UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CAMPECHE

FACULTAD DE MEDICINA

LABORATORIO DE PATOLOGÍA CLÍNICA

MANUAL DE PRÁCTICAS

SEGUNDO AÑO

Q.F.B. Miguel Piña Quijano M. en C.

CAMPECHE, MÉXICO, 2008

PRÓLOGO

El único medio para establecer un diagnóstico correcto es practicar una exploración del enfermo con un método perfecto. Sólo así cubriremos adecuadamente las cuatro etapas fundamentales del diagnóstico. Es preciso que aclaremos, paso a paso, estas etapas, indagando ante todo el trastorno funcional (etapa funcional), para localizar luego el órgano enfermo (etapa anatómica); después precisaremos el mecanismo productor del trastorno (etapa patogénica). Para ello disponemos de tres métodos de exploración: el interrogatorio, la exploración objetiva del enfermo y las exploraciones complementarias. A los dos primeros se les considera como dos fases del método clínico. Los segundos son métodos de análisis fisicoquímicos, aplicados unos directamente al enfermo y otros a sus humores o secreciones. A estos últimos se les acostumbra calificar como “métodos de laboratorio”.En muchísimas enfermedades, los exámenes de laboratorio son decisivos para el diagnóstico, hasta tal punto que el desconocimiento de los datos de auscultación sería un defecto tan grande como el desconocimiento de los datos de auscultación de un cardíaco, o de los interrogatorios de un dispéptico. Como todos los signos de exploración, los datos de laboratorio tienen su jerarquía y es preciso situarlos en el plano que les corresponde al hacer el razonamiento diagnóstico. Lo importante es recordar que ese diagnóstico jamás será la suma resultante de todos ellos, aunque a estos se añadan, como sumandos, los datos de exploración clínica. Ello es así porque el diagnóstico no es una suma, sino una síntesis. Lo primero lo podría hacer una máquina, lo segundo sólo puede hacerlo el médico. Para ello el médico necesita tener “sentido clínico”, cosa que sólo se puede adquirir con la experiencia propia. Por eso, nosotros solemos decir que el diagnóstico es “una síntesis plena de sentido”. Esta síntesis será tanto más perfecta cuantos más datos se hayan analizado para llevarla a cabo. Entre estos datos, los de laboratorio cumplen un papel importantísimo y es necesaria su ordenación adecuada para su perfecta aplicación.

M. Soriano. Jiménez.

REGLAMENTO DE LABORATORIO

1. Asistir con puntualidad.

2. Use bata siempre que acuda al laboratorio a realizar sus prácticas.

3. Lea las instrucciones de la práctica antes de asistir al laboratorio.

4. Siga las recomendaciones dadas por el maestro, a fin de obtener un mejor resultado de la práctica y para evitar pérdida de tiempo, desperdicio de materiales y reactivos o bien algún accidente.

5. Traer la (las) muestra (s) biológica (s) por estudiar.

6. Evite juegos y bromas en el interior del laboratorio.

7. Todo material roto por descuido, deberá ser repuesto por el causante.

8.. No introduzca alimentos en el laboratorio.

9. Aplicar las consideraciones generales establecidas para el tratamiento de muestras de desecho y lavado de materiales.

10. Aplicar las normas de separación y envasado de residuos peligrosos biológico infecciosos de acuerdo a sus características físicas y biológicas infecciosas.

11. Al término de la práctica, limpie y ordene las mesas, materiales y bancos.

NOTA: EL ALUMNO QUE NO SE SUJETE AL PRESENTE REGLAMENTO

SERÁ SANCIONADO O EN SU DEFECTO, EXPULSADO DEL

LABORATORIO TEMPORAL O DEFINITIVAMENTE.

INDICE PÁGINAANTIESTREPTOLISINAS 1PROTEINA C REACTIVA 3FACTOR REUMATOIDE 5CALCIO 7DERMATOFITOS 10ASPARTATO TRANSFERASA (A.S.T.) 22ALANINOTRASFERASA (A.L.T) 24CREATINFOSFOKINASA (C.P.K.) 26CREATINFOSFOKINASA-MB (CK-MB) 28DESHIDROGENASA LACTICA 29EXUDADO FARÍNGEO 32CREATININA Y DEPURACIÓN 36UREA 41PROTEINURIA 44BIOMETRÌA HEMÀTICA 47TIEMPO DE PROTROMBINA 57TIEMPO PARCIAL DE TROMBOPLASTINA 60GRUPOS SANGUINEOS Y RH 62BILIRRUBINAS 67AMILASA α 70FOSFATASA ALCALINA 73COLESTEROL- HDL, LDL 75COLESTEROL TOTAL 77TRIGLICÉRIDOS 81PROTEÌNAS TOTALES Y ALBÙMINA 84

ANEXOS:

CONSIDERACIONES GENERALES PARA EL TRATAMIENTO DE MUESTRAS DE DESECHOS Y LAVADO DE MATERIALES. 88

II. SEPARACIÓN Y ENVASADO DE RESIDUOS PELIGROSOS, BIOLÓGICO INFECCIOSOS DE ACUERDO A SUS CARACTERÍSTICAS FÍSICAS Y BIOLÓGICAS INFECCIOSAS. 89

III. EXTRACCIÓN DE MUESTRAS SANGUÍNEAS. 90

ANTIESTREPTOLISINAS

INTRODUCCIÒN Los estreptococos tipo A, producen una enzima denominada estreptolisina O que tiene la capacidad de lisar los hematíes, comportándose como antígeno. El organismo reacciona produciendo un anticuerpo neutralizante, antiestreptolisina (ASO), el que aparece entre 8 a 30 días después del comienzo de infección, los valores más elevados se dan en la tercera semana de la infección y es cuando pueden aparecer las enfermedades secundarias a esta infección (glomerulonefrìtis, una fiebre reumática, una endocarditis bacteriana o una escarlatina) pero no son específicos de ninguna de ellas. Deben ser diagnosticadas cada una de ellas por la clínica o por otros estudios diagnósticos. Títulos elevados indican que las secuelas por infección estreptocócica está presente. Entre el 80 al 85% de pacientes con fiebre reumática y el 95% de pacientes con glomerulonefrìtis aguda, presentan títulos representativos. En endocarditis bacteriana y escarlatina, los títulos se modifican.Títulos altos no son específicos para determinada enfermedad. Solo indica infección por estreptococo A. Los títulos se modifican en la convalecencia, siendo inferiores cuando el tratamiento es acertado. Los niveles altos de beta-lipoproteína dan falsos resultados elevados por inhibición de la estreptolisina; los antibióticos y adrenocorticoides, bajos, (son enmascarados). En amigdalitis, sepsis puerperal y erisipela por estreptococo A, los títulos están elevados.Los niveles normales de ASLO se expresan en unidades TODD:En niños menores de 2 años menos de 50 U/TEn niños entre 2 y 4 años menos de 160 U/TEn niños entre 4 y 12 años entre 160 y 300 U/TAdultos menos de 160 U/T

Los niveles aumentados de ASLO pueden indicar:Infección por estreptococos beta hemolíticos del tipo A, glomerulonefrìtis, fiebre reumática, endocarditis bacteriana, escarlatina, pioderma por estreptococo beta hemolítico del tipo A.El no tratar o tratar inadecuadamente una infección por el estreptococo beta hemolítico del tipo A, puede tener las siguientes complicaciones: absceso periamigdalino, fiebre reumática, glomerulonefrìtis. Escarlatina.

OBJETIVO:Determinar cualitativa y cuantitativamente la presencia de Antiestreptolisinas en una muestra sérica problema mediante el empleo de reacciones antígeno - anticuerpo, a fin de establecer su importancia clínica como apoyo al diagnóstico de enfermedades causadas por estreptococos del grupo A.

MATERIAL Y EQUIPO:Tubos de 10 x 75mm. Micropipeta 10 – 100 L Puntillas para micropipeta placa de reacciónAplicadores de madera

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VortexKit de Antígeno Estreptoex, LAFON Solución salina isotónicaSuero sanguíneo problema

PROCEDIMIENTO

a) Cualitativo

1. Colocar una gota de suero (40L) en un óvalo de la placa2. Agregar una gota de reactivo látex (30L) mezclar3. Oscilar suavemente la placa durante 2 min.4. Observar macroscópicamente

Interpretación de resultados:

POSITIVO: presencia de aglutinación visible por formación de grandes agregados y un fondo claro.NEGATIVO: ausencia de aglutinación visible

b) Semicuantitativo

1. Colocar de 5 a 6 tubos de ensayo ò mas si considera que el título es alto, identificarlos como 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, etc…..

2. Agregar a cada tubo 0.1mL (100L) de solución salina isotónica3. Agregar al primer tubo 0.1mL (100L) de suero, mezclar y transferir al segundo

tubo 0.1mL (100L), mezclar y transferir la misma cantidad, repetir la misma operación hasta el último tubo.

4. Colocar una gota de cada una de las diluciones en un óvalo de la placa y añadirles una gota de látex.

5. Mezclar y seguir el mismo procedimiento que en la prueba cualitativa.

c) Cálculos:

UI/mL de antiestreptolisina = recíproco de la última dilución x 200 en suero del suero que presenta aglutinación

BIBLIOGRAFÌA1. www.tuotromedico.com/temas/antiestreptolisinas.htm 2. Gilberto Ángel/Mauricio Ángel R. Interpretación Clínica del Laboratorio. 5ª. Ediciòn 1998. Editorial Médica Panamericana.3. Instructivo Estreptoex. Laboratorio LAFON, S.A.de C.V., Mèxico, D.F.

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DETERMINACIÓN DE PROTEINA C REACTIVA

INTRODUCCIÓN:

En 1930 Tillet y Francis reportaron una reacción de precipitación que podía ser demostrada en el suero de pacientes que padecían neumonía lobar con un extracto de polisacáridos provenientes de cepas de neumococos. El extracto neumococcico era un carbohidrato denominado C y a la proteína humana selectiva capaz de precipitar se le denominó Proteína “C” Reactiva (PCR). Independientemente de la neumonía lobar, la proteína C reactiva, se ha asociado a una gran variedad de enfermedades infecciosas, a procesos inflamatorios no infecciosos y a ciertos procesos inflamatorios malignos, lo cual en la actualidad permite clasificarla como un reactivo de fase aguda. La demostración de niveles elevados de proteína C reactiva es una prueba no específica de inflamación, la cual es virtualmente positiva en todas las infecciones agudas bacterianas, en algunos estados neoplásicos y en varios tipos de destrucción de tejidos como el infarto al miocardio. La PCR aparece muy pronto en varias enfermedades, alcanza un máximo en los primeros días y decrece a niveles no detectables en 8 a 10 días. La prueba es usada frecuentemente para monitorear la actividad de pacientes con fiebre reumática y artritis reumatoide. La PCR no se encuentra en sujetos normales y desaparece cuando se cura el enfermo. La regresión del proceso inflamatorio es acompañado en forma general por un decremento en los niveles séricos de proteína C reactiva. La elevación de la velocidad de sedimentación eritrocitaria (VSG), se acompaña de la presencia de PCR, pero la elevación de esta ocurre antes que el aumento en la VSG, disminuyendo antes que la VSG retorne a los niveles normales. La PCR aparece en el suero en forma de complejo de glicoproteína.

OBJETIVO: Determinación cualitativa y cuantitativa de la Proteína “C” Reactiva en una muestra sérica problema, a fin de correlacionar su importancia clínica en los procesos inflamatorios o patologías afines como son: infecciones agudas bacterianas y aquellas con destrucción de tejidos.

MATERIAL Y EQUIPO:

Tubos de ensaye de 13 x 100 mmGradillaPipetas PasteurMicropipetas de volumen variablePuntas para micropipetaCentrífugaVortexKit de PCR/CRP latex, SPINREACTSuero problema

TECNICA:

3

a) Método Cualitativo:1. Poner a temperatura ambiente los reactivos y homogenizarlos.2. Colocar una gota del suero en un circulo del portaobjetos (del equipo) sin diluir. Realizar lo mismo con los controles positivo y negativo.3. Añadir una gota de PCR latex a un lado de cada una de las anteriores.4. Mezclar las dos gotas extendiéndolas por todo el círculo.5. Colocar el portaobjetos en el vortex entre 80 y 100 rpm, y observar la aparición o ausencia de aglutinación exactamente al cabo de dos minutos. El exceso del tiempo de reacción podría dar lugar a falsos resultados.6. Interpretación: La presencia de aglutinación indica un nivel de PCR igual o superior a 6mg/l en la muestra. La ausencia de aglutinación indica un nivel de PCR inferior a 6mg/l en la muestra.

b) Método CuantitativoSiguiendo la metódica cualitativa, se procederá con diluciones de suero muestra con solución salina (NaCl 9g/l).

DILUCIONES 1/2 1/4 1/8 1/16Suero muestraSol. Salina

100 μL100 μL 100 μL 100 μL 100 μL

100 μL 100 μL 100 μLDe cada diluciónColocar en portaobjetos

50 μL 50 μL 50 μL 50 μL

concentración si la última dilución que da aglutinación6 X n° dilución 6 x 2 6 x 4 6 x 8 6 x 16mg/L 12 24 48 96

c) VALORES NORMALES:

Adultos: < 6 mg/L

BIBLIOGRAFÍA:

1. Todd-Sanford. Diagnóstico Clínico por el Laboratorio. 6ª. Edición. Editorial Salvat.2.M.J. Lynch et.al. Métodos de Laboratorio. 2ª. Edición. Editorial interamericana.3.Alfonso Balcells. La Clínica y el Laboratorio. 18ª. Edición. Editorial Masson.1999.4. Instructivo PCR Latex. Sanofi Diagnostics Pasteur, S.A.5. Instructivo PCR Latex. Spinreact, S.A.

DETECCIÓN DE FACTOR REUMATOIDE

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INTRODUCCIÓN:

El factor Reumatoide es un anticuerpo circulante que reacciona con algunos componentes de inmunoglobulinas; es una IgM o IgG con reactividad de anticuerpo para la IgG de humanos. Se halla presente en la artritis reumatoide, otras enfermedades vasculares de la colágena, endocarditis infecciosa activa y algunos otros padecimientos como artritis reumatoide juvenil, Síndrome de Sjögren, esclerosis generalizada progresiva, mononucleosis infecciosa y algunos pacientes con poliomiositis, así como una variedad de enfermedades no asociadas a Artritis Reumatoide, en las cuales es posible detectar actividad del factor reumtoide. Estas enfermedades son en su mayor parte inflamatorias o crónicas o ambas cosas, Ejemplos: Enfermedades Infecciosas: endocarditis bacteriana subaguda, sífilis, enfermedad vírica, hepatitis infecciosa, tripanosomiasis, tuberculosis, lepra. Enfermedades del Pulmón: bronquitis, asma, asbestosis, silicosis, fibrosis pulmonar idiopática. Varias: sarcoide, mieloma múltiple, fibrosis del hígado, homoinjerto renal, infarto de miocardio. El factor reumatoide se detecta en los pacientes por medio de la mezcla de suero diluido con partículas inertes (latéx, bentonita, eritrocitos tratados, etc.) cubiertas con IgG de humanos y observando aglutinación.

OBJETIVO: Determinación cualitativa y cuantitativa del Factor Reumatoide en una muestra sérica problema, a fin de correlacionar su importancia clínica en los procesos artríticos, inflamatorios o patologías afines con reactividad al factor.

MATERIAL Y EQUIPO:

Tubos de ensaye de 13 x 100 mmGradillaPipetas PasteurPlaca de vidrio con óvalosMicropipetas de volumen variablePuntas para micropipetaCentrífugaVortexKit de REUMATEX, Lafon, S.A. de C.V.Suero problema

TÉCNICA:

a) método cualitativo1. Poner en un tubo de ensayo 1mL de sol. Reguladora glicina-salina, (diluida 1:10 a partir de la solución concentrada), añadir una gota de suero problema, mezclar y agitar.2. Colocar una gota de la mezcla anterior en un óvalo de la placa de vidrio.3. Agregar una gota de latex-globulina, mezclar con un aplicador.4. Agitar por dos minutos.5. Interpretación: negativo = ausencia de aglutinación

positivo débil = aglutinación visible con pequeños agregados

5

positivo = aglutinación visible con agregados grandes y fondo claro

b) Método Cuantitativo

1. Colocar 9 tubos de ensayo en una gradilla y marcarlos del 1 al 92. Depositar 1.9mL de sol. Reguladora glicina-salina en el tubo # 1 y 1mL en cada uno de los tubos restantes.3. Añadir 0.1mL de suero problema la tubo # 1, mezclar y transferir 1mL al tubo #24. Mezclar y transferir de igual modo hasta llegar al tubo # 9, 5. Los valores de las diluciones son:

TUBO No. DILUCIÓN1 1:202 1:403 1:804 1:1605 1:3206 1:6407 1:12808 1:25609 1:5120

6. Colocar una gota de cada dilución en cada óvalo de la placa de vidrio y añadir una gota de latex-globulina, continuar con el mismo procedimiento que para la prueba cualitativa arriba mencionada.7. Interpretación . El título del suero corresponderá a la última dilución en que se presente aglutinación del reactivo latex-globulina.

BIBLIOGRAFÍA:

1. Todd-Sanford. Diagnóstico Clínico por el Laboratorio. 6ª. Edición. Editorial Salvat.2.M.J. Lynch et.al. Métodos de Laboratorio. 2ª. Edición. Editorial interamericana.3.Marcus a. Krupp. Diagnóstico Clínico y de Laboratorio. Manual Moderno. 8ª. Edición.4. Instructivo REUMATEX. Laboratorios Lafon, S.A. de C.V.

CALCIO SERICO

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INTRODUCCIÒN:

Todas las células requieren del calcio para su funcionamiento y es especialmente importante en la estructura de los huesos y la actividad neuromuscular. Una deficiencia de calcio en los líquidos corporales produce una hiperexcitabilidad en los nervios y músculos, y su exceso tiene un efecto opuesto.El calcio existe dentro de la sangre en forma libre (calcio ionizado, metabólicamente activo) y ligado a la fracción albúmina. La medición de calcio sérico habitual, incluye ambas formas.Cuando el nivel de albúmina está bajo o alto, se refleja en la misma forma en el calcio sérico. Por cada gramo que rebaje el nivel sérico de la albúmina, se rebaja en 0.8mg el calcio sérico. La mayor parte del calcio del organismo se encuentra en los huesos, bajo la forma de cristales hexagonales planos de hidroxiapatita y se depositan en la matriz de fibras colàgenas. El calcio es indispensable para la formación, conservación y reparación del hueso; para el mantenimiento de un grado normal de excitabilidad y tono neuromuscular; para el funcionamiento adecuado de muchas enzimas, incluyendo las que intervienen en la coagulación de la sangre y por último para la conservación de la permeabilidad fisiológica de las membranas celulares y sus poros.Los cambios de concentración del calcio en la sangre producen problemas óseos, y la posible alteración de las hormonas reguladoras del mismo que se producen en las glándulas paratiroides y en el riñón.La hormona paratiroidea produce una elevación de los niveles de Calcio por aumentar su absorción intestinal, disminuyendo su salida por el riñón hacia la orina, y aumentando la reabsorción del hueso.La ingesta excesiva de leche o vitamina D como suplemento en la dieta puede aumentar los niveles de calcio dado que se requiere de ella para su absorción, la cual es acelerada por la hormona paratiroidea. La hipercalemia puede ocurrir por dos mecanismos principales: por movilización del calcio óseo o por aumento en la absorción intestinal de Ca. Todos los procesos que cursan con hiperproteinemia ocasionan hipercalcemia “artefacto” (estasis venosa, deshidratación, nutrición parenteral, mieloma, sarcoidosis, etc.)

