modelo de manual

GUIA PARA LA ACREDITACION DE LABORATORIOS DE MICROBIOLOGA DE ALIMENTOSAUTOR: ALICIA IRENE CUESTA. [email protected] Consultora Internacional de la FAOCAPTULO 1 PERSONAL 1.1 COMPETENCIA TCNICA. 1.2 CAPACITACIN DEL PERSONAL 1.3 ORGANIZACIN ANEXO 1.A EJEMPLOS DE PERFILES DE PUESTOS PR 1.1 PERFILES DE PUESTO, AUTORIZACIN Y CALIFICACIN DEL PERSONAL PR 1.2 CAPACITACIN DEL PERSONAL

CAPTULO 2 INSTALACIONES Y CONDICIONES AMBIENTALES 2.1 LOCALES 2.2 CONDICIONES AMBIENTALES ANEXO A.2. EJEMPLO DE DISTRIBUCIN DE REAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA. IN 2.1 MONITOREO AMBIENTAL PR 2.1 LIMPIEZA Y DESINFECCIN DE LOCALES PR 2.2 PLAN DE HIGIENE CAPTULO 3: MTODO DE ENSAYO Y VALIDACIN DE LOS MTODOS 3.1 MTODOS DE ENSAYO MICROBIOLGICOS: 3.2 MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS: 3.3 VALIDACIN DE LOS MTODOS MICROBIOLGICOS: 3.4 ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE DE MEDICIN EN MICROBIOLOGA: 3.5 CONTROL DE LOS DATOS: ANEXO 3.A. DOCUMENTOS PARA LA ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE DE MEDICIN EN MICROBIOLOGA: PR 3.1 DISEO DE MTODOS PROPIOS PR 3.2 VALIDACIN DE MTODOS MICROBIOLGICOS PR 3.3 MTODO DE ENSAYO CUANTITATIVO PR 3.4 ESTIMACION DE LA INCERTIDUMBRE DE MTODOS MICROBIOLGICOS PR 3.5 CONTROL DE DATOS PR 3.6 MTODO DE ENSAYO CUALITATIVO IN 3.1 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVOS Y REACTIVOS IN 3.2 EVALUACIN DE LA CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS

CAPTULO 4 EQUIPOS 4.1 REQUISITOS ANEXO 4.A. DIRECTRICES PARA CALIBRACION DE EQUIPOS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA. ANEXO 4.B DIRECTRICES PARA LA PUESTA EN SERVICIO Y VERIFICACION DE EQUIPOS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA. ANEXO 4.C DIRECTRICES PARA EL MANTENIMIENTO DE EQUIPOS ANEXO 4.D INSTRUCTIVO DE USO DE EQUIPOS PR 4.1 MANEJO DE EQUIPOS IN 4.1 LIMPIEZA DE EQUIPOS

ndice

1

CAPTULO 5 TRAZABILIDAD DE LAS MEDICIONES 5.1 DEFINICIN 5.2 REQUISITOS 5.3 PATRONES DE REFERENCIA Y MATERIALES DE REFERENCIA: 5.4 MATERIALES DE REFERENCIA (CERTIFICADOS) 5.5 COMPROBACIONES INTERMEDIAS 5.6 CULTIVOS DE REFERENCIA PR 5.1 MANEJO Y USO DE CULTIVOS DE REFERENCIA PR 5.2 MANEJO DE PATRONES Y MATERIALES DE REFERENCIA IN 5.1 CALIBRACIN DE TERMMETROS CAPTULO 6 MUESTREO 6.1 DEFINICIN 6.2 REQUISITOS: 6.3 PLANES DE MUESTREO 6.4 ELECCIN DE LOS PLANES DE MUESTREO ANEXO 6.A: CATEGORAS DE RIESGO ANEXO 6.B: ESPECIFICACIONES MICROBIOLGICAS POR GRUPO DE ALIMENTO. ANEXO 6.C: EJEMPLOS DE PLANES DE MUESTREO PARA LECHE EN POLVO PR 6.1 MUESTREO

CAPTULO 7 MANIPULACIN DE LOS TEMS DE ENSAYO GENERALIDADES 7.1 7.2 TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS 7.3 RECEPCIN DE LAS MUESTRAS 7.4 MANIPULACIN DE LAS MUESTRAS 7.5 ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS 7.6 DISPOSICIN FINAL DE LAS MUESTRAS PR 7.1 MANIPULACIN DE LAS MUESTRAS

CAPTULO 8 ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS RESULTADOS 8.1 GENERALIDADES 8.2 CONTROLES DE CALIDAD 8.3 EVALUACIN DE LAS TENDENCIAS DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS. APNDICE 8.A. EJEMPLO DE GRFICO DE CONTROL PR 8.1 ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS RESULTADOS DE ENSAYOS

CAPTULO 9 INFORME DE LOS RESULTADOS 9.1 GENERALIDADES 9.2 CORRECCIONES A LOS INFORMES DE ENSAYO. DOCUMENTO MODELO DE INFORME DE RESULTADO

REFERENCIAS

ndice

2

CAPTULO 1 PERSONALRequisitos de la Norma 17025ndiceCAPTULO 1 PERSONAL ........................................................................................................................................... 1 1.1 COMPETENCIA TCNICA............................................................................................................................... 1 1.2 CAPACITACIN DEL PERSONAL. ................................................................................................................... 1 1.3 ORGANIZACIN............................................................................................................................................ 2 ANEXO 1.A EJEMPLOS DE PERFILES DE PUESTOS:....................................................................................................... 3

1.1 COMPETENCIA TCNICA. Todo el personal involucrado en el ensayo, debe ser competente para la tarea asignada. 1.1.1 La direccin del laboratorio debe asegurar la competencia del personal que participa en la realizacin del ensayo, que opera equipos, que evala los resultados y firma los informes de ensayos. Cuando el laboratorio emplea personal en formacin debe proveer adecuada supervisin. La direccin debe autorizar al personal que realiza una determinada tarea; como ser realizar el muestreo, el ensayo, emitir el informe, operar equipos o realizar interpretaciones. El laboratorio debe conservar los registros: de la autorizacin (1.1.3) relativos a la competencia del personal y la fecha a partir de la cual se autoriz para efectuar una tarea. La competencia del personal debe ser evaluada en forma continua. Ejemplo: a travs de controles de calidad de los resultados, Ensayos intralaboratorios e interlaboratorios (ver Captulo 8 Aseguramiento de la calidad de los resultados).

1.1.2 1.1.3

1.1.4 1.1.5

1.2 CAPACITACIN DEL PERSONAL. Todo el personal tcnico que trabaja en el laboratorio de microbiologa debe recibir un adecuado entrenamiento de modo de asegurar que ejecuta en forma idnea las operaciones relacionadas con el ensayo. (PR 1.2 Capacitacin del personal) 1.2.1 La direccin debe definir y mantener actualizados: los requisitos mnimos en cuanto a su nivel de estudio, calificacin y experiencias del personal directivo, tcnico y de apoyo clave afectado a los ensayos (perfiles de puestos). Los ejemplos de perfiles de puesto que se presentan a continuacin son generales, hay que adaptarlos a cada organizacin y a los casos especiales. Se detallan cinco perfiles (ANEXO 1.A.): Captulo 1: Personal Autor: Alicia Cuesta. Consultora Internacional de la FAO 1

1.2.2

Director del laboratorio Responsable de calidad Jefe del laboratorio de microbiologa Personal tcnico del laboratorio de microbiologa Auxiliar de laboratorio de microbiologa. El personal deber contar con conocimientos, experiencia y competencia de acuerdo a las tareas y responsabilidades que tenga asignadas. Todo el personal tcnico debe recibir un adecuado entrenamiento que incluyen tcnicas bsicas de microbiologa para la manipulacin de cultivos y muestras en condiciones de esterilidad, adecuado criterio para el manejo de material potencialmente infeccioso, conocimiento de normas de bioseguridad, etc.

1.2.3

El laboratorio deber asegurar la formacin permanente de su personal y mantener actualizado su Curriculum vitae y los registros de formacin que recibe cada uno de los miembros del personal. La formacin a ser adquirida deber orientarse a garantizar la competencia en las tcnicas y mtodos realizado por el personal involucrado en el ensayo. El laboratorio debe conservar los registros para todo el personal tcnico: Curriculum vitae: el nivel de estudios, ttulos obtenidos, experiencia, calificacin, formacin, aptitudes. de su capacitacin en la realizacin de la tarea asignada El laboratorio debe establecer y documentar el tiempo necesario para la capacitacin y el intervalo de tiempo lmite que el analista puede no realizar el ensayo sin necesidad de recapacitarse. La capacitacin que recibe el personal, dentro de la organizacin o fuera de ella, debe incluir temas relacionados con calidad de modo de asegurar el buen funcionamiento de su sistema de calidad y la mejora continua.

1.2.4 1.2.5 1.2.6

1.2.7

1.3 ORGANIZACIN (Ver requisitos de gestin) 1.3.1 1.3.2 1.3.3 Cada laboratorio dispondr de una estructura organizativa y contar con personal adecuado a los diferentes campos analticos en que desarrolla su actividad. El laboratorio debe disponer de personal que est empleado por el laboratorio o que est bajo contrato con l. El laboratorio debe definir claramente en su manual de calidad las responsabilidades de todo el personal. El personal debe tener claro conocimiento del rea de su responsabilidad.

Captulo 1: Personal Autor: Alicia Cuesta. Consultora Internacional de la FAO

2

ANEXO 1.A EJEMPLOS DE PERFILES DE PUESTOS: El dueo del puesto dispone de todas las atribuciones necesarias para poder realizar las tareas detalladas en el perfil de puesto.

A. Denominacin del puesto: Director del laboratorio

Puestos subordinados: Jefe del laboratorio de microbiologa, Personal tcnico y Auxiliar de laboratorio. Requisitos de dueo del puesto: ser experto titulado en el rea de trabajo especfica. Debe serlo en los aspectos administrativos y de relaciones humanas (manejo y motivacin del personal), para cumplir con xito sus funciones. Debe tener la experiencia necesaria que le permita prever, reconocer y solucionar cualquier problema tcnico que se presente durante la ejecucin de los ensayos. Tareas: Responsable de todas las operaciones tcnicas y de proveer los recursos necesarios para la realizacin del ensayo y el aseguramiento de calidad de los resultados. Definir y planificar la poltica de calidad. Establecer los objetivos de calidad del laboratorio. Determinar las estrategias tcnicas a seguir para lograr los objetivos de calidad. Verificar el funcionamiento del sistema de calidad. Definir y planificar la estructura de la organizacin. Asegurar que el laboratorio cuente con personal competente para la realizacin del ensayo y que dicho personal est libre de presiones que pudieran influir en su trabajo. Verificar que se mantengan actualizados los registros de personal. Promover a la capacitacin de todo el personal. Ejecutar la revisin del sistema de calidad.

