ratio (Fig. 2F), se redujo significativamente en el grupo tratado con chía durante el sexto mes

de lactancia.

Figura 1. Cont.


Figure 2. Cont.

Figura 1. Composición total de ácidos grasos de la leche materna durante la lactancia. Ácidos

grasos saturados (SFA) (A); ácidos grasos monoinsaturados (MUFA) (B); ácidos grasos

poliinsaturados (PUFA) (C); PUFA n-6 total (D); PUFA n-3 total (E). Datos expresados como g de

ácido graso por 100 g FAME y representan la media_D.S. de n=21 mujeres (grupo control) y

n=19 (tratados con chía). Significancia estadística (p<0.05); *: indica diferencia significativa

cuando se compara el grupo tratado con chía con el grupo control de cada mes de

lactancia (test) y para todos los meses de lactancia (una cola ANOVA y Newman-Keuls test).

SFA corresponde a 6:0, 8:0, 10:0, 12:0, 16:0, 18:0, 20:0, y 22:0, 24:0. MUFA corresponde a 14:1 n-

5, 16:1 n-7 y 18:1, n-9. PUFA corresponde a 18:2 n-6, 18:3 n-3, 20:4 n-6, 20:5 n-3, 22:5 n-3.


Figura 2. Cont.


Figure 2. Composición individual de ácidos grasos de la leche materna durante la lactancia.

18:2, n-6 (LA) (A); 18:3, n-3 (ALA) (B); 20:4, n-6 (AA) (C); 20:5, n-3 (EPA) (D); 22:6,n-3 (DHA) (E);

(F). Datos expresados como g de ácido graso por 100 g de FAME y representan la media_D.S.

de n=21 mujeres (grupo control) y n=19 (grupo tratado con chía). Significancia estadística

(p<0.05); *: Indica diferencia significativa al comparar el grupo tratado con chía con cada

mes de lactancia del grupo control (t-test) y para todos los meses de lactancia (Una cola

ANOVA y Newman-Keuls test). n-6 PUFA/n-3 PUFA ratio is (18:2, n-6 + 20:4, n-6)/(18:3,

n-3 + 20:5, n-3 + 22:5, n-3 + 22:6, n-3).

Discusión

La ingesta dietética de ácidos grasos por las embarazadas y nodrizas en los períodos de

suplementación estudiados, se refleja en la composición de ácidos grasos de los fosfolípidos

de eritrocitos y también en la composición de ácidos grasos de la leche materna. Las

diferencias en la composición de ácidos grasos son particularmente relevantes para ALA, el

precursor de n-3 LCPUFA, que a su vez refleja el complejo metabolismo de los ácidos grasos

poliinsaturados y su conversión (a través de elongación y desaturación) a los ácidos grasos de

20 y más átomos de carbono. En el mismo sentido, nuestros resultados demuestran que el ALA

proporcionado a las mujeres embarazadas y nodrizas a través de la aceite de chía, aumenta

el contenido de ALA y EPA de los fosfolípidos de eritrocitos y el contenido de ALA y DHA de la

leche materna, pero no modifica el DHA en los fosfolípidos de los eritrocitos, lo cual refleja que

la conversión de ALA a n-3 LCPUFA y la acumulación posterior a células o fluidos biológicos,

como la leche, es un proceso altamente regulado. Los resultados para eritrocitos obtenidos

del grupo chia están en línea con las observaciones anteriores de Arterburn et al., (2006), que

sugieren que estas células no son reservorios metabólicos para DHA, a diferencia de otros

tejidos, tales como la corteza cerebral, los espermatozoides y la retina. Sin embargo, los

eritrocitos se consideran un buen marcador de sangre de la situación nutricional de los ácidos

grasos. Lauritzen y Carlson han propuesto que el perfil de ácidos grasos de los eritrocitos

materno durante el embarazo se relaciona con el perfil de ácidos grasos de los eritrocitos del

recién nacido, lo que indica un papel activo de la placenta durante el embarazo y de la

leche materna durante la lactancia. Se ha demostrado previamente que la ingesta de ALA

en la dieta aumenta la acumulación de EPA en los eritrocitos. Sin embargo, también ha sido

demostrado que la ingesta de ALA, suministrada como aceite de sacha inchi (49% ALA),

aumenta ambos ácidos grasos, EPA y DHA, en eritrocitos, introduciendo así la controversia en

relación con el metabolismo de n-3 LCPUFA en humanos.

