ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

PRÁCTICA Nº 11Recuento e Identificación de

Bacillus cereus

ASIGNATURA :

Microbiología de los Alimentos I

DOCENTE :

Dra. Graciela Albino Cornejo

ALUMNO :

Rómulo Aycachi Inga

CICLO :

2007 - II

Lambayeque, 13 de marzo de 2008.

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PRÁCTICA Nº 11RECUENTO E IDENTIFICACIÓN DE

Bacillus cereus.

I. Introducción:

Es un bacilo formador de esporas responsable de intoxicaciones alimentarias, siendo su hábitat natural el suelo, contamina con frecuencia cereales, leche, budines, cremas pasteurizadas y especias, entre otros alimentos. La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que las enfermedades causadas por alimentos contaminados constituyen uno de los problemas sanitarios más difundidos en la actualidad Los casos de intoxicaciones o enfermedades por alimentos mal preparados o contaminados por este microorganismo suelen ser frecuentes a pesar de que son perfectamente evitables; la primera descripción de un brote de gastroenteritis data de principios de 1900 En nuestro país casos de brotes de ETA denunciados y confirmados, por este tipo de microorganismos han sido esporádicos, 3 brotes en los últimos 9 años. B. cereus puede producir dos enterotoxinas: la toxina diarreica y la toxina emética. Los síntomas de la toxiinfección tienen dos formas de presentación con presencia de diarrea, dolores abdominales y vómitos. Su período de incubación varía de 4 a 16 horas luego de la ingesta del alimento contaminado.

La resistencia térmica de esporas de B. cereus en un medio con elevado contenido de agua vuelve a este microorganismo un potencial peligro para el desarrollo de una intoxicación, si las medidas higiénico sanitarias y de elaboración no son las adecuadas.

La enfermedad alimentaria por Bacillus cereus se presenta después de la ingestión de alimentos en los que ha crecido el organismo y formado sus toxinas. Habitualmente, se describen dos síndromes asociados, el diarreico, caracterizado por una diarrea que aparece entre 8 y 24 horas después de la ingestión de grandes cantidades de células, y el síndrome emético, con episodios de vómito que aparecen entre una y seis horas después de la ingestión de la toxina que se halla preformada ya en el alimento, con un cuadro similar al producido por Clostridium botulinum.

Las cepas de B. cereus son muy variables en cuanto a su crecimiento y características de supervivencia. Algunas son psicotrofas, siendo capaces de crecer a 4-5 grados pero no a 30-35 grados, mientras que otras cepas son mesófilas y pueden crecer entre los 15 grados y los 50-55 grados. En general, no obstante, la temperatura óptima de crecimiento varía de 30 a 40 grados. Las formas esporuladas, al igual que en el género Clostridium, son muy termorresistentes, y sólo se eliminan mediante la esterilización. Por definición, se trata de microorganismos anaerobios facultativos, lo que significa que se desarrollan tanto con las concentraciones normales de oxígeno del aire como cuando este contenido en oxígeno disminuye.

II. Objetivos:

- Familiarizarse con la metodología específica para la determinación de B. cereus.- Aislar B. cereus a partir de una muestra de alimento (harinas).- Numeración e identificación de B. cereus por conteo en placa.

III. Materiales:

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- Muestra: Harina de - trigo a granel.- Medios: Agar yema de huevo

con rojo de fenol.- Huevo criollo- Aguas destilada estéril.- Frasco estéril- Tubos de dilución

- Placas de Petri- Mechero Bunsen- Espátulas de Drigalsky- Gradillas- Asas bacteriológicas- Pipetas

IV. Procedimiento:

- Pasado el tiempo de incubación leemos las placas.- Se seleccionan las colonias que presenten un halo color grosella (colonias

sospechosas).- A las colonias sospechosas se les realizará tinción de Gram, si se observan

bacterias bacilares, de bordes rectos, de a dos o en cadenas cortas y enmarañados, esporas centrales, elípticas o subterminales no deformantes, se los tomará como presuntos B. cereus.

- Se realizará el conteo en placa.- Luego, de las colonias seleccionadas se les realizará las pruebas bioquímicas

características.

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10-1 10-2 10-3

1 mL 1 mL 1 mL

Pesamos 3 g de la muestra (harina de trigo)

Realizamos tres diluciones

Diluyente: Agua destilada estéril

Incubar a 35-37 ºC por 24-48 h.

Agar yema de huevo rojo de fenol

V. Resultados:

a. Identificación de especie:

- Para la identificación primero se observó las colonias que crecieron en el agar Yema de huevo Rojo de fenol, las que tenían un halo color grosella se escogieron para su aislamiento.

- Las colonias escogidas se pasaron a viales con agar nutritivo y se incubaron a 37 ºC por 24 horas (cepa).

- Luego, a la cepa obtenida se le realizó las sgtes. pruebas:

Catalasa Positiva Utilización almidón PositivaGelatinasa NegativaReduc. de nitratos Negativa

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Rojo de metilo NegativaTSI K/K

- Con las pruebas bioquímicas realizadas NO se pudo identificar a B. cereus, pero,

por la tinción Gram relizada, en la que se observó la morfología característica bacilar, la espora de forma oval y de posición central, su característica anaerobia facultativa (por la forma de crecimiento en caldo: con turbidez y sedimento), su capacidad para hidrolizar el almidón, y la capacidad de las colonias aisladas en placa de Agar Yema de huevo con Rojo de Fenol (con su característico halo grosella), podemos asegurar que la cepa aislada pertenece al género Bacillus.

b. Recuento de colonias:

- Se obtuvieron en el recuento de colonias los sgtes. resultados:

Diluciones # de colonias Promedio 10-1 A 30

2510-1 B 20

10-2 A 67

10-2 B 8

10-3 A 32

10-3 B 1

- Dividimos los promedios de las diluciones 10 - 2 y 10 - 3 y obtenemos los sgtes. resultados:

10-2 → 7= 3.5

10-3 → 2

- El resultado es mayor de 2. Entonces tomamos la menor dilución como el valor para el conteo de colonias. Entonces, el resultado para el conteo de colonias será:

2 x 10 3 ufc/gr

- Entonces la cantidad de Bacillus ssp. (expresado en ufc) en la muestra de harina de trigo a granel del Mercado Modelo de Lambayeque es de 2 x 10 3 ufc/gr.

VI. Referencias:

- Bacillus cereus (2004) obtenido el 7 de marzo de 2008 en http://www.bvsops.org.uy/pdf/cereus.pdf

- L. ORTIZ, M. (2003) Material didactico de Microbiologia de Alimentos: Investigación y recuento de V. cholerae y V. parahaemolyticus. Obtenido el 01 de febrero de 2008 en http://www2.uah.es/farmacia/programas/microbiologia/material_didactico_de_microlimentos.htm

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