B. Denominacin del puesto: Responsable de calidad Requisitos de dueo del puesto: profesional con experiencia en el la implementacin de un sistema de calidad. Objetivo del puesto: elaborar, disear e implementar el sistema de calidad. Colaborar con las reas tcnicas en su implementacin.


3

Tareas: Recomendar al Director del laboratorio la poltica de calidad. Conducir el sistema de de calidad y establecer medidas de control. Coordinar las actividades de control de calidad para lograr la integracin del sistema. Recomendar las necesidades de adiestramiento del personal con respecto al tema calidad. Asistir al personal del laboratorio en la elaboracin de procedimientos. Informar peridicamente al director sobre el funcionamiento del sistema de calidad y promover a la mejora del sistema.

C. Denominacin del puesto: Jefe del laboratorio de microbiologa.

Puestos subordinados: Personal tcnico y Auxiliar de laboratorio Superior: Director del laboratorio Reemplazante: Personal tcnico asignado. Requisitos de dueo del puesto: debe ser un profesional especializado en microbiologa de alimentos, bromatologa o disciplinas estrechamente relacionadas, altamente calificado, tener amplios conocimientos, experiencia de al menos cinco aos y criterio necesario para el trabajo en microbiologa. Objetivo del puesto: organizacin y supervisin de todas las tareas realizadas en el laboratorio de microbiologa.

Tareas: Supervisin de los analistas. Verificacin de los resultados. Planificacin de los ensayos. Elaboracin del plan de capacitacin del personal a su cargo. Programacin de verificacin y calibracin de los equipos pertenecientes al laboratorio de microbiologa. Programacin de preparacin de ensayos intralaboratorios y participacin en ensayos interlaboratorios. Evaluacin de las desviaciones del sistema informadas. Definicin e implementacin de a las acciones correctivas y preventivas. Validacin y desarrollo de metodologas nuevas. Calificacin del personal a su cargo. Evaluacin de quejas y reclamos de su rea.


4

D. Denominacin del puesto: Personal tcnico o analista del laboratorio de microbiologa.

Superior: Director del laboratorio y Jefe del laboratorio de microbiologa. Puestos subordinados: Auxiliar de laboratorio. Requisitos del dueo del puesto: tcnico o profesional con experiencia mnima de un ao en microbiologa. Objetivo del puesto: Ejecucin de tareas relacionadas con el laboratorio de microbiologa. Tareas: Realizacin de los ensayos. Manipulacin de las muestras y registro. Confeccin del informe. Reportar al jefe del laboratorio de desviaciones con respecto a: condiciones de recepcin de la muestra, condiciones de almacenamiento, durante la realizacin ensayo, mantenimiento, verificacin y calibracin de equipos. Responsable de la vigencia de los reactivos y medios de cultivo usados.

E. Denominacin del puesto: Auxiliar de laboratorio de microbiologa.

Superior: Director del laboratorio, Jefe del laboratorio de microbiologa y Personal tcnico. Requisitos de dueo del puesto: personal capacitado en tcnicas de lavado y preparacin de material para el laboratorio de microbiologa. Tareas: Trabajan bajo supervisin del personal tcnico. Realizacin limpieza y mantenimiento de equipos. Preparacin de muestras Preparacin de medios de cultivo y reactivos. Lavado de material.


5

(NOMBRE DEL LABORATORIO) (Logo DEL LABORATORIO) NDICE 1 2 3 4 5 6 7 8 9 OBJETIVO ALCANCE

Cdigo: PR 1.1 Revisin: 1 Perfiles de puesto, autorizacin Fecha: 23 de Agosto de 2005 PAGINA : 1 de 8 y calificacin del personal PROCEDIMIENTO

DEFINICIONES Y ABREVIATURAS REFERENCIAS RESPONSABILIDADES RELACIONES DESARROLLO ARCHIVO Y REGISTROS APENDICES Y ANEXOS

REVISION Y APROBACIN

REVISION N : 001

MODIFICACION: S X NO (Adjuntar en Anexo las modificaciones efectuadas)

REDACTADO POR NOMBRE Y APELLIDO FIRMA FECHA

REVISADO POR NOMBRE Y APELLIDO FIRMA FECHA

APROBADO POR NOMBRE Y APELLIDO FIRMA FECHA

(NOMBRE DEL LABORATORIO) (Logo DEL LABORATORIO)


1

OBJETIVO

Establecer los requisitos mnimos de formacin, experiencia laboral y caractersticas de personalidad y que debe cumplir el personal, a fin de asegurar la competencia para el desarrollo de las tareas asignadas 2 ALCANCE

Este procedimiento est destinado a todo el personal del (NOMBRE DEL LABORATORIO). 3 DEFINICIONES Y ABREVIATURAS Personal directivo: personal que posee asignadas responsabilidades de relativas a la gestin. Personal autorizado: personal que posee el reconocimiento formal de su capacidad para realizar en forma correcta una determinada tarea que le ha sido asignada. Perfil del puesto de trabajo: son los requisitos mnimos de formacin acadmica y experiencia que debe tener el personal para acceder al puesto de trabajo 4 REFERENCIAS

Manual de la Calidad del (Nombre del Laboratorio). Captulo: Personal. Norma ISO 17025:1999 tem 5.2. Personal 5 RESPONSABILIDADES DL D D/E I D/E RC JM E

Actividad Autorizacin del personal para la realizacin del ensayo (PR 1.1/3 y PR 1.2/4) Elaborar los perfiles de puestos del personal (PR 1.1/4) Identificar las necesidades de personal y elevar la solicitud Gestionar los recursos necesarios para la incorporacin del personal solicitado Archivar y Verificar la actualizacin de la planilla de personal autorizado (PR 1.1/3) DL: Direccin del laboratorio RC: Responsable de calidad JM: Jefe del laboratorio de microbiologa 6 RELACIONES

P D/E

E

E: Ejecuta D: Decide P: Participa I: recibe informacin

PR 1.2 Capacitacin del personal

(NOMBRE DEL LABORATORIO) (Logo DEL LABORATORIO) 7 7.1 DESARROLLO


Cuando un analista o personal tcnico o un auxiliar de laboratorio cumple el plan de formacin y entrenamiento que se registra en PR 1.2/4; dicho personal se incorpora a la planilla de PR 1.1/3 como personal Autorizado para la realizacin del ensayo u otra actividad para la que fue capacitado (como puede ser validacin de la metodologa, anlisis de datos, evaluacin de la calidad de los medios de cultivo, preparacin de los medios de cultivo, lavado de material, etc.). Personal en proceso de reautorizacin: En el caso que una persona no haya realizado, por un perodo superior a 1 ao, la tarea o ensayo para la cual estaba autorizada o cuando los resultados emitidos por dicha persona durante controles entre analistas o usando material de referencia, no cumplan con los valores de precisin establecidos, debe ser nuevamente capacitado para poder estar autorizado en la realizacin de las tareas y/o ensayos que tena designadas. El jefe de laboratorio de microbiologa elabora, para el analista en proceso de reautorizacin, un plan de formacin y entrenamiento que registra en PR 1.2/4. El Jefe del laboratorio de microbiologa detecta las necesidades de personal, de acuerdo a la situacin, que puede ser por incremento extraordinario de tareas, inexistencia o falta de disponibilidad de personal. El Jefe del laboratorio de microbiologa especifica con detalle los objetivos de la funcin que debe cumplir el personal a incorporar, la formacin requerida, ya sea secundaria, terciaria, universitaria y describe las tareas a realizar, los requerimientos tcnicos de formacin, la experiencia previa, si es necesaria, e informa a la Direccin. La Direccin evala la solicitud, elabora el perfil, especifica el horario a cumplir y de quien depende directamente (reporta/ informa a) y que tarea desarrollar Si existen en la base de datos del Laboratorio currculum vitae de personas que se ajustan al perfil requerido, se las convoca con prioridad a una entrevista a dichas personas. En caso de no existir en la base de datos currculum vitae se intenta obtener a travs de bolsas de trabajo de universidades, colegios con orientaciones afines, etc. La Direccin gestiona la incorporacin de la persona. ARCHIVO Y REGISTROS

7.2

7.3

7.4

7.5

7.6 8

El perfil de puesto elaborado, y las tareas para las cuales esta autorizado el personal, se conservan en el rea de calidad.



9

APENDICES Y ANEXOS N Codificacin Ttulo ANEXOS 1 PR 1.1/1 Hoja de modificaciones 2 PR 1.1/2 Lista de distribucin del procedimiento 3 PR 1.1/3 Planilla de personal autorizado laboratorio de microbiologa 4 PR 1.1/4 Registro de perfil del puesto



ANEXO 1: HOJA DE MODIFICACIONES VERSIN N: 001 MODIFICACIONES: HOJA N:

FECHA: VERSIN N: MODIFICACIONES:

FIRMA: HOJA N:


FIRMA: HOJA N:


FIRMA: HOJA N:

FECHA:

FIRMA:



ANEXO 2: LISTA DE DISTRIBUCIN DEL PROCEDIMIENTO

N COPIA

SECTOR/ AREA

RECUPERA VERSIN N

FECHA

FIRMA

ACLARACION



ANEXO 3

PR 1.1/3Pg.____ de ____

PLANILLA DE PERSONAL AUTORIZADO LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Nombres del personal/analistas autorizados Actividades para la cual est autorizado

Aprobado por:

Firma del Responsable

Fecha



ANEXO 4 REGISTRO DE PERFIL DEL PUESTO Denominacin del puesto: Puestos subordinados: Superior: Reemplazante: Requisitos de dueo del puesto:

PR 1.1/4

Objetivo del puesto:

Tareas:

Firma del responsable de la elaboracin del perfil

Fecha


PROCEDIMIENTO Capacitacin del personal

Cdigo: PR 1.2 Revisin: 1 Fecha: 23 de Agosto de 2005 PAGINA : 1 de 14


REVISION Y APROBACIN REVISION N : 001





(NOMBRE DEL LABORATORIO) (Logo DEL LABORATORIO) 1 OBJETIVO



En este procedimiento se describe y define la metodologa que el laboratorio emplear para la identificacin de las necesidades y planificacin de la capacitacin, entrenamiento, formacin y perfeccionamiento de los empleados, incluyendo la ejecucin de las acciones de capacitacin necesarias. 2 ALCANCE Se aplica a todo el personal del laboratorio antiguo y al recientemente incorporado. 3 DEFINICIONES Y ABREVIATURAS Capacitacin: proceso continuo y sistemtico destinado a la formacin, entrenamiento, actualizacin o perfeccionamiento especfico del personal. Entrenamiento: Actividad de ensear las habilidades que una persona necesita para desarrollar su labor en un determinado puesto de trabajo. Tiene carcter eminentemente prctico y se relaciona directamente con la tecnologa, tiles, equipos, etc. que se usan en el puesto de trabajo. Formacin: Actividades de incorporacin de conocimientos generales y especficos necesarios para que el personal pueda desarrollar su labor en un determinado puesto de trabajo. Se hace referencia a la formacin acadmica del personal. 4 REFERENCIAS

Manual de la Calidad del (Nombre del Laboratorio). Captulo: Personal. Norma ISO 17025:1999 tem 5.2. Personal

(NOMBRE DEL LABORATORIO) (Logo DEL LABORATORIO) 5 RESPONSABILIDADES



Actividad DL RC JM PT Externos Identificacin de las necesidades de capacitacin (PR 1.2/8) E D/E P Confeccin del plan de capacitacin (PR 1.2/3 y PR 1.2/4) P D/E I Aprobacin del plan de capacitacin (PR 1.2/3) D Capacitacin de nuevos empleados P E E E Perfeccionamiento tcnico (cursos, talleres) E E E Seguimiento del Plan de capacitacin anual E Completar documentacin de capacitacin (PR 1.2/5, E E PR 1.2 /6) Completar y/o Archivar documentacin y certificados de E capacitacin (PR 1.2/5, PR 1.2/6, PR 1.2/7) Evaluacin de la eficiencia de la capacitacin realizada P D Actualizar el curriculum vitae personal E E E E Asignacin de recursos para llevar a cabo la capacitacin D/E P DL: Direccin del laboratorio RC: Responsable de calidad JM: Jefe del laboratorio de microbiologa PT: Personal tcnico 6 RELACIONES E: Ejecuta D: Decide P: Participa

PR 1.1 perfiles de puesto, autorizacin y calificacin del personal. 7 DESARROLLO

La capacitacin de los empleados es una accin de fundamental importancia para el sistema de calidad. Se asegura la calificacin del personal necesaria para tareas especficas por medio de ttulos profesionales, realizacin de cursos y la experiencia adquirida a travs de la prctica. A su vez se verifica dicha calificacin a travs de los controles realizados peridicamente para el aseguramiento de calidad de los resultados. 7.1 Curriculum vitae: El curriculum vitae de todo el personal del (NOMBRE DEL LABORATORIO) debe actualizarse anualmente. Cada curriculum vitae debe contener la siguiente informacin y caractersticas: formacin acadmica puesto de trabajo responsabilidades que tiene asignadas dicho personal. estar paginado con nmero individual y total de pginas. Contener la fecha de emisin y firmado en la ltima pgina. Tener adjunto copia de los ttulos acadmicos y certificados de asistencia a los cursos mencionados en el mismo.




7.2

La firma al pie de la Ficha tcnica individual del personal del laboratorio de microbiologa PR 1.2/5 se utiliza como registro de firmas.

7.3 PROGRAMA DE PERFECCIONAMIENTO: En el ltimo trimestre de cada ao el jefe del laboratorio de microbiologa junto con el responsable de calidad realizan la encuesta PR 1.2/8 y elaboran un programa de perfeccionamiento para el personal del laboratorio que culmina con un plan de capacitacin al ao siguiente. Antes de la aprobacin del plan de capacitacin se les informa a los empleados en una reunin donde est presente el director y el responsable del laboratorio de microbiologa sobre las capacitaciones planeadas. En esta reunin los empleados pueden exponer sus deseos personales con referencia al perfeccionamiento. El director decide la aprobacin del plan de capacitacin. 7.4 CAPACITACION DE NUEVOS EMPLEADOS: Los empleados nuevos deben cumplir los requisitos mencionados en la descripcin de perfil de puesto. El jefe de laboratorio de microbiologa de modo de contar con personal autorizado para las distintas actividades que se realizan en su rea, elabora el Plan de formacin y entrenamiento del personal del laboratorio de microbiologa PR 1.2/4. En dicho Plan se detallan las actividades de formacin y entrenamiento que debe realizar el personal en cuestin para obtener su autorizacin, los criterios de aceptacin de dicha capacitacin y el periodo durante el cual se completar la misma. Los empleados nuevos tienen a su lado una persona experimentada que los supervisa. Esta persona acompaa al empleado nuevo durante todo el perodo de adiestramiento y eventualmente determina otras necesidades de capacitacin. Una vez concluida, las actividades planificadas de formacin y entrenamiento, el jefe de laboratorio de microbiologa documenta en el registro Plan de formacin y entrenamiento del personal del laboratorio de microbiologa PR 1.2/4 la fecha en la cual el empleado fue aceptado como competente para esa actividad y la referencia donde se localiza la evidencia objetiva. 7.5 EVALUACIN DE LA CAPACITACIN RECIBIDA

Durante la Revisin del Sistema de la Calidad, que se realiza segn el procedimiento PR Auditoras Internas y Revisin del Sistema, se analiza la capacitacin adquirida frente a los objetivos que haban sido establecidos. En el caso que no se hayan cumplido se toman acciones de acuerdo a lo indicado en el procedimiento Reclamos, sugerencias, no conformidades y acciones correctivas. 8 ARCHIVO Y REGISTROS

Los registros PR 1.2 /3 Plan anual de capacitacin del laboratorio de microbiologa, PR 1.2/4 Plan de formacin y entrenamiento del personal del laboratorio de microbiologa se archivan en el laboratorio de microbiologa, el resto de las planillas se ocupar de archivarlas el sector de calidad.




9

APENDICES Y ANEXOS N Codificacin Ttulos ANEXOS 1 PR 1.2/1 Hoja de modificaciones 2 PR 1.2/2 Lista de distribucin del procedimiento 3 PR 1.2 /3 Plan anual de capacitacin del laboratorio de microbiologa 4 PR 1.2/4 Plan de formacin y entrenamiento del personal del laboratorio de microbiologa 5 PR 1.2/5 Ficha tcnica individual del personal del laboratorio de microbiologa 6 PR 1.2/6 Asistencia a cursos y/o entrenamiento personal del laboratorio de microbiologa 7 PR 1.2/7 Actualizacin del curriculum vitae del laboratorio de microbiologa 8 PR 1.2/8 Identificacin de necesidades de capacitacin




ANEXO 1: HOJA DE MODIFICACIONES

VERSIN N: 001 MODIFICACIONES:

HOJA N:


FIRMA: HOJA N:


FIRMA: HOJA N:


FIRMA: HOJA N:

FECHA:

FIRMA:





N COPIA

SECTOR/ AREA

RECUPERA VERSIN N

FECHA

FIRMA

ACLARACION




ANEXO 3: PR 1.2/3 PLAN ANUAL DE CAPACITACIN DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Pg.____ de ____ Nombre del personalAREA DE CAPACITACION

(NOMBRE DEL LABORATORIO) (Logo DEL LABORATORIO) ANEXO 4:


Cdigo: PR 1.2 Revisin: 1 Fecha: 23 de Agosto de 2005 PAGINA : 9 de 14 PR 1.2/4Pg.____ de ____

PLAN DE FORMACIN Y ENTRENAMIENTO DEL PERSONAL DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Nombre y apellido del empleado: Puesto del empleado:

Actividades de capacitacin a realizar

Criterio de aceptacin de la capacitacin

Periodo previsto para realizar la capacitacin

Fecha inicio capacitacin

Fecha aceptado como competente

Firma responsable de capacitacin

Firma Firma del Responsable capacitado del Laboratorio

Referencia a localizacin de evidencia objetiva

Observaciones



Cdigo: PR 1.2 Revisin: 1 Fecha: 23 de Agosto de 2005 PAGINA : 10 de 14 PR 1.2/5Pg.____ de ____

FICHA TECNICA INDIVIDUAL DEL PERSONAL DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Nombre y Apellido Funcin Formacin recibida

Ttulos obtenidos

Actividades realizadas

Firma del personal

Fecha

(NOMBRE DEL LABORATORIO) (Logo DEL LABORATORIO) ANEXO 6


Cdigo: PR 1.2 Revisin: 1 Fecha: 23 de Agosto de 2005 PAGINA : 11 de 14 PR 1.2/6

Planilla de asistencia a cursos y/o entrenamiento personal del laboratorio de microbiologa Nombre y Apellido Curso realizado Duracin Lugar de realizacin del curso Dictante Fecha Observaciones



Cdigo: PR 1.2 Revisin: 1 Fecha: 23 de Agosto de 2005 PAGINA : 12 de 14 PR 1.2/7 Pg. ___de___

PLANILLA DE ACTUALIZACION DEL CURRICULUM VITAE DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIANOMBRE DEL PERSONAL Fecha Firma(1) Fecha Firma(1) Fecha Firma(1) Fecha Firma(1)

(1) Corresponde a la firma del responsable de llevar el registro de actualizacin del Curriculum vitae del personal.



Cdigo: PR 1.2 Revisin: 1 Fecha: 23 de Agosto de 2005 PAGINA : 13 de 14 PR 1.2/8

IDENTIFICACIN DE NECESIDADES DE CAPACITACIN ENCUESTA A. DATOS PERSONALES: LABORATORIO: FUNCIN: Profesional Otros Tcnico Aclaracin: Administrativo N Encuesta

A1. TAREAS QUE DESARROLLA EN LA ACTUALIDAD:

A2. INDIQUE LAS LTIMAS ACTIVIDADES DE CAPACITACINTEMA INSTITUCION EVALUACION GRADO DE INTERES CONOCIMIENTOS ADQUIRIDOS MATERIAL RECIBIDO DURACION UTILIDAD EN SU TAREA CALIFICACION DEL DOCENTE

INSTITUCIN: Direccin de Laboratorios, Organismo Central, Organismos Nacionales, Internacionales o Privados. EVALUACION: Curso con evaluacin del participante: GRADO DE INTERES: A: Alto. R: Regular. Si / No B: Bajo.

CONOCIMIENTOS ADQUIRIDOS, MATERIAL RECIBIDO, UTILIDAD EN SU TAREA, CALIFICACIN DEL DOCENTE: MB: Muy Bueno. B: Bueno. R: Regular. M: Malo. E: Excesiva.