Durante los seis meses de análisis de la la leche materna, se observó que la ingesta diaria

de aceite de chía permitió un contenido más alto y constante de ALA. Del mismo modo, se

esperaba un comportamiento igual para DHA, ya que es el producto de la supuesta continua

transformación de ALA en el hígado. Ambos ácidos grasos son transportados a la mama para

ser secretados en la leche. Sorprendentemente, el aumento de DHA en la leche sólo se


observó durante los primeros, segundo y tercer mes de lactancia, alcanzando valores similares

a los del grupo control después del tercer mes de lactancia, a pesar de la ingestión alta y

continua de ALA. Tampoco aumentó EPA, ya que se ha demostrado que ocurre en

poblaciones en que la ingesta de EPA a través de los alimentos marinos es alta. Estas

observaciones conducen a la hipótesis de un alto control de la conversión de ALA en EPA y

DHA, y de la presencia de estos ácidos grasos en la leche materna. La leche materna no

contiene EPA porque este ácido graso compite con AA. Esta es la razón por la que las fórmulas

iniciales fueron enriquecidas con DHA y AA a partir de fosfolípidos de huevo con exclusión de

EPA. Nuestra hipótesis es que se produce el control fisiológico de la conversión de ALA en DHA:

(i) a través de una alta regulación en la actividad de las enzimas implicadas en la elongación

y desaturación, que fijó DHA en concentraciones fisiológicas; (ii) a través de la beta oxidación

de exceder ALA para la producción de energía o el reciclado del carbono; (iii) debido al

hecho de que el exceso de PUFA y LCPUFA puede aumentar la susceptibilidad a la rancidez

oxidativa de la leche con el riesgo de estrés oxidativo del tejido en el niño, sin embargo, esta

última propuesta requiere una mayor demostración.

La literatura indica que los valores de DHA de la leche materna de mujeres pueden variar

de 0,2% a 1% de ácidos grasos totales. Estos valores son altamente dependientes de la

ingestión directa de DHA (es decir, el consumo de pescado y / o tomar suplementos n-3 de

LCPUFA) como se ha demostrado previamente. En un estudio reciente se estableció que las

mujeres embarazadas chilenas que muestran consistentemente muy bajo consumo de

pescado y otros alimentos marinos, como resultado muestran un nivel muy bajo de DHA en la

leche materna, así como un bajo contenido de DHA en los fosfolípidos de eritrocitos. Las

poblaciones que consumen grandes cantidades de pescado, como Filipinas y las mujeres

japonesas, muestran mayores niveles de DHA en la leche en comparación con las

poblaciones que consumen menos pescado (por ejemplo, Israel, Columbus, Ohio, EE.UU). Sin

embargo, el contenido de EPA de la leche de las mujeres de estos países es muy baja y no se

modifica por el consumo de pescado a pesar de la presencia de este ácido graso en los

alimentos marinos, lo que indica un control fisiológico en el transporte y acumulación de este

