manual clinico.docx

PARASITOLOGIA

5.1 EXAMEN FSICO DE HECES

1.1.1. PROPSITO:Por medio de la observacin macroscpica de la muestra de heces determinar el color, la consistencia,presencia de mucus, sangre, restos alimenticios o parsitos.

1.1.2. MUESTRA REQUERIDA:

5 gramos de heces recin emitidas, instruir al paciente que colecte en el frasco la porcin de muestraque evidencia el dao intestinal (Mucus, sangre, parsitos). No son recomendables las muestrasobtenidas con laxantes o enemas.

1.1.3. MATERIALES:

- Frascos plsticos de boca ancha y tapa de rosca, con aplicador.- Aplicadores de madera.- Guantes descartables.- Marcador.- Laminas y laminillas.

1.1.4. PROCEDIMIENTO:

- Observar el color de la muestra.- Observar la consistencia de la muestra.- Utilizar un aplicador de madera para buscar la presencia de mucus en la muestra.- Observar la presencia de restos alimenticios en la muestra.- Anotar los hallazgos.

1.1.5. FUENTES DE ERROR:

- Ingesta de medicamentos y algunos alimentos con colorantes.- Frascos sucios.- Contaminacin de las heces con orina.

1.1.6. FORMA DE REPORTE:

- COLOR: Marrn, amarillo, verde, rojo, aclico (blanco), negro.- CONSISTENCIA: Dura, cbalos, blanda, pastosa y lquida.- PRESENCIA DE MUCUS: Negativo o Positivo.- RESTOS ALIMENTICIOS: Escasos, moderados o abundantes.

Valores de referencia:- COLOR: Marrn- CONSISTENCIA: Pastosa a blanda.- PRESENCIA DE MUCUS: No debe observarse.- RESTOS ALIMENTICIOS: Escasos.

1.1.7. RESPONSABLE:Profesional Tecnlogo Medico y/ o Tcnico de laboratorio.

1.2 EXAMEN MICROSCPICO DE HECES

1.2.1. PROPSITO:

Analizar microscpicamente una muestra de heces en busca de la presencia de leucocitos,parsitos protozoarios y metazoarios en sus diferentes estadios.


5 gramos de heces recin emitidas. No son recomendables las muestras obtenidas con laxantes oenemas.

1.2.3. MATERIALES Y REACTIVOS:

- Lminas porta objeto.- Laminillas cubre objeto.- Marcador.- Aplicaciones de madera.- Guantes descartables.- Solucin salina 0.85%.- Solucin de Lugol para heces. - Papel lente.

1.2.4. EQUIPO:

- Microscopio


- Identificar la lmina porta objeto- Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de solucin salina al 0.85%.- Seleccionar la parte ms representativa de la muestra (mucus o sangre, si hay presenciade estos).- Agregar con un aplicador 1 a 2 mg de material fecal seleccionada y emulsionar.- Cubrir la preparacin con una laminilla cubreobjeto, colocndola en ngulo de 45sobre el borde de la preparacin y bajndolo con cuidado a fin de que no queden burbujasentre el cubre y el porta objeto.- Colocar en el otro extremo del portaobjeto, una gota de lugol para heces y repetir elprocedimiento anterior.- Observar en forma sistemtica al microscopio, con el objetivo 10x y luego con el 40x.- Reportar todo lo observado. (Anexo 2)Con solucin salina 0.85%, los trofozoitos y quistes de los protozoarios se observan en forma naturaly con lugol se visualizan las estructuras internas, ncleos y vacuolas.


- Desecacin de la preparacin.- Preparacin muy gruesa o delgada.- Intensidad de luz inadecuada.- Contaminacin de la muestra con orina.- Dejar transcurrir ms de 3 horas despus de la recoleccin para observar formas activasen la muestra.- Omitir la preparacin y observacin con lugol.- No examinar en forma sistemtica.- Muestra de heces escasa o seca en el frasco.


PARSITOS: Anotar el nombre del gnero y especie, as como su estado evolutivo.LEUCOCITOS: Reportar el nmero de leucocitos por campo.ERITROCITOS: Reportar el nmero de eritrocitos por campo.RESTOS ALIMENTICIOS: Escasos, moderados o abundantes.LEVADURAS: Escasas, moderadas o abundantes.RESTOS DE GRASA: Reportar de moderado a abundante.Valores de referencia:PARSITOS: No se deben observar.LEUCOCITOS: No se deben observar.ERITROCITOS: No se deben observar.RESTOS ALIMENTICIOS: de escasos a moderados.LEVADURAS: No se deben observar.RESTOS DE GRASA: Reportar de moderado a abundante.

1.3 PRUEBA DE AZUL DE METILENO

1.3.1. PROPSITO:

Es la bsqueda de leucocitos polimorfonucleares y mononucleares en una muestra lquida coloreadacon azul metileno lo que permite identificar si se trata de un proceso viral o bacteriano.


5gr. de heces frescas y lquidas, instruir al paciente sobre la forma de colectar la muestra.

1.3.3. MATERIALES Y REACTIVOS

- Lmina portaobjeto.- Aplicadores de madera.- Aceite de inmersin.- Papel filtro.- Embudo.- Bandeja o soporte de coloracin.- Colorante de azul metileno 0.1%.- Guantes descartables.- Marcador de vidrio.- Papel toalla.- Fsforos.- Papel lente.

1.3.4. EQUIPO:

- Microscopio.- Mechero.

1.3.5. PROCEDIMIENTO

- Filtrar el colorante antes de utilizar.- Identificar el portaobjeto a utilizar.- Realizar el extendido de muestra en las dos terceras partes de la lmina.- Dejar secar a temperatura ambiente.- Fijar al calor pasndolo rpidamente sobre la llama de un mechero tres veces en formahorizontal.- Cubrir la lmina con azul de metileno de 30 a 60 segundos.- Eliminar el azl de metileno tomando el portaobjeto por el extremo numerado inclinndolohacia delante, y lavar dejando caer una corriente de agua a baja presin sobre la parte enque no hay extendido, la que escurrir suavemente sobre la pelcula.- Dejar secar a temperatura ambiente.- Observar al microscopio con objetivo de inmersin 100x.- Contar 100 clulas blancas o leucocitos diferenciando los polimorfonucleares de losmononucleares.