Los valores normales van de 8.5 a 10.2 mg/dL. Aunque pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios.

Los niveles por encima de lo normal pueden estar relacionados con:Hiperparatiroidismo Tumor metastásico de hueso Síndrome de leche y alcalinos Mieloma múltiple Enfermedad de Paget Sarcoidosis Tumores que producen una sustancia similar a la PTH (hormona paratiroidea) Intoxicación por vitamina D Ingesta excesiva de calcio Inmovilización prolongada Hipertiroidismo (actividad excesiva de la glándula tiroides)

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Enfermedad de Addison (actividad deficiente de la glándula suprarrenal) Diuréticos tiazídicos Litio VIH/SIDA

Los niveles por debajo de lo normal pueden estar relacionados con:Hipoparatiroidismo Malabsorción (absorción inadecuada de los nutrientes del tracto intestinal) Osteomalacia Pancreatitis Insuficiencia renal Raquitismo y deficiencia de vitamina D Enfermedad hepática (disminución de la producción de albúmina) Magnesio sérico bajo Las afecciones adicionales bajo las cuales se puede realizar el examen son:Delirio Demencia Neoplasia endocrina múltiple (MEN) II Neoplasia endocrina múltiple (MEN) I Carcinoma de células renales Hiperparatiroidismo secundario

La determinación de los niveles de calcio resulta de gran interés en el coma, pancreatitis, nefrolitiasis, polidipsia, poliuria, hiperazohemia y tumores malignos.

OBJETIVO:

Determinar la concentración sérica de calcio a fin de establecer su relación e importancia clínica con los trastornos de la actividad neuromuscular, problemas óseos, y la posible alteración de las hormonas reguladoras del mismo.

MATERIAL Y EQUIPO:

Jeringa con aguja hipodérmica de 3 mL.Torundas de algodónAlcohol desnaturalizadoTubos de 13 x 100mm.Pipetas de 1 y 5 mL.Micropipeta de Volumen variable Puntillas para micropipetaGradillaCentrífugaEspectrofotómetro

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Baño MaríaKit de Calcio SERA-PAK Plus * paciente o suero problema

PROCEDIMIENTO:

Longitud de onda............................650 nm (490 – 550)Temperatura.................................... 37 °CCubeta ............................................. 1 cm. Paso de luzAjuste a cero con blanco de reactivo

Pipetear en tres tubos:BLANCO STANDARD MUESTRA

STANDARDMUESTRAAGUA DEST.REACTIVO

--

10 L1.0 mL.

10 L.--

1.0 mL

-10 L.

-1.0 mL

Mezclar e incubar 1 min. A 37°C, Coloración estable 60 min.

Cálculo: D.O. muestra -------------------- x n D.O. estandar

n = 10mg/dL (concentración estándar)

VALORES DE REFERENCIA: 8.8 – 10.2 mg/dL

BIBLIOGRAFÍA:1. Todd-Sanford. Diagnóstico Clínico por el Laboratorio.6ª. Edición 1978. Editorial Salvat.2. M.J. Lynch. et.al. Métodos de Laboratorio. 2ª. Edición 1977. editorial Interamericana.3.ww.mercksource.com/ppdocs/us/cns/content/adam/esp/esp_ency/article/003486.htm 4.Alfonso Balcells. Ka Clínica y el Laboratorio 18a. Edición 1999. Editorial Masson.5. Bayer. SERA-PAK PLUS. Calcio (ARSENAZO III). Argentina.6. www.tuotromedico.com/temas/calcio_en_suero.htmDERMATOFITOS DE IMPORTANCIA CLINICA

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INTRODUCCIÓN: Las dermatofitosis o tiñas son una variedad de infecciones clínicas superficiales, causadas por tres grupos de hongos muy relacionados, los dermatofitos, que tienen la capacidad de invadir el tejido queratinizado (piel, cabello, uñas). Las infecciones micóticas superficiales afectan a millones de personas en todo el mundo.  Los dermatofitos representan mas de 40 especies clasificadas en tres géneros: Microsporum, Trichophyton y Epidermophyton. Solo un pequeño grupo de estos es responsable de la mayoría de infecciones en humanos.

Los dermatofitos se clasifican en tres categorías según los huéspedes de preferencia y su hábitat natural. Esta agrupación es importante desde el punto de vista epidemiológico y nos ayuda a determinar la fuente de infección (Cuadro1). Los organismos geofílicos viven en la tierra y solo esporádicamente infectan al ser humano y cuando esto ocurre, la enfermedad es generalmente inflamatoria, M. gypseum es el hongo geófilo que con más frecuencia se aísla de infecciones en humanos. Las cepas aisladas a partir de humanos son más virulentas y en condiciones adecuadas son responsables de diseminaciones epidémicas. Los dermatofitos zoofílicos usualmente infectan animales, la transmisión de animales a humanos no es rara, por ejemplo: M. canis de perros y gatos es una fuente frecuente de infección y esto puede ocurrir ya sea por contacto con la especie animal infectada, a través de pelos del animal adheridos al vestido, o a materiales diferentes.

Otro ejemplo de transmisión de animal a humanos ocurre en manejadores del ganado vacuno, los cuales a veces pueden presentar cuadros de tiña de la barba secundarias a infección por T. verrucosum, o la infección que ocurre por transmisión de T. mentagrophytes proveniente de pequeños roedores. Aunque las infecciones en el hombre por estos hongos usualmente son de carácter supurativo, la infección en el animal puede ser silenciosa clínicamente; en este caso hablaríamos de un portador asintomático lo cual demuestra el grado de adaptación de el microorganismo a su hospedero.     Las especies antropofílicas se han adaptado para infectar al hombre, a diferencia de las dos primeras estas dan lugar a infecciones de naturaleza epidémica.3

Cuadro 1. Agrupación de los dermatofitos basados en la ecología y la preferencia del hospedero. 3

Antropofílicos Zoofílicos Geofílicos

E. floccosum M. canis M. cookeiM. audouinii M. equinum M. gypseumM. ferrugineum M. gallinae M. fulvumT. concentricum M. persicolor M. nanumT. megninii T. equinum M. praecox T. mentagrophytes var interdigitalis

T. mentagrophytes var erinacei

M. vanbreusemgemii

T. mentagrophytes var T. mentagrophytes var  

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nodulare mentagrophytesT. rubrum T. mentagrophytes var

quickeanum 

T. schoenleinii T. simii  T. soudanense T. verrucosum  T. tonsurans    

En general, la infección se recibe de animales, del medio ambiente o del hombre, participando también la susceptibilidad del huésped, su competencia inmunológica y factores locales. Con mayor frecuencia los niños tienen infecciones de la piel cabelluda, mientras que en adultos predominan en áreas intertriginosas.La infección producida por dermatofitos, da como resultado diferentes cuadros clínicos dependiendo de las regiones afectadas, aunque algunas características clínicas son comunes a todos ellos. Las distintas formas clínicas con las que se presenta la infección por dermatofitos son las siguientes: Tiña de la cabeza

Micosis Superficial producida principalmente por los dermatofitos Trichophyton tonsurans  en un 60% de los casos y Microsporum canis en el 40% restante, afectando primordialmente a niños.

Características ClínicasExisten dos variedades, la seca y la inflamatoria. En la primera existen pequeñas placas numerosas con descamación y pelos cortos que alternan con pelos normales, lo cual corresponde a una etiología tricofítica. Por otro lado, cuando las placas son mas grandes y con escamas presentando pelos "rotos" a un mismo nivel y lesiones menos numerosas, corresponden a la tiña microspórica. La variedad inflamatoria o querión de Celso, predomina en piel cabelluda de niños, apareciendo en una zona de tiña seca. Inicia con dolor que va en aumento, eritema, inflamación, pústulas, exudado purulento y se forma un plastrón con costras melicéricas que se acompaña de adenomegalia regional.

A) Tiña seca de la cabeza (tricofítica)

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B) Tiña inflamatoria de la cabeza o Querion de Celso (microspórica. )

Tiña del cuerpoMicosis Superficial producida principalmente por los dermatofitos M. canis, T. tonsurans, T. rubrum, T. mentagrophytes y E. floccosum. 

Características ClínicasSon placas redondeadas, con bordes delimitados por micro vesículas, que inician como pápulas eritematosas y pruriginosas que en cuestión de días van creciendo. Pueden ser circulares, de gran tamaño y escasas (tricofíticas) o ser numerosas, pequeñas y múltiples (microspóricas).Cuando afecta las manos se presenta con características similares al resto del cuerpo, siempre y cuando se localice en el dorso, mientras que cuando se presenta en las palmas existe la presencia de escamas y vesículas, hiperqueratosis difusa, eritema y anhidrosis; además de que puede haber una forma inflamatoria con vesículas y pústulas.

Tiña corporis en cara Tiña corporis en brazo

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Tiña de la ingle

Micosis Superficial producida principalmente por los dermatofitos T. rubrum, E. floccosum y T. mentagrophytes.

Características Clínicas

La parasitación de esta región por dermatofitos, forma placas eritematoescamosas con borde micro vesicular y regular así como liquenificación debido a que en las zonas húmedas  el cuadro puede ser más pruriginoso. También las lesiones pueden avanzar a periné, región crural y nalgas. Esto puede ser debido al uso de esteroides o inmunodepresión.

Tiña inguinal o crural

1. 2.

13

3.

Tiña de los pies

Micosis Superficial producida principalmente por los dermatofitos T. rubrum, E. floccosum y T. mentagrophytes.

Características Clínicas

Hay tres variedades clínicas, intertriginosa, vesiculosa e hiperqueratósica. La intertriginosa esta caracterizada por afectar la piel de los espacios interdigitales en donde se encuentra escama, maceración y vesículas. La forma vesiculosa se caracteriza por presentar vesículas pequeñas que se rompen dejando zonas de erosión, costras melicéricas y prurito. Por último, en la variedad hiperqueratósica se observan zonas de piel gruesa y dura, así como descamación del área en cuestión.

Tiña pedis

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Tiña de la uñas u Onicomicosis

Representan aproximadamente 30% de todas las infecciones causadas por hongos de las que tres grupos ocasionan la mayoría de los cuadros clínicos: dermatofitos, levaduras y mohos. La infección micótica de las uñas puede afectar a manos o mas frecuentemente a pies. El agente con más frecuencia aislado de la onicomicosis de los pies es T. rubrum, y en las manos Candida; entre los mohos, especies de Scytalidium pueden infectar tanto las uñas de los pies, las manos y la piel adyacente.

Características Clínicas

A) Onicomicosis subungueal distal y o lateral.- El hongo penetra por el borde distal de la uña en forma lateral o longitudinal subungueal, pudiendo afectar toda la lámina ungueal en forma de una banda longitudinal. 

Onicomicosis subungueal distal

B) Onicomicosis blanca superficial. Hay desarrollo de la infección en la zona superficial de la uña, produciéndose máculas blancas. 

Onicomicosis blanca superficial

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C) Onicomicosis subungueal blanca proximal. El hongo penetra por debajo de la cutícula hacia el lecho y  lámina ungueal, avanzando hacia el borde distal., produciéndose un color blanquecino. Esta variedad clínica se observa en pacientes inmunodeprimindos como trasplantados renales y pacientes con sida.

D) Onicomicosis distrófica total. En esta se da la afectación de toda la uña, la cual se observa muy engrosada,  destruida y amarillenta. Es el resultado de la evolución de los cuadros clínicos descritos anteriormente.

. Onicomicosis distrófica total

1. 2.

CANDIDOSIS Micosis causada por diversas especies de levaduras oportunistas del género Cándida, en especial C. albicans, presenta una variedad de cuadros clínicos, afecta primordialmente mucosas (boca, vagina, etc), piel, uñas y de manera excepcional otros órganos como pulmones, intestinos, etc.

Puede ser referida también como: candidiasis, moniliasis, muguet, algodoncillo, blastomicosis.

Características clínicas.

Es una de las infecciones más frecuentes y polimórficas que atacan al hombre, su nivel de profundidad o sistematización no depende tanto del agente etiológico en sì, sino del factor predisponente con el que se asocie. Las variedades clínicas que se presentan son las siguientes:

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CANDIDOSIS TIPO CLÌNICO______________________________________________________________________Mucocutànea Oral, genital, gastrointestinal, broncopulmonar, mucocutànea-

crònica.

______________________________________________________________________

Cutánea Intertrigos, onicomicosis, del área del pañal, pustulosis, granuloma.

______________________________________________________________________

Sistémica Septicemia, tracto urinario, meningitis, endocarditis.

Independientemente de los grupos clínicos citados, es posible que se presenten algunos cuadros alérgicos como: rinitis, alveolitis, asma, gastritis y eccema.

Candidosis oral pseudomembranosa Foliculitis por Candida asociada a Paciente con SIDA

candidemia

Candidosis ungueal granulomatosa Onicolisis candidósica pigmentadaPaciente diabètico

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 PITIRIASIS (PITIRIASIS VERSICOLOR)

Es una micosis superficial causada por un hongo levaduriforme y lipofìlico denominado Malassezia furfur, se caracteriza por la presencia de placas de fina descamación (pitiriasis) que pueden ser hipocrómicas e hipercròmicas (versicolor), generalmente localizadas en el tronco y raíces de los brazos.Erróneamente es llamada tiña versicolor, ya que su agente causal no es un dermatofito, otros sinónimos son: cromofitosis, tiña flava, manchas hepáticas, mal de amor.

Características clínicas.

La topografía fundamental es en tronco (espalda y pecho), cuello y raíces de los brazos. Otras localizaciones menos frecuentes son cara, ingles, región glútea, piernas, puede presentarse por empleo de corticosteroides.

Pitiriasis versicolor hipocromiante Pitiriasis versicolor hipercromiante

Pitiriasis versicolor infantil. Malassezia furfur. Filamentos y(niño con Cushing por esteroides) blastoconidias.

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OBJETIVO

Realizará observaciones microscópicas directas de muestras micóticas con solución de Hidróxido de Potasio al 10%, para identificar las diferentes estructuras de los dermatofitos mas comunes y establecer su importancia clínica.

MATERIAL Y EQUIPO:

Portaobjetos y CubreobjetosPipetas Pasteur LancetasSolución de KOH al 10%Microscopio Guantes desechables de látexCubre bocasMuestras o Paciente con probable micosis.

PROCEDIMIENTO

Consideraciones para la Toma de la muestra:

Que el enfermo no haya recibido tratamiento antimicótico (general o local) en al menos los 7 días anteriores

Si la lesión es seca y escamosa, hay que recoger el material con el borde plano de una lanceta o en su defecto con el extremo de un portaobjetos,(escamas) del borde de la lesión y depositarlo sobre un portaobjetos

Si es exudativa, untando una torunda convencional En las lesiones pilosas, hay que recoger los pelos rotos o descoloridos con unas

pinzas de depilar. En las lesiones ungueales la muestra se ha de tomar de la zona subungueal,

recortando la uña y raspando la hiperqueratosis.

Método Directo:

Añadir a la muestra una gota de KOH al 10% y colocar un cubreobtejos, observar al microscopio con objetivo de 40/0.65 ó seco fuerte, tratando de identificar las diferentes estructuras.

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DIVERSOS CAUSANTES DE MICOSIS SUPERFICIALES

Malassezia furfur Piedraia hortai(Pitiriasis Versicolor) (Piedra Negra)

Microsporum canis Microsporum gypseum(Tiña Prepuberal) (Tiña cuero cabelludo y piel lampiña)

Trichophyton mentagrophytes Trichophyton schoenleinii(Pie de atleta) (Favus de cuero cabelludo)

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Epidermophyton floccosum Trichophyton rubrum(Eccema de región crural) (Lesiones tipo psoriasis)

Candida albicans Trichophyton tonsurans(Candidiasis) (Tinea capitis)

BIBLIOGRAFÍA:1. B.A. Freeman. Tratado de Microbiología de Burrows. 21ª. Edición 1984.Edit. Interamericana.2. J.T. Sánchez V.; J.Tay Z. Fundamentos de Microbiología y Parasitología Médicas Edición 2003 Méndez. Editores S.A. de C.V. 3. Tay et. al. Microbiología y Parasitología Médicas.3ª. Edición 2003, Méndez Editores S.A. de C.V.4. Antología,”Hongos”.2000. Maestría en Microbiología. Facultad de Ciencias Químico Biológicas. Universidad Autónoma de Campeche. 5. A.Bonifaz. Micologìa Mèdica Bàsica.2ª.Ediciòn 2002.Méndez. Editores S.A. de C.V.6. www.galderma.com.mx/pac/Pac2/d2_p10.htm 7. www.uaq.mx/medicina/mediuaq/especialidades/dermatologia/micosis.htm

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DETERMINACIÓN DE ASPARTATO AMINOTRANSFERASA (AST) OTRANSAMINASA GLUTÁMICO-OXALACÉTICA (TGO o SGTO)

INTRODUCCIÓN:

El aspartato aminotrasferasa o transaminasa glutámco-oxalacética es una enzima que cataliza la transferencia reversible del grupo amino desde el aspartato al α-cetoglutarato para producir oxalacetato, por esto es esencial en la producción de energía en el ciclo de krebs. Esta enzima se encuentra en el citoplasma de las células básicamente, corazón, hígado, músculo estriado, músculo esquelético, riñones, páncreas y tejido cerebral en concentraciones decrecientes.Significado Clínico. Los valores séricos de la TGO aumentan cuando se libera la enzima de células dañadas del miocardio, de 6 a 12 hs. después de la oclusión de una arteria coronaria. El grado de aumento es aproximadamente proporcional a la la extensión del daño, siendo que el valor máximo se alcanza al cabo de unas 48 hs. del accidente, disminuyendo a niveles normales de 3 a 5 días. Las cifras de TGO aumentan considerablemente en las lesiones agudas del hepatocito; en la hepatitis viral, no son raros valores hasta de 1200 unidades, y las lesiones hepáticas por intoxicación con tetracloruro de carbono dan todavía cifras mayores. Hay aumento moderado en otros trastornos del hígado como en la ultimas etapas de la cirrosis y en las neoplasias pero rara vez pasan de 300 unidades. Lo mismo puede decirse de la ictericia obstructiva. En la mononucleosis infecciosa, los niveles de TGO en suero corresponden a la amplitud de la lesión hepática; en casos graves, las cifras pueden ser tan altas como en la hepatitis viral aguda. Los niveles séricos de TGO aumentan ligera o moderadamente en algunas variedades de distrofia muscular; se encuentran aumentos mayores en las lesiones por aplastamiento del músculo, y en la dermatomiositis.

OBJETIVO:

Cuantificar la concentración de aspartato aminotrasferasa en una muestra problema, mediante el empleo de una prueba cinética a fin de establecer su importancia en el diagnóstico clínico.

MATERIAL Y EQUIPO:

Tubos de ensaye de 13 x 100 mmGradillaPipetas PasteurMicropipetas de volumen variablePuntas para micropipetaCentrífugaEspectrofotómetro

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Kit cinético de TGO, Spinreact.Suero problema

TÉCNICA

a). Preparación del reactivo de trabajoDisolver un comprimido en un frasco tampón R.1

b). MétodoTemperatura ................................... 25/30/37°CLongitud de onda ........................... 340nmCubeta ............................................ 1 cm paso de luzLectura frente aire o agua destilada

Reactivo al usoMuestra

2.0 mL200μL

Mezclar, esperar 1 minuto. Anotar la lectura y poner en marcha el cronómetro. Repetir la lectura a 1, 2 y 3 minutos. Calcular el valor promedio de los incrementos de extinción por minuto (ΔE/min)

c) CálculoΔE/min x 1750 = U/L

d) Valores normales

25°C 30°C 37°CHombresMujeres

Hasta 19 U/LHasta 16 U/L

26 U/L22 U/L

38U/L31 U/L

BIBLIOGRAFÍA:1. M.J. Lynch, et.al., Métodos de Laboratorio.2a. Edición. Editorial Interamericana.2. Todd Sanford. Diagnóstico Clínico por el Laboratorio. 6ª. Edición. Editorial Salvat.3. Marcus A. Krupp I.M. Manual de Diagnóstico Clínico y de Laboratorio. 8ª. Edición. Editorial Manual Moderno.4. Alfonso Balcells. La Clínica y el Laboratorio. 18ª.Edición. Editorial Masson. 5. Instructivo Test cinéticoU.V. .Spinreac, S.A.