ácido graso en el contenido de grasa de la leche materna. De acuerdo con nuestros

resultados, la ingesta de ALA durante el período perinatal sólo permite un aumento de DHA

en la leche durante los tres primeros meses de lactancia, lo que sugiere o bien una mayor

conversión limitada y acumulación de DHA en el hígado y / o un transporte regulado en el

pecho, como fue postulado anteriormente. Después del primer período de tres meses de

lactancia, El DHA de la leche alcanza los niveles fisiológicos estimados de DHA (un promedio

de 0.3% a 0.32% de grasa total) a pesar de la alta disponibilidad nutricional de ALA. Es

interesante que el contenido de AA y EPA de la leche materna no se modificó por la

suplementación con ALA en nuestro modelo experimental. Esto es altamente relevante

debido a la estrecha relación de estos dos ácidos grasos con el control de la homeostasis

vascular y las respuestas inflamatorias en los recién nacidos. En nuestro estudio, AA siempre


estuvo presente en los eritrocitos de los dos grupos experimentales en las concentraciones

fisiológicas estimadas, corroborando el importante papel de este ácido graso, como para el

desarrollo del cerebro en las primeras etapas de la vida, como se ha demostrado

previamente. Las madres que consumieron aceite de chía se les indicó reemplazar los aceites

vegetales en la dieta habitual (más comúnmente aceite de girasol/ soja). Esta sustitución, que

aumenta el consumo de ALA, permitió la sustitución de una alta proporción de LA por ALA,

tanto en los eritrocitos y en la leche. Se ha demostrado que las madres que tenían una alta

ingesta dietética de LA y una baja ingesta de ALA entregados a los niños con puntuaciones

subnormales de aprendizaje, donde el consumo alto de LA se correlacionó con los niveles más

bajos de DHA en la leche materna. Un resultado relevante del presente estudio fue el cambio

en la proporción total de ácidos grasos n-6/ n-3 en los fosfolípidos de eritrocitos y de la leche

materna. Modificaciones ancestrales de esta proporción en favor de los ácidos grasos n-3

pueden haber establecido un patrón genérico evolutivo, que en la actualidad caracteriza el

cerebro de seres humanos. Nuestros resultados se obtuvieron de madres no obesas, libres de

cualquier enfermedades crónicas, ambos aspectos relevantes debido a que en las mujeres

obesas, la mayoría de los que sufren de la enfermedad de hígado graso no alcohólico, hay

una reducción en la actividad hepática de las enzimas desaturasas (Δ-5 y Δ-6 desaturasas)

con una reducción concomitante en la formación de EPA y DHA a partir de ALA. Debido a la

alta prevalencia de mujeres con obesidad en los países occidentales y la comorbilidad de

enfermedad del hígado graso no alcohólico, es un reto interesante para el futuro evaluar el

efecto de la suplementación con ALA a través de aceite de chía y la presencia de este ácido

graso y de DHA en la secreción de la leche de estas mujeres. Nuestro estudio no evaluó el

efecto de la intervención dietética de las mujeres embarazadas y nodrizas con aceite de chía

en sus bebés, como la duración del período gestacional, peso al nacer y el desarrollo

cognitivo y visual. Otros informes han estudiado el impacto de la suplementación con DHA en

estos parámetros, pero no de ALA en concentraciones como las utilizadas en nuestro estudio.

Un estudio previo, suminitró aceite de canola (10% ALA) a las mujeres embarazadas,

mostrando un incremento del período gestacional y el peso al nacer.

Conclusiones

La aceite de chía puede constituir una forma asequible y barata para proporcionar ALA en

cantidades superiores a la población de muchos países que se caracteriza por un bajo

consumo de pescado. No es de menor importancia considerando la baja disponibilidad real

de peces y las crecientes preocupaciones sobre la contaminación de peces con metales

pesados y otros productos tóxicos que influyen negativamente en el consumo de pescado.

Nuestra investigación ha demostrado que la ingesta de aceite de chía, una buena fuente

natural de ALA, permite una modificación importante en el contenido de EPA de los eritrocitos

en madres embarazadas y un interesante aumento de DHA en su leche. Sin embargo, se


necesita más investigación en relación con las intervenciones nutricionales pre y postnatales

con aceite de chía o de otros aceites con un alto contenido de ALA, para apoyar

científicamente la recomendación del consumo de ALA para aumentar el contenido de DHA

de la leche materna. La suplementación con aceite de Chia también puede contribuir a

mejorar la relación LA / ALA en las mujeres durante el período perinatal.

paper 1 metodología de la investigación (1)

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