- Extendidos gruesos.- Fijacin con excesivo calor.- Lminas sucias o grasosas.- Arrastrar la prepracin con un lavado brusco


Reportar el porcentaje de leucocitos encontrados con el predominio del que tenga mayorporcentaje.Polimorfonucleares ........... por ciento.Mononucleares .... por ciento.Interpretacin:Predominio de polimorfonucleares se asume que existe un proceso infeccioso de origenbacteriano.Predominio de Mononucleares se asume que el proceso infeccioso es de origen viral.5.4 COLORACIN DE ZIELH NEELSEN MODIFICADA PARALA INVESTIGACIN DE COCCIDIOS

1.4.1. PROPSITO:

La bsqueda de los ooquistes de coccidios en una coloracin teida con Zielh Neelsen modificada,la cual se basa en el comportamiento cido resistente de la cubierta de estos parsitos, que se tiende rojo, destacndose sobre un fondo azul.


5 gr de heces fecales o esputo.


- Lminas portaobjeto esmerilada.- Aplicadores de madera.- Fucsina fenicada.- Azl de metileno.- Papel filtro.- Embudo.- Alcohol cido.- Papel toalla.- Marcador de vidrio.- Aceite de inmersin.- Fsforos.- Guantes descartables.- Papel lente.

1.4.4. EQUIPO:

- Mechero.- Microscopio.


- Filtrar los colorantes antes de utilizar.- Identificar la lmina en el extremo esmerilado.- Hacer un extendido de materia fecal sobre un portaobjeto en las dos terceras partes de lalmina (No ejercer presin para hacer e extendido).- Dejar secar el extendido a temperatura ambiente.- Fijar con calor pasndolo rpidamente tres veces sobre la llama de un mechero en formahorizontal.- Cubrir la preparacin con Fucsina fenicada por 20 minutos.- Eliminar la fucsina tomando el portaobjeto por el extremo numerado inclinndolo haciadelante, y lavar dejando caer una corriente de agua a baja presin sobre la parte en que nohay extendido, la que escurrir suavemente sobre la pelcula.- Decolorar con alcohol cido por 2 minutos.- Lavar con agua de chorro hasta que no hayan restos de colorante.- Cubrir la preparacin con azul de metileno por 1 minuto.- Lavar con agua de chorro hasta que no hayan restos de colorante.- Dejar secar a temperatura ambiente.- Observar al microscopio toda la preparacin con el objetivo 40x en busca de estructurassemejantes a los ooquistes del coccidio. (Anexo 2)- Identificar con el objetivo de inmersin 100x.


- No filtrar los colorantes.- Realizar extendidos muy gruesos.- No dejar el tiempo suficiente para el secado del extendido.- Omitir la fijacin o excesivo calor al fijar la preparacin.- Incumplir los tiempos de coloracin.- Cubrir la preparacin con insuficiente fucsina.


En presencia de ooquistes:Reportar: Se observan ooquistes de Isospora belli o Criptosporidium sp. o Cyclosporacayetanensis, segn lo encontrado.En ausencia de ooquistes en la preparacin:Reportar: No se observan ooquistes.1.5.1.METODO DE CONCENTRACION DE LAS HECES DENNIS MODIFICADO1.5.1. PROPSITO:

La bsqueda de los parasitos, que talvez por su presencia escasa no se observan en los exmenes microscpicos de solucin salina y lugol, se evidencian en una cantidad mayor de muestra y por sedimentacin con solucin detergente al 1%.


5 gr de heces fecales.


- Lminas portaobjeto esmerilada.- Aplicadores de madera.- Solucion detergente al 1%.- Embudo.- Tubos conicos.- Gasa.- Marcador de vidrio.- Lugol.- Gradilla.- Guantes descartables.- Piceta.

1.5.4. EQUIPO:

- Microscopio.


- Preparar la solucin detergente al 1% con agua destilada, y colocarla en una piceta.- Identificar la muestra y el tubo conico, colocar en el embudo la gasa doblada.- Homogenizar toda la muestra de heces con solucin detergente, y filtrarla a travez de la gasa.- Dejar reposar por 15 minutos..- Decantar suavemente todo el sobrenadante, y con ayuda de la piceta con fuerza llenar nuevamente el tubo.- Dejar reposar por 15 minutos, y repetir nuevamente por una vez mas la decantacin del sobrenadante, el llenado del tubo y finalmente la decantacin .- Colocar en la lamina portaobjeto una gota del sedimento y agregar una gota de lugol, homogenizar y cubrir con la laminilla.- Observar al microscopio toda la preparacin con el objetivo de 10X y luego a 40x en busca de estructurasparasitarias.


- Mala preparacin de la solucin detergente.- Concentracion de una cantidad escasa de muestra de heces, sin una buena homogenizacin.- No realizar los tres lavados recomendados, si se hacen mas corremos el riesgo de quedarnos sin un buen sedimento o si es menos la cantidad de sedimento es muy abundante, que no permite ser visualizado correctamente al microscopio.


En presencia de parasitos:Reportar: Se observan huevos, quistes o larvas de parasitos, segn lo encontrado.En ausencia de parasitos en la preparacin:Reportar: No se observan huevos, larvas, ni quistes de parasitos.1.6. EXAMEN COPROFUNCIONAL1.6.1. PROPOSITO: Es muy importante en el estudio de causas de transtornos digestivos, en recin nacidos y adultos.1.6.2. MATERIALES- Lminas porta objeto.- Laminillas cubre objeto.- Marcador.- Aplicadores de madera.- Guantes descartables.- Solucin salina 0.85%.- Solucin de Lugol para heces. - Papel lente.- Reactivo de sudan III- Reactivo de benedict.- Papel tornasol.

1.6.3. EQUIPO:

- Microscopio


- Identificar la lmina porta objeto- Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de solucin salina al 0.85%.- Seleccionar la parte ms representativa de la muestra (mucus o sangre, si hay presencia de estos).- Agregar con un aplicador 1 a 2 mg de material fecal seleccionada y emulsionar.- Cubrir la preparacin con una laminilla cubreobjeto, colocndola en ngulo de 45sobre el borde de la preparacin y bajndolo con cuidado a fin de que no queden burbujas entre el cubre y el porta objeto.- Colocar en el otro extremo del portaobjeto, una gota de lugol para heces y repetir elprocedimiento anterior.- Observar en forma sistemtica al microscopio, con el objetivo 10x y luego con el 40x.- Reportar todo lo observado. Con solucin salina 0.85%, los trofozoitos y quistes de los protozoarios se observan en forma natural.y con lugol se visualizan las estructuras internas, ncleos y vacuolas, fibras musculares, fibras vegetales, almidn, gotas de grasa, et.

1.6.5 FUENTES DE ERROR:

- Desecacin de la preparacin.- Preparacin muy gruesa o delgada.- Intensidad de luz inadecuada.- Contaminacin de la muestra con orina.- Dejar transcurrir ms de 3 horas despus de la recoleccin para observar formas activas en la muestra.- Omitir la preparacin y observacin con lugol.- No examinar en forma sistemtica.- Muestra de heces escasa o seca en el frasco.


PARSITOS: Anotar el nombre del gnero y especie, as como su estado evolutivo.LEUCOCITOS: Reportar el nmero de leucocitos por campo.ERITROCITOS: Reportar el nmero de eritrocitos por campo.LEVADURAS: Escasas, moderadas o abundantes.RESTOS ALIMENTICIOS: Escasos, moderados o abundantes.Fibras musculares: normalmente unas pocas sueltas, apenas reconocibles como tales , sin estriacin transversal y redondeadas. Fibras estriadas de carne poco modificada sugieren un defecto e la digestin proteica o creatorrea, cuya causa es la insuficiencia pancreticaAlmidn. Amilorrea: restos de almidn sin digerir en las heces, que con lugol aparecen de color azul. Trnsito acelerado a travs del colnGrasas : Reportar de moderado a abundante. (Esteatorrea), Puede apreciarse macroscpicamente si es muy abundante. En la preparacin microscpica :con Sudn III se tie de rojo los glbulos de grasa. Causas: deficiencia de enzimas pancreticas ( pancreatitis crnica, fibrosis qustica del pncreas) o enteropatas (enfermedad celiaca, enfermedad de Whipple,etc)Azcar reductor: lactosa (reaccin de benedict). Importante en estudio de diarreas en lactantes: intolerancia a la lactosa, sindrome de mala absorcinpH : aporta informacin sobre una posible malabsorcin de hidratos de carbono como causa de diarrea y fermentacin en el coln por la flora bacteriana y como consecuencia los cidos grasos de cadena corta liberan acidifican el pH y lo disminuyen por debajo de 61.7.SANGRE OCULTA EN HECES1.7.1. PROPOSITO : Importante en el estudio de anemias crnicas por sospecha de sangrado oculto en va digestiva: lcera, cncer de estmago, cncer de colon

1.7.2. MUESTRA REQUERIDA:5 grs de heces, previa dieta de tres das sin carne,sin alimentos ricos en hierro.Evitar frmacos irritantes gstricos

1.7.3. MATERIALES :

Kitts de reactivos para sangre oculta

1.7.4- PROCEDIMIENTO : Tomar una muestras de heces de 5 6 lugares diferentes,con un aplicador y colocarlo en un diluyente.Homogenizar y dispensar tres gotas en el cassette.Leer a los 10 minutos.1.7.4. RESULTADOS :Positivo : cuando aparece una lnea roja en el control y el testigo.Invalidado : Cuando no aparece la lnea roja en el control, aunque aparezca en el testigo.Negativo : Cuando aparece la lnea roja solo en el control, mas no asi en el testigo.

URIANLISIS

6.1 TOMA DE MUESTRA PARA ANLISIS DE ORINA2.1.1. PROPSITO:

Obtener una muestra de orina con el volumen y condiciones adecuadas para realizar un anlisisfsico, qumico y microscpico.


30 mL de orina de chorro intermedio, recomendable la primera miccin de la maana, previa higiene genital.

2.1.3. MATERIALES:

Frascos plsticos transparente de boca ancha con capacidad de 50 mL limpio y seco.


- Lavar cuidadosamente los genitales, con agua, luego secarlos.- Descartar el inicio y el final de la miccin; recolectar la orina de la porcin intermedia. (Enel caso de la mujer separar los labios genitales).- Destapar y depositar la muestra de orina en un frasco plstico, transparente, limpio, deboca ancha con tapn de rosca y capacidad de 50 a 100 mL.- Tapar el frasco inmediatamente.


- Limpieza de genitales inadecuada.- Frascos sucios.- Tiempo prolongado entre la recoleccin y la entrega en el laboratorio.- No descarte del inicio y final de la miccin.

2.1.6. RESPONSABLE:

Paciente con instrucciones previas proporcionadas por el personal de laboratorio.

2.2 EXAMEN FSICO DE ORINA

2.2.1. PROPSITO:

Por medio de la observacin directa de la muestra de orina determinar el color y el aspecto de sta,lo cual puede sugerir una patologa del tracto urinario u otras enfermedades que estn en diferentelocalizacin, pero que sus manifestaciones secundarias son a nivel del rin.


30 mL de orina. Preferible la primera de la maana, 10 mL de orina en muestra de nios.

2.2.3. MATERIALES:

- Frascos plsticos transparente de boca ancha con capacidad de 50 mL.- Bolsa peditrica recolectora de orina.- Papel toalla.- Marcador.- Guantes descartables.


- Verificar que el frasco est bien identificado y completamente tapado.- Agitar en forma circular sobre la mesa de trabajo.- Observar color y aspecto.- Anotar lo observado.


- Frascos sucios.- Toma de muestra inadecuada.- Muestras medicamentosas.- Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacin (no mayor de 2horas)


Valores de referencia:COLOR: Amarillo.ASPECTO: transparente.

2.2.7. RESPONSABLE:

Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.

2.3 EXAMEN QUMICO DE ORINA

2.3.1. PROPSITO:

Determinar las sustancias qumicas presentes en una muestra de orina, as como su densidad ypH, a travs de las zonas de reaccin presentes en una tira reactiva.

2.3.2 MUESTRA REQUERIDA:

30 mL de orina. Preferible la primera de la maana, 10mL de orina en muestra de nios.


- Frascos plsticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL.- Bolsa peditrica recolectora de orina.- Tubos con capacidad de 10 mL.- Gradilla para tubos.- Papel toalla.- Marcador.- Guantes descartables.- Tiras reactivas para orina.


- Identificar el tubo.- Agitar la muestra de orina en forma circular sobre la mesa de trabajo.- Verter la orina en el tubo.- Introducir la tira reactiva en el frasco de orina.- Eliminar el exceso de orina colocando la tira sobre un papel absorbente.- Esperar el tiempo recomendado por el fabricante para su lectura visual o con el equipo lector de tiras.- Anotar los resultados.Los cambios de color que aparecen despus de dos ms minutos carecen de importanciadiagnstica.2.3.5. FUENTES DE ERROR:

- Muestras medicamentosas.- Tubos mal lavados.- Tiras reactivas de mala calidad o vencidas.- Cortar las tiras reactivas.- Leer las tiras reactivas despus del tiempo indicado por el fabricante.


pH: de 5 a 9.DENSIDAD: de 1.000 a 1.030.LEUCOCITOS: 0 a 500 Leucocitos por l.NITRITOS: Positivo Negativo.PROTENA: 0 a 1000 mg por dL.GLUCOSA: 0 - 1000 mg por dLCUERPOS CETNICOS: de una cruz a tres cruces.UROBILINGENO: de 304+BACTEROIDES4______________________________________________________________________________

11+12-52+26-303+3>304+MOBILUNCUS4______________________________________________________________________________

PUNTAJE DE LOS MORFOTIPOS BACTERIANOS OBSERVADOS Y VALORIZADOS

PUNTAJEDIAGNOSTICO

0 -3NORMAL4 -6INTERMEDIO7-10VAGINOSIS BACTERIANA_______________________________________________________________________________

6.4.8. RESPONSABLE:

Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.

6.5. DIRECTO DE SECRECIN URETRAL COLOREADO CON GRAM

6.5.1. PROPSITO:Investigar en una muestra de secrecin uretral coloreada, la presencia de Diplococos gramnegativosintracelulares (leucocitos) y extracelulares.


Secrecin uretral, tomada si es posible en las primeras horas de la maana antes de que el paciente haya orinado.


- Lmina portaobjeto.- Aplicador de madera o asa bacteriolgica.- Marcador de vidrio.- Guantes descartables.- Papel toalla.- Gasa.- Aceite de inmersin.- Solucin salina estril 0.85%.- Papel limpia lente.- Cristal violeta modificado por Hucker.- Lugol o solucin de Yodo para Gram.- Alcohol Acetona.- Safranina.

6.5.4. EQUIPO:

- Microscopio.


- Identificar la lmina portaobjeto.- Tomar la muestra aplicando una ligera presin en el pene de atrs hacia delante de manera que salga una gota de pus por el meato, la cual ser recibida en una lmina portaobjeto.- Cuando la muestra es demasiada espesa, agregar una gota de solucin salina estril 0.85%.- Proceder a la elaboracin de frotis y coloracin de Gram como est descrito en los procedimientos de: Preparacin de un extendido de muestra y Coloracin de Gram - Observar en el microscopio con objetivo de inmersin 100x, la presencia de Diplococos gramnegativos de forma arrionadas, tanto intracelulares (leucocitos) como extracelulares.- Prestar especial atencin a las orillas del frotis donde los elementos se extienden en una capa ms delgada, son ms fciles de reconocer y la tincin es menos concentrada. - Reportar lo observado.


- Coloracin o frotis inadecuado. 6.5.7. FORMA DE REPORTE:

Reportar de la forma siguiente:SE OBSERVAN DIPLOCOCOS GRAMNEGATIVOS INTRA Y/O EXTRACELULARES Y LA PRESENCIA DE POLIMORFONUCLEARES.- Cuando se observan cocos arrionados en pareja de color rosado.

NO SE OBSERVAN DIPLOCOCOS GRAMNEGATIVOS EN LA PRESENTE PREPARACION.- Cuando no se observan cocos en pareja de color rosado ni intra ni extracelulares.

6.5.8. RESPONSABLE:Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.

6.6. EXAMEN DIRECTO PARA BACILOS CIDO ALCOHOL RESISTENTE (Tuberculosis)

6.6.1. Objetivo:la baciloscopa es una tcnica fundamental para el diagnstico de la tuberculosis.Alcance:clnica ortega- rea de microbiologa6.6.2.Muestra:muestra pulmonar: Esputos, aspirado bronquial, post aspirados bronquiales.Muestra extra pulmonar: Lquidos biolgicos y orina.6.6.3.Materiales y equipos: Vasos de plstico con tapa rosca de boca ancha para la recoleccin de la muestra. Laminas porta objetos nuevos, desgrasados con alcohol. Mechero bunsen y de alcohol. Bandejas. Papel graff. Soporte de metal para colorear las lminas. Aceite de inmersin. Colorantes segn la tcnica de ziehl neelsen: fucsina bsica fenicada, alcohol-cido clorhdrico al 95%, azul de metileno y agua destilada. Microscopio binocular con objetivo de 100x. Aplicadores de madera para el extendido.6.6.4.Procedimiento: Sobre el extendido: Colocar sobre la mesa de trabajo el papel graff humedecido con el fenol al 5% para colocar las muestras debidamente rotuladas. Rotular las lminas con un papel graso en la tercera parte de la lmina y hacer una lnea divisoria. Cuidadosamente destapar el envase que contiene la muestra, siempre manteniendo la boca del envase cerca del mechero encendido. Fraccionar el aplicador de madera (baja lengua) en 2 o tres partes para poder seleccionar y extraer la muestra que debe ser muco purulento, enrollando en el aplicador. Colocar la porcin elegida sobre el portaobjeto y extender haciendo movimientos de vaivn (movimientos rotatorios como ovillos), que sea un extendido uniforme y que no sea un muy grueso ni muy delgado y no hacer la extensin hasta el borde de lmina para evitar contaminarse. Una vez extendida las l{aminas deben dejarse secar en una bandeja soporte a temperatura ambiente Terminado el extendido descartar los aplicadores en el recipiente para ser incinerados y cerrar el envase que contiene la muestra.Sobre el coloreado del extendido: tcnica ziehl neelsen Antes de su uso los colorantes deben ser filtrados. Colocar las lminas extendidas y secas sobre el soporte para colorear con el extendido hacia arriba y sobre un lavadero. Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con el colorante de la fucsina bsica fenicada. Calentar suavemente con la llama del mechero de alcohol por debajo de cada lmina portaobjeto hasta la emisin del vapor, repetir el proceso por tres veces (no debe hervir la o preparacin). Si el colorante disminuye por la evaporacin agregar ms colorante hasta cubrir el extendido y dejar enfriar. Lavar la lmina con agua corriente y a baja presin para eliminar la fucsina, inclinando y tomando la lmina por el lado rotulado con el dedo pulgar e ndice o con una pinza. Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con la solucin del alcohol acido durante dos minutos hasta obtener una coloracin rosa plido. De ser necesario decolorar nuevamente y dejar reposar por un minutos. Eliminar el alcohol acido lavar nuevamente la lmina con agua corriente a baja presin para no desprender el extendido. Cubrir la superficie del extendido con azul de metileno de uno a dos minutos. Colocar las lminas coloreadas en una bandeja, inclinado para escurrir el agua y dejar secar al medio ambiente.

6.6.5. RESULTADOS:- Observacin microscpica de la muestra coloreada.

Es importante considerar como campo microscpico til aquel en el cual se observa elementos celulares de origen bronquial es decir fibras mucosas clulas ciliadas y leucocitos. Los campos que carecen de estos elementos no deben ser considerados en una lectura, esta es para las muestras que proceden de las muestras pulmonares especialmente en el esputo.Colocar una gota de aceite de inmersin en la lmina coloreada a observar.Observar como mnimo cien campos (tiles en el esputo). Hacer un examen completo d la lmina empleando objetivo de 100x avanzando de izquierda a derecha con iluminacin mxima y sin filtro de color.Apuntar el nmero de bacilos observados y el nmero de campos observados.I. Interpretacin e informacin.1. Se informa de la siguiente escala semi cuantitativa:

-Negativo: no se encuentra BAAR en 100 campos microscpicos observados.

+Menor de un BAAR por campo en 100 campos microscpicos observados.

++1 a 10 BAAR observados en 50 campos microscpicos observados.

+++Ms de 10 BAAR por campo en 20 campos microscpicos observados.

6.7.PREPARACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVOSObjetivo:Para hacer el aislamiento de bacterias y micosis causantes de la enfermedad.Muestra: Partiendo de los insumos existentes en el comercio, que ya estn ajustados en pH y composicin adecuada.Alcance: Clnica Ortega REA DE MICROBIOLOGA Materiales y Equipos: Placas Petri estriles. Tubos de vidrios estriles. Balones o matraces 50 ul 100 ul 250 ul. Cocinita pequea. Autoclave. Mechero Bunsen. Incubadora 37C para el control.PROCEDIMIENTO1. Pesar de acuerdo a la indicacin de cada medio que est inscrito en cada etiqueta y/o de acuerdo a la necesidad.2. Agregar la cantidad de agua destilada suficiente de acuerdo a los gramos pesados.3. Disolver completamente con ayuda del calor haciendo que de un hervor.4. Colocar en la autoclave por 15 minutos a 15 libras de presin.No todos los medios se autoclavan como es el caso paro los medios para coprocultivo S.S. Agar o XLD, y tambin en el caso de la urea que se esteriliza por filtracin o esterilizar solo el agua destilada y despus agregar la UREA. 5. Cumplido el tiempo de esterilizacin apagar y dejar por unos 15 minutos y luego esperar que no est muy caliente para paquear, o si lo requieren en tubos, ya sea en tubos inclinados (pico de flauta) o tubos rectos, con mechero encendido.6. Esperar que se enfre.7. Colocar en la incubadora a 37 por 24 horas.8. Guardar en un medio de conservacin en bolsas plsticas, no ms de 6 semanas.9. Para hacer uso de los medios de cultivo pre calentar antes a 37 grados centgrados en la incubadora.10. El pH del medio debe ajustarse entre 7,2-7,4, debe almacenarse a 2-8C y utilizarse dentro de los 7 das siguientes a su preparacin. El medio debe dejarse a temperatura ambiente unas dos horas antes de utilizarlo. Si existe agua en la superficie del agar, las placas pueden colocarse en el incubador a 35C durante unos 30 minutos con la tapa ligeramente entreabierta.

6.8.UROCULTIVO Objeto:Realizar el aislamiento primario de la bacteria responsable de la infeccin del tracto urinario del paciente.Alcance: Clnica Ortega rea Microbiologa Muestra: Orina, colectada adecuadamente *Materiales y Equipo: Medio de cultivos bsicos (Agar Sangre, Agar MCkonkey). Asa de siembra calibrado (10ul). Mechero de bunsen. Incubadora. Placas Petri. Tubos de prueba de vidrio 13*100. Balones 50 ul 100 ul 250 ul.PROCEDIMIENTO:1. Rotular las placas con medios de cultivo, con el nombre del paciente, prueba y fecha.2. Quemar el asa de siembra calibrada de 10 ul, con el fin de esterilizarla.3. Esperar que el asa de siembra se enfre, tomar una asada de la muestra y siembran en el agar sangre, por estra.4. Inmediatamente sin necesidad de esterilizar, sembrar en el agar MCkonkey por estra.5. Esterilizar el asa de siembra y guardarlo.6. Colocar las placas con agar, sembradas, en la incubadora a 37C por 24 horas.INTERPRETACION: La lectura de los medios cultivados sern realizados despus de las 18 a 24 horas. Observar el tipo de colonia y hacer la coloracin gram de la misma. Realizar el recuento de colonias Estas deben ser mayor a cien mil. (100000 unidades formadoras de colonias (UFC/ml)) Realizar identificacin bioqumica de los gram negativos, en los medios de TSI, LIA, CITRATO SIMONS, SIM, UREA, INDOL. Identificar ayudado por la tabla de identificacin de enterobacterias.NOTA: es imprescindible hacer coloracin Gram de colonias sospechosas*Ver toma de Muestra6.9. CULTIVO DE SECRECIN FARNGEAObjetivo:Aislamiento de microorganismos causantes de faringitis, amigdalitis, o inflamacin de los pilares.Alcance: Clnica Ortega REA DE MICROBIOLOGAMuestra: Secrecin Farngea.Materiales: Hisopos de algodn esterilizados Baja lenguas Mascarilla Laminas porta objeto Medios de cultivo (agar MCkonkey, agar sangre, agar Columbia, agar manitol salado, agar saboread) Tubos 13 x 100mm Incubadora Microscopio Mechero bunsen Asas de platinoProcedimiento1. Rotular las placas con medio de cultivo con el nombre del paciente.2. Con el paciente sentado y cmodo proceder a tomar la muestra de las amgdalas, pilares y y fondo de la faringe con el hisopo.3. Colocar muestra de secrecin en cada una de las placas con el hisopo4. Con el asa de siembra hacer la estra de la secrecin en el agar5. Colocar un trozo de algodn en la base del frasco de anaerobiosis y humedecer, para crean un ambiente hmedo.6. Colocar las placas con medios de cultivo en el frasco de anaerobiosis correctamente y encender una vela para quitar oxgeno del frasco.7. Realizar la primera lectura del crecimiento a partir de las 18 a 24 horas8. Revisar el tipo de colonia, forma, nmero, etc. y hacer coloracin Gram de las colonias para discriminar si son colonias patgenas o flora normal.Interpretacin:Agar sangre y agar Columbia:1. Revisar la hemolisis que han producido las colonias.2. Revisar mediante una extensin y coloracin Gram de la colonia si son bacterias de inters patgeno, Gram positivos o Gram negativos o si son levaduras.3. Si son cocos Gram positivos tipo estreptococos se har la prueba de bacitracina y sulfatrimetoprim. Para el descarte de estreptococos beta hemoltico, estreptococos viridans o estreptococos beta hemoltico del grupo A, B o estreptococos beta hemoltico que no pertenece al grupo A.4. En caso de ser estreptococos beta hemoltico del grupo B hacer antibiograma.Agar MCkonkey1. Pueden desarrollarse colonias como klebsiella comnmente causantes de amigdalitis. La identificacin bioqumica ser concluyente para su identificacin.2. El aislamiento de pseudnimas es muy raro, pero suele darse casos.Agar manitol salado1. En caso de desarrollarse colonias y estas sen de color amarillo intenso, hacer la prueba de la couagulasa, tomando aproximadamente 30ul de plasma , inocular la cepa y esperar alrededor de 3 horas, revisar y concluir si hay coagulacin o presencia de fibrina en tal caso la prueba es positiva. Si es as hace antibiograma.

6.10. COPROCULTIVOObjetivo: es el mtodo indicado y ms til para el aislamiento de bacterias enteropatgenas.Las ms comunes son: shigella, salmonella, algunas cepas enteropatgenas de escherichia coli.Otras especies de poca frecuencia como: yersinia enterocoltica, Vibrio cholerae, clostridium.Principios generales: Para la obtencin de la muestra, usar frascos de boca ancha estril, si los pacientes viven cerca. Usar medios de transporte cuando los pacientes son de lejos o cuando se hace campaas fuera del laboratorio. Las muestras deben ser debidamente rotuladas nombres y cdigo que identificara a la muestra.Materiales y equipos Medios de cultivo como:1. Medio de transporte cary Blair2. Medio de xilosa lisina desoxicolato (XLD) 3. Medio de eosina azul de metileno (EMB)4. Medio de desoxicolato citrato (DE)5. Medio de enriquecimiento caldo selenito

Tubos de ensayo de vidrio con tapa rosca de 13 x 100 Incubadora Esterilizadora (autoclave, estufa) Microscopio Placas Petri Balones Matraces Asa de platino Mechero bunsenProcedimiento Hace siembras primarias o directas son muy importantes para aquellas que no crecen en medios de enriquecimiento como el caso de la Shigella. La superficie del medio de cultivo a usarse debe estar completamente seca, debe usarse un solo medio a eleccin XLD de preferencia.1. Girando el hisopo y haciendo un movimiento de rotacin dejar una porcin de la muestra en el borde extremo de la placa.2. Tomando como referencia central el lugar del depsito de la muestra distribuir con el asa uniformemente hacia ambos extremos tocando los bordes de la placa unos dos cm. De ancho.3. Continuar la siembra, distribuyendo con el asa, de uno de los extremos de la primera porcin y en el ngulo recto hasta el otro extremo, conservando el ancho de los dos centmetros. Siguiendo la misma direccin distribuir l tercera porcin que ha quedado libre, como se indica en la figura, secciones b y c.4. Seguir la siembra en la parte central, con un trazo de zigzag bien unido, sij tocar los lados de las siembras anteriores, segn seccin d en la figura.5. Anotar el nombre del paciente.6. Incubar de 35 a 37 grados centgrados durante 18 a 24 horas.

Enriquecimiento1. Una vez sembrada en la placa para el aislamiento primario, se procede hacer la siembra en el medio de enriquecimiento, hay varios, pero caldo selenito es ms recomendable porque no inhibe el crecimiento de la salmonella thypi al contrario permite su crecimiento.2. Escribir en nombre del paciente en el tubo que se va hacer la resiembra.3. Colocar el hisopo con loa muestra en el caldo tratando de exprimir en los extremos del tubo y dejar el hisopo en el tubo. Si la muestra es tomada en el laboratorio se pondr al caldo una buena asada.4. Incubar de 35 a 37 grados centgrados por 18 24 horas.5. El caldo despus de este periodo de incubacin se habr tornado rojo ladrillo y en estas condiciones para continuar el paso siguiente.6. La prolongacin de la incubacin del caldo selenito por cinco das mejora en muchos casos la recuperacin de la salmonella thypi.7. Hacer la siembra a partir del medio enriquecido, se debe usar el medio SS agar la cual permite el crecimiento de la Salmonella thypi.8. Obtener una asada sin agitar el caldo selenito, incubar a 37 grados centgrados por 18 a 24 horas.9. Con el asa cargada seguir el trazo de siembra indicado.10. Incubar las placas rotuladas a 37 grados centgrados por 18 a 24 horas.Interpretacin El crecimiento de colonias amarillas en XLD son latosa positivas. El crecimiento de colonias rojas pequeas y puntos negros son lactosa negativas. Las colonias sospechosas para salmonella o shigella sern repicadas en su oportunidad a los medios de diferenciacin bioqumica. Las pruebas para diferenciacin bioqumica de salmonella y shigella son numerosas ; pero aqu se usara : Triple azcar fierro conocido como el TSI. Agar lisina fierro: conocido como LIA. Estos medios incluyen varias pruebas bioqumicas que permiten orientarnos fcilmente al diagnstico de salmonella y shigella.

Caractersticas de colonias:

En el medio xilosa lisina desoxicolato (XLD)1. Las salmonellas en XLD son colonias rojas con puntos negros o completamente negras.2. La shigella, son colonias rojas en el XLD.En medio desoxicolato citrato o en eosina azul de metileno.1. En el medio EMB las colonias de shigella y salmonellas son translucidas e incoloras.En el medio salmonella shigella agar (SS)1. Salmonella: colonias translucidas e incoloras. Bordes incoloros y centro negro.2. Shigella: colonias translucidas e incoloras.Incubacin en los medios TSI y LIA Tener la seguridad de que ambos tubos TSI y LIA sern inoculados con la misma colonia tratando de no tocar las colonias vecinas ni el fondo del medio de cultivo. Punzar una sola vez en el medio TSI punzando por el centro hasta tocar el fondo del tubo retirar por el mismo trazo y sembrar en estra la parte inclinada. Con el resto de muestra que queda en la misma asa sin volver a tocar la colonia, punzar tres veces de espesor en el medio de LIA hasta el fondo del tubo, terminando as mismo en estra la parte iclinada.se colocara en el colocara en el tubo de LIA papel indol cuidando que no tenga contacto con el agar . Se puede hacer el indol en tubo de caldo BHI o en el SIM pero usar la misma colonia que se us para TSI y LIA o hacer a partir del TSI los repicajes Incubar los tubos de 35 37 por 18 hasta 24 horas. Los resultados Se llevaran a la tabla para la identificacin de enterobacterias.Resultados interpretados en TSI La presencia de color negro nos indica la produccin de hidrgeno o sulfurado (H2S) y se califica en cruces de 1+ a 4+. La presencia de gas se manifiesta por la elevacin y el resquebrajamiento de medio, se califica segn su intensidad de 1+ a 4+. La acides se pone de manifiesto por el cambio de color amarillo y se simboliza con la letra A. La alcalinidad del medio es el cambio de color rojo ladrillo a grosella y se simboliza con la letra K. El consumo de glucosa se manifiesta por la alcalinidad en la parte inclinada (pico de flauta) y la acides al fondo y se simboliza K/A. El consumo dela lactosa y/o sacarosa se manifiesta en cambio total del medio al color amarillo, se simboliza A/A.Resultados interpretados en LIA Lisina positiva: produce alcalinidad en todo el medio por tanto el color azul se intensifica K/K, se produce por la descarboxilacin. Lisina negativa: alcalinidad en la inclinacin y acides al fondo K/A o A/A. La desaminacin empieza en la parte inclinada, variando esta porcin al color rojo ladrillo, al fondo del tubo se torna amarillo (R/A) es lisina negativo. El H2S en el medio de LIA no tiene importancia, solamente tendr valor cuando el TSI es negativo y el LIA es positivo.Para identificar la salmonella y la shigella se har primero la identificacin bioqumica y luego la serologa y nunca hacer la serologa sin tener orientacin bioqumica.

6.11.Antibiograma El antibiograma disco-placa basado en el trabajo de Bauer, Kirby y colaboradores es uno de los mtodos que el National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) recomienda para la determinacin de la sensibilidad bacteriana a los antimicrobianos.Para conocer la sensibilidad de una bacteria adistintos antibiticos se siembra una muestra del cultivo puro en un medio en el queconocemos la capacidad de difusin de cada una de las sustancias a testar. Estees el medio de Mueller Hinton.

Material Cultivo Puro de un microorganismo Placa con medio de Mueller-Hinton Pinzas metlicas Discos de antibiticos

Para la realizacin de la prueba en primer lugarhay que suspender en el caldo BHI una colonia del cultivo con el hisopo esteril, que aproximadamente nos de la turbidez de 0.5 en la escala de Mac Farland.Se descarga el hisopo realizando unaestrella en el centro de la placa y extendindola posteriormente por toda lasuperficie procurando que no queden espacios sin cubrir. Una vez sembrada la placa. dejar secar de 3 a 5 minutos antes de depositar los discos.

Los antibiticos vienen en impregnados en discosde papel absorbente que se sacan con pinzas metlicas esterilizadas mediante flameo.Los discosse depositan en la superficie del medio de cultivoinoculado, realizando una ligera presin para que queden adheridos al mismo.Hay que procurar que queden suficientemente separados unos de otros paraque la lectura de resultados, sea clara y no hayan interferencias entre la accin deunas sustancias y otras.

La placa preparada con el inculo y los antibiticos seinvierte y se lleva a incubar durante 24 horas a 37C. Tras este tiempo, se leenlos resultados midiendo el dimetro de los halos de inhibicin del crecimiento queaparecen alrededor de los discos de papel. Se valora la efectividad de losmismos consultando la tabla correspondiente en la que, segn el antibitico,tenemos la capacidad de difusin en el medio y por tanto, la medida de halo quecorresponder a una bacteria sensible, de sensibilidadintermedia, o resistente.

La lectura de los halos de inhibicin debe interpretarse como sensible (S), intermedia (I) o resistente (R) segn las categoras establecidas por el NCCLS Cuando aparecen colonias dentro del halo de inhibicin, puede tratarse de mutantes resistentes, contaminaciones, poblaciones heterogneas o cultivos mixtos y conviene volver a identificarlas y realizar otra vez el ensayo de sensibilidad antimicrobiana. Como regla general, no debe considerarse aquellas colonias diminutas que aparecen en el halo de inhibicin y que han sido visualizadas mediante luz transmitida o con ayuda de una lupa, a excepcin de estafilococos resistentes a oxacilina o enterococos resistentes a vancomicina. La interpretacin de los resultados puede realizarse en funcin de las normas del NCCLS Antimicrobianos seleccionadosEs evidente la imposibilidad de ensayar un gran nmero de antimicrobianos frente a un microorganismo determinado. La seleccin final de qu antibiticos deben ser estudiados depender del Laboratorio de Microbiologa en sintona con las decisiones del Comit de Infecciones de cada hospital. En las Tablas 1 a 5 se muestran los antimicrobianos recomendados por la NCCLS, agrupados en cuatro grupos segn el trabajo de Washington. En el grupo A se encontran quellos antimicrobianos que se han de ensayar y que deben ser informados de forma rutinaria. El grupo B est constituido por antimicrobianos que pueden ser valorados de forma rutinaria, pero cuya informacin se efectuar de forma selectiva; es decir, solamente se informarn si los del grupo A no son activos, no son apropiados para un lugar determinado de la infeccin, o si se constata un fallo teraputico con el grupo A. En el grupo C estn incluidos los antibiticos que sern estudiados cuando aparezcan problemas especficos de resistencia, por ejemplo, brotes epidmicos, en pacientes con alergia a otros antibiticos o en infecciones inusuales. Finalmente, el grupo D, se destina a antimicrobianos utilizados en infecciones del tracto urinario. El NCCLS y grupo MENSURA (Mesa Espaola de Normalizacin de la Sensibilidad y Resistencia a los Antimicrobianos) tambin establecen recomendaciones segn el tipo de microorganismo e infeccin. Control de calidadEs necesario emplear cepas control para supervisar la exactitud y fiabilidad de la metodologa, debido tambin al gran nmero de variables que pueden afectar los resultados y que se han descrito anteriormente. Las cepas que se utilizan para el control de calidad son las mencionadas en las Tablas 1-4. El NCCLS ha establecido unos lmites en los dimetros de las zonas de inhibicin que son aceptables para las cepas utilizadas en el control de calidad. Los problemas que podamos encontrar en la determinacin del halo de inhibicin de las cepas de control de calidad y su resolucin se detallan en la Tabla 5.Las cepas de control se mantienen en el congelador a 70C en alguno de los medios descritos para la conservacin de cepas, con el fin de preservar su viabilidad y minimizar posibles modificaciones. Para resembrarlas debe utilizarse un escobilln o asa con el que se rascar la superficie del material congelado (no hace falta descongelar) y sembrar en una placa de agar sangre. Incubar a 35C, de 18 a 20 horas, realizar una nueva resiembra que ya podr emplearse para el ensayo. Debe realizarse controles cada nuevo lote de medio de cultivo y cada nuevo lote de antibiticos. La cepa ATCC 29212 sirve para detectar que el Mueller-Hinton contiene los niveles correctos de inhibidores al ensayar el trimetoprim y/o sulfametoxazol. Los resultados normalmente quedan registrados en una libreta de Control de Calidad. Control del inculo: Se utiliza un MacFarland 0.5. Para prepararlo se emplea 0.5 ml de 0.048 M de BaCl2 (1,175% BaCl2+2H2O) en 99,5 ml de 0.18 M H2SO4 (1% v/v) con agitacin constante. La absorcin a 625 nm ha de estar entre 0.08 y 0.10 (comprobar cada mes). Alcuotas de 4 a 6 ml se distribuyen en tubos con tapn de rosca y se guardan en la oscuridad a temperatura ambiente.ResultadosInterpretacin: Comparando los dimetros del halo de inhibicin con las CMIs, y estableciendo las correspondientes rectas de regresin, se han fijado unos criterios para clasificar las cepas estudiadas. De esta forma se han fijado tres categoras: sensible (S), intermedia (I) y resistentes (R). Anteriormente se aada la categora moderadamente sensible (MS) que tiende a eliminarse y los resultados correspondientes a la misma se han situado en la categora de intermedia. Las interpretaciones seguirn las normas establecidas por el NCCLS (Tabla 1 a 5) pero, por regla general, un dimetro de inhibicin de 30 a 35 mm es indicativo de una cepa altamente sensible, mientras que dimetros de zona de inhibicin inferiores a 15 mm son los que presentan las cepas resistentes.El trmino sensible indica que la infeccin ocasionada por la cepa para la que se ha determinado la CMI o su correspondiente halo de inhibicin puede tratarse de forma adecuada empleando las dosis habituales de antimicrobiano, en funcin del tipo de infeccin y de la especie considerada. El trmino intermedio indica que el halo de inhbicin traducido en valores de CMI se aproxima a las concentraciones de antimicrobiano alcanzables en sangre o tejidos y que puede esperarse eficacia clnica en aquellas localizaciones en las que se alcanzan altas cocentraciones de antimicrobiano (p. ej. orina) o cuando se emplean dosis ms elevadas de lo habitual. El NCCLS tambin incluye en esta categora aquellos casos de antimicrobianos con mrgenes de toxicidad estrechos en los que pequeos errores tcnicos podran suponer cambios de interpretacin en la categora clnica.Finalmente, el trmino resistente se refiere a aquellos microorganismos que no se inhiben por las concentraciones habitualmente alcanzadas en sangre/tejidos del correspondiente antimicrobiano, o a aquellos microorganismos en los que existen mecanismos de resistencias especficos para el agente estudiado en los que no ha habido una adecuada respuesta clnica cuando se ha usado como tratamiento el correspondiente antimicrobiano.Reproducibilidad: el medio de Mueller-Hinton, regulado en su concentracin de iones divalentes, presenta una buena reproducibilidad entre fabricantes. La reproducibilidad est condicionada a la correcta estandarizacin de la metodologa y a la utilizacin de controles de calidad.Comunicacin: Como se ha mencionado anteriormente los resultados se expresarn como sensible, intermedio o resistente. Como reglas importantes se debe considerar las cepas de estafilococos resistentes a oxacilina como resistentes a todos los beta-lactmicos, incluyendo la combinacin beta-lactmico ms inhibidor de beta-lactamasas, todas las cefalosporinas, penicilinas y los carbapenems.Tabla 1. Patrones estndar del halo de inhibicin, puntos de corte equivalente a la CMI para enterobacteriasa y dimetro del halo de inhibicin para la cepa E. coli ATCC25922 empleada como control de calidad

GRUPOAntimicrobianoCarga del disco (g)Dimetro del halo de inhibicin (mm)Punto de corte Equivalente a la CMI (g/ml)E. coli ATCC 25922 intervalo b

ResistenteIntermediaSensibleResistenteSensible

AAmpicilina a,c1017>323232816/832/16128/4128/2128128128323232843264646464326432161632488/152323225328163264648168321283501625612812812812812812832832/16128/2128/2128/4128/4326432161688>500416128162561000g/ml para microdilucin y >2000 g/ml para dilucin en agar.

Tabla 5. Problemas que pueden surgir en la determinacin de los halos de inhibicin de las cepas utilizadas como control de calidad

ObservacinDiagnsticoSolucin

Halos de inhibicin demasiado pequeos1. Inculo demasiado denso.2. Deterioro del antibitico.3. Cambio en la cepa control.4. Agar demasiado profundo.5. Lectura incorrecta de los resultados6. Aislamiento resistente1. Comprobar y ajustar inculo.2. Comprobar potencia . Utilizar un disco nuevo.3. Utilizar una cepa nueva.4. Comprobar profundidad del agar.5. Repetir con varios observadores.

Halos de inhibicin demasiado grandes1. Inculo poco denso.2. Antibitico demasiado potente.3. Cambio en la cepa control.4. Agar demasiado delgado.5. Lectura incorrecta de los resultados.6. Aislamiento sensible 1. Comprobar y ajustar inculo.2. Comprobar potencia. Utilizar un disco nuevo.3. Utilizar una cepa nueva.4. Comprobar la profundidad del agar.5. Repetir con varios observadores.

Resultados para Pseudomonas y aminoglicsidos fuera de control1. Contenido catinico incorrecto.1. Utilizar nuevo medio suplementado con cationes.

Resultados anmalos para Pseudomonas spp. y carbenicilina1. Mutacin en la cepa control.1. Utilizar cepa control nueva.

Aminoglicsidos y macrlidos demasiado resistentes, tetraciclina demasiado sensible.1. Medio demasiado cido.1. Comprobar pH del medio.

Aminoglicsidos y macrlidos demasiado sensibles, tetraciclina demasiado resistente.1. Medio demasiado alcalino.1. Comprobar pH del medio.

Halo de inhibicin del trimