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TECNOLOGA DEL

ADNRECOMBINANTE

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QU ES LA TECNOLOGA DELADN RECOMBINANTE?

El trmino ADN recomin!nte "!ce re#erenci!! l! cre!ci$n %e n&e'!( comin!cione( %e(e)mento( o %e molc&l!( %e ADN *&e no (e

enc&entr!n +&nt!( %e m!ner! n!t&r!l,

L! tecnolo)-! %el ADN recomin!nte &tili.!tcnic!( *&e /ro'ienen %e l! io*&-mic! %e lo(

0ci%o( n&cleico( &ni%!( ! meto%olo)-!()enric!( %e(!rroll!%!( ori)in!lmente /!r! l!in'e(ti)!ci$n %e !cteri!( 1 %e 'ir&(,

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CU2LES SON SUSA3LICACIONES?

Aplicaciones en investigacin ymedicina

4 3ro%&cci$n ! )r!n e(c!l! %e /rote-n!( %e&tili%!%

m%ic! 4 Anim!le( tr!n()nico(

4 Ter!/i! )nic!

Aplicaciones industriales Aplicaciones en agricultura 4 Me+or! )entic! %e lo( c&lti'o(

4 N&e'o( in(ectici%!( n!t&r!le(

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5 6UNCIONES B2SICAS

CLONAR 7OBTENER MULTI3LES CO3IAS8 UN GEN E93RESAR UNA 3ROTENA

7CODI6ICADA 3OR EL GEN DEINTERS8

: C;MO SE

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5 ELEMENTOS ESENCIALES

SECUENCIA DE ADN DE INTERS =ECTOR

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VECTORES

1. Plsmidos Insercin de hasta 10kb

Sistema ms comn

2. Fagos

Filamentosos (M13, capacidad de insercin 10kb)Tipo I (T1, capacidad 3kb)!amba (capacidad "kb)#1 (capacidad 100 kb)

3. Csmidos$apacidad de %%kb#lsmidos con sitios cos

&'entes e peden insertar n *ra'mento de &+ dentro dena c-lla h-sped . M/!$!& +2 &+ T&S#/T&+/&

4. BAC $apacidad de 300kb

$romosoma arti*icial de bacterias

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Clulas Huspd

!RA" #E!AT$VAS!RA" #E!AT$VAS %E. &oli' P.a(ugi)osa*!RA" POS$T$VAS!RA" POS$T$VAS %Ba&illus su+,ilis'

S.au(us' S,(p,omm-&s*

Levaduras

Clulas mamferas

Bacterias

Sa&&a(om-&s &(/isa'Pi&ia pas,o(is' ,&.

0)as &lula(s &omoCHO % &l. O/a(io Hams,(*

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>, 3l0(mi%o(Lo( /l0(mi%o( (on molc&l!( %e ADN %e %olec!%en! circ&l!r co'!lentemente cerr!%o 7ccc8etr!cromo($mic!( %e ori)en n!t&r!l *&e tienen&n ori)en %e re/lic!ci$n 7ori@8 1 *&e (e re/lic!n

!&t$nom!mente en l!( cl&l!( !cteri!n!(,

3or*& (on em/le!%o( como 'ectore(?

3or*&e (on43e*&eo(,43ro%&cen mlti/le( co/i!(,

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LOS PLSMIDOS SON ELEMENTOS DETANS!EEN"IA DE IN!OMA"I#N

$EN%TI"A ENTE &A"TEIAS

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3L2SMIDOS COMO =ECTORES DE CLONADO

OI$EN DEEPLI"A"I

ON

$EN DEESISTEN"

IA ALANTI&I#TI"O

'MA"ADO DE

SELE""ION

(

$EN LA")'MA"AD

O DESELE""I#

N(

SITIO DE"LONADOM*LTIPLE

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l!cAm/

R

ADN#or0neo

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PLSMIDO DE"LONADO

OI$EN DEEPLI"A"I#N

$EN LA")

SITIO DE "LONADOM*LTIPLE

AMP

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DI$ESTI#N DELPLSMIDO + DEL

!A$MENTO DE ADN"ON LA MISMA EN)IMA

DE ESTI""ION

POD,"TO DE

P"

PLSMIDO DE"LONADO

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DI$ESTI#N "ON LAMISMA EN)IMA DE

ESTI""ION

EcoI EcoIEcoI

POD,"TO DEP"

PLSMIDO DE"LONADO

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DIGESTI;N CON LAMISMA ENIMA DERESTRICCION

POD,"TO DE P"DI$EIDO "ON EcoI

PLSMIDO DE"LONADO DI$EIDO

"ON EcoI

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LIGACI;N

CON QU?

ADN LIGASAT,&O "ON ME)"LA DE!A$MENTO DE ADN +PLSMIDO DI$EIDOS

"ON EcoI

ADN LI$ASA

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DOSES,LTADOSPOSI&LES -.

PLSMIDO

E"OM&INANTE

PLSMIDO NOE"OM&INANTE

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TRANS6ORMACI;NBACTERIANA

C;MO?

MTODO QUMICO O 6SICO

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,&O "ON ME)"LADE PLSMIDOS

E"OM&INANTES +NO

E"OM&INANTES

T,&O "ON ",LTI/OL01,IDO DE&A"TEIAS

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DOS

ES,LTADOSPOSI&LES -.