DURACION: A: Adecuada. I: Insuficiente.

A3. INTERS POR PARTICIPAR EN ACTIVIDADES DE CAPACITACIN: Significativo Normal Escaso Ninguno




B. NECESIDADES DE CAPACITACIN (Indique el/ los Temas que considera) B.1. De su rea de trabajo:

B.1.1. Imprescindibles (para perfeccionar su funcin):

B.1.2. Otros de su inters:

B.2 De otras reas del Organismo y/ u otros Organismos: B.2.1. Imprescindibles (para perfeccionar su funcin):

B.2.2. Otros de su inters:

C. METODOLOGA: TCNICA DE ENSEANZA PREFERIDA CURSO TERICO TALLER OTROS SEMINARIO PARTICIPATIVO ADIESTRAMIENTO EN TERRENO Aclarar:

LUGAR Y FECHA

CAPTULO 2 INSTALACIONES Y CONDICIONES AMBIENTALESRequisitos de la Norma 17025ndice:CAPTULO 2 INSTALACIONES Y CONDICIONES AMBIENTALES .............................................................. 1 2.1 LOCALES ...................................................................................................................................................... 1 2.2 CONDICIONES AMBIENTALES ...................................................................................................................... 2 ANEXO A.2. EJEMPLO DE DISTRIBUCIN DE REAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA. ................................. 6

2.1 2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.1.4

Locales Las instalaciones del laboratorio de ensayo (incluye fuente de energa, luz y condiciones ambientales) deben ser capaces de facilitar la realizacin correcta de los ensayos. Los requisitos tcnicos necesarios para que las instalaciones no afecten los resultados de los ensayos deben estar documentados. Debe haber una efectiva separacin entre reas vecinas en las que se realicen actividades incompatibles. Se deben tomar medidas para prevenir la contaminacin cruzada. La ubicacin, el diseo y la distribucin de las diferentes reas que integran el laboratorio deben minimizar el riesgo de contaminacin de las muestras y los cultivos.

En la prctica esto se puede lograr: Separando las actividades en tiempo y espacio. Mediante la construccin del laboratorio segn un diseo sin camino de regreso se puede obtener una reduccin significativa del riesgo de contaminacin cruzada. Llevando a cabo los procedimientos de una manera secuencial, usando las precauciones apropiadas para asegurar la integridad de la muestra y del ensayo. Por ejemplo uso de recipientes hermticamente cerrados. 2.1.5 Es recomendable disponer de reas auxiliares (Ejemplo: oficina, sector de archivos, guardarropas) y sectores o reas de ensayo propiamente dicho, en donde se llevan a cabo las actividades especficas para la realizacin del ensayo. El espacio destinado a depsito de materiales, equipos, muestras debe ser suficiente y apropiado para su uso. No es aceptable que el laboratorio de microbiologa ocupe una sola sala polivalente. El rea analtica debe estar separada de la de preparacin de medios de cultivo y lavado de material. Es conveniente separar las siguientes reas: 1) zona de recepcin y almacenamiento de muestras. 2) preparacin, muestreo y pesada de muestras. 3) rea de siembra 4) rea de apoyo: donde se realiza la preparacin de los medios y reactivos, esterilizacin, descontaminacin, lavado de material. El rea de lavado, luego de descontaminar la muestra, puede ser compartida con otro laboratorio. En este caso se debe tener la precaucin que no entre en contacto con alguna sustancia que pueda interferir con el crecimiento microbiano. Captulo 2: Instalaciones y condiciones ambientales Autor: Alicia Cuesta. Consultora Internacional de la FAO. 1

El laboratorio puede tomar una serie de medidas de modo de disminuir el riesgo de contaminacin y facilitar la limpieza y desinfeccin de las diferentes reas: Medidas relativas al diseo: Las reas del laboratorio deben ser suficientemente espaciosas El espacio necesario estar de acuerdo con el volumen de muestras analizadas y la organizacin interna del laboratorio Las uniones entresuelo, paredes y techos deben ser cncavas Las reas de trabajo deben estar ventiladas apropiadamente y a una temperatura adecuada. Puede hacerse por ventilacin natural o forzada, o mediante el uso de acondicionadores de aire. En este ltimo caso, los filtros deben revisarse, mantenerse y reemplazarse peridicamente, acorde al tipo de trabajo que se realiza. Evitar uso de cortinas y/o En caso de uso incluirlas en el plan de limpieza persiana internas

Medidas relativas a los materiales y otras: Las paredes, techos suelos y superficies de trabajo del laboratorio deben ser lisas. Las superficies de madera de las instalaciones y accesorios deben estar protegidas y selladas Evitar maderas rugosas y sin revestir Minimizar la apertura de puertas y ventanas durante la realizacin del ensayo Contar para el lavado de manos del personal con canillas no manuales, el jabn desinfectante debe estar dispuesto en dispensadores y toallas descartables para el secado. Ausencia de documentos obsoletos, objetos o mobiliario innecesario en el rea del laboratorio Los armario estanteras, equipos deben estar colocados de forma de evitar acumulacin de polvo. Ejemplo armarios hasta el techo. 2.1.6 Se debe controlar el acceso y el uso de las reas que afecta la calidad de los ensayos. El acceso al laboratorio debe estar restringido slo al personal tcnico o a personas autorizadas. Condiciones Ambientales El laboratorio debe asegurarse que las condiciones ambientales, bajo las cuales se realizan los ensayos microbiolgicos, no invaliden los resultados de ensayo ni comprometan la calidad requerida de los resultados. 2

2.2 2.2.1

Captulo 2: Instalaciones y condiciones ambientales Autor: Alicia Cuesta. Consultora Internacional de la FAO.

2.2.2 2.2.3

Cuando los muestreos o ensayos se realicen fuera de la instalacin permanente del laboratorio se deben tomar precauciones especiales. Los requisitos tcnicos necesarios para que las condiciones ambientales no afecten los resultados de los ensayos deben estar documentados.

De modo de elaborar requisitos tcnicos y las medidas relativas al tem 2.2.4 tener en cuenta los siguientes puntos: Condiciones ambientales Efecto posible sobre el ensayo Lugar a monitorear crtico (o Etapa del ensayo que puede afecta) Sala de siembra y Sala de preparacin de muestras Sala de siembra y Sala de preparacin de muestras.

Deficiente esterilidad biolgica (nmero aumentado de microorganismos o presencia de determinados Contaminacin de las muestras y cultivos tipos de microorganismos en suspensin en el aire o en las superficies respecto al criterio establecido) Mayor polvo en suspensin en el aire Contaminacin de las muestras y cultivos

-Variacin de las condiciones de ensayo -Prdida de viabilidad cepas de Suministro elctrico interrumpido o referencia por descongelacin. deficiente -Conservacin inadecuada de la muestra, reactivos y medios de cultivo. Contaminacin de las muestras y cultivos por aumento de la Humedad ambiente alta proliferacin de mohos Aumento del crecimiento microbiano dependiendo de la temperatura y del Temperatura alta medio ambiente Interfiere en la pesada de la muestra, Niveles de ruido o vibracin polvos deshidratados para preparacin excesivos de medios de cultivos o reactivos

Funcionamiento de estufas, congeladores y heladeras Sala de siembra y Sala de preparacin de muestras Sala de siembra y Sala de preparacin de muestras Sala de preparacin de muestras

2.2.4

El laboratorio deber establecer un programa documentado de limpieza y desinfeccin que tenga en cuenta los resultados de vigilancia de las condiciones ambientales y la posibilidad de contaminacin cruzada.

2.2.4.1 PLAN DE LIMPIEZA Y DESINFECCION: El laboratorio debe contar con un plan de limpieza y desinfeccin. Este debe documentarse en cuanto al procedimiento y monitorearse de modo de demostrar su efectividad. Ver PR 2.1 Limpieza y desinfeccin de locales y IN 2.1 Monitoreo ambiental. Los registros de las operaciones de limpieza permiten corroborar el cumplimiento del plan establecido. PR 2.1/3 Registro general de limpieza y/o desinfeccin del Laboratorio de microbiologa. Captulo 2: Instalaciones y condiciones ambientales 3 Autor: Alicia Cuesta. Consultora Internacional de la FAO.

2.2.4.2 PLAN DE HIGIENE: El plan de higiene debe estar junto con la documentacin del laboratorio, en un procedimiento o en un instructivo. Plan de higiene: Los procedimientos operativos empleados durante la realizacin del trabajo en el laboratorio. Tiene como principal objetivo evitar la contaminacin en todas las etapas del ensayo lo que implicara obtencin de resultados errneos, la infeccin del personal, etc. 2.2.5 El laboratorio debe monitorear, controlar y registrar las condiciones ambientales de modo que se cumpla el punto 2.2.1, de acuerdo al documento modelo IN 2.1 Monitoreo ambiental. 2.2.5.1 MONITOREO AMBIENTAL: La calidad microbiolgica del aire y las superficies del laboratorio en microbiologa es un indicador de la efectividad de las tareas realizadas segn el plan de limpieza, desinfeccin y mantenimiento y plan de higiene. El procedimiento de monitoreo ambiental consta de: una toma de muestra, lugares de toma de muestra, lmites de tolerancia o criterios de aceptacin o rechazo, frecuencia de monitoreo y acciones correctivas a tomar en caso de desvos de los lmites establecidos. El programa de muestreo para monitoreo ambiental incluye: la determinacin cuantitativa de microorganismos presentes en el ambiente (recuento total o recuento de determinados tipos de microorganismos como por ejemplo hongos) y la determinacin cualitativa de algunos patgenos y/o indicadores dependiendo de los ensayos que realiza el laboratorio (Ejemplo: Enterobacterias, Coliformes, Salmonella spp, Listeria monocytogenes, Listeria spp, Staphylococcus aureus). Si el laboratorio efecta ensayos de deteccin de Listeria monocytogenes y Salmonella spp, estos dos microorganismos son los que se deben monitorear en el ambiente. Esto se aplica tanto a control ambiental del rea analtica del laboratorio como para la/s campana/s de flujo laminar. El laboratorio debe definir los recuentos mximos de microorganismos que considera aceptable y disponer de un procedimiento documentado en el que se describan las acciones a tomar para corregir las situaciones en que se sobrepasen esos lmites. La frecuencia con la que se realiza el monitoreo ambiental la debe establecer el laboratorio teniendo en cuenta la frecuencia de uso de las reas y los resultados previos.


4

Mtodos para control de superficies: Tipo de superficie en la que se puede usar Delimitada Irregular Plana Plana

Mtodo Hisopado Esponjatrapeado Caja de contacto Petrifilm

recoleccin Hisopo estril Esponja embebida en medio especfico Contacto, presin y tiempo standard Contacto, presin y tiempo standard

siembra Siembra directa Siembra de volumen conocido Incubacin directa Incubacin directa

dificultades Gesto codificado Protocolo estricto y guante estril Influencia del soporte Influencia del soporte

Mtodos para control del aire: Documentos de consulta: Normas IRAM 14071-1:2002 Control de carga microbiana en el aire. Parte 1: Mtodo pasivo, por sedimentacin. Normas IRAM 14071-2:2002 Control de carga microbiana en el aire. Parte 2: Mtodo activo, por impacto. 2.2.6 Se debe interrumpir los ensayos cuando las condiciones ambientales comprometan los resultados de ensayo.


5

Anexo A.2. Ejemplo de distribucin de reas en el laboratorio de Microbiologa. Sala de siembra

10.2

1 2 Sala de preparacin de muestrasSala de preparacin de material

Droguero

Oficina Area de acceso restringido

10Sala de lavado

8

9 7

5 4

6

3

5) Balanza 6) Campana de flujo laminar o cabina de seguridad 7) Microscopio 8) Estufa de cultivo 9) Heladera con congelador 10) Congelador para mantenimiento de cepas de referencia a -70 Celsius. 11) Estufa de esterilizacin 12) Autoclave de descontaminacin 13) Autoclave de esterilizacin 14) Estufa de secado

NOTA: lo ideal es que los laboratorios dispongan de autoclave especfico para descontaminacin. No obstante, se podr utilizar un nico autoclave siempre que se tomen las debidas precauciones para separar las cargas de descontaminacin y esterilizacin.


6


INSTRUCTIVO Monitoreo ambiental

Cdigo: IN 2.1 Revisin: 1 Fecha: 23 de Agosto de 2005 PAGINA : 1 de 8



REVISION N : 001






PROCEDIMIENTO Monitoreo ambiental


1

OBJETIVO

Realizar el monitoreo de la calidad microbiolgica del aire y de las superficies en el laboratorio de Microbiologa. 2 ALCANCE

Se aplica tanto al control ambiental del rea analtica como a la/s campana/s de flujo laminar pertenecientes al laboratorio de Microbiologa. 3 DEFINICIONES Y ABREVIATURAS

No aplicable 4 REFERENCIAS

-Manual de la Calidad del (Nombre del Laboratorio). Captulo: Locales y Medio Ambiente. -Norma ISO 17025:1999 tem 5.3. Instalaciones y condiciones ambientales. -Norma ISO 7218:1996(E). Microbiologa de alimentos reglas generales para los ensayos microbiolgicos. -Normas IRAM 14071-1:2002 Control de carga microbiana en el aire. Parte 1: Mtodo pasivo, por sedimentacin. 5 RESPONSABILIDADES RC JM PT I P E I D/E I P D/E D/E P P

Actividad Realizar Control ambiental del aire y de superficies Verificar cumplimiento de las tareas de monitoreo ambiental del aire y de superficies Controlar que los resultados obtenidos en el control ambiental del aire y de superficies sean conformes Tomar acciones correctivas en caso que los resultados obtenidos en el control ambiental del aire y de superficies no cumplan con los criterios de aceptacin. RC: Responsable de calidad JM: Jefe del laboratorio de microbiologa PT: Personal tcnico

D: Decide P: Participa E: Ejecuta I: Recibe informacin

6

RELACIONES

Captulo 2: Instalaciones y Condiciones ambientales. Requisitos de la norma 17025.




7

DESARROLLO

Se realizan los controles ambientales segn 7.1 y 7.2. Los resultados obtenidos se registran en IN 2.1/3 Registro de monitoreo ambiental del aire y de superficies de trabajo del laboratorio de microbiologa. 7.1 MONITOREO DE LA CALIDAD MICROBIOLGICA DEL AIRE POR EXPOSICIN DE PLACAS: Toma de muestra: durante un tiempo estipulado, se exponen placas de Petri (o sea se abren las placas) con medio de cultivo no selectivo, en el rea de trabajo y durante el proceso de siembra.

7.1.1

7.1.2 Tiempo y temperatura de incubacin: Luego de la exposicin al aire, las placas se cierran e incuban durante 72 horas a 30 C. * 7.1.3 7.1.4 7.1.5 Medio de cultivo usado: PCA. Frecuencia de realizacin de los controles: mensual.* reas a monitorear o zonas de toma de la muestra: sala de siembra y sala de preparacin de muestras. Es necesario que las placas sean colocadas en el mismo lugar, cada vez que se efecta el control, de modo de poder analizar tendencias. 7.1.6 Criterio de conformidad: para una exposicin durante 15 minutos de las placas se permite hasta 15 colonias.* Los resultados se expresan como unidades de colonias (ufc) por placa. * Los valores de criterio de conformidad, tiempo y temperatura de incubacin y frecuencia de monitoreo que figuran en este documento se presentan a ttulo orientativo. 7.2 MONITOREO DE LA CALIDAD MICROBIOLGICA DE LAS SUPERFICIES DE TRABAJO: Se puede emplear dos metodologas tal como se indica a continuacin: Mediante esta tcnica se realizar la determinacin cuantitativa de microorganismos totales presentes en el ambiente y la determinacin cualitativa de algunos patgenos y/o indicadores. Las esponjas esterilizadas se preparan dentro de una bolsa estril. Se emplea la esponja para monitorear superficies grandes. Los hisopos estriles son de eleccin para esquinas, superficies pequeas, donde se pueden alojar los microorganismos. 7.2.1.1 Toma de muestra: por frotacin con esponja o hisopos de un rea determinada de la superficie de trabajo a monitorear. Antes de usar, la esponja o hisopos se humedece en caldo nutritivo o agua peptona 0.1%. Se puede usar un marco estril para delimitar el rea.

7.2.1 Por frotacin con esponja o hisopos:




Luego de la frotacin se introduce la esponja o hisopos en un determinado volumen de diluyente. Se siembra en el medio de cultivo 1 ml del diluyente que estuvo en contacto con la esponja o hisopos. 7.2.1.2 Medio de cultivo usado: Determinacin cuantitativa de microorganismos totales en PCA Determinacin cualitativa de algunos patgenos y/o indicadores: en medio selectivo para el microorganismo target. 7.2.1.3 Tiempo y temperatura de incubacin: Determinacin cuantitativa de microorganismos totales: 48 horas a 35 C. * Determinacin cualitativa de algunos patgenos y/o indicadores: depende del microorganismo investigado. 7.2.1.4 Frecuencia de realizacin de los controles: trimestral* 7.2.1.5 reas a monitorear o lugares de toma de muestra: sala de siembra y sala de preparacin de muestras. 7.2.1.6 Criterio de conformidad: Determinacin cuantitativa: no debe superar las 10 ufc/cm2.* Determinacin cualitativa: Ausencia del microorganismo target. *Los valores de criterio de conformidad, tiempo y temperatura de incubacin y frecuencia de monitoreo que figuran en este documento se presentan a ttulo orientativo. 7.2.2 Por contacto directo con la superficie de trabajo:

Slo sirve para muestrear superficies planas. 7.2.2.1 Toma de muestra: por contacto directo con la superficie de trabajo con placa de Petri con medio de cultivo no selectivo o equivalente.

7.2.2.2 Medio de cultivo usado: PCA (microorganismos totales) 7.2.2.3 Tiempo y temperatura de incubacin: luego del muestreo, las placas se cierran e incuban durante 48 horas a 35 C. *. 7.2.2.4 Frecuencia de realizacin de los controles: trimestrales* 7.2.2.5 reas a monitorear o lugares de toma de muestra: sala de siembra y sala de preparacin de muestras. 7.2.2.6 Criterio de conformidad: 50 ufc/placa* *Los valores de criterio de conformidad, tiempo y temperatura de incubacin y frecuencia de monitoreo que figuran en este documento se presentan a ttulo orientativo.

(NOMBRE DEL LABORATORIO) (Logo DEL LABORATORIO) 7.3



Acciones correctivas a tomar en caso de desvos de los lmites establecidos: si un control excede los lmites de aceptacin se proceder a la limpieza y desinfeccin de dicha rea segn PR 2.1 limpieza y desinfeccin de locales y se volver a chequear hasta que los resultados obtenidos vuelvan a cumplir con los criterios de conformidad.

8

ARCHIVO Y REGISTROS

Los registros de monitoreos ambientales se conservan en el laboratorio de Microbiologa. 9 APENDICES Y ANEXOS N Codificacin Ttulo ANEXOS 1 IN 2.1/1 Hoja de modificaciones 2 IN 2.1/2 Lista de distribucin del procedimiento 3 IN 2.1/3 Registro de monitoreo ambiental del aire y de superficies de trabajo del laboratorio de microbiologa






HOJA N:


FIRMA: HOJA N:


FIRMA: HOJA N:


FIRMA: HOJA N:

FECHA:

FIRMA:





N COPIA

SECTOR/ AREA

RECUPERA VERSIN N

FECHA

FIRMA

ACLARACION



Cdigo: IN 2.1 Revisin: 1 Fecha: 23 de Agosto de 2005 PAGINA : 8 de 8 IN 2.1/3

REGISTRO DE MONITOREO AMBIENTAL DEL AIRE Y DE SUPERFICIES DE TRABAJO DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGAPg.____ de ____

Fecha

Sector del laboratorio monitoreado

Medio de cultivo usado

Metodologa empleada (exposicin de placas, frotacin con esponja hisopado o contacto directo de superficies)

Resultado (unidades)

Conforme (SI/NO)

Personal tcnico responsable

Criterio de conformidad determinacin cuantitativa de microorganismos totales presentes en el aire y superficies: exposicin de placas ( ufc/placa): frotacin con esponja o hisopado de superficies (ufc/cm2): contacto directo de superficies (ufc/placa):

Criterio de conformidad determinacin cualitativa de patgenos y/o indicadores: frotacin con esponja o hisopado de superficies: Ausencia


PROCEDIMIENTO Limpieza y desinfeccin de locales




REVISION N : 001





(NOMBRE DEL LABORATORIO) (Logo DEL LABORATORIO) 1 OBJETIVO



Organizar las tareas de limpieza y desinfeccin del laboratorio de microbiologa de (Nombre del Laboratorio), fijar la frecuencia de realizacin de las mismas, para que los locales estn en condiciones adecuadas para realizar los ensayos y permitir al personal que trabaje en forma cmoda. 2 ALCANCE

Este procedimiento se aplica a todas las instalaciones que forman parte del laboratorio de microbiologa. 3 DEFINICIONES Y ABREVIATURAS

D: frecuencia diaria. S: frecuencia semanal. M: frecuencia mensual. T: frecuencia trimestral. 4 REFERENCIAS

Manual de la Calidad del (Nombre del Laboratorio). Captulo: Locales y Medio Ambiente. Norma ISO 17025:1999 tem 5.3. Instalaciones y condiciones ambientales 5 RESPONSABILIDADES

Actividad DL RC JM PT Externos Control servicios empresa de limpieza contratada E Verificar cumplimiento de las tareas de limpieza que realiza D/E el laboratorio de microbiologa Controlar que se realicen las tareas de limpieza E Verificar que se mantenga el orden general del laboratorio E Realizar la limpieza y/o desinfeccin de mesadas. E Autoriza, interrumpe o solicita que se rehaga la tarea de D/E limpieza y/o desinfeccin del laboratorio Realizar la limpieza y/o desinfeccin de los locales: pisos, E paredes, ventanas, muebles. Mantenimiento del orden general del laboratorio de E microbiologa DL: Direccin del laboratorio RC: Responsable de calidad JM: Jefe del laboratorio de microbiologa PT: Personal tcnico Externos: Empresa contratada. 6 RELACIONES E: Ejecuta D: Decide P: Participa

Captulo 2: Condiciones ambientales. Requisitos de la norma 17025.

(NOMBRE DEL LABORATORIO) (Logo DEL LABORATORIO) 7 DESARROLLO



A continuacin se detallan las superficies a limpiar y/o desinfectar, el nivel de limpieza requerido (trapeo hmedo, trapeo mojado, etc.), la frecuencia de la limpieza y el personal que realiza la limpieza. Las tareas realizadas quedan registradas en la PR 2.1/3 Registro general de limpieza y/o desinfeccin del laboratorio de microbiologa Las superficies del laboratorio se deben limpiar con regularidad y en horario prefijado para no interferir con las tareas propias del laboratorio. No se permite la realizacin de tareas de limpieza y/o desinfeccin en la misma rea y paralelamente a la siembra y/o preparacin de las muestras. La limpieza se realizar con un desinfectante (ejemplo: lavandina 10%) mediante el uso de un trapo embebido. El personal encargado de la limpieza debe estar instruido en cuanto a las condiciones que debe realizar las tareas, uso adecuado de los desinfectantes, posibles peligros que puede acarrear la negligencia. En las siguientes secciones se desarrollan las microbiologa. 7.1 PISOS: indicaciones a aplicar al laboratorio de

Nota: No barrer el laboratorio para no levantar polvo. Personal Frecuencia que realiza la tarea D D Personal de limpieza externo contratado

Tarea Trapeado

Descripcin de la tarea

Pasar un trapo escurrido, previamente embebido en detergente diluido en agua pasar un trapo escurrido, previamente Desinfeccin embebido en lavandina diluida al 10% u otro desinfectante 7.2 PAREDES Tarea Trapeado Descripcin de la tarea Pasar un trapo escurrido, previamente embebido en lavandina diluida al 10% u otro desinfectante

Frecuencia T

Personal que realiza la tarea Personal de limpieza externo contratado

Nota: se incluyen las caeras de gas, aire y agua.




7.3

TECHOS Tarea Descripcin de la tarea Pasar un trapo escurrido, previamente embebido en lavandina diluida al 10% u otro desinfectante Frecuencia Personal que realiza la tarea Personal de limpieza externo contratado

Trapeado

T

7.4

VIDRIOS Y VENTANAS

Se aplica a todas los vidrios de ventanas interiores y exteriores y tabiques de vidrio. Tarea Lavado Limpieza de la zona del picaporte y cerradura 7.5 Descripcin de la tarea Con esponja hmeda con detergente y secado con secador Con spray y franela Frecuencia M Personal de limpieza externo contratado Personal que realiza la tarea

S

CESTOS Y RECIPIENTES PARA RESIDUOS NO CONTAMINADOS Tarea Descripcin de la tarea -----------------------------------Frecuencia D Personal que realiza la tarea Personal de limpieza externo contratado

Vaciamiento

7.6

MESAS Y SILLAS Tarea Descripcin de la tarea Pasar un trapo escurrido, previamente embebido en detergente diluido en agua Frecuencia S Personal que realiza la tarea Personal de limpieza externo contratado

Trapeado 7.7 ESTANTES

Se aplica a los estantes en general. Tarea Trapeado Descripcin de la tarea Con franela Frecuencia S Personal que realiza la tarea Personal de limpieza externo contratado




7.8

MESADAS: Tarea Descripcin de la tarea Frecuencia Personal que realiza la tarea Personal tcnico del laboratorio.

Limpieza y desinfeccin

Rociar las mesadas con alcohol 70% v/v u otro desinfectante, Antes y despus del uso distribuir bien con toalla de papel

Nota: las mesadas deben quedar libres al finalizar las tareas diarias. 7.9 DROGUERO Tarea Pisos: barrido Descripcin de la tarea Con escobilln Frecuencia S M Personal que realiza la tarea Personal de limpieza externo contratado Personal de limpieza externo contratado Personal de limpieza externo contratado Personal de limpieza externo contratado

Estantes: vaciamiento y Con franela lustrado Frascos: limpieza Con trapo seco absorbe polvo externa Vidrios: lavado Con esponja hmeda con y secado detergente y secado con secador

M M

7.10 DESINSECTIZACION El laboratorio contrata un servicio externo especialista en desinsectizacin. 7.11 PRECAUCIONES: Los productos de limpieza permitidos son: Agua Detergente sin lavandina Spray para vidrios Desinfectantes En el laboratorio hay un lugar indicado para guardar los elementos y productos de limpieza. 7.12 ARCHIVO Y REGISTROS Los registros se conservan en el laboratorio de microbiologa.

(NOMBRE DEL LABORATORIO) (Logo DEL LABORATORIO) 8 APENDICES Y ANEXOS N ANEXOS 1 2 3 Codificacin PR2.1/1 PR2.1/2 PR 2.1/3



Ttulo Hoja de modificaciones Lista de distribucin del procedimiento Registro general de limpieza y/o desinfeccin del Laboratorio de microbiologa

N Codificacin APNDICE 1 --Plano del laboratorio

Ttulo






HOJA N:


FIRMA: HOJA N:


FIRMA: HOJA N:


FIRMA: HOJA N:

FECHA:

FIRMA:





N COPIA

SECTOR/ AREA

RECUPERA VERSIN N

FECHA

FIRMA

ACLARACION




PR 2.1/3 REGISTRO GENERAL DE LIMPIEZA Y/O DESINFECCIN DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGAPg.____ de ____

Fecha

Personal interviniente en la limpieza

Sector, zona o rea de trabajo del laboratorio

Observaciones

Firma del Personal que realiz la limpieza

(NOMBRE DEL LABORATORIO) (Logo DEL LABORATORIO) APENDICE 1: Plano del laboratorio



10.2

Sala de siembra

1 2 Sala de preparacin de muestrasSala de preparacin de material

8 10Sala de lavado

Droguero

Oficina Area de acceso restringido

9 7

5 4

6

3

1) Balanza 2) Campana de flujo laminar o cabina de seguridad 3) Microscopio 4) Estufa de cultivo 5) Heladera con congelador 6) Congelador para mantenimiento de cepas de referencia a -70 Celsius. 7) Estufa de esterilizacin 8) Autoclave de descontaminacin 9) Autoclave de esterilizacin 10) Estufa de secado


PROCEDIMIENTO Plan de higiene


NDICE 1 2 3 4 5 6 7 8 9 OBJETIVO ALCANCE DEFINICIONES Y ABREVIATURAS REFERENCIAS RESPONSABILIDADES RELACIONES DESARROLLO ARCHIVO Y REGISTROS APENDICES Y ANEXOS


REVISION N : 001








1

OBJETIVO

En este procedimiento se describe y define la metodologa que el laboratorio emplear para tomar precauciones de higiene durante los ensayos microbiolgicos, con el objetivo de evitar la contaminacin de las muestras, de los medios de cultivo y adems evitar los riesgos de infeccin del personal del laboratorio. 2 ALCANCE

Se aplica al laboratorio de microbiologa. 3 DEFINICIONES Y ABREVIATURAS

No aplicable 4 REFERENCIAS

-Manual de la Calidad del (Nombre del Laboratorio). Captulo: Locales y Medio Ambiente. -Norma ISO 17025:1999 tem 5.3. Instalaciones y condiciones ambientales. -Norma ISO 7218:1996(E). Microbiologa de alimentos reglas generales para los ensayos microbiolgicos. 5 RESPONSABILIDADES DL RC JM PT I P D/E P D/E P E E: Ejecuta D: Decide P: Participa I: recibe informacin

Actividad Confeccin del plan de higiene Supervisin de tareas con uso de precauciones Realizacin de tareas usando precauciones DL: Direccin del laboratorio RC: Responsable de calidad JM: Jefe del laboratorio de microbiologa PT: Personal tcnico 6 RELACIONES

Captulo 2: Condiciones ambientales. Requisitos de la norma 17025.

(NOMBRE DEL LABORATORIO) (Logo DEL LABORATORIO) 7 DESARROLLO



El laboratorio debe tomar las siguientes precauciones para trabajar en condiciones aspticas: 7.1 Relativo al trabajo propiamente dicho: Asegurarse que el rea de trabajo est limpia y que no haya corrientes de aire. Limpiar la superficie de trabajo con un desinfectante adecuado, antes y despus del trabajo. Durante la siembra y manipuleo estril de muestras no hablar y evitar toser. Abrir los tubos de ensayo y botellas cerca de la llama. Trabajar tan rpido como sea posible, evitando movimientos innecesarios. Asegurarse de cerrar adecuadamente la bolsa que contenga pipetas, Placas de Petri, etc. despus de tomar las unidades necesarias, en el caso que no se utilicen todas durante una operacin. Esterilizar las ansas metlicas en la llama antes y despus de usarlas. Secar con cuidado el ansa hmeda sobre la llama, antes de la esterilizacin, para evitar la proyeccin del material. Despus de utilizar las pipetas, esptulas, etc., colocarlas en recipientes con desinfectante o en bolsas plsticas antes de lavarlas y/o esterilizarlas. Colocar las placas de Petri, medios de cultivo, pipetas y todo otro material que pueda contener microorganismos en recipientes especiales. Depositar todo el material plstico que no vaya a ser reutilizado en bolsas plsticas, para ser incinerado o desinfectado. Sacar de su lugar los libros, diarios, documentos de administracin del laboratorio, media, reactiva, etc. solamente mientras sea necesario. Limpiar inmediatamente cualquier derrame o salpicadura de medio de cultivo o producto contaminado cubriendo con una toalla de papel impregnada con alcohol 70% (v/v) o cualquier otro desinfectante, dejar actuar el tiempo que sea necesario y despus limpiar y desinfectar el rea de trabajo antes de continuar la tarea. En el momento en que se manipula la muestra, las placas o caldos con crecimiento microbiano, se debe mantener lejos de la boca, nariz, ojos y cara. El manipuleo del material patgeno o txico requiere adems otras precauciones, por ejemplo: trabajar en reas cerradas o bajo campanas de flujo laminar, especialmente cuando se abren las cajas de Petri. Usar pipetas de seguridad. Una causa importante de contaminacin o infeccin del medio ambiente son los aerosoles. Por lo tanto, se debe evitar su formacin. Los aerosoles se pueden formar al abrir las cajas de Petri, los tubos, las botellas o los frascos, al usar mezcladores, jeringas, centrfugas, etc. y cuando se esterilizan ansas hmedas. Tambin se pueden esparcir microorganismos en el aire al abrir ampollas que contengan cultivos liofilizados. Relativo al rea de trabajo: Utilizar vestimenta de uso exclusivo en el laboratorio, guardapolvo de color claro, limpio y en buenas condiciones, no debe ser usado fuera del rea de trabajo del laboratorio. Dejar en zona de oficinas o externa al laboratorio los abrigos. portafolios, etc. En el rea del laboratorio no comer, beber, fumar. No colocar alimentos personales en las heladeras destinadas al almacenamiento de muestras para ser analizadas o medios de cultivo.

7.2




7.3 Relativo a la Higiene del personal tcnico: Antes y al finalizar la labor en el laboratorio, el personal tcnico debe lavarse las manos con un producto adecuado (jabn desinfectante). El personal debe tener uas cortas y limpias, el pelo debe estar recogido, no tener anillos ni pulseras. Uso de barbijo si es necesario. Llevar delantales limpios sin roturas y agujeros. El personal que presente infecciones serias en manos o cara no debe realizar exmenes microbiolgicos.

8

ARCHIVO Y REGISTROS

No aplicable 9 APENDICES Y ANEXOS N Codificacin Ttulo ANEXOS 1 PR 2.2/1 Hoja de modificaciones 2 PR 2.2/2 Lista de distribucin del procedimiento






HOJA N:


FIRMA: HOJA N:


FIRMA: HOJA N:


FIRMA: HOJA N:

FECHA:

FIRMA:





N COPIA

SECTOR/ AREA

RECUPERA VERSIN N

FECHA

FIRMA

ACLARACION

CAPTULO 3 MTODO DE ENSAYO Y VALIDACIN DE LOS MTODOSRequisitos de la Norma 17025ndiceMTODO DE ENSAYO Y VALIDACIN DE LOS MTODOS.......................................................................... 1 3.1 MTODOS DE ENSAYO MICROBIOLGICOS: .................................................................................................. 1 3.2 MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS: ............................................................................................................. 3 3.3 VALIDACIN DE LOS MTODOS MICROBIOLGICOS:.................................................................................... 6 3.4 ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE DE MEDICIN EN MICROBIOLOGA:..................................................... 7 3.5 CONTROL DE LOS DATOS:........................................................................................................................... 10 ANEXO 3.A. DOCUMENTOS PARA LA ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE DE MEDICIN EN MICROBIOLOGA: ....... 11

3.1

MTODOS DE ENSAYO MICROBIOLGICOS:

3.1.1 Seleccin de Mtodos: El anlisis microbiolgico tiene como fin proporcionar informacin confiable acerca de la inocuidad y calidad sanitaria de los alimentos. Es por ello que es indispensable la eleccin de un mtodo de ensayo adecuado. El laboratorio debe utilizar los mtodos de ensayo que satisfagan la necesidad del cliente y que sean apropiados para los ensayos que realiza. El laboratorio debe aplicar mtodos y procedimientos apropiados para todos los ensayos dentro de su alcance (incluye muestreo, manipulacin, transporte, almacenamiento, preparacin de las muestras a ensayar, estimacin de la incertidumbre y empleo de tcnicas estadsticas para el anlisis de datos de los ensayos). El laboratorio puede utilizar mtodos oficiales, mtodos normalizados nacionales e internacionales, o mtodos internos desarrollados por l mismo. Es recomendable la utilizacin de mtodos normalizados o de referencia, siempre y cuando stos estn disponibles y sean apropiados. Sin embargo, el laboratorio no est obligado a utilizar un mtodo normalizado, si dispone de un mtodo propio con el que obtenga resultados equivalentes o superiores, utilice tecnologa ms avanzada y presente un grado de validacin adecuado. En todos los casos, el laboratorio debe demostrar que un mtodo es adecuado para la finalidad pretendida. Para decidir si un mtodo es apropiado o no, se debe tener en cuenta: si ese mtodo es aplicable al alimento a analizar, la cantidad de muestra necesaria para el ensayo, el lmite inferior del mtodo (para ensayos cuantitativos), si usando esta metodologa puedo evaluar el cumplimiento de las exigencias requeridas para el alimento. Cuando el muestreo es llevado a cabo por el laboratorio, este debe usar procedimientos documentados y tcnicas estadsticas apropiadas para seleccionar las muestras. Ver Captulo 6. Muestreo. Requisitos de la Norma 17025. La precisin, la especificidad, la sensibilidad, el lmite de cuantificacin y/o de deteccin, los efectos matriciales y facilidad de uso, son caractersticas que deben tenerse en cuenta antes de seleccionar un determinado mtodo de ensayo. El laboratorio debe elegir los mtodos que mejor se adecuen a sus objetivos, y debe documentarlos debidamente.

Captulo 3: Mtodo de ensayo y validacin de los mtodos Autor: Alicia Cuesta. Consultora Internacional de la FAO

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3.1.1.1 Mtodos normalizados: No es necesario anexar o volver a escribir bajo forma de procedimientos las normas u otras especificaciones reconocidas que tengan suficiente informacin para realizar los ensayos. El laboratorio debe confirmar que puede operar correctamente los mtodos normalizados antes de introducir los ensayos. Si el mtodo normalizado cambia, se debe repetir la confirmacin. Cuando sea necesario, la norma debe ser complementada con detalles adicionales para asegurar una aplicacin coherente. Ejemplo: La metodologa empleada para la leche UAT incluye una incubacin previa siete das a 37 C y luego se realiza el ensayo segn FIL-IDF 100B:1991. Esto debe ser especificado cuando se hace referencia a la metodologa en el informe de ensayo. 3.1.1.2 Mtodos desarrollados por el laboratorio: debe ser una actividad planificada y debe ser asignada a personal calificado y proveer los recursos necesarios. Los planes deben ser actualizados a medida que avanza el desarrollo y deben asegurar que la comunicacin sea eficaz entre todo el personal involucrado. 3.1.1.3 Mtodos de ensayo no normalizados: Cuando sea necesario utilizarlos deben ser validados adecuadamente antes del uso. Tambin deben ser acordados con el cliente y deben incluir una especificacin clara de los requisitos del cliente y del objeto del ensayo. Para los mtodos de ensayo nuevos es conveniente elaborar procedimientos antes de la realizacin de los ensayos los que deben contener, como mnimo, la informacin siguiente: a) Una identificacin apropiada de los mtodos de ensayo. b) El alcance. c) La descripcin del tipo de tem a ensayar. d) Los parmetros o las magnitudes; y los rangos a ser determinados. e) Los aparatos y equipos, incluidos los requisitos tcnicos de funcionamiento. f) Los patrones de referencia y los materiales de referencia requeridos. g) Las condiciones ambientales requeridas y cualquier periodo de estabilizacin que sea necesario. h) La descripcin del procedimiento incluida la siguiente informacin: -marcas para identificacin durante la manipulacin, el transporte, el almacenamiento y la preparacin de los tems. - las verificaciones a realizar antes de comenzar el trabajo - la verificacin del correcto funcionamiento de equipos y, cuando corresponda, su calibracin y ajuste antes de cada uso; - el mtodo de registro de las observaciones y de los resultados; -las medidas de seguridad a ser observadas. i) Los criterios o requisitos para la aprobacin o rechazo. j) Los datos a ser registrados y el mtodo de anlisis. k) La incertidumbre o el procedimiento para estimar la incertidumbre.


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3.1.2 Modificacin de la metodologa. Si la metodologa empleada por el laboratorio para realizar el ensayo incurre en algn desvo o modificacin, es aceptable nicamente si: dicho desvo se documenta. se realiza una justificacin tcnica es autorizado y aceptado por el cliente.