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DETERMINACIÓN DE ALANINO AMINOTRANSFERASA (ALT) OTRANSAMINASA GLUTÁMICO-PIRÚVICA (TGP o SGTP)

INTRODUCCIÓN:

La Alanino aminotransferasa (ALT) o Transaminasa Glutámico Pirúvica (TGP o SGTP) es una enzima que cataliza la transferencia reversible de un grupo amino del ác. Glutámico al Ac. Pirúvico que entra en el ciclo del Ac. Tricarboxílico y que es necesario en los tejidos para la producción de energía, mientras que el glutamato es desaminado dando amoníaco y -cetoglutarato. Esta enzima se halla en gran concentración en el hígado y en menor medida en riñón, corazón y músculo. El alto contenido de esta enzima en el hígado, en comparación con la relativamente baja concentración de este en el miocardio y otros tejidos, ha llevado a la aplicación de la determinación de la TGP al estudio de la enfermedad hepática. El límite normal para esta enzima, expresado en unidades Karmen, es casi lo mismo que para la TGO. Los enfermos con hepatitis vírica y otras formas de necrosis hepática muestran elevaciones llamativas del nivel de la TGP (DE 500 A 4000U). Los valores de la TGP están moderadamente elevados( 300U) en la mayoría de los enfermos con ictericia posthepática, colestasis intrahepática, carcinoma metastásico, cirrosis o esteatonecrósis alcohólica ( hepatitis alcohólica). Los valores de TGP son tan altos o más que los de la TGO en la mayoría de los enfermos con hepatitis vírica, ictericia posthepática, o colestasis intrahepáca, mientras que son muchos más bajos que los respectivos de TGO en los enfermos con cirrosis o carcinoma metastásico. Los niveles de TGP son normales o están solo mínimamente elevados en los pacientes afectados con infarto al miocardio. En general la determinación de ALT nos permite detectar una alteración en el hígado, para diferenciar la ictericia hemolítica de la hepática, para monitorear el tratamiento de hepatitis u otras enfermedades, así como también el efecto de ciertos fármacos tóxicos al hígado.

OBJETIVO:

Cuantificar la concentración de Alanino aminotrasferasa en una muestra problema, mediante el empleo de una prueba cinética a fin de establecer su importancia en el diagnóstico clínico.

MATERIAL Y EQUIPO:

Tubos de ensaye de 13 x 100 mmGradillaPipetas PasteurMicropipetas de volumen variablePuntas para micropipetaCentrífugaEspectrofotómetroKit cinético de TGP, Spinreact.Suero problema

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TÉCNICA:

a). Preparación del reactivo de trabajoDisolver un comprimido en un frasco tampón R.1

b). MétodoTemperatura ................................... 25/30/37°CLongitud de onda ........................... 340nmCubeta ............................................ 1 cm paso de luzLectura frente aire o agua destilada

Reactivo al usoMuestra

2.0 mL200μL

Mezclar, esperar 1 minuto. Anotar la lectura y poner en marcha el cronómetro. Repetir la lectura a 1, 2 y 3 minutos. Calcular el valor promedio de los incrementos de extinción por minuto (ΔE/min)

c) CálculoΔE/min x 1750 = U/L

d) Valores normales

25°C 30°C 37°CHombresMujeres

Hasta 22 U/LHasta 18 U/L

29U/L22U/L

40U/L32 U/L

BIBLIOGRAFÍA:1. M.J. Lynch, et.al., Métodos de Laboratorio.2a. Edición. Editorial Interamericana.2. Todd Sanford. Diagnóstico Clínico por el Laboratorio. 6ª. Edición. Editorial Salvat.3. Marcus A. Krupp I.M. Manual de Diagnóstico Clínico y de Laboratorio. 8ª. Edición. Editorial Manual Moderno.4. Alfonso Balcells. La Clínica y el Laboratorio. 18ª.Edición. Editorial Masson. 5. Instructivo Test cinéticoU.V. .Spinreac, S.A.

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DETERMINACIÓN DE CREATINFOSFOQUINASA (CPK)

INTRODUCCIÓN:

La creatina fosfocinasa es una enzima ampliamente distribuida en los tejidos del organismo. Su concentración en el músculo esquelético y en el miocardio es muy elevada mientras que en otros tejidos es mínima la concentración y en el hígado no se encuentra.La creatina fosfocinasa es la enzima responsable de la producción de fosfato de creatina. Su función fisiológica esta asociada con la generación de trifosfoadenosina(ATP) para sistemas contráctiles o de transporte.La CPK está constituida por tres proteínas separables por electroforésis. El músculo esquelético se caracteriza por su contenido en isoenzima MM, el miocardio por isoenzima MB y el cerebro por la isoenzima BB. El incremento de las isoenzimas de la CPK en el suero sanguíneo se interpreta de la siguiente manera: la CK-MM está elevada en el traumatismo del músculo esquelético, del músculo cardíaco y del encéfalo: en los trastornos musculares ( por ejemplo distrofias, hipotiroidismo, dermatomiositis, polimiositis), en la rabdomiólisis y después del ejercicio exhaustivo. La CK-MB se eleva en forma casi inmediata (dentro del as 2 – 4 primeras horas) después de infarto al miocardio y se mantiene alta durante mas de 72 hs (Los valores elevados se prolongan con la extensión del infarto o por un nuevo accidente), se eleva también en la rabdomiólisis extensa o en el traumatismo muscular, enfermedad muscular grave, síndrome de Reye o fiebre manchada de las montañas rocallosas. La CPK-BB se eleva en ocasiones en el choque grave, en algunos carcinomas (especialmente el carcinoma de células aveniformes o carcinomas de ovarios, mama o próstata) o en la atresia biliar. En general esta prueba se usa como un índice específico de lesión del miocardio y músculo.

OBJETIVO:

Cuantificar la concentración de Creatinfosfoquinasa (CPK) en una muestra problema, mediante el empleo de una prueba cinética a fin de establecer su importancia en el diagnóstico clínico.

MATERIAL Y EQUIPO:

Tubos de ensaye de 13 x 100 mmGradillaPipetas PasteurMicropipetas de volumen variablePuntas para micropipetaCentrífugaEspectrofotómetroKit cinético de CPK, Spinreact.Suero problema

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TÉCNICA:

a) Método

Longitud de onda 340 nm.Temperatura 37ºC.Cubeta 1 cm de paso de luzCero frente a aire.

Pipetear en un tubo de ensayo:Suero 0.10 mLReactivo 1 2.0 mLMezclar e incubar a 37ª C al menos 5 min. AñadirReactivo 2 0.20 mL

Mezclar y transferir a una cubeta de lectura termostatizada a 37ª C pasados 90 segundos aproximadamente, leer la absorbancia, poner en marca el cronómetro simultáneamente y repetir la lectura a intervalos de tiempo exactamente iguales.

b) CálculosCalcular la actividad de la creatinaquinasa de la muestra usando el siguiente factor.Suero A/min x 3651 = U/L.

VALORES NORMALES.

SueroHombres Hasta 270 U/LMujeres Hasta 150 U/L

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CK-MBFundamento del método:La CK-MB está formada por las subunidades CK.B y CK-M. La fracción CK-M está inhibida por un anticuerpo específico que no influye en la fracción CK-B. La restante actividad de esta fracción que corresponde a la mitad de la actividad de la CK-MB es determinada mediante técnica cinética UV al igual que la CKMuestra:Suero, plasma heparinizada ó con EDTALa hemólisis interfiere en el test.La actividad de la CK-MB en el suero disminuye a 4°C un 10% al cabo de 24hs, o bien a 25°C un 10% al cabo de 1 hora.

Técnica:Longitud de onda ................... 340nmTemperatura ........................... 25/30/37°CCubeta .................................... 1 cm paso de luz.Lectura ................................... frente a aire o agua destilada

Reactivo en uso ......................... 2.5 mLMuestra ..................................... 100 μL

Mezclar y dejar en reposo 10 minutos a 25/30/37°CLeer la extinción E1 y después de exactamente 5 min leer la extinción E2

Calcular ΔE = E2 – E1

ΔE x 1651 = U/L

VALORES NORMALES:La probabilidad de un infarto de miocardio es elevada si las siguientes condiciones están reflejadas:

25°C 30°C 37°CCK HOMBRES CK MUJERESCK-MB

> 80 U/L> 70 U/L> 10 U/L

>130 U/L> 110 U/L> 15 U/L

>190 U/L> 167 U/L> 24 U/L

La actividad de la CK-MB se encuentra entre el 6 y 25% de la actividad de la CKEn caso de sospecha de un infarto de miocardio y los valores encontrados son inferiores a los límites indicados, podría tratarse de un infarto reciente. En dicho caso se repetirá la determinación al cabo de 4 horas.

BIBLIOGRAFÍA:1. Hamilton M.B. Rose. DIAGNOSTICO CLINICO.- 1ª Edición Editorial Interamericana, México 1985.2. Kaplan Lawrance A. Química Clínica. Editorial Médica Panamericana. Impreso en Argentina,1988.3. Lynch Mattew J. Métodos de Laboratorio Vol. 1. 2 edición. Editorial Manual Moderno. Impreso en México, 19874. Instructivo Test cinético de Creatin Kinasa (CK) y CK-MB. Spinreact, S.A.

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DESHIDROGENASA LÁCTICA (DHL o LDH)

INTRODUCCIÒN Deshidrogenasa del ácido láctico ò lactato deshidrogenasa, esta enzima se encuentra en muchos tejidos del cuerpo, especialmente el corazón, el hígado, el riñón, el músculo esquelético, piel, las células sanguíneas, del cerebro y los pulmones.

La deshidrogenasa láctica afecta la reacción química para la conversión del piruvato y el lactato. Los músculos en ejercicio convierten la glucosa en lactato (y los glóbulos rojos la metabolizan). El lactato luego es liberado en la sangre y finalmente absorbido por el hígado, el cual lo convierte de nuevo en glucosa y libera dicha glucosa en la sangre. Los músculos en reposo, los glóbulos rojos y otros tejidos absorben luego esta glucosa.

Pueden distinguirse 5 isoenzimas de LDH: la fracción 1, termoestable y de más rápida movilidad, es la predominante en el infarto de miocardio y trastornos en eritrocitos, y la 5, termolábil y de movilidad muy lenta, es característica de las afecciones hepáticas y músculo estriado. Por tanto, la diferencia de un tejido a otro estriba en la variedad predominante de LDH. En vista de la ubicuidad de la LDH en tejidos y glóbulos rojos, es dudoso que tenga valor clínico la medición de la actividad total de LDH.

En realidad pasa la deshidrogenasa en exceso a la sangre en toda destrucción hìstica, infecciosa o neoplàsica, especialmente del miocardio, pero también de otros músculos estriados, del hígado, riñón cerebro y de tumores malignos. Es por tanto un signo inespecífico más de organicidad del proceso, pero dada su constante y mayor elevación en el infarto de miocardio, puede confirmar este diagnóstico si han podido excluirse otras causas.

En ciertos casos de enfermedad maligna ampliamente diseminada se encuentran niveles elevados, en el infarto del miocardio su nivel se eleva entre las 12 y 24hs postinfarto y tiene su máxima concentración entre 2 y 4 días después permaneciendo elevada entre 8 y 14 días con una frecuencia del 83%. En la enfermedad hepática se pueden encontrar valores elevados en aproximadamente tres cuartas partes de los casos de hepatitis aguda; sin embargo, se encuentran valores normales en la mayoría de los enfermos con ictericia obstructiva, con cirrosis compensada y con infecciones crónicas. Las anemias hemolíticas se presentan con niveles elevados de DHL porque los eritrocitos hemolisados liberan su DHL en el plasma. Las anemias megaloblàsticas también presentan niveles elevados de DHL, supuestamente por la hemólisis intramedular (en el espacio medular). La concentración normal fluctúa 105 a 333 UI/L (unidades internacionales por litro), y se pueden observar cifras de 1500 U a los 5 días del infarto, en procesos malignos hasta 2500U, en hepatitis aguda de 1000U y en anemias megaloblàsticas hasta 2000U.

Se ha mencionado que esta medición, en caso de resultar elevada, simplemente indica que el paciente presenta enfermedad activa y para verificar daño tisular.Otras afecciones bajo las cuales se puede realizar el examen son: Anemia por deficiencia de B12, Anemia megaloblástica, Anemia perniciosa.

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Los niveles superiores a los normales pueden ser indicio de:Accidente cerebrovascular (ACV, apoplejía) Ataque cardíaco Anemia hemolítica Presión arterial baja Mononucleosis infecciosa Deficiencia de sangre (Isquemia intestinal ) Enfermedad hepática (por ejemplo, hepatitis) Lesión muscular Distrofia muscular Estados (neoplásicos) de formación anormal de nuevos tejidos Pancreatitis Muerte de tejido (infarto pulmonar)

OBJETIVO:Cuantificar la concentración de Deshidrogenasa Láctica en una muestra problema, mediante el empleo de una prueba cinética a fin de establecer su importancia en el clínica en toda destrucción hìstica, infecciosa o neoplàsica o bien en patologías relacionadas con el metabolismo del lactato y piruvato.

MATERIAL Y EQUIPO:

Tubos de ensaye de 13 x 100 mmGradillaPipeta de 1 mL.Micropipetas de volumen variablePuntas para micropipetaEspectrofotómetroKit cinético de LDH, SERA-PAK Plus.Suero sanguíneo problema

PROCEDIMIENTO:

Longitud de onda............................340 nm Temperatura.................................... 30 °CCubeta............................................. 1 cm. Paso de luzLeer contra blanco de agua destilada.

Pipetear en un tubo:

MuestraReactivo de uso

20μL1.0 mL

Mezclar y, tras una incubación de un minuto a 30°C, medir el cambio de densidad óptica (ΔDO/min) durante tres minutos.

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Cálculo: Actividad (U/L) = ΔDO/min x 8.095

VALORES DE REFERENCIA:140 – 280 U/L

BIBLIOGRAFÍA:1. M.J. Lynch. et.al. Métodos de Laboratorio. 2ª. Edición 1977. editorial Interamericana.2. G. Angel M. / M. Angel R. Interpretaciòn clínica del laboratorio. 5ª. Ediciòn. Editorial Panamericana.1996.3. Alfonzo Balcells. La Clìnica y el Laboratorio. 18ª. Ediciòn. Editorial Masson. 2001.4. Bayer.Test cinètico de Deshidrogenasa Làctica. SERA-PAK Plus. Argentina.5. http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003471.htm 6. John A. Koepke. Analisis de laboratorio Clìnico para diagnósticos.1985. Editorial Limusa.

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CULTIVO Y ANTIBIOGRAMA DE EXUDADO FARINGEO

INTRODUCCIÓN:

La flora de la región faríngea presenta problemas peculiares para el aislamiento e identificación de microorganismos, tanto por lo que se refiere a los componentes de la flora normal como a microorganismos con acción patogénica. Es importante recordar que algunos microorganismos tienen capacidad patogénica definida y su presencia es un indicio claro de enfermedades, en tanto que otros, llamados “oportunistas” guardan una posición ambigua y pueden encontrarse tanto como componentes de la flora normal, como asociados a procesos patológicos causados por otros microorganismos que son los verdaderos responsables (por ejemplo virus). Los métodos utilizados deben seleccionarse de tal manera que permitan tanto el aislamiento de microorganismos gram positivos como de gram negativos, además de detectar algunos otros agentes específicos de enfermedades. El aislamiento de gram positivos se deberá orientar al cultivo de estreptococos y estafilococos y determinación de sus características de hemólisis. No se debe olvidar que en el exudado faríngeo es posible encontrar enterobacterias, las cuales desempeñan el papel de oportunistas en algunos estados patológicos, por lo que su aislamiento e identificación pueden ser de utilidad tanto para evaluar la evolución del padecimiento como para orientar sobre el manejo del mismo. La mayoría de las faringitis son provocadas por virus, tanto en los adultos como en los niños, alcanzando una frecuencia en el hombre del 90 al 95% y en los menores de edad varían del 80 al 85%. Para obtener resultados óptimos deberán tomarse las muestras antes del inicio de la terapia antimicrobiana y de los sitios afectados como las amígdalas, pared posterior de la faringe y en general de cualquier área que manifieste signos de inflamación, exudados y úlceras, procurando no tocar con el hisopo la lengua, labios ni los otros anexos de la cavidad bucal del paciente. Los microorganismos normales de la garganta y de la nasofaringe son, entre otros: el Streptococcus viridans, Hemophilus hemolyticus, Staphylococcus epidermidis, Neisseria catarrhalis, difteroides, Escherichia coli, Enterobacter-Klebsiella, Estreptococos no hemolíticos, proteus y Actinomyces naeslundii. Los microorganismos que pueden tener importancia patógena comprenden: el Diplococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes (grupo A, y posiblemente B, C, y G), Staphylococcus aureus, Neisseria meningitidis, Hemophilus influenzae, Bordetella pertusis, Corynebacterium diphteriae, Cándida albicans, Actinomyces israelii y Borrelia vincentii. Al valorar los cultivos de garganta y de la nasofaringe, es importante recordar que un predominio inusitado de un microorganismo determinado, aunque pueda considerarse como uno de los normales, quizá tenga alguna importancia y que hay que informar sobre este hallazgo. En ciertas condiciones puede encontrarse que un organismo de los llamados normales ejerce un efecto pernicioso.

OBJETIVO:

Determinar la presencia de diversos focos infecciosos en las enfermedades que involucran al tracto superior respiratorio, mediante la realización de cultivos de exudados de faringe y nasofaringe, a fin de correlacionar el desarrollo de diversos microorganinismos, su importancia clínica y su comportamiento ante algunos antibióticos.

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MATERIAL Y EQUIPO:

Hisopos estérilesAbate lenguas estérilesAsa de platinoPinzas de disección PortaobjetosPipetas pasteurMechero de bunsenCubre bocasMedio de cultivo S-110Base agar sangreMedio de transporte de StuartAgar nutritivoSensidiscos de antibióticos para Gram positivosSensidiscos de antibióticos para Gram negativosCristal violetaSolución de lugolSafraninaSol. Alcohol-cetonaAceite de inmersiónMicroscopioEstufa bacteriológicaColony CounterPaciente o muestra con patología compatible

TÉCNICA:

a) Toma del exudado.1.Con ayuda de un depresor lingual presionar la lengua en introducir en la boca un hisopo estéril, teniendo el cuidado de no rozar la lengua u otra superficie no elegida para la toma de la muestra, haciéndolo rotar sobre la superficie elegida.2. Realizar un extendido en un portaobjetos limpio y fijar al calor.3. Inmediatamente depositar el hisopo en un medio de transporte de stuart hasta su inoculación en el medio de cultivo.

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b) Tinción de Gram

Una vez secada y fijada la extensión tratar la extensión de la siguiente manera:1.Teñir la extensión durante 1 minuto con cristal violeta.2. Lavar brevemente con agua corriente.3. Añadir solución de lugol y reposar por 1minuto.4. Lavar con agua corriente.5. Decolorar rápidamente con alcohol-cetona 1:1.6. Aplicar coloración de contraste con safranina durante 10seg.7. Lavar con agua corriente.8. Secar y examinar al microscopio con el objetivo de 100x1.25 de inmersión9. Resultados: Los organismos gram positivos se tiñen de violeta; los gram negativos de rojo.

c) Cultivo

1. Cerca de un mechero inocular con el hisopo una pequeña porción del exudado en cada uno de los medios dispuestos: S-110, Gelosa sangre. 2. Estriar con ayuda de un asa de platino , previamente esterilizada en el mechero, según el esquema siguiente:

3

2

1

3. Incubar en la estufa bacteriológica a 37°C x 24hs.4. Observar las características coloniales.5. Tomar una porción de una colonia aislada y proseguir con la tinción de Gram.

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d) Prueba de antibiograma

1. Cerca de un mechero, tomar una colonia aislada con un hisopo estéril y estriar sobre una placa de agar nutritivo cubriendo toda la superficie.2. Con una pinza de disección esterilizada tomar un sensidisco para gram positivos o negativos según sea el caso, y depositarlo en la superficie de la placa de agar nutritivo previamente inoculada, haciendo presión para favorecer el contacto.3. Incubar en la estufa bacteriológica a 37°C x 24hs.4. Resultados: La aparición de un halo de inhibición de crecimiento alrededor de un disco, se interpretará como que el microorganismo es sensible a ese antibiótico, mientras que la ausencia del mismo indicará resistencia.

BIBLIOGRAFÍA:1. Manual de Medio de Cultivo. BIOXON. Becton Dickinson de México, S.A. de C.V.2. M.J. Lynch, et.al., Métodos de Laboratorio.2a. Edición. Editorial Interamericana.3. Todd Sanford. Diagnóstico Clínico por el Laboratorio. 6ª. Edición. Editorial Salvat.4. Marcus A. Krupp I.M. Manual de Diagnóstico Clínico y de Laboratorio. 8ª. Edición. Editorial Manual Moderno.

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DETERMINACIÓN DE CREATININA Y DEPURACIÓN DE CREATININA

INTRODUCCIÓN:

La creatinina es un producto final del metabolismo muscular. Se origina a partir de la creatina por pérdida de una molécula de agua (anhídrido). A su vez, la creatina se produce por hidrólisis del fosfato de creatina, por acción de la creatin-fosfo-quinasa (CPK), apareciendo como metabolitos de dicha reacción del fosfato energético y la creatina. El radical fosfato puede aportar energía directamente por dicha reacción o a través de su acoplamiento a una molécula de ADP para formar ATP y posterior hidrólisis por acción de la ATPasa. En el músculo estriado, se encuentra el 98% de toda la creatina del organismo.

La cantidad de creatinina excretada está en relación con el desarrollo muscular del individuo y por esto es mayor en el hombre que en la mujer, y en los atletas que en los individuos no musculados. Los niveles de creatinina sanguínea se utilizan como índice de la función renal, debido a que es una sustancia que no tiene umbral renal, o sea que, en cuanto aparece en sangre, es eliminada y conserva niveles muy bajos en sangre, cuando este nivel aumenta, se debe a una nefropatía. La eliminación de la creatinina en la especie humana tiene lugar casi exclusivamente a través de la filtración glomerular, siendo un importante índice del funcionalismo renal. La elevación de su valor suele ir parejo con la urea, aún cuando es más tardía, en la uremia prerrenal circulatoria la creatinina aumenta también, pero no en la histolítica ( sangre en intestino, etc..) A diferencia de la urea, la eliminación de la creatinina por la orina no viene afectada por la diuresis, al mismo tiempo que para una misma persona es muy constante su eliminación diaria con casi independencia de la dieta alimenticia, siendo la masa muscular el factor condicionante más directo de su excreción total por día. Tiene particular interés diagnóstico y pronóstico en los siguientes casos:Nefropatía. Cuando es una insuficiencia renal con uremia se observan cifras de creatinina superiores a 5mg%, el pronóstico es fatal a corto plazo. Esto solo sucede en las fases avanzadas ya que en los precoces, dada la facilidad de eliminación de creatinina, solo aumenta el ácido úrico y la urea. En la Nefritis aguda generalmente no hay elevación, en los casos en que existe (40%) es un cambio reversible y de escaso valor pronóstico. En la Nefrosis por tóxicos (Hg y Ag) es donde se observan mayores elevaciones. En la Insuficiencia circulatoria con déficit prerenal de sangre al riñón: Insuficiencia cardíaca avanzada, hipovolemia por deshidratación y depleción salina (digestiva, sudoral profusa, diurética-coma diabético-, ciertas insuficiencias suprarrenales, etc.). En Obstrucciones urinarias ( afecciones de próstata, vejiga, uréter, etc.) y en la anuria refleja (cálculos uretrales, etc.) se producen así mismo elevaciones marcadas de la creatinina (incluso 30mg o más), igualmente reversibles con la reparación de la obstrucción. En el Gigantismo y en la Acromegalia, discretas elevaciones.

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Pruebas de Depuración. Estas pruebas se han ideado para medir la capacidad de los riñones para depurar la sangre de productos de desecho o materiales extraños (inulina, yodopiracet, etc.) y excretadas en la orina. Si se conoce la concentración sanguínea del material de prueba y la cantidad eliminada en orina, se puede determinar la depuración en términos de mililitros de sangre depurada por unidad de tiempo. La creatinina se filtra a nivel del glomérulo. En condiciones normales, la depuración de creatinina endógena se acerca a la tasa de filtración glomerular. En resumen podemos decir que la eliminación de creatinina es un intervalo de 24Hs en un valor muy constante, dependiente principalmente de la masa muscular del individuo, y es que por otro lado el cálculo del aclaramiento de la creatinina será un parámetro directo del funcionalismo renal. Se pueden usar períodos de depuración de 2 a 6 hs. Para el período de depuración corto es preferible que el enfermo se encuentre en ayunas. Se obtiene una muestra urinaria correspondiente a 2 ó 6 hs. y se toma una muestra de sangre aproximadamente en el punto medio del período de recolección de la orina. Para el cálculo de la depuración se determina las concentraciones de creatinina en plasma y orina, así como el volumen urinario. Es esencial el cuidado en las determinaciones químicas de la creatinina. Pueden observarse falsos resultados bajos de depuración, debido a la presencia del cromógeno no creatinínico plasmático, como ocurre en algunos enfermos con cardiopatías. En caso de insuficiencia renal avanzada, la secreción tubular de creatinina es la responsable de una proporción significativa del total de creatinina excretada. En presencia de insuficiencia renal crónica, la depuración de creatinina, da valores más altos que los de inulina.

OBJETIVO:

Cuantificar la concentración de Creatinina y Depuración en una muestra problema, mediante el empleo de una prueba cinético-calorimétrica a fin de establecer su importancia en el diagnóstico clínico de patologías relacionadas con el funcionamiento renal.

MATERIAL Y EQUIPO:

Tubos de ensaye de 13 x 100 mmProbetaGradillaPipetas PasteurPipetas graduadas de 2mLMicropipetas de volumen variablePuntas para micropipetaCentrífugaEspectrofotómetroKit cinético-colorimétrico de Creatinina, Spinreact Suero y Orina de 24hs. Problema

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TÉCNICA:a) Preparación de reactivo y muestra

1. Mezclar a partes iguales los reactivos R1 y R2, según la necesidad.2. En el caso de la orina, diluir esta 1:50 con agua destilada y multiplicar el resultado x 50.

b) Método

Standard MuestraSuero u orina diluidaStandardMezcla reactiva

--100μL1.0mL

100μL--1.0mL

Mezclar y poner en marcha el cronómetro.Anotar la D.O. a los 30seg. (E1), y a los 90 seg. (E2)Lectura a 490 nm (490 – 510)

c) Nomogramas para la determinación de la superficie corporal de niños y adultos:

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d) Cálculos

(E2 - E1) muestramg/dL creatinina = ---------------------------- x conc. standard

(E2 - E1) standard

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Depuración de Creatinina

V x OCL = ------------

S x 1440

CL = Depuración de creatinina (mL/min)V = volumen de orina de 24hs (mL)O = Concentración creatinina en orina (mg/dL)S = Concentración de creatinina en suero (mg/dL)

Depuración Corregida:

Depuración 1.73 metros cuadradosDe X ------------------------------------ = Depuración CorregidaCreatinina Superficie corporal

e) Valores normales:

Creatinina: Suero : 0.7 – 1.4 mg/dLOrina : 15 – 25 mg/Kg/24hs.

Depuración de Creatinina Corregida

Hombres : 110 – 150 mL/min.Mujeres : 105 – 132 mL/min.

BIBLIOGRAFÍA:1. Todd Sanford. Diagnóstico Clínico por el Laboratorio. 6ª. Edición. Editorial Salvat.3. Marcus A. Krupp I.M. Manual de Diagnóstico Clínico y de Laboratorio. 8ª. Edición. Editorial Manual Moderno.4. Alfonso Balcells. La Clínica y el Laboratorio. 18ª.Edición. Editorial Masson. 5. Instructivo Test cinético-colorimétrico0. Spinreac, S.A.

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DETERMINACIÓN DE UREA

INTRODUCCIÓN:

La urea es el principal componente nitrogenado de la orina y producto del metabolismo proteico.Los aminoácidos absorbidos en las vellosidades intestinales pasan de la vena porta al hígado, son desaminados, esto es, pierden sus grupos amino nitrogenados que son transformados en amoniaco. Este ultimo es muy tóxico especialmente para el cerebro, razón por la cual debe ser eliminada con la misma rapidez con que se forma. En el hígado el amoniaco se combina con bióxido de carbono para formar urea, que es liberada en la sangre y secretada al final en la orina.La urea se forma principalmente en el hígado (de menor cantidad en el riñón) a partir del amoniaco, de ciertos grupos aminos y del CO2, en presencia de ATP, por medio de una secuencia cíclica de reacciones enzimáticas mismas que pueden esquematizarse:

Ornitina + CO2 + NH3 Citrulina

Citrulina + NH3 Arginina

arginasaArginina + H2O ------------- Ornitina + Urea

La urea, producto final del metabolismo proteico, se excreta por el riñón, en el filtrado glomerular, la concentración de urea es la misma que la del plasma. La resorción tubular de la urea varía en forma inversamente proporcional a la velocidad de flujo urinario. Por esto, la urea es una medida de la filtración glomerular menos útil que la creatinina, ya que esta última no se resorbe. El nitrógeno de la urea sanguínea varía directamente con la ingestión proteica e inversamente con la tasa de excreción de la urea. El valor sérico se halla elevado en los casos siguientes:

a) Insuficiencia renal: nefritis, aguda y crónica, insuficiencia renal aguda (necrosis tubular) obstrucción de las vías urinarias.

b) Aumento del metabolismo nitrogenado asociado con disminución del flujo renal sanguíneo o función renal alterada. Deshidratación de cualquier índole, hemorragia gastrointestinal (combinación de una absorción proteica elevada por la ingestión de la sangre, junto con disminución del flujo renal)

c) Disminución del flujo sanguíneo renal: Choque, insuficiencia suprarrenal, ocasionalmente insuficiencia cardiaca congestiva.

El valor serico se halla disminuido en los casos siguientes: En la insuficiencia hepática, nefrosis no complicada por insuficiencia renal y caquexia. Casos raros pero probables:

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Ingesta elevada de bebidas o administración endovenosa abundante de líquidos; durante el embarazo, por aumento del filtrado glomerular. Efecto de los medicamentos sobre los resultados de laboratorio: elevados por muchos antibióticos que alteran la función renal, por la guanetidina, metildopa, indometacina, isoniacina, propranolol y los diuréticos potentes ( volumen sanguíneo y flujo renal sanguíneo disminuido)

OBJETIVO:Cuantificar la concentración de Urea en una muestra problema, mediante el empleo de una prueba cinético “Ureasa” a fin de establecer su importancia en el diagnóstico clínico de nefropatías y/o enfermedades extrarrenales.

MATERIAL Y EQUIPO:

Tubos de ensaye de 13 x 100 mmGradillaPipetas PasteurPipetas graduadas de 2mLMicropipetas de volumen variablePuntas para micropipetaCentrífugaEspectrofotómetroKit cinético de Urea, Spinreact Suero problema

TÉCNICA:

a) Preparación de reactivo Disolver el contenido del vial de enzimas R2 en el frasco de solución Tampón R1

b) Método

Temperatura ....................... 25/30/37°CLongitud de onda ............... 340nm Paso de luz ......................... 1 cmLectura ............................... frente a aire o agua destilada

Pipetear en un tubo:

Muestra o standard ........................ 10 μLReactivo al uso .............................. 1.0 mLMezclar y anotar la disminución de extinción entre los 30 y los 90 segundos (Δ extinción)

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c) CálculosCon las diferencias de extinción anotadas, aplicar la siguiente ecuación: Δ extinción muestra ------------------------- x conc. Standard = Conc. MuestraΔ extinción standard

d) Valores normales

de 15 a 45 mg/dL

BIBLIOGRAFÍA:1. Todd Sanford. Diagnóstico Clínico por el Laboratorio. 6ª. Edición. Editorial Salvat.3. Marcus A. Krupp I.M. Manual de Diagnóstico Clínico y de Laboratorio. 8ª. Edición. Editorial Manual Moderno.4. Alfonso Balcells. La Clínica y el Laboratorio. 18ª.Edición. Editorial Masson. 5. Instructivo Test cinético-“Ureasa” Spinreac, S.A.

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DETERMINACIÓN DE PROTEINURIA

INTRODUCCIÓN:

La concentración de proteínas en la orina normal secretada en cantidades normales, es de alrededor de 2 a 8 mg/100mL. Se ha considerado normal en los adultos un límite superior de 150mg de proteína excretada por día. Los recién nacidos normales pueden presentar niveles superiores de proteína en orina durante los dos o tres primeros días de vida. La albúmina urinaria tiene las mismas propiedades inmunológicas ultracentrífugas que las plasmáticas. Las globulinas urinarias comprenden casi una mitad o los dos tercios de las proteínas urinarias normales; las globulinas predominantes son las α1 y α2, con cantidades más pequeñas que globulina β y γ . Con mayor frecuencia, un aumento en las proteínas urinarias de mas de 150mg por día es el resultado de una elevación del filtrado glomerular de proteínas, causado por lesiones glomerulares de algún tipo. En general; el índice de excreción de proteínas plasmáticas se relaciona por su tamaño molecular, por ejemplo, la albúmina y globulina α1 presentan un índice de aclaramiento mayor en pacientes con proteinuria que las globulinas β, γ y α2 . En la mayoría de procesos renales que implican proteinuria, la albúmina es la proteína predominante. El grado de proteinuria varía con el tipo de nefropatía y con la gravedad del proceso. La existencia de proteinuria persistente en cualquier cantidad, incluso en personas aparentemente sanas, indican generalmente la existencia de un proceso renal mínimo. El grado de proteinuria puede relacionarse con el proceso específico:Proteinuria Intensa. (más de 4g/día).Es caracterizada por el síndrome nefrótico. También puede observarse en la glomerulonefrítis aguda y crónica, nefritis lípica, amiloidosis renal y en la congestión venosa renal de carácter grave.Proteinuria Moderada. (de 0.5 – 4.0g/día). Puede observarse en gran número de nefropatías, que incluyen las mencionadas antes, la nefroclerosis y pielonefritis con hipertensión, también el mieloma múltiple, nefropatía diabética, preeclampsia del embarazo y gran variedad de nefropatías toxicas, que comprenden la nefritis por radiación).

Proteinuria Mínima. (menos de 0.5g/día). Puede observar en la pielonefritis crónica, en la cual puede ser intermitente, y en las fases relativamente inactivas de los procesos glomerulares. Se observa en los riñones poliquisticos y en los procesos tubulares renales.

Proteinuria Postural. La proteinura postural u ortostática se manifiesta en un 3 – 5% de adultos jóvenes sanos. En estas personas se observa proteinuria durante el día, pero no por la noche cuando el sujeto adopta la posición de decúbito.

Proteinuria Funcional. Puede asociarse con fiebre, exposición al frió, tensiones emocionales, o ejercicios físicos muy intensos o desacostumbrados. La proteinuria de este tipo es transitoria y claramente benigna, aunque puede persistir después de tres días de haber efectuado un ejercicio intenso.

En general la presencia de proteínas en orina indica aumento de la permeabilidad glomerular y cierto grado de menor disminución de la resorción proteica en el túbulo. De la

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cantidad de proteína (albúmina) no puede inferirse la gravedad de la afección, pero para un mismo enfermo, el aumento o disminución de la proteinuria permite enjuiciar la progresión o regresión del proceso causal; con la salvedad, todavía, de que precisamente la fase terminal, esclerosa de las nefropatías cursa con disminución y hasta desaparición de la proteinuria. Para seguir la evolución de una proteinuria hay que tener en cuenta que las comparaciones cuantitativas correctas requieren examinar la albúmina en muestras de orina de 24hs., ya que las variaciones de las diuresis enmascaran las variaciones reales de la proteinuria. Cifras superiores a 250mg/24hs. requieren exploraciones uronefrológicas y por encima de 1 – 2g/24hs. hay que sospechar de nefropatías importantes.

OBJETIVO:Determinar la concentración de proteínas en orina, mediante la prueba de Bernard y Scher y el Método de coagulación mediante calor, a fin de correlacionar su importancia clínica en el diagnóstico de patologías relacionadas.

MATERIAL Y EQUIPO:Pipetas graduada Tubos de ensayoGradillaPipetas PasteurÁcido sulfosalicílico al 10% P/V en metanol al 50%Orina problema de 24 hs.

TÉCNICA:a) Método cualitativo

Se colocan 3mL de orina en un tubo de ensayo por encima de ellos una cantidad equivalente de ácido sulfosalicílico al 10% p/v en alcohol metílico al 50% el cual deberá depositarse por las paredes del tubo. Si existen proteínas aparece un precipitado nebuloso en la interfase.

b) Método Semicuantitativo Preparación del reactivo: Ácido acético glacial, 23.7mLAcetato sódico anhidro 7.4gAgua destilada c.b.p.100mL

Procedimiento:Centrifugar 10mL de orina para aclarar en un tubo de ensayo y añadir 3 gotas del reactivo. Mézclese invirtiéndolo. Si se precipita moco quitarlo por filtración o centrifugación. Calentar la parte superior de la orina a la llama hasta el punto de ebullición y comparar entonces la mitad superior con la inferior.

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Interpretación:

Sin diferencia negativoTurbidez escasa indicios alrededor de 5mg/100mLTurbidez evidente conhuellas visible + de 10 – 30mg/100mLTurbidez moderada + + de 40 – 100mg/100mLTurbidez notable + + + de 200 – 500mg/100mLFloculación intensa + + + + de 500 – más mg/100mL

BIBLIOGRAFÍA:1. Todd Sanford. Diagnóstico Clínico por el Laboratorio. 6ª. Edición. Editorial Salvat.3. Marcus A. Krupp I.M. Manual de Diagnóstico Clínico y de Laboratorio. 8ª. Edición. Editorial Manual Moderno.4. Alfonso Balcells. La Clínica y el Laboratorio. 18ª.Edición. Editorial Masson.

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BIOMETRÍA HEMÁTICA:

INTRODUCCIÓN:

La sangre esta formada por dos partes fundamentales, una parte líquida constituida por el plasma y otra parte sólida que corresponde a los elementos figurados suspendidos en ella, dichos elementos son los eritrocitos, leucocitos y plaquetas, cuando la sangre se coagula, el líquido que queda después de separa el coágulo, recibe el nombre de suero. Cuando se utiliza anticoagulante la parte líquida que se separa de los elementos celulares se denomina plasma, la diferencia fundamental entre plasma y suero, consiste en que el suero pierde el fibrinógeno proteico que se convierte en filamento insoluble de fibrina en el curso de la coagulación.La biometría hemática es una ciencia de los métodos estadísticos aplicada a estructuras y funciones de los seres vivos, al recuento y medición de las células, específicamente las sanguíneas.1,2

Fundamentalmente este estudio se halla divido en dos partes:

I. FÓRMULA ROJA:Esta se halla conformada de los siguientes parámetros:Hb. La hemoglobina, componente principal de los glóbulos rojos, es una proteína conjugada que sirve de vehículo para el transporte de oxígeno y de carbono.Hto. El hematocrito representa la proporción de glóbulos rojos a plasma en la sangre circulante y se expresa en volúmenes por ciento. Aproximadamente, la cifra del hematocrito nos indica el número de hematíes por milímetro cúbico para lo cual se le suma el 10% de su valor y se expresa en millones. El valor del hematocrito depende, en primer lugar, del número de hematíes circulantes, pero también de su forma y tamaño.VCM. El volumen corpuscular medio. Para conocer las dimensiones, en el espacio, de los eritrocitos, no basta la determinación del tamaño de los hematíes por la medición microscópica de su diámetro, dadas la morfología discoidea de estas células y las variaciones de unas a otras. Por lo que se recurre al VCM que es el volumen medio de los hematíes individuales en micras cúbicas (3) o femtolitros (fl).CCMH. Es la concentración de hemoglobina por eritrocito en %.VG. El contenido hemoglobínico de los hematíes puede expresarse de diversas formas. El más sencillo y conocido es el valor globular o cromemia (CI= índice de color).HCM. La hemoglobina corpuscular media, es el contenido (peso) de hemoglobina en un hematíe individual medio, en microgammas () o picogramos (pg).RDW ó ADE. La amplitud de distribución eritrocitaria es el recuento diferencial de tamaños y grado de dispersión de los hematíes.1,2,3,4

SEMIOLOGÍA MORFOLÓGICA ERITROCITARIA.4

1. Poiquilocitosis: Desigualdad de forma, que no es circular, sino piriforme o abigarrada entre los hematíes. Suele aparecer en las anemias hipocromas y en síndromes mieloproliferativos (mielosclerósis primaria con metaplasia mieloide), y en el cáncer metastásico éseo.

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2. Planocitos o Leptositos: Adelgazamiento aplanado del disco eritrocitario. También es frecuente en las anemias hipocromas.

3. Anulocitos: Hematíes “en anillo”, por exagerada depresión central muy pálida. Igual presentación que los planocitos: unos y otros significan reducción del contenido hemoglobínico.

4. Esferocitos: Hematíes en bola, redondos, mas pequeños e hipercromáticos. Típicos de la anemia hemolítica constitucional (esferocitosis hereditaria).

5. Ovalocitos, eliptocitos: Eritrocitos alargados, en forma de huevo. Normal su hallazgo si es inferior al 10%. En mayor proporción en anemias ferropénicas y en las megaloblásticas. En la eliptositosis hereditaria alcanzan el 90% de los elementos rojos.

6. Dacriocitos (Teardrop): Formas en lágrimas o raquetas, propio de la mielofibrósis con metaplasia mieloide, pero también de trastornos de la hematopoyesis (anemia ferropénica o megaloblástica).

7. Esquistocitosis o fragmentositosis: Formas en triángulo, yelmo, casco o lágrima, etc.. por fragmentación de hematíes. Suelen registrarse en la hemólisis mecánica; p.ejm. en la anemia microangiopática o por prótesis valvulares y en la púrpura trombótica trombocitopénica.

8. Dianocitos o células en Diana (Target cells): Hematíes con zona central abultada, mas coloreada rodeada de halo pálido y anillos periféricos normales. Aparecen en anemias hemolíticas hemoglobinopáticas (talasemia, HbF, A2 o C). También en ictericia obstructiva o hepatocelulares (Sherlock) y postesplenectomía.

9. Drepanocitos o células falsiformes: Hematíes en forma de “guadaña” o semiluna (sickle-cells) típicos de la hemoglobinopatía S, pero también en otras.

10. Acantocitosis: Hematíes erizados con espinas o espículas (burr-cells). Corresponde a una abetalipoproteinemia (con retinitis pigmentaria y ataxia) o a la neuroacatocitosis (con corea) pero también se ha descrito en las anemias hemolíticas microangiopáticas, en la púrpura trombótica trombopénica, en le déficit de piruvato kinasa incluso en carcinomas cirrosis y uremia. No confundirla con las formas espinosas del prominencias cortas (equinocitos), artefacto osmótico por secado lento de la preparación; pero tambien se ven por hepatopatías alcoholicas y en el simdrome de Zieve (Spur-cells).

11. Estomatocitos: Hematíes con una depresión central en ranura o “boca” por carencia de ATPasa. Anomalía presente en una anemia hemolítica hereditaria (estomatocitosis) y algunas veces en hepatopatías, alcoholismo, saturnismo y también talasemia.

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OBJETIVO:Realizar la fórmula roja y la determinación adecuada de los parámetros que la conforman: Hemoglobina (Hb), hematocrito (Hto), Volumen corpuscular medio (VCM), Concentración corpuscular media de hemoglobina (CCMH), Valor globular (VG), Hemoglobina corpuscular media (HCM), Amplitud de distribución eritrocitaria (RDW ó ADE), y establecer la relación de sus valores con su importancia clínica.

MATERIAL Y EQUIPO:

Jeringa con aguja hipodérmica de 3 mL.Torundas de algodónAlcohol desnaturalizadoTubos de 13 x 100mm.TaponesGradillaCánulasTubos de WintrobePipeta de SahlíBoquillasGasasE.D.T.A.CianometahemoglobinaSangre venosa anticuagulada. (Se extraerá en el Laboratorio)CentrífugaEspectrofotómetro

PROCEDIMIENTOS:Toma de muestra. Extraer aproximadamente de 3-5mL de sangre (ver anexos) y depositar en un tubo de ensayo con EDTA, mezclar suavemente.

a) Determinación de hemoglobina.1. Con ayuda de una boquilla llenar una pipeta de Sahlí hasta la marca de 20 cmm. con sangre venosa previamente anticuagulada y mezclada. (no deben formarse burbujas de aire).2. En un tubo de ensayo con 5 mL de cianometahemoglobina diluir la muestra de sangre de forma homogénea.3. Dejar en reposo durante 10min. y leer en el espectrofotómetro a 540 nm. Ajustando a 100% de transmitancia ó cero de absorbancia con solución de cianometahemoglobina.

VALORES DE REFERENCIA:Hombres : 13.2 17 g/100mLMujeres : 12 – 16 g/100mLPromedio general: 14.5 g/100mL

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b) Determinación del hematocrito.La fuerza centrífuga aplicada, va sedimentando poco a poco los hematíes seguidos de leucocitos y plaquetas, esto nos permite calcular el volumen de hematíes sedimentado (hematocrito).

1. Con ayuda de una cánula llenar con sangre un tubo de Wintrobe hasta la marca de 10 (no debe contener burbujas de aire).2. Centrifugar durante 30 min. a 3000 rpm.3. Leer en la escala de la derecha y expresar en %.

VALORES DE REFERENCIAHombres : 40 – 52 %Mujeres : 37 – 47 %

c) Cálculo del Número de Eritrocitos

Al valor del hematocrito expresado en millones se le suma el 10% del mismo, Ejem:Hematocrito = 40% = 4 000 000 + 10% = 4 400 000 eritrocitos x mm3

VALORES DE REFERENCIA

Hombres: 5 000 000 x mm3Mujeres : 4 500 000 x mm3

d) Volumen Corpuscular medio.Permite conocer el volumen medio de cada eritrocito.

Se determina por cálculo mediante el empleo de la fórmula siguiente: Hematocrito

VCM = ---------------------------------------------------------- x 100 Dos primeras cifras del recuento de hematíes

VALORES DE REFERENCIA:

El resultado, expresado en micrones cúbicos o “femtolitros”, oscila normalmente entre 80 y

94; volumen corpuscular (normocitico). Valores superiores a 94 se observan en las anemias

macrociticas, e inferiores de 80 en las microciticas.

e) Concentración corpuscular media de hemoglobina.Se determina por cálculo mediante el empleo de la fórmula siguiente:

HemoglobinaCCMH = ------------------------------------- x 100

Hematocrito

50

VALORES DE REFERENCIA:Normal de 32 a 36 %. En las anemias ferroprivas se encuentran valores bajos (de 20 –

30%), en las anemias macrociticas la CCMH es normal o ligeramente baja.

f) Hemoglobina Corpuscular Media.Se determina por cálculo mediante el empleo de la fórmula siguiente:

HemoglobinaHCM = ------------------------------------------------------------------------- x 100

Dos primeras cifras del recuento de hematíes

VALORES DE REFERENCIA:Normal de 27 – 33 pg.

Las anemias hipocromas (ferropenicas, etc.) ofrecen valores inferiores a 27 y las hipercromas, superiores a 32 (megalocitarias: perniciosa y otras macrocitarias).

g) Valor globular.

Se determina por cálculo mediante el empleo de la fórmula siguiente:

Hemoglobina encontrada --------------------------------- Hemoglobina normalVG = ------------------------------------------ # de hematíes encontrados ----------------------------------- # de hematíes normales

VALORES DE REFERENCIA:

Normalmente el VG es 1, con oscilaciones entre 0.9 y 1.1, un volumen VG bajo inferior a 0.9 se observa en las anemias hipocromas y alto superior a 1.1 en las hipercromas, perniciosas, etc.

h) Amplitud de distribución eritrocitaria.

Este parámetro puede registrarse con histogramas de recuento diferencial de tamaños y grado de dispersión con ayuda de modernos aparatos electrónicos. La RDW ó ADE normal es de 11.5 – 14.5 %. La isocitosis y anisocitosis así comprobadas pueden ser un criterio para el diagnóstico hematológico de las anemias:

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CURVA DE PRICE-JONES

Microcitosis 30 % Isocitosis de células 20

Macrocitosis 10

4 6 8 10 12 Diámetro de hematíes en μm

VALORES DE REFERENCIA:

Diámetro promedio de Hematíes : 5.5 – 8.8 μm

Diámetro promedio de Leucocitos: 6 – 15 μm

Diámetro promedio de Plaquetas: 2 – 4 μm

ADE normal ADE alta

VCM normal

Enfermedad crónica Anemia sideroblásticaHemorragia aguda Anemia drepanociticaEsferocitosis hereditaria Mielofibrosis

VCM bajo

Talasemia minor Anemia ferropénicaHbE Hb-H

VCM alto

Talasemia aplásica Deficiencia de vitamina B12 o folatosAlcoholismo Anemia hemolítica autoinmuneSíndrome mielodisplásico Anemia por aglutininas frías.

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II.-FÓRMULA BLANCA:

Durante las infecciones y en toda reacción general de agresión, la fórmula blanca muestra variaciones según la fase en el tiempo, la virulencia del agente y la resistencia del organismo. Schilling ha establecido una “curva leucocitaria biológica”, típica y común al síndrome general parainflamatorio: la primera fase, de lucha, consiste en una leucocitosis neutrófila, con desviación a la izquierda (formas inmaduras) y granulaciones tóxicas; aneosinofília y linfo y monopenia. En la segunda fase, de defensa, aparece una monocitosis y en la tercera, de curación, una linfocitosis con reaparición de los eosinófilos. Se apartan de este patrón determinadas infecciones bacterianas. P.ejm. tifoidea, y la viriasis, que cursan generalmente con leucopenia. Tiene interés pronóstico seguir la evolución de la fórmula leucocitaria; una leucopenia con abundantes granulaciones tóxicas y marcada desviación a la izquierda en una sepsis o en otra infección habitualmente leucocitaria supone malignidad del proceso.

OBJETIVO: Aplicar los métodos de Neubauer y Hemocolorante en una muestra sanguínea problema, a fin de contabilizar glóbulos blancos y establecer la diferenciación celular.

MATERIAL Y EQUIPO:

Jeringa con aguja hipodérmica de 3 mL.Torundas de algodónAlcohol desnaturalizadoTubos de 13 x 100mm.TaponesGradillaPipeta de ThomaCámara de NeubauerBoquillasPortaobjetosGasasE.D.T.A.Líquido de TurkKit de HemocolranteAceite de inmersiónMicroscopioSangre venosa anticoagulada (se extraerá en el Laboratorio)Contador de célulasContador diferencial de células

PROCEDIMIENTOS:

a) Recuento de leucocitos.En el recuento de leucocitos totales no existe distinción entre los cinco tipos de células normales. Para ello se emplea el llamado Reactivo de Turk a base de ácido acético glacial, agua destilada y violeta de genciana . Esta solución hipotónica tiene por objeto destruir los

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eritrocitos. El violeta de genciana permite reconocer fácilmente el líquido, y observar mejor los glóbulos blancos a los que tiñe ligeramente.

1. Con ayuda de una boquilla llenar con sangre la pipeta de Thoma hasta la marca de 0.5 y limpiar la punta de la pipeta con una gasa para quitar el exceso de sangre. MANTENER EN POSICIÓN HORIZONTAL.

2. En rápida posición vertical, aspirar el liquido de Turk hasta la marca de 11,evitando que se formen burbujas de aire en la pipeta, y regresar a la posición anterior.

3. Tapar la pipeta de ambos lados para evitar que salga el contenido y agitar por 2 minutos para hacer una mezcla homogénea.

4. Desechar las dos primeras gotas y la tercera colocarla entre la cámara de Neubauer y el

cubreobjetos.

5. Observar al microscopio con el objetivo seco débil (10 x /0.22) y contabilizar los leucocitos en los 16 cuadros (señalado en el esquema) de los 4 cuadrantes de la cámara.

1 2 Observación del campo

En el microscopio

3 4

Representación del rayado de la Cámara de Neubauer.

6. Cálculo: Número de leucocitos por mm3 = leucocitos contados x 50

VALORES DE REFERENCIA:

Leucocitos x mm3 : 5 000 a 10 000

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b) Diferenciación de leucocitos. (apoyarse en el esquema de tipos celulares)

Una parte importante de la biometría hemática es el examinar los frotis sanguíneos, y la fidelidad de la información así obtenida depende de la calidad de las extensiones. Cada tipo de célula (neutrófilos, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos, en orden decreciente de cantidad), tiene su función particular en la defensa del organismo contra las amenazas exógenas.

Preparación del frótis sanguíneo:

1. Con ayuda del tapón del tubo de ensaye depositar una pequeña gota de sangre en uno de los extremos de un portaobjetos.2. Colóquese el extremo de un segundo portaobjetos sobre la gota de sangre, recorriendo la superficie en la siguiente forma:

portaobjetos deslizar enesta dirección

mantener fijo el portaobjetos

Gota de sangre pequeña

3. Dejar secar el frotis al aire4. Sumergir el frotis en la solución fijadora 5 veces durante 1 seg. c/u, escurrir el exceso.5. Sumergir el frotis en el hemocolorante # 1, 5 veces durante 1 seg. c/u escurrir el exceso. 6. Sumergir el frotis en el hemocolorante # 2, 5 veces durante 1 seg. c/u escurrir el exceso.7. Lavar con agua destilada y dejar secar.8. Observar al microscopio con objetivo de 100 x /1.25 con una gota de aceite de inmersión, según el esquema siguiente:

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VALORES DE REFERENCIA:

Neutrófilos segmentados 55 – 65 %Neutrófilos en cayado 3 - 5 %0Esosinófilos 0.5 – 4 %Basofilos 0 - 0.5 %Monocitos 4 - 8 %Linfocitos 25 - 35 %

BIBLIOGRAFÍA:1. Todd-Sanford. Diagnóstico Clínico por el Laboratorio.6ª. Edición 1978. Editorial Salvat.2. M.J. Lynch. et.al. Métodos de Laboratorio. 2ª. Edición 1977. editorial Interamericana.3. Marcus A. Krupp.et.al. Manual de Diagnóstico Clínico y de Laboratorio. 8ª.edición 1985. Editorial Manual Moderno.4.Alfonso Balcells. Ka Clínica y el Laboratorio 18a. Edición 1999. Editorial Masson.

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TIEMPO DE PROTROMBINA (TP)

INTRODUCCIÒNCuando uno sangra, el cuerpo inicia una serie de actividades que ayudan a que la sangre se coagule, lo cual se denomina cascada de la coagulación. La coagulación plasmática cumple la función de generar fibrina, polímero insoluble que dará consistencia y estabilidad al coágulo. El sistema plasmático de la coagulación está integrado por diversos factores que son enzimas circulantes en forma inactiva (cimógenos) denominadas serin-proteasas. Desde el punto de vista funcional, están agrupados en tres sistemas: El de activación intrínseca (factores XII, XI, IX, VIII, precalicreìna, y cininògeno de alto peso molecular); El de activación extrínseca (factor VII) y una vía común (factores V, X, II y I); Mientras que desde el punto de vista bioquímico se pueden dividir en tres grupos: Grupo I del Fibrinógeno, comprende los factores I, V, VIII y XIII; se hallan en los gránulos alfa de las plaquetas, se consumen totalmente durante la coagulación, no se afectan por los anticoagulantes ya que su síntesis no depende de vitamina K, se incrementan en la inflamación aguda y no se absorben con sulfato de bario o sales similares. Grupo II Protrombìnico. Incluye los factores II, VII, IX, X y las proteínas C y S, se sintetizan en los hepatocitos, para lo que requieren vitamina K; no se consumen por completo durante la coagulación, se afectan por ingesta de anticoagulantes orales y se precipitan con sulfato de bario o hidróxido de aluminio. Grupo III del Sistema de activación por contacto, comprende los factores XII, XI, cininògeno de alto peso molecular y precalicreìna, no se consumen totalmente durante la coagulación y precipitan con sulfato de bario e hidróxido de aluminio.

La prueba del tiempo de protrombina (TP), como fue originalmente diseñada por Quick, ha sido utilizada ampliamente durante varios años como una prueba pre-operatoria para conocer ciertos factores de coagulación y en el monitoreo de la terapia anticoagulante oral. El TP es un examen de sangre que mide el tiempo que le toma a la porción líquida de la sangre (plasma) coagularse, es un examen de detección amplio para muchos tipos de trastornos hemorrágicos e indicado cuando hay signos de un trastorno de coagulación de la sangre.

Este examen mide la capacidad de coagulación de los factores I (fibrinógeno), II (protrombina), V, VII y X. (activadores del sistema extrínseco) Cuando cualquiera de estos factores no está presente, el tiempo de protrombina se prolonga.

El tiempo de protrombina de un estado, mide el tiempo de coagulación del plasma de prueba después de la adición del reactivo de Tromboplastina que contiene cloruro de calcio. El reactivo proporciona una fuente de “tromboplastina tisular” activando el factor VII, y es por lo tanto sensible para todos los factores de las fases II y III. La deficiencia en los factores de la fase I (VII, IX, XI, y XII) no se detectan con la prueba.

El dicumarol y algunas drogas relacionadas reducen la actividad de los llamados factores “complejos de protrombina” II, VII, IX y X. Como la prueba de tiempo de protrombina es

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sensible a las deficiencias de todos estos factores excepto el IX, se ha probado que es útil en el monitoreo de la terapia anticoagulante oral y como prueba funcional hepática.

OBJETIVO:Determinar el tiempo de protrombina de una muestra sanguínea problema a fin de establecer su correlación clínica con algunos trastornos de la coagulación sanguínea.

MATERIAL Y EQUIPO:Citrato de sodio al 3.8%Jeringa con aguja hipodérmicaTubos de ensayo 13x100mmPipetas de 1mLPipetas PasteurBaño de MaríaCronòmetroSoluplastin (un vial)Gasas

Preparaciòn de la muestra:Obtenga la muestra en condiciones asépticas.Mezcle 0.2mL de citrato de sodio con 1.8mL. de sangre venosaCentrifugue la muestra a 3400rpm por 3min.Retire el plasma y colóquelo en otro tubo.

PROCEDIMIENTOColocar el plasma en baño de agua a 37ºC durante 2-3minEn un tubo de ensayo colocar0.2mL de soluplastin reconstituido y preincubar a 37ºC durante 2-3min.Pipetear 100µL de plasma preincubado y agregar rápidamente al tubo conteniendo 0.2mL de soluplastin, disparando simultáneamente el cronòmetro.Mantener el tubo dentro del baño y cerca de una fuente de luz. Previo al tiempo estimado de coagulación, sacar el tubo del baño, inclinar suavemente una o dos veces por segundo y detener el cronòmetro en el momento de la aparición del coàgulo.Reporte los resultados como tiempo de protrombina en segundos.

VALORES NORMALESEl rango normal es de 11 a 13.5 segundos, sin embargo, el concepto de "normal" varía de un laboratorio a otro.El tiempo de protrombina será más prolongado en personas que toman anticoagulantes.

Significado de los resultados anormales    El aumento en los tiempos TP puede deberse a:Obstrucción de las vías biliares Cirrosis Coagulación intravascular diseminada Hepatitis

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Sìndrome de Malabsorción Deficiencia de vitamina K Terapia con cumadina (warfarina)

Deficiencia del factor VII (proconvertina - factor estable) Deficiencia del factor X (Stuart – Power) Deficiencia del factor II (protrombina) Deficiencia del factor V (proacelerina-factor lábil) Deficiencia del factor I (fibrinógeno)

BIBLIOGRAFÌA  

1. http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003652.htm 2. Quick, A.J.Haemorragic diseases. Philadelphia. Lea & Febiger- 19573. http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003652.htm 4. Ferri FF. Ferri’s Clinical Advisor: Instant Diagnosis and Treatment. 2005 ed. St.

Louis, Mo: Mosby; 2005:1365.5. Hoffman R, Benz EJ, Shattil SS, et al. Hematology: Basic Principles and Practice.

4th ed. Orlando, Fl: Churchill Livingstone; 2005:2004-2005.6. 4. Alfonso Balcells. La Clínica y el Laboratorio 18a. Edición 1999. Editorial

Masson.7. Wiener Lab. Soluplastin. Instructivo 2000.8. G.J. Ruiz Arguelles. Fundamentos de Hematologìa.Ediciòn 1995.Editorial

Panamericana

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TIEMPO PARCIAL DE TROMBOPLASTINA (TPT)

INTRUDUCCIÒNLlamado también Tiempo de tromboplastina parcial activado (TTPA) ò Tiempo de Cefalina, es una prueba sensible a la deficiencia de factores procoagulantes del plasma así como a la presencia de ciertos factores de la coagulación, examina el tiempo que le toma a la sangre coagularse y puede ayudar a establecer si una persona tiene problemas de sangrado o coagulación, en sí este método sirve para comprobar la existencia de todos los factores de la “vía intrínseca” (XII, XI, IX y VIII), así como los de la vía común ( X,V, Protrombina(II) y fibrinógeno(I) ), el factor Fletcher, no siendo así con los trastornos plaquetarios, las deficiencias de los factores VII y XIII, ni los problemas vasculares. La prueba es muy adecuada para determinar problemas de sangrado o coagulación de la sangre, así como para el control de la terapéutica anticoagulante por heparina. También permite la identificación rápida de hemofílicos en potencia, a fin de poder someterlos a tratamientos preventivos pre quirúrgicos y evitar problemas hemorrágicos. Este examen generalmente se hace junto con otros exámenes, como un examen de protrombina.

OBJETIVODeterminar el tiempo parcial de tromboplastina de una muestra sanguínea problema a fin de establecer su correlación clínica con algunos trastornos de la coagulación sanguínea.

MATERIAL Y EQUIPO

Citrato de sodio al 3.8%Jeringa con aguja hipodérmicaTubos de ensayo 13x100mmPipetas de 1mLPipeta PasteurBaño de MaríaCronómetroAPTTestCloruro de calcio 0.025mol/LPlasma humanoGasas

Preparación de la muestra:Obtenga la muestra por venopunciònMezcle 0.2mLde citrato de sodio con 1.8mL. de sangre venosaCentrifugue la muestra a 3400rpm por 3min.Retire el plasma y colóquelo en otro tubo.

PROCEDIMIENTOPrecalentar el cloruro de calcio antes de realizar la prueba en baño de agua a 37ºC En un tubo de ensayo colocar 0.1mLde plasma problema Añadir 0.1mL de APTT, mezclar e incubar 3 min. a 37ºC.

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Agregar 100µL de cloruro de calcio y disparar simultáneamente un cronómetroAgitar brevemente para homogenizar el contenido, mantener en el baño unos 25seg- . Luego sacar el tubo del baño, inclinar suavemente una o dos veces por segundo y detener el cronómetro en el momento de la aparición del coágulo.Reporte los resultados como tiempo parcial de tromboplastina en segundos.

VALORES NORMALES    Entre 25 a 35 segundos.

El alargamiento del tiempo ocurre de forma patológica cuando alguno de los factores está por debajo de 15 -20% de su concentración normal. No se altera en la diátesis broncopatica o angiopàticas.Si la persona está tomando anticoagulantes, la coagulación toma hasta 2 ½ veces más tiempo.Los medicamentos que pueden afectar los resultados de un examen TPT abarcan antihistamínicos, vitamina C (ácido ascórbico), aspirina y clorpromazina (Thorazine).Significado de los resultados anormales    Un resultado de TPT anormal (demasiado prolongado) puede deberse a:Cirrosis Coagulación intravascular diseminada (CID) Deficiencia del factor XII Hemofilia A Hemofilia B Hipofibrinogenemia Malabsorción Enfermedad de von Willebrand Anticoagulantes para lupus

BIBLIOGRAFÌA:Ferri FF. Ferri’s Clinical Advisor: Instant Diagnosis and Treatment. 2005 ed. St. Louis, Mo: Mosby; 2005:1365.Hoffman R, Benz EJ, Shattil SS, et al. Hematology: Basic Principles and Practice. 4th ed. Orlando, Fl: Churchill Livingstone; 2005:2004-2005. http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003653.htm Lynch Mattew J. Métodos de Laboratorio Vol. 1. 2 edición. Editorial Manual Moderno. Impreso en México, 1987 Alfonso Balcells. La Clínica y el Laboratorio. 18ª.Edición. Editorial Masson. Viener Lab. APTTest. 2000 Rosario - Argentina.G.J. Ruiz Arguelles. Fundamentos de Hematologìa.Ediciòn 1995.Editorial Panamericana

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GRUPOS SANGUINEOS Y RH

INTRODUCCIÒNLa determinación del grupo sanguíneo a que pertenece el sujeto está indicada, corrientemente, ante la inminencia de una transfusión sanguínea, para evitar accidentes inmediatos. Hoy se sabe que, además del sistema ABO, existen otros muchos sistemas – MNSs, P, Q, Lutheran, Kell-Cellano, Lewis, Duffy, Sutter, Kidd y sobre todo, por su importancia clínica, el Rh- independientes del primero y entre si, de modo que cada individuo tiene unos caracteres hemáticos constitucionales que le son propios y que dependen de la combinación genética de los distintos factores.1,2

El primer sistema de grupos sanguíneos se describió al inicio del siglo XIX por Karl Landsteiner. El observó que los eritrocitos de algunos individuos se aglutinan cuando se mezclan con el suero de otros, pero no con su propio suero. Mediante esta técnica de aglutinación se calsifican a los eritrocitos individuales en cuatro tipos: A, B, AB, y O. Los estudios realizados por Landsteiner, llevaron a establecer que solamente se necesitan dos tipos de antígenos para explicar la presencia de los cuatro grupos sanguíneos del sistema. Los determinantes antigénicos de este sistema, son moléculas de carbohidratos, ubicados en la superficie de la membrana eritrocitaria; su especificidad o diferenciación reside en los azúcares terminales de un oligosacárido. La expresión de los determinantes antigénicos sigue un control genético, que ocurre a través de la producción de enzimas transferasas que conjugan los azúcares terminales a un carbohidrato original. Por tanto, se ha establecido que genes codifican a dichas enzimas par la manifestación del antígeno específico, siendo los genes alélicos A, B y H respectivamente los que determinan la conjugación de los azúcares. El gen H codifica para la enzima fucosiltransferasa que efectúa la adición de la fucosa a la cadena precursora y completa la cadena original de la cual se derivan los otros antígenos.El gen A codifica a la transferasa que va a conjugar la N-acetilgalactosamina a la cadena original completa, produciéndose así antígeno de tipo A. Las transferasas del grupo B conjugan a la cadena original la galactosa terminal expresando así el antígeno B.Existe también en el sistema el gen O que no produce transferasa por lo tanto no modifica la sustancia H o cadena original:

ESTRUCTURA QUÍMICA DE LOS ANTÍGENOS DEL SISTEMA ABO

GlucNac Gal GlcNac Gal ANTÍGENO A

Fuc

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Gal Gal GlcNac Gal ANTÍGENO B

Fuc

Gal GlcNac Gal ANTÍGENO H

Fuc

En el sistema ABO existen para cada antígeno en el suero la presencia de anticuerpos (aglutininas), considerados naturales y los anticuerpos inmunes. Los anticuerpos naturales son inmunoglobulinas de tipo IgM que en ocasiones puede activar el sistema de complemento. Dentro de este tipo de anticuerpos se consideran a los anti-A y ant-B, los cuales se originan de manera natural sin que el individuo haya recibido algún evento inmunizante. Los anticuerpos llamados inmunes son aquellos que se producen en un individuo como respuesta a una inmunización. En estos últimos se encuentran anticuerpos conocidos pero que han sufrido algún cambio conformacional o mal formados. Los anticuerpos inmunes en algunos casos son IgG que son peligrosos por que pueden atravesar la barrera placentaria y pueden reaccionar con algunos antígenos causando hemólisis en las células sanguíneas por lo que se conoce a estos anticuerpos también con el nombre de hemolisinas.Landsteiner, al efectuar reacciones anígeno-anticuerpo establece una relación recíproca entre los antígenos de los eritrocitos y los anticuerpos presentes en el suero. “La presencia de un antígeno en el eritrocito significa la ausencia de su aglutinina correspondiente en el suiero.3

A parte la prevención de los accidentes transfusionales, el interés clínico de la determinación del factor Rh estriba en el reconocimiento y prevención de la eritroblastosis fetal por incompatibilidad materno-fetal. Tiene su importancia también en medicina legal (exclusión forense de la paternidad y criminología).1,2

En la raza blanca, el 84% de los individuos son Rh-positivos y sólo el 16% Rh-negativos. Una madre Rh-negativa desarrolla anticuerpos frente a los hematíes del feto, si éste es Rh - positivo, desencadenando una eritoblastosis fetal, enfermedad hemolítica intrauterina, responsable de abortos por hidropesía fetal o mortinatos, de ictericia grave en el recién

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nacido con trastornos cerebrales (Kern – ikterus) irreversibles o simplemente de una anemia hemolítica en los casos menos graves .1,2

Naturalmente, esto tiene lugar porque el padre es Rh-positivo, ante la consulta de una mujer, a resultas de una determinación prematrimonial de los grupos sanguíneos, sobre la conveniencia eugenésica de tal enlace, téngase en cuenta que la concepción de los hijos que incurran en la eritroblastosis fetal es sólo una posibilidad remota y desde luego dependiente del carácter homocigótico o heterocigótico del padre. En este último caso, el 50% de los hijos serán Rh-positivos y, por otra parte, un número relativamente pequeño entre los matrimonios ♂ Rh+ /♀Rh- tienen hijos con eritoblastosis fetal .1,2

El primer hijo suele quedar indemne, y el segundo, aunque sufra la enfermedad, por lo general sobrevive. Hay casos, sin embargo, en que el primogénito nace muerto, lo cual obedece probablemente a que la madre esta previamente sensibilizada por transfusiones de sangre del grupo Rh-positivo. Por esto es inadmisible, actualmente, utilizar dadores Rh –positivos para las niñas y mujeres antes del climaterio sin averiguación previa de sus grupos sanguíneos.1,2

El enjuiciamiento serológico de una gestante requiere, no obstante, ciertas cautelas. Aunque un ascenso del título de anticuerpos Rh en los últimos meses del embarazo corresponde verosímilmente a la incompatibilidad maternofetal, puede tratarse todavía de una reacción inespecífica, “anamnésica”, por parte de la madre Rh-negativa, ante estímulos intercurrentes desconocidos. Por tanto, no es sensato hacer pronóstico absoluto ante partum en relación al feto a resultas de los anticuerpos maternos (Wolman). Estos pueden deberse a transfusiones anteriores al presente embarazo. El feto actual puede ser Rh-negativo como la madre y no afectarse por aquellos anticuerpos (Wolman). Sin embargo, como advierte Vives Mañé, la comprobación de anticuerpos incompletos monovalentes, mediante test de Coombs Indirecto, en la sangre de la madre y a título progresivo, en los últimos meses del embarazo, hace posible la presentación de accidentes en el niño.1,2

La conducta que hay que seguir ante un posible caso de incompatibilidad materno fetal es la siguiente:1,2

1. Averiguar el Rh de la madre. Esto debiera generalizarse a toda mujer embarazada; y es

más, toda mujer debiera conocer su Rh.

2. Si la madre es Rh-negativa, debe averiguarse también el Rh del marido. Si ése es positivo, el problema está en potencia.

1. Practicar con el suero de la madre frente a hematíes grupo “O” Rh-positivos el test de Coombs Indirecto. Si es positivo, la madre está inmunizada, bien por el niño que va a nacer, bien por anteriores transfusiones Rh positivas, etc..

2. Practicar durante el embarzo, especialmente los últimos meses, la titulación de anticuerpos. Un título alto aislado tiene menos valor que un título bajo, pero creciente, en relación al pronóstico.

3. Apenas nazca el niño, debe averiguarse su Rh (si es negativo no hay problema). Si es positivo, debe practicarse un test de Coombs directo, que nos dirá si los hematíes del niño están recubiertos de anticuerpos bloqueantes.

4. Bilirrubinemia en el niño; con el test de Coombs Directo y la cifra de bilirrubina sabremos si es necesaria una exanguinotransfusión.

5. Averiguar si el padre es homocigótico o heterocigótico, con vistas al pronóstico en futuros embarazos.

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OBJETIVO:Determinar mediante reacciones antígeno-anticuerpo el tipo sanguíneo y factor Rh de una muestra hemática.

MATERIAL Y EQUIPO:

Jeringa con aguja hipodermicaTorundas de algodónAlcohol desnaturalizadoTubos de 13 x 100mm.TaponesGradillaPortaobjetos o placas cóncavasAplicadores de maderaE.D.T.A.LancetasSuero Anti-ASuero Anti-BSuero Anti-Rh o DSolución salina 0.9%Sangre capilar o venosa (se extraerá en laboratorio)

PROCEDIMIENTOS:

a) Método de portaobjetos.

1.-Depositar una gota de sangre anticuagulada en 3 “pozos” de una placa cóncava respectivamente. 2. Agregar una gota de suero anti-“A” , anti “B” y anti D ó “Rh” (una para cada pozo respectivamente).3.-Mezclar con un aplicador de madera y agitar con movimientos de balanceo por unos segundos y observar resultados como máximo a los dos minutos.

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4. INTERPRETACIÓN:

GRUPO Anti-A Anti-B Anti-D ó RhA, Rh positivo + - +A, Rh negativo + - -B, Rh positivo - + +B, Rh negativo - + -AB, Rh positivo + + +

AB, Rh negativo + + -O, Rh positivo - - +O, Rh negativo - - -

NOTA: (+) = Aglutinación (- ) = No aglutinación

b) Método de tubo de ensayo1. Lavar los eritrocitos con solución salina al 0.9% , 3 veces por 3min c/u.1. Preparar una suspensión al 5% de eritrocitos en solución salina (0.25mL de eritrocitos + 4.75mL de solución salina al 0.9%)2. En tres tubos de ensayo depositar una gota de suero anti-“A” , anti “B” y anti D ó “Rh” (una para cada uno).3. Agregar una gota de la suspensión al 5% de eritrocitos a cada tubo.4. Mezclar y centrifugar a 2500 rpm por 1 min.5. Resuspender el paquete globular mediante ligera agitación y examinar la presencia o ausencia de aglutinación.6. Interpretar como en el método anterior.

BIBLIOGRAFÍA:

1. M.J. Lynch. et.al. Métodos de Laboratorio. 2ª. Edición 1977. editorial Interamericana.2 .Alfonso Balcells. La Clínica y el Laboratorio 18a. Edición 1999. Editorial Masson.3. Tesina de Banco de Sangre del Seminario de Titulación de la Carrera de Q.F.B . Facultad de Ciencias Químico Biológicas de la Universidad Autónoma de Campeche. 2001

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DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINA TOTAL Y DIRECTA

INTRODUCCIÓN:

La bilirrubina es un producto derivado del metabolismo de la hemoglobina en el sistema retículo endotelial. Los hematíes al degradarse liberan hemoglobina que es metabolizada a dos moléculas : el grupo hem y el grupo globina, el primero se transforma en biliverdina y esta en bilirrubina a la cual se le llama no conjugada o indirecta. Al pasar por el hígado esta se conjuga con ácido glucurónico transformándose en bilirrubina conjugada o directa.

El hígado segrega esta bilirrubina directa a través de las vías biliares hacia el intestino, al metabolizarse por la flora intestinal se convierte en urobilinas que dan el color marrón a las heces. Parte de estas urobilinas se reabsorben y pueden aparecer en la orina en forma de urobilinógeno.

La elevación de los valores de bilirrubina no conjugada orientan hacia un problema a nivel del hígado; mientras que la elevación de los valores de bilirrubina conjugada orientan hacia un problema a nivel de vías biliares.

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Cuando se realiza un análisis de rutina se mide La bilirrubina total, de la cual del 70% al 85% corresponde a la bilirrubina no conjugada o indirecta.En general, desde un punto de vista analítico y clínico, interesa conocer los niveles de bilirrubina total y diferenciar cuantitativamente la “bilirrubina libre” o prehepática, que aumenta principalmente en procesos de tipo hemolítico, de la “bilirrubina conjugada” o hepática que está incrementada en la disfunción hepática y más concretamente en fallos de los mecanismos de su eliminación, a través del sistema biliar, cuyo primer paso es pasar del hepatocito a los canalículos biliares.

OBJETIVO:Determinar la concentración sérica de bilirrubina Total, Directa e Indirecta para establecer su importancia y asociación clínica con trastornos hepáticos.

MATERIAL Y EQUIPO:

Tubos de ensaye de 13 x 100 mmGradillaPipetas PasteurMicropipetas de volumen variablePuntas para micropipetaCentrífugaEspectrofotómetroKit Bilirrubina DMSO Total y Directa, Spinreact.Suero Humano reciente

TÉCNICA:Longitud de onda ...............................555nm ( 530 – 580)Temperatura .......................................25/30/37°CCubeta .................................................1cm paso de luzLectura ................................................frente a aire o agua destilada

BLANCOTOTAL

TOTAL BLANCODIRECTA

DIRECTA

R.1 Bilirrub. DirectaR. 2 Bilirrub. Total R. 3 Nitrito SódicoMuestra o standard

---1.5 mL---100μL

---1.5 mL50 μL100μL

1.5 mL------100μL

1.5 mL---50 μL100μL

Mezclar y esperar 5 min exactamente a temperatura ambiente. Leer las D. Ópticas.

Cálculos:Bilirrubina Total (mg/dl) = D.O. Tubo Total – D.O.Blanco Total x 19.1

Bilirrubina Directa (mg/dl) = D.O. Tubo Directa – D.O. Blanco Directa x 15.0

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Notas:1. Utilice muestras recientes, protegidas de la luz.2. No utilice muestras hemolizadas.

VALORES NORMALES:Bilirrubina Total: Hasta 1.1 mg/dL (18.8μmol/L)Bilirrubina Directa: Hasta 0.25 mg/dL (4.3 μmol/L)

Factor de conversión:mg/dL x 17.1 = μmol/L

BIBLIOGRAFÍA:1. Hamilton, H.K. Diagnóstico Clínico. Editorial Interamericana. 1985.2. Kaplan, Lawrance A. Química Clínica. Editorial Médica Panamericana. 988.3. Lynch Mattew J.Métodos de laboratorio Vol 1.Segundaedición.Editorial Interamericana.1987.4. Todd-Sanford. Diagnóstico Clínico por el Laboratorio. 6ª. Edición. Editorial Salvat.5. Instructivo Bilirrubina DMSO Total y Directa. Spinreact, S.A.

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DETERMINACIÓN DE AMILASA α:

INTRODUCCIÓN:

La amilasa α es una enzima sintetizada por el páncreas y las glándulas salivales, actúa sobre el almidón, rompiendo los enlaces α 1-4 glucosídicos (excepto en la maltosa). Las amilasas pancreática y salival son las amilasas α ( las amilasas β son de origen vegetal). En las personas existe normalmente en el páncreas (aproximadamente 200 mg/Kg), glándulas salivales, hígado, músculo, tejido adiposo, saliva, sangre, orina, heces, leche y semen. La amilasa sanguínea se excreta por el riñón, y la depuración renal se ha calculado que es de 1- 3 mL/minuto, y parece ser constante en una gran cantidad de flujo urinario; por consiguiente, el aumento de liberación en la sangre va seguido de un incremento de excreción en la orina. Durante años, los niveles de α amilasa en suero y plasma han evidenciado la necesidad de la determinación para el diagnóstico de pancreatitis aguda. El aumento de la actividad sérica en esta enfermedad, se debe probablemente al escape de las enzimas al tejido intersticial y cavidad peritoneal, con un aumento de la absorción a través de los linfáticos y las venas. Sin embargo, los resultados pueden estar dentro de los índices normales o limitáneos en algunos enfermos en quienes ha quedado muy poco tejido pancreático funcionante, como puede ocurrir en los que sufren necrosis pancreática aguda. Por otra parte, la actividad puede ser elevada, incluso a valores muy altos ( 500 ó incluso 1,000 U Somogyi) en ausencia de pancreatitis, como en los enfermos con obstrucción, estrangulación o perforación abdominal, después de una cirugía abdominal , en un embarazo ectópico roto, en la parotiditis, en la insuficiencia renal o después de la administración de morfina. La actividad de la amilasa sérica aumenta a las pocas horas del comienzo en los pacientes con pancreatitis aguda, pero no es proporcional a la gravedad de la enfermedad. Los valores superiores a cinco veces el límite superior normal son muy sugestivos del diagnóstico. La actividad suele volver a la normalidad en 2 a 5 días en los enfermos con las formas edematosas más moderadas de la enfermedad. La persistencia más prolongada de valores elevados sugiere la continuación de la necrosis o la posible formación de seudoquistes. La determinación urinaria de amilasa (Diastasuria o Amilasuria) tiene ciertas ventajas sobre la hemática: una eliminación aumentada puede persistir cuando ya está normalizada la cifra plasmática del fermento, y, por otra parte, las cifras patológicas son cuantitativamente más llamativas en orina que en sangre. En general la alteración de los valores normales de amilasa con las patologías puede relacionarse:AUMENTADO: Pancreatitis aguda, durante las primeras 72 hs, Carcinoma de la cabeza del páncreas, Hipertiroidismo, Parotiditis, Afecciones renales con alteración de la función renal, Obstrucción intestinal alta, Trauma esplénico agudo, Ulcera duodenal, Perforación de ulcera gástrica.DISMINUIDO: Hepatitis, Toxemias de la gestación, Cirrosis Hepática, Abscesos hepáticos, Carcinoma hepático, Alcoholismo agudo, Grandes quemaduras, Tirotoxicosis severa, a veces en la neumonía, en el mongolismo de modo inconstante.

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OBJETIVO:Cuantificar la concentración de α-amilasa en una muestra problema, mediante el empleo de una prueba cinética a fin de establecer su valor clínico en el diagnóstico y/o diferenciación de la pancreatitis.

MATERIAL Y EQUIPO:

Tubos de ensaye de 13 x 100 mmGradillaPipetas PasteurMicropipetas de volumen variablePuntas para micropipetaCentrífugaEspectrofotómetroKit cinético de α-Amilasa, Spinreact.Suero u orina problema

TÉCNICA:Longitud de onda ......................................... 405 nmTemperatura ................................................. 37°CCubeta .......................................................... 1cm paso de luzCero frente a agua destilada.

Procedimiento:

Reactivo (tomarlo de un vial del kit) 1.0 mLSuero o plasma o control 20 μLSi la muestra es orina 10 μLMezclar y leerMedir el incremento de la absorbancia por minuto durante 1, 2 y 3 minutos: ΔA/min.

Cálculo:Calcular la actividad de la α-amilasa de la muestra usando el siguiente factor:Suero, plasma : ΔA/min x 3954 = U/LOrina: ΔA/min x 7908 = U/L

VALAORES NORMALES:

Suero, plasma : < 90U/LOrina : < 450 U/L

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NOTAS:1.No deberán procesarse muestras hemolizadas.2. Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos de normalidad.

BIBLIOGRAFÍA:

1. Alfonso Balcells. La Clínica y el Laboratorio. 18ª. Edición. Editorial Masson 1999.2. Todd-Sanford. Diagnóstico Clínico por el Laboratorio. 6ª. Edición. Editorial Salvat.3. Instructivo α-amilasa Test cinético-CNPG3/Líquido, Spinreact, S.A.

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FOSFATASA ALCALINA

INTRODUCCIÒNLa fosfatasa alcalina, es una proteína que se encuentra en todos los tejidos corporales. Se origina principalmente en los huesos y accesoriamente en el hígado, aunque para algunos es segregada sólo por osteoclastos y el hígado es apenas el órgano de excreción. Está bien establecida la relación que existe entre esta enzima, los osteoclastos y la formación ósea. El ritmo rápido del incremento óseo infantil, corre paralelo con las dosis elevadas. Si el crecimiento se bloquea, la concentración baja a cifras similares como en el adulto. Cuando hay deficiencia de vitamina D, raquitismo, enfermedad de Paget, hiperparatiroidismo, fracturas en consolidación y en metástasis óseas, sus niveles aumentan. Igualmente, durante el embarazo los niveles pueden ser hasta el triple de lo normal y persisten hasta por 2 meses después del parto.Presta utilidad en las ictericias donde sirve para diferenciar la obstructiva de la parenquimatosa, pues cuando es de origen mecánico sus cifras son mucho más elevadas. En el absceso hepático sus cifras se encuentran aumentadas y sin cabios ictéricos. En el embarazo, cuando sus niveles descienden, hay compatibilidad con feto muerto intrauterino. Los tejidos con cantidades particularmente altas de FA abarcan el hígado, las vías biliares y los huesos.Este examen se hace para diagnosticar enfermedad del hígado y del hueso o para ver si los tratamientos para dichas enfermedades están funcionando. Puede incluirse como parte de las pruebas de la función hepática de rutina.Los valores normales pueden variar de un laboratorio a otro, según la técnica empleada, al igual con la edad y el sexo de la persona. Los niveles altos de FA normalmente se observan en niños que presentan un aumento repentino en su crecimiento y en las mujeres embarazadas.Los niveles de la fosfatasa alcalina superiores a los normales pueden deberse a:Anemia, Obstrucción biliar, Enfermedad ósea, Consolidación de una fractura, Hepatitis, Hiperparatiroidismo, Leucemia, Enfermedad hepática, Cánceres óseos osteoblásticos, Osteomalacia, Enfermedad de Paget, Raquitismo.Los niveles de la fosfatasa alcalina (hipofosfatasemia) inferiores a los normales pueden deberse a: Desnutrición, Deficiencia de proteína.Algunas afecciones adicionales bajo las cuales se puede hacer el examen son:Enfermedad hepática alcohólica (hepatitis/cirrosis), Alcoholismo, Estenosis biliar, Arteritis de células gigantes (temporal, craneal), Neoplasia endocrina múltiple (NEM) II Carcinoma de células renales.

OBJETIVO.Determinar la concentración sérica de fosfatasa alcalina en una muestra problema, a fin de establecer su importancia clínica en los trastornos hepáticos y del hueso principalmente.

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MATERIAL Y EQUIPO:

Tubos de ensaye de 13 x 100 mmGradillaPipeta de 1 mL.Micropipetas de volumen variablePuntas para micropipetaEspectrofotómetroKit cinético de Fosfatasa Alcalina, SERA-PAK Plus.Suero sanguíneo problemaBaño María

PROCEDIMIENTO:

Longitud de onda............................405 nm Temperatura.................................... 30 °CCubeta............................................. 1 cm. Paso de luzLeer contra blanco de agua destilada.

Pipetear en un tubo:

MuestraReactivo de uso

20μL1.0 mL

Mezclar y, tras una incubación de un minuto a 30°C, medir el cambio de densidad óptica (ΔDO/min) durante tres minutos.

Cálculo: Actividad (U/L) = ΔDO/min x 2.750

VALORES DE REFERENCIA

Niños: 145 – 950 U/LAdultos: 80- 220 U/L

BIBLIOGRAFIA1. http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003470.htm . 2. G. Angel M. / M. Angel R. Interpretaciòn clínica del laboratorio. 5ª. Ediciòn. Editorial Panamericana.1996.3. Alfonzo Balcells. La Clìnica y el Laboratorio. 18ª. Ediciòn. Editorial Masson. 2001.4. Bayer.Test cinètico de Fosfatasa alcalina SERA-PAK Plus. Argentina.

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LDL-COLESTEROL, HDL-COLESTEROL

INTRODUCCIÒNDesde la década de los cincuenta, en los países industrializados el infarto es el principal factor de muerte en la población adulta. Durante los últimos años en México se han incrementado las cifras de defunciones por la misma causa, la proporción en que se manifiestan es de una mujer por cada seis hombres que sufren de infartos.Investigaciones especializadas arrojan que entre las causas principales del incremento de infartos se considera el exceso de colesterol en la sangre, también conocido como hipercolesterolemia, que imposibilita al flujo sanguíneo transitar por las arterias de manera que irrigue adecuadamente a órganos como el cerebro o el corazón, principalmente.El colesterol es una sustancia grasa producida por el hígado y requerida para el funcionamiento regular del organismo, que se desplaza por el torrente sanguíneo hacia las células en forma de paquetes llamados lipoproteínas. De presentarse en exceso, se acumula en las paredes de las arterias formando placas, lo que limita su flexibilidad y reduce el flujo de sangre hacia el corazón, proceso que recibe el nombre de aterosclerosis. Esta acción causa dolor o inclusive angina de pecho, pero en el peor de los casos sobreviene un infarto.El colesterol es necesario como protector de las membranas de las células de todo el cuerpo, utilizando como vía de transporte la sangre. Se reconocen tres tipos de colesterol: el denominado total, que es el cúmulo en todo el organismo. Otro es el llamado de baja densidad (LDL), o también conocido como colesterol malo, que por su pequeñísimo tamaño perfora las paredes arteriales depositándose en ellas. Al abrir el poro de la arteria ocasiona que ésta se oxide, provocando su rompimiento y con ello la acumulación de glóbulos rojos y plaquetas. Esta aglomeración forma un trombo o coágulo que obstruye la arteria e impide el libre tránsito de las sangre, por lo que la función irrigatoria al corazón u otros órganos se torna inadecuada, y puede propiciar un infarto.El tercer tipo es el de alta densidad o colesterol bueno (HDL), parte fundamental para la síntesis que el propio organismo efectúa de la adrenalina o las hormonas. La presencia de HDL disminuye la concentración de LDL en las arterias. Un elemento igualmente importante en la evaluación de grasa en la sangre son los triglicéridos, derivados de azúcares que el organismo no necesita y que los transforma en grasas, por lo que también se les considera parte del colesterol. Como se ha mencionado, las células humanas contienen suficiente grasa para protegerse. Sin embargo, un individuo se sobrecarga de ella cuando abusa de la ingesta de alimentos que contienen colesterol, principalmente los de origen animal y sus derivados. El hígado es el órgano encargado de inducir la grasa a las regiones del cuerpo en que hace falta o bien la desaloja, pero si la cantidad es superior a la capacidad de procesamiento o si no cuenta con los receptores adecuados del colesterol de baja densidad, éste es absorbido por la sangre con las consecuencias mencionadas.Con frecuencia, la cuantificación de grasas, es un examen que se hace para determinar los riesgos de arteriopatía coronaria, dado que el nivel alto de colesterol y triglicéridos en la sangre ha sido asociado con ataque cardíaco y accidente cerebrovascular.El examen de colesterol total generalmente se hace como parte de un perfil lipídico, que también verifica los niveles de LDL, HDL y triglicéridos.

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Las afecciones adicionales bajo las cuales se puede llevar a cabo el examen son:Arterioesclerosis de las extremidades, Disbetalipoproteinemia familiar, Hipercolesterolemia familiar, Hipotiroidismo primario, Hipotiroidismo secundario, Diabetes tipo I o tipo II, Cirrosis biliar primaria

Significado de los resultados anormales.En general, un valor de colesterol total por encima de 200 mg/dL puede significar que la persona está en mayor riesgo de sufrir una cardiopatía. Sin embargo, los niveles de LDL son una mejor manera de predecir la cardiopatía y determinan cómo se debe tratar el colesterol alto. Los niveles altos de colesterol total pueden ser causados por:Cirrosis biliar, Hiperlipidemias familiares, Dieta alta en grasa, Hipotiroidismo, Síndrome nefrótico, Diabetes no controlada.Los niveles bajos de colesterol puede ser causados por:Hipertiroidismo, Enfermedad hepática, Malabsorción (absorción inadecuada de nutrientes desde el tracto intestinal), Desnutrición, Anemia perniciosa, Sepsis .

OBJETIVOCuantificar la concentración de lipoproteínas de alta y baja densidad en una muestra de suero problema, a fin de establecer su relación e importancia clínica con los trastornos cardiovasculares.

MATERIALES Y EQUIPOJeringa con aguja hipodérmica de 3 mL.Torundas de algodónAlcohol desnaturalizadoTubos de 13 x 100mm.Pipetas de 1 y 5 mL.Micropipeta de Volumen variable Puntillas para micropipetaGradillaCentrífugaEspectrofotómetro Baño MaríaKit SERA-PAK Plus COLESTEROL HDL DIRECTOKit SERA-PAK Plus COLESTEROLKit SERA-PAK Plus TRIGLICERIDOSCalibrador HDL-ColesterolPaciente o suero problema

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PROCEDIMIENTO:

Longitud de onda............................600 nm (hasta 700)Temperatura.................................... 37 °CCubeta ............................................. 1 cm. Paso de luzLeer contra blanco de reactivo

Pipetear en tres tubos:BLANCO CALIBRADOR MUESTRA

REACTIVO 1AGUA DEST.CALIBRADORMUESTRA

270L3L

--

270 L.-

3L-

270L --

3LMezclar, esperar cuatro minutos, realizar la lectura de la densidad óptica y añadir 90L de REACTIVO 2, mezclar y, tras una incubación de cinco minutos, medir la densidad óptica.

Cálculo HDL: Δ D.O. muestra -------------------- x n Δ D.O. calibrador

n = concentración del calibrador

VALORES DE REFERENCIA:HDL: Hombres: 35.3 – 79.5 mg/dL

Mujeres: 42.0 – 88.0 mg/dL

Para calcular LDL: (Fòrmula de Friedwald)

LDL = COL TOT – HDL – (TRIGLICÈRIDOS/5) (NORMAL < 130)

VLDL = TRIGLICERIDOS/5

Indice aterogènico:

COL TOT / HDL (>5 ALTO RIESGO)

BIBLIOGRAFÍA:1. Todd-Sanford. Diagnóstico Clínico por el Laboratorio.6ª. Edición 1978. Editorial Salvat.2. M.J. Lynch. et.al. Métodos de Laboratorio. 2ª. Edición 1977. editorial Interamericana.3. www.nutriscitech.com/chldx.htm 4.Alfonso Balcells. Ka Clínica y el Laboratorio 18a. Edición 1999. Editorial Masson.5. Bayer. SERA-PAK PLUS. COLESTEROL HDL DIRECTO Argentina.

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6. www.tuotromedico.com/temas/COLESTEROL_en_suero.htmDETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL

INTRODUCCIÓN:

El colesterol es una sustancia hidrófoba, insoluble en medios acuosos y por tanto insoluble en el plasma sanguíneo. La circulación sistemática del colesterol es posible gracias a la formación de complejos solubles por su unión a proteínas, las lipoproteínas séricas, y entre ellas las de tipo β “low density lipoproteins” (LDL) son las que representan el mayor porcentaje, con aproximadamente un 60 – 70% del total. El hígado es el órgano principal donde se produce la incorporación del colesterol y otros lípidos a las lipoproteínas. Así mismo, en el hígado, se esterifica, con ácidos grasos, la mayor parte de colesterol (60-75% del total).La dieta promedio (carne y yema de huevo especialmente) contribuye en una mínima proporción (fuente exógena) a la tasa total del colesterol corporal (endógeno más exógeno). En contraste con la síntesis endógena de alrededor de 1g/día, la dieta corriente produce unos 0.3 g/día (aportación exógena). El colesterol en asociación con los quilomicrones, tras su absorción intestinal, pasa a la circulación portal. El hígado extrae mucho del colesterol exógeno. Sin embargo, los quilomicrones son distribuidos a los lugares hísticos donde se libera colesterol a las células. La síntesis del colesterol ocurre sobre todo a nivel hepático, pero también se realiza en otros muchos tejidos, incluyendo la corteza suprarrenal, aorta, piel, intestinos y testículos. En su síntesis se lleva a cabo una serie compleja de reacciones en las que interviene el acetilcoenzima A como fuente de todos los átomos de carbono y varios intermediarios importantes, incluyendo el escualeno y lanosterol. Su conversión en ácidos biliares y la excreción de esteroles neutrales a través de la bilis y heces es papel fundamental del hígado, que constituye la principal vía (90%) de excreción del colesterol. La participación intestinal en el metabolismo del colesterol se lleva a cabo a través de la circulación enterohepática del colesterol y sales biliares. El colesterol es de gran importancia en la síntesis de las hormonas. La concentración del colesterol sanguíneo tiene unas variaciones amplias que dependen de la edad. Aunque no puede ser sintetizado en todos los tejidos, el colesterol está distribuido por todas las células y tejidos. Los jugos biliares y pancreático son necesarios para la digestión y absorción del colesterol en el intestino. La dieta rica en grasas saturadas hace que aumenten los niveles de colesterol al incrementar la cantidad de grasas en el hígado.Los niveles altos de colesterol en suero pueden guardar relación con un mayor riesgo de arteriopatías coronarias.

OBJETIVO:

Cuantificar la concentración de Colesterol total en una muestra problema, mediante el empleo de una prueba enzimática a fin de establecer su importancia en el diagnóstico clínico de patologías relacionadas.

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MATERIAL Y EQUIPO:

Tubos de ensaye de 13 x 100 mmGradillaPipeta de 1 mL.Micropipetas de volumen variablePuntas para micropipetaEspectrofotómetroKit enzimático de colesterol, SERA-PAK Plus.Suero sanguíneo problemaBaño MaríaPROCEDIMIENTO:

Longitud de onda............................505 nm (490 – 550)Temperatura.................................... 37 °CCubeta ............................................. 1 cm. Paso de luzLeer contra blanco de reactivo

Pipetear en tres tubos:Blanco Standard Muestra

StandardMuestraReactivo de uso

----1.0 Ml

10μL--1.0 mL

--10μL1.0 mL

Mezclar e incubar 5 min a 37°C Ajustar el espectrofotómetro a 0 con el blanco de reactivos. La coloración es estable a 60 min.

Cálculo D.O. muestra ----------------------- x 200 D.O. standard

VALORES DE REFERENCIA:

150 - 260 mgdL

BIBLIOGRAFÍA:

1. Hamilton M.B. Rose. DIAGNOSTICO CLINICO.- 1ª Edición Editorial Interamericana, México 1985.2. Lynch Mattew J. Métodos de Laboratorio Vol. 1. 2 edición. Editorial Manual Moderno. Impreso en México, 1987

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3. Alfonso Balcells. La Clínica y el Laboratorio. 18ª.Edición. Editorial Masson. 4. Bayer.Test enzimático-colorimétrico Colesterol SERA-PAK Plus. Argentina.DETERMINACIÓN DE TRIGLICERIDOS

INTRODUCCIÓN

Los Triacilglicéridos son ésteres de glicerol y de tres ácidos grasos, por lo regular esteárico, oleico y palmítico. Constituyen alrededor del 95 % del tejido adiposo y representan la principal forma de almacenamiento de lípidos en el humano.

Los triglicéridos séricos están dispuestos en varios agregados o complejos lípidos, fundamentalmente quilomicrones y proteínas de muy baja densidad (VLDL), cuya función principal es el transporte celular de los triglicéridos de los alimentos. Los quilomicrones son grandes partículas producidas en el intestino, muy ricos en triglicéridos de origen exógeno mientras que las proteínas de muy baja densidad (VLDL) son algo más pequeñas y ricas en triglicéridos en menor proporción son de origen endógeno principalmente hepático.

El metabolismo de lípidos se lleva a cabo en tres fases:Fase intraluminal. La mayor parte de la digestión de la grasa alimentaría tiene lugar en el intestino mediante las enzimas intestinales, pancreáticas y de los ácidos biliares. Las sales biliares son de importancia en la degradación de las grasas debido a sus propiedades anfipáticas : por ser altamente hidrófila y altamente hidrófoba al mismo tiempo. Debido a sus propiedades activas de superficie, encapsula a las grasas y las emulsiona, produciendo partículas que pueden ser rápidamente modificadas por las enzimas digestivas. En el lumen intestinal, la acción de la lipasa pancreática sobre la grasa ingerida da por resultado una mezcla compleja de triglicéridos, diglicéridos, monoglicéridos y ácidos grasos libres. Continuando con una fase oleosa y una acuosa.Fase celular. Después de los monoglicéridos y los ácidos grasos se ingresan al retículo endoplásmico de las células mucosas, presumiblemente por difusión, los monoglicéridos y ácidos grasos son reesterificado a triglicéridos. Fase de transporte. Una vez que se ha resintetizado los triglicéridos en el interior de la célula mucosa intestinal, estas sustancias son acumuladas en el retículo endoplásmico de la célula mucosa y en el aparato de Golgi en la forma de macromoléculas hidrosolubles, los quilomicrones, y, hasta un cierto grado, de lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL). Las lipoproteínas intestinales abandonan las células mucosas mediante un mecanismo de pinocitosis inversa. Estos complejos aparecen inicialmente en los vasos linfáticos de la región abdominal y más tarde en la circulación sistémica. Los complejos lipoproteicos más voluminosos son mezcla de triglicéridos, algunas proteínas, pequeñas cantidades de colesterol y fosfolípidos. La circulación sanguínea transporta quilomicrones y VLDL a todos los tejidos del organismo, incluyendo el tejido adiposo que representa su principal sitio de incorporación. Los quilomicrones y los triglicéridos de las VLDL son hidrolizados por una enzima “ lipoproteína lipasa” y tiene un sitio de actividad, es la superficie de las células endoteliales. Los ácidos grasos derivados de los triglicéridos ingresan a las células del tejido adiposo, en donde puede ser almacenado mientras que el glicerol es liberado a la circulación.

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OBJETIVO:

Cuantificar la concentración de Trigliceridos en una muestra problema, mediante el empleo de una prueba enzimática a fin de establecer su importancia en el diagnóstico clínico de patologías relacionadas con el metabolismo de lípidos.

MATERIAL Y EQUIPO:

Tubos de ensaye de 13 x 100 mmGradillaPipetas PasteurPipetas graduadas de 2mLMicropipetas de volumen variablePuntas para micropipetaEspectrofotómetroBaño MaríaKit enzimático de SERA-PAK Plus Bayer Suero sanguíneo problema

PROCEDIMIENTO:

a) Método

Pipetear en tres tubos de ensayo:

Blanco Estándar MuestraMuestra - - 10μL

Estándar - 10μL -

Agua destilada 10μL

Reactivo 1 mL 1 mL 1 mLMezclar e incubar a 37 C durante 10 minutos. Leer absorbancia de la muestra (A muestra) y la del standar (A estándar) frente al blanco.

Longitud de onda: 500 nmCubetas: 1 cm. De paso de luzTemperatura: 37 CLectura: leer contra blanco de reacvtivo.

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b) Cálculo

A muestra-------------- x 200 = Triglicéridos mg/dLA standar

VALORES REFERENCIA

Hombres 60 - 165 mg/dLMujeres 40 - 140 mg/dL

BIBLIOGRAFÍA:

1. Hamilton, H.K. Diagnóstico Clínico. Editorial Interamericana. Impreso en México,1985.2. Kaplan, Lawrance A. Química Clínica. Editorial Médica Panamericana. Impreso en Argentina, 1988.3. BAYER.Instructivo Enzimático Triglicéridos SERA-PAKPlus. Argentina.

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PROTEÍNAS TOTALES Y ALBÚMINA:

INTRODUCCIÓN:Las proteínas del plasma sanguíneo son una mezcla de varias clases de cadenas polipeptídicas y pueden clasificarse simplemente como: 1) proteínas hísticas y 2) proteínas hemáticas. A su vez, las proteínas hísticas y hemáticas pueden separarse en hemoglobina, proteínas de los eritrocitos y del plasma. Aunque las proteínas de los tejidos son obviamente de importancia vital para el organismo, las de la sangre, debido a su accesibilidad, son más importantes en términos de la información de laboratorio clínico. No sólo pueden estudiarse conveniente las proteínas plasmáticas, sino que ocupan una posición central en el metabolismo proteico; interaccionan virtualmente con todos los tejidos o células del organismo y están íntimamente relacionadas con el metabolismo proteico en el hígado. De hecho, el hígado es un órgano tan importante en el metabolismo proteico, que la enfermedad hepática está frecuentemente asociada con alteraciones en las proteínas plasmáticas y trastornos del metabolismo proteico. Las fracciones obtenidas reciben diversos nombres según el procedimiento empleado y no representan sustancias puras en la generalidad de los casos sino macromoléculas con caracteres físico-químicos semejantes en las condiciones del experimento. La fracción de proteínas plasmáticas precipitadas a media saturación por el sulfato de amonio originalmente se consideró como la fracción “globulina” y las restantes que precipitan con sulfato de amonio a saturación completa como la fracción “albúmina”. El fibrinógeno, que precipita con la fracción globulina, como es una proteína especial que interviene en la coagulación sanguínea, se toma como una fracción aparte. Debido a que la albúmina sérica y por lo menos una pequeña fracción de las globulinas se sintetizan en el hígado, las proteínas del suero son afectadas tanto cualitativa como cuantitativamente en los padecimientos hepáticos. En cualquier enfermedad que ocasione alteraciones hepatocelulares la concentración de seralbúmina estará disminuida. En diversas hepatopatías las globulinas séricas pueden alcanzar niveles suficientes que basten para mantener la concentración total de proteínas a niveles normales o elevados, aun en presencia de una notable reducción de la albúmina. Debido a estas causas, las cifras cambiantes de albúmina sérica proporcionan índices valiosos respecto a la severidad, evolución y pronóstico de las hepatopatías. Los niveles bajos de albúmina y elevados de globulina en suero, indican origen hapatocelular de la ictericia o de la hepatopatía. En la ictericia obstructiva, los cambios de las proteínas del suero se presentan tardíamente, una vez que se han instalado las alteraciones hepatocelulares secundarias. Sin embargo, las colangitis y la cirrosis biliar ocasionan alteraciones hepáticas que pueden no ser percibidas por alteraciones en las proteínas. Más aún, las alteraciones de las proteínas séricas pueden volver a la normalidad antes de que la convalecencia de la hepatitis se haya completado. Las alteraciones en las proteínas séricas se presentan también en padecimientos ajenos a los hepáticos. La interpretación y significado de la determinación de las proteínas séricas requiere, por lo tanto, un gran cuidado y criterio.

OBJETIVO:

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Determinar la concentración de proteínas totales y albúmina séricas en una muestra problema mediante la aplicación de los métodos de Biuret y Verde de Bromocresol y correlacionarla con su importancia clínica.

MATERIAL Y EQUIPO:

Tubos de 13 x 100mm.Pipetas de 1, 5 y 10 mL.Micropipeta de Volumen variable Puntillas para micropipetaCentrífugaEspectrofotómetro Baño de María TermómetroKit de Proteínas totales y Albúmina, SERA-PAK Plus. Bayer Suero sanguíneo problema

PROCEDIMIENTOS:

a) Proteínas Totales (Método de Biuret)

Las uniones peptídicas reaccionan con el sulfato de cobre en solución alcalina y producen un color violeta proporcional a su concentración.

Longitud de onda............................550 nm (546)Temperatura.................................... 37 °CCubeta ............................................. 1 cm. Paso de luzLeer contra blanco de reactivo

1. Marcar 3 tubos de ensayo blanco, muestra, standard y agregar:

BLANCO STANDARD MUESTRAAgua DestiladaMuestra StandardReactivo de Biuret

10μL --1.0mL

--10μL1.0mL

-10μL-1.0mL

2. Mezclar e incubar 10 min.,Determinar las absorbancias del standard y de la muestra con el blanco. El color es estable por 1 hora.

Absorbancia de la muestra3. Cálculos: Proteínas totales (g/dL) = ----------------------------------- x 6

Absorbancia del standard

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b) Determinación de Albúmina: (Método Verde de Bromocresol)

La albúmina reacciona con el verde de bromocresol y debido al llamado error proteico de los indicadores, se forma una coloración verde que es proporcional a la concentración de la albúmina de la muestra.

Longitud de onda............................620 nm (550-628)Temperatura.................................... 37 °CCubeta ............................................. 1 cm. Paso de luzLeer contra blanco de reactivo

1. Marcar 3 tubos blanco, muestra, strandard y agregar:

BLANCO STANDARD MUESTRAReactivo de albúminaAgua destiladaStandard Muestra

1.0mL 10μL ---

1.0mL-10μL-

1.0mL--10μL

2. Mezclar e incubar 5 min. A 37°C Determinar las absorbancias (D.O.) de la muestra y standard con el blanco. El color es estable por 1 horas.

3. Cálculos: Absorbancia de la muestra Albúmina (g/100mL) = ---------------------------------- x 5

Absorbancia del standard

NOTAS: La reacción es lineal hasta concentraciones de 6g/dL. Para valores superiores, es recomendable diluir (1:3) la muestra con solución fisiológica y determinar nuevamente, multiplicando el resultado por el factor de la dilución .El valor de las globulinas (g/dL) se obtiene restando de las proteínas totales, el valor de la albúmina. La relación A/G (albúmina/globulina), se obtienen dividiendo la concentración de la albúmina entre la concentración de la globulina.

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VALORES DE REFERENCIA:

Proteínas totales: 6.2 a 8.0 g/dL

Albúmina : 3.8 a 5.4 g/dL

BIBLIOGRAFÍA:1. Todd-Sanford. Diagnóstico Clínico por el Laboratorio.6ª. Edición 1978. Editorial Salvat.2. M.J. Lynch. et.al. Métodos de Laboratorio. 2ª. Edición 1977. editorial Interamericana.3. Marcus A. Krupp.et.al. Manual de Diagnóstico Clínico y de Laboratorio. 8ª.edición 1985. Editorial Manual Moderno.4. Proteínas Totales y Albúmina. SERA-PAK Plus. Bayer. Argentina.

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ANEXOS

I.- CONSIDERACIONES GENERALES PARA EL TRATAMIENTO DE MUESTRAS DE DESECHO Y LAVADO DE MATERIALES.

1. Use guantes durante la manipulación de muestras y lavado de materiales.

2. Antes de desechar cualquier muestra, añada solución de hipoclorito de sodio (Cloro) en una proporción del 25% con relación a la misma.

3. Deseche los sólidos en los botes respectivos y los líquidos en la tarja.

4. Lave los materiales empleando detergente, escobillón o fibra según el caso.

5. Coloque los materiales en el escurridor o gradilla según el caso.

6. Mantenga limpias las tarjas, mesas y en orden los utensilios de limpieza.

7. Lávese las manos antes de salir del laboratorio.

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II. SEPARACIÓN Y ENVASADO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLÓGICO INFECCIOSOS DE ACUERDO A SUS CARACTERÍSTICAS FÍSICAS Y BIOLÓGICAS INFECCIOSAS.

TIPO DE RESIDUOS ESTADO FÍSICO

ENVASADO COLOR

SANGRE. La sangre y los componentes de ésta, sólo en forma líquida, así como los derivados no comerciales (hemoderivados)Recipientes desechables que contengas sangre líquida (bolsas de transfusión, jeringas, etc.).Material de curación, empapado, saturado o goteando de sangre/líquido sinovial, pericárdico, líquido pleural, cefalorraquídeo o peritoneal.

Líquidos Recipientes Herméticos

ROJO

Bolsa de Polietileno

CULTIVOS Y CEPAS DE AGENTES INFECCIOSOS.Utensilios desechables usados para contener, transferir, inocular y mezclar cultivos de agentes infecciosos.

Sólidos Bolsa de Polietileno ROJO

PATOLÓGICOS.Tejidos, órganos y partes que se extirpan o remueven durante las necropsias, la cirugía o algún otro tipo de intervención quirúrgica que no se encuentren en formol.

Sólidos Bolsa de Polietileno AMARILLO

Líquidos Recipientes Herméticos

RESIDUOS NO ANATÓMICOS.Materiales desechables que contengan esputo, secreciones pulmonares y cualquier material generado por pacientes con sospecha o Dx de TB o de otra enfermedad infecciosa.

SólidoBolsa de Polietileno ROJO

Líquido Recipientes Herméticos

OBJETOS PUNZOCORTANTES.Tubos capilares, navajas, lancetas, agujas desechables, agujas hipodérmicas de sutura, bisturís, etc.

Sólidos Recipientes rígidos de Polipropileno

ROJO

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III. EXTRACCIÓN DE MUESTRAS SANGUÍNEAS

La sangre consta de una parte liquida, el plasma, en donde están en suspensión los glóbulos blancos, los glóbulos rojos y las plaquetas. Su análisis abarca una extraordinaria extensión y las investigaciones pueden efectuarse sobre la sangre total, en el plasma, en el suero o en los elementos morfológicos de la misma.El tipo de estudio, el estado y la edad del paciente son los factores que rigen la obtención de una muestra adecuada de sangre, el sitio de toma y la técnica seguida. En la mayor parte de todos los análisis se necesita una muestra de sangre venosa; la punción en una vena debe hacerse con gran cuidado para evitar hemólisis o hemoconcentración de la muestra, que se forme un hematoma o que las venas sufran lesión.Se necesita elegir un sitio para la punción venosa y el mas usado es el pliegue anterior del codo; otros sitios son la muñeca, el dorso de la mano o el pie.

PROCEDIMIENTO:

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Haga que el paciente se siente paralelamente a la mesa de trabajo donde se hará la extracción de sangre.Ponga el brazo del paciente sobre la mesa de trabajo apoyándolo en un pequeño cojín dispuesto bajo el codo, con la palma de la mano vuelta hacia arriba.

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Puntos para la extracción de sangre:

El sitio más adecuado es la vena que se encuentra en el pliegue anterior del codo, en el punto donde sea más gruesa y fácilmente visible, aprovechando, de preferencia, una de las ramas que forman una E inmediatamente arriba del lugar donde se juntan (1).Si fuera necesario se pueden usar los puntos 2, 3 ó 4.

Monte la aguja en la jeringa, sin tocar más que la base de la aguja. Pruebe aguja y jeringa para cerciorarse de que no está obstruida y la jeringa es hermética. Tápela de nuevo.

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Aplique el torniquete firmemente alrededor del brazo y sujete los extremos con una mano.

Con firmeza y con la otra mano tire de un extremo, cruzándolo.

A continuación introduzca este extremo por debajo de la parte principal del torniquete. El torniquete se deberá ajustar solo lo suficiente para aminorar la corriente sanguínea y dilatar las venas, sin apretarlo tanto que reduzca el paso por las arterias.

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Pida al paciente que abra y cierre la mano varias veces, para favorecer la dilatación de las venas. El torniquete no debe permanecer más de 1 minuto ya que provocaría hemoconcentración.

Con la yema del dedo palpe la vena ubicando la trayectoria de la misma.

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Importante:Nunca se intente puncionar una vena por un lado.Nunca se introduzca la aguja con el bisel hacia abajo.

Desinfecte la piel con una torunda de algodón alcoholada.

Tome la jeringa con la mano derecha, colocando la yema del dedo índice sobre la base de la aguja y con el bisel hacia arriba. Oriente la aguja hacia la trayectoria de la vena.

Haga entrar la aguja a lo largo de la vena 1 – 1.5 cm siguiendo la trayectoria y de un solo movimiento. Ayúdese con la otra mano para fijar la vena.

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Se sentirá que la aguja atraviesa la piel que es resistente, inmediatamente después la pared de la venas, que es menos resistente.

Aplique una torunda de algodón sobre la parte donde se encuentra oculta la punta de la aguja e inmediatamente retire con un movimiento rápido por debajo de la pieza de algodón.

Retire el torniquete tirando del extremo doblado.

Con la mano izquierda tire hacia atrás el émbolo de la jeringa muy lentamente.

NOTA: Vacíe sin tardanza alguna y con gran cuidado la sangre en el tubo de ensayo adecuado.

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Pida al paciente que presione firmemente la torunda de algodón durante 3 minutos, con el brazo extendido.En la actualidad no se recomienda que se flexione el brazo con la torunda de algodón (a causa del riesgo de que se forme un hematoma).

TOMA DE SANGRE CAPILAR:

Mediante ella se obtendrá sangre sin modificar. El lugar de elección es el lóbulo de la oreja, el talón o la yema del dedo.

Se limpiara perfectamente con alcohol la zona elegida.

Se deja secar y se realiza la punción con la lanceta desechable.

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La sangre debe fluir libremente, se desecha la primera gota, secándola con una torunda de alcohol y se hace la toma.

Esta sangre es de gran utilidad para determinar recuento y formula leucocitaria,

hemoglobina, grupo sanguíneo, recuentos de plaquetas entre otros.

BIBLIOGRAFÍA:

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