&A"TEIANO

TANS!OMADA

&A"TEIA

TANS!OMADA

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SIEM&A PLA"AS "ON MEDIO A$A L&S,PLEMENTADO "ON AMPI"ILINA2 IPT$ +

34gal

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INCUBACI;N A FC 3OR >H

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TES ES,LTADOSPOSI&LES -.

&A"TEIANO

TANS!OMADA

A.

EN ,NMEDIO "ON

AMPI"ILINA

LA &A"TEIA SINPLSMIDO NO

"E"E

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&A"TEIATANS!OMADA "ON

PLSMIDO NOE"OM&INAN

TE


&.

EN ,NMEDIO "ON

AMPI"ILINA

EN ,NMEDIO "ONIPT$ + 3gal

LA &A"TEIA "ONPLSMIDO"E"E

LA &A"TEIA "ONPLSMIDO NO

E"OM&INANTE '$ENLA") INTE$O ES

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&A"TEIATANS!OMADA "ON

PLSMIDOE"OM&INAN

TE


".

EN ,NMEDIO "ON

AMPI"ILINA

EN ,NMEDIO "ONIPT$ + 3gal

LA &A"TEIA "ONPLSMIDO"E"E

LA &A"TEIA "ONPLSMIDO NO

E"OM&INANTE '$ENLA") DIS,PTO ES

3L2SMIDOS COMO =ECTORES DE

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3L2SMIDOS COMO =ECTORES DEE93RESI;N

"OMPONENTES5

6.OI$EN DE EPLI"A"I#N7.$EN DE ESISTEN"IA AL ANTI&I#TI"O 7/!r!(eleccion!r l!( !cteri!( *&e contienen el /l0(mi%o e+,!m/icilin!88.SITIO DE "LONADO M*LTIPLE9.POMOTO 7%ee (er #&erte /!r! tener &n!e/re(i$n ele'!%!8:.SE;AL DE TEMINA"I#N 7Jn!li.!ci$n %el ARNm8

3ARA LAAM3LI6ICACI;N DELGEN EN BACTERIAS

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3L2SMIDOS COMO =ECTORES DEE93RESI;N

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3L2SMIDO DE E93RESI;N ENBACTERIAS

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BACTERIAS 3ROTENAS DE

6USI;N

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EL CASO DE LA INSULINA

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SELECCI;N DEL 3ROMOTOR

Se)n l! cl&l! "&(/e%

4 B!cteri!

4 Cl&l! e&c!riot!( Se)n el ti/o %e ARN %e(e!%o en

cl&l!( e&c!riot!(

4 ARNm ARN 3OLIMERASA ti/o II 4ARN(" ARN 3OLIMERASA ti/o III

2 ;

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3L2SMIDOS DE E93RESI;NEN CLULAS DE MAM6EROS

3L2SMIDOS DE E93RESI;N

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3L2SMIDOS DE E93RESI;NEN CLULAS DE MAM6EROS

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MTODOS DETRANS6ECCI;N

TRANS6ECCION ESTABLE :

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TRANS6ECCION ESTABLE :TRANSITORIA

Se %enomin! tr!(#ecci$n tr!n(itori! !*&ell! en l!

*&e el /l0(mi%o no "! (i%o inte)r!%o ! &no %e lo(cromo(om!( e&c!ri$tico(,

Se "!l! %e tr!n(#ecci$n e(t!le c&!n%o el/l0(mi%o (e "! inte)r!%o ! &no $ m0(

cromo(om!( e&c!riot!(,CO4TRANS6ECCIONL! co4tr!n(#ecci$n e( l! tr!n(#ecci$n (im&lt0ne! %e'!rio( /l0(mi%o(, Me%i!nte l! co4tr!n(#ecci$n (e

/&e%e 'eriJc!r (i l! tr!n(#ecci$n (e "! re!li.!%ocorrect!mente, 3!r! lo)r!rlo (e co4tr!n(#ect! &n/l0(mi%o c&1! /re(enci! e( 'eriJc!%! /or &n!re!cci$n r0/i%! 1 (im/le *&e in%ic! *&e el /l0(mi%o

%e inter( "! (i%o ien tr!n(#ect!%o,

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GENES RE3ORTEROS OMARCADORES

GENES RE3ORTEROS O

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GENES RE3ORTEROS O

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5,6AGOS

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Q& (on lo( 'ir&( ?

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!A$OS

!A$OS

ELI"OIDALES

!A$OSI"OSAEDI"

OS

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CICLOLITICO=S,

CICLOLISOGNI

CO

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6AGOS El )enom! %e lo( #!)o( /&e%e (er

4 NA simple cadena7MS5K Q8K4 NA do>le cadena7/"i H8K4 DNA simple cadena7/"i 9>FK #%K M>8 o4 DNA do>le cadena7TK TFK l!m%! K TK

M&K T5K T8,

Lo( #!)o( /&e%en (er

4l-tico(K4tem/er!%o( o li(o)nico(

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3ARA 3ENSAR P,,

LOS 6AGOS UTILIADOSCOMO =ECTORESSON LTICOS O

LISOGNICOS?

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3L2SMIDO

6AGOS

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,C$(mi%o(

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,BACTERIAL ARTI6ICIAL

C

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