3.1.3 Instrucciones para realizar el ensayo. El personal que realiza el ensayo debe tener disponibles en el laboratorio las instrucciones para: El uso y el funcionamiento de todo el equipamiento empleado, la manipulacin y la preparacin de las muestras a ensayar. Tiene que contar con el diagrama de flujo del ensayo propiamente dicho. Los mtodos de rutina que se emplean en el laboratorio deben ser claros y deben contener el detalle de los puntos crticos de la operacin, para que puedan ser fcilmente interpretados por los analistas menos experimentados. Suele ser de utilidad indicar estos puntos crticos en el diagrama de flujo del ensayo. 3.1.3.1 Todas las instrucciones, Normas, manuales y datos de referencia necesarios para la realizacin del ensayo deben mantenerse actualizados y estar disponible para el personal tcnico. Algunas normas y tcnicas usadas por los laboratorios que realizan ensayos microbiolgicos para alimentos son desarrolladas por organismos internacionales como AOAC, ISO, ICMSF, FDA BAM, USDA-FSIS y FIL-IDF. 3.1.4 Comunicacin con el cliente: El cliente debe ser informado del mtodo elegido. El laboratorio debe informar al cliente si el mtodo propuesto por este ltimo se considera inapropiado o desactualizado. 3.2 MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS:

El laboratorio debe asegurarse de que la calidad de los medios de cultivo y reactivos sea apropiada para los ensayos realizados. 3.2.1 El fabricante en el momento de la entrega del producto (medio de cultivo) debe proveer informacin acerca de las especificaciones de calidad, como mnimo debe incluir lo siguiente: Nombre del medio y lista de componentes, incluido cualquier suplemento Fecha de vencimiento del medio Condiciones de almacenamiento Control de esterilidad Control del crecimiento de los microorganismos de inters (target) y de los microorganismos no deseados (no target) y criterios de aceptabilidad. Controles fsicos y criterios de aceptabilidad aplicados Fecha de emisin de las especificaciones 3


Los lotes de medios deben estar debidamente identificados. Cada lote recibido debe ir acompaado de evidencias del cumplimiento de las especificaciones de calidad. El laboratorio debe asegurarse de que el fabricante notifique cualquier cambio en las especificaciones de calidad. Cada lote de productos suministrado debe incluir una garanta de que cumple la especificacin. 3.2.2 Preparacin de medios de cultivo: La preparacin adecuada de medios de cultivo es uno de los pasos fundamentales en el examen del microbiolgico y se le dar un especial cuidado. 3.2.2.1 Los medios de cultivo, soluciones y reactivos deben prepararse, almacenarse y utilizarse de acuerdo con un procedimiento documentado. 3.2.2.2 Los medios de cultivo se preparan en el laboratorio a partir de sus diferentes componentes o a partir de productos en polvo deshidratados comerciales, pero tambin pueden adquirirse medios listos para su uso. Ver IN 3.1Preparacin de medios de cultivo y reactivos. Para la preparacin y esterilizacin de medios, as como los tiempos de almacenamiento recomendados se puede tomar como base el documento ISO 7218:1996(E) Microbiology of food and animal feeding stuff-General rules for microbiological examinations. 3.2.2.3 Para la preparacin de medios, soluciones y tampones, debe utilizarse agua destilada que haya sido sometida a controles peridicos que aseguren su calidad (conductividad, pH y contaminacin microbiana, libre de sustancias bactericidas, inhibidoras o interferentes) y llevar un registro actualizado de los mismos. 3.2.2.4 Debe determinarse y verificarse el perodo de validez de los medios preparados en las condiciones de conservacin especificadas. En general los medios preparados no se guardan en heladera ms de tres meses o a temperatura ambiente no ms de un mes en condiciones que impidan que su composicin sea modificada. 3.2.2.5 El laboratorio debe registrar o colocar una etiqueta indicando en los medios de cultivo y reactivos los siguientes datos: la identificacin, la concentracin, las condiciones de almacenamiento, fecha de preparacin, fecha de vencimiento, el personal que los prepar. 3.2.2.6 Medios preparados internamente: Siempre que sea necesario, se verificar que los medios de cultivo y diluyentes preparados por el laboratorio tengan las caractersticas adecuadas con respecto a: Recuperacin o supervivencia de los microorganismos de inters.(Productividad) Inhibicin o supresin de los microorganismos no deseados.(Selectividad) Propiedades bioqumicas (diferenciales y diagnsticas) Propiedades fsicas (por ejemplo, pH, volumen). Sea estril.

Debe verificarse la esterilidad de los medios y diluyentes preparados en el laboratorio. Los lotes de medios preparados segn formula en el laboratorio deben verificarse para comprobar que facilitan el crecimiento de determinados cultivos microbianos procedentes de una coleccin Captulo 3: Mtodo de ensayo y validacin de los mtodos Autor: Alicia Cuesta. Consultora Internacional de la FAO 4

reconocida y debe verificarse que los medios selectivos inhiben el crecimiento de microorganismos no deseado. Ver IN 3.2 Evaluacin de calidad de los medios de cultivo. Los medios de cultivo, productos en polvo deshidratados y reactivos comerciales deben consumirse antes de la fecha de caducidad. 3.2.2.7 Medios listos para su uso: Todos los medios y diluyentes que se suministren en una forma directamente utilizable o parcialmente completa deben ser validados antes de su utilizacin. La evaluacin del medio respecto a la recuperacin o supervivencia de los microorganismos de inters y la inhibicin o supresin de los microorganismos no deseados tiene que ser cuantitativa; los atributos (por ejemplo, propiedades fsicas y bioqumicas) deben evaluarse utilizando criterios objetivos. Parte de esa validacin es provista por las especificaciones de calidad del proveedor. 3.2.3 Manejo de los medios de cultivo: 3.2.3.1 El laboratorio debe registrar la fecha de recepcin, la fecha de caducidad y la fecha de apertura del envase de los medios de cultivo. 3.2.3.2 El almacenamiento debe realizarse en las condiciones apropiadas. Todos los envases, especialmente los que contengan medios deshidratados, deben estar hermticamente cerrados. No deben utilizarse medios deshidratados que presenten apelmazamiento o un cambio de color. 3.2.4 Evaluacin de la calidad de los reactivos: El laboratorio debe asegurarse de que la calidad de los reactivos utilizados sea apropiada para los ensayos realizados. Debe verificar la idoneidad de cada uno de los lotes de reactivos crticos para el ensayo, al inicio y durante su perodo de validez, utilizando microorganismos de control positivo y negativo que sean trazables a colecciones de cultivos nacionales o internacionales reconocidas. 3.2.5 Control de las prdidas de volumen durante la esterilizacin:

Debe verificarse que no haya prdidas significativas de volumen de los diluyentes durante el proceso de esterilizacin en autoclave. Debe haber un procedimiento documentado y registro de datos obtenidos realizados en forma peridica. El laboratorio determina el intervalo en el que se efectan estos controles. Para evaluar la prdida de volumen de los diluyentes (esto es especialmente importante en ensayos cuantitativos) colocar un volumen fijo de diluyente en tubos de ensayo o frascos de dilucin. Medir el peso o volumen antes y despus del proceso de esterilizacin en autoclave. Luego, con los datos obtenidos, se efecta el clculo y la inferencia estadstica. IN Prdida de volumen de los diluyentes durante la esterilizacin. 3.2.6 Lavado de material: Otro aspecto a tener en cuenta es el correcto lavado del material reciclable. El laboratorio de debe contar con un instructivo para esta tarea. IN Lavado de material para ensayos microbiolgicos En general, luego de descontaminar el material de vidrio se enjuaga y se lava con agua caliente y extran neutro diluido al 2%, se enjuaga un n de veces con agua corriente y luego un n de veces con agua destilada. El material se seca en estufa y se acondiciona para ser esterilizado.


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3.2.7 Eliminacin de los reactivos: Si bien la eliminacin adecuada de los reactivos no es un problema que afecte directamente a la calidad, pero debe realizarse de acuerdo con la normativa vigente en materia de medio ambiente, salud y seguridad. 3.3 VALIDACIN DE LOS MTODOS MICROBIOLGICOS:

3.3.1 Definicin: la validacin es la confirmacin, a travs del examen y el aporte de evidencias objetivas, de que se cumplen los requisitos particulares para un uso especfico previsto. 3.3.2 El laboratorio debe validar los siguientes mtodos para confirmar que son aptos para el fin previsto: a) Los mtodos no normalizados b) Los mtodos que disea o desarrolla En este caso, el proceso de validacin es mucho ms arduo, ya que se debe demostrar que cada paso elegido responde a lo esperado. c) Los mtodos normalizados empleados fuera del alcance previsto (Ejemplo: mtodos normalizados aplicados a matrices que no se especifiquen en el procedimiento normalizado), as como las ampliaciones y modificaciones de los mtodos normalizados. Para demostrar que una versin modificada de un mtodo cumple las mismas especificaciones que el mtodo original, deben realizarse comparaciones utilizando replicados. d) En el caso en que utilice mtodos oficiales, mtodos normalizados o mtodos de organismos nacionales o internacionales reconocidos, o basados en ellos, antes de analizar cualquier muestra, los laboratorios debern verificar su capacidad para cumplir de forma satisfactoria todos los requisitos establecidos en dichos mtodos. 3.3.3 En todos los casos un parmetro para la validacin de ensayos microbiolgicos es la descripcin del mtodo de ensayo. 3.3.4 Mtodos de ensayo microbiolgicos cualitativos: Son mtodos en los que el resultado se expresa en trminos de ausencia/presencia. Los procedimientos de confirmacin e identificacin del microorganismo, deben ser validados estimando, cuando sea apropiado, su especificidad, exactitud relativa, desviacin positiva, desviacin negativa, lmite de deteccin, efecto matricial, repetibilidad y reproducibilidad Las diferencias debidas a las matrices deben tenerse muy en cuenta al analizar diferentes tipos de muestras. Los resultados deben evaluarse utilizando mtodos estadsticos apropiados. 3.3.5 Mtodos de ensayo microbiolgicos cuantitativos: debe considerarse la especificidad, sensibilidad, exactitud relativa, desviacin positiva, desviacin negativa, repetibilidad, reproducibilidad y el lmite de cuantificacin dentro de una variabilidad establecida y, en caso necesario, determinar cuantitativamente estos parmetros. Las diferencias debidas a las matrices deben tenerse en cuenta al analizar diferentes tipos de muestras. Los resultados deben evaluarse utilizando mtodos estadsticos apropiados. 3.3.6 Los laboratorios deben conservar los datos sobre la validacin de los sistemas de ensayo comerciales (kits) que utilicen. Estos datos pueden obtenerse de ejercicios de intercomparacin o de datos sobre validacin remitidos por los fabricantes y sujetos a la evaluacin de una tercera Captulo 3: Mtodo de ensayo y validacin de los mtodos Autor: Alicia Cuesta. Consultora Internacional de la FAO 6

parte (p. Ej., AOAC). Si no se dispone de datos sobre validacin o si stos no son plenamente aplicables, el laboratorio ser responsable de completar la validacin del mtodo. 3.3.7 Para la validacin de un mtodo se puede aplicar el anlisis de las mismas muestras usando en paralelo el nuevo mtodo propuesto o mtodo alternativo junto con un mtodo existente de referencia y validado para la misma determinacin. Referencia: prEN ISO 16140:1999 Microbiology of food and animal feeding stuffs- Protocol for validation of alternative methods. 3.3.8 Incluso cuando se haya realizado la validacin, el laboratorio tendr que verificar peridicamente que se cumplen los parmetros documentados, utilizando, por ejemplo, muestras inoculadas o materiales de referencia incorporados a las matrices ms representativas. 3.3.9 En todos los casos de validacin el diseo experimental y el anlisis de los resultados tienen que ser estadsticamente vlidos. 3.3.10 La validacin de los mtodos de ensayo debe reflejar las condiciones reales de ensayo. Esto puede conseguirse utilizando productos contaminados naturalmente o productos inoculados con un nivel conocido de microorganismos contaminantes. El analista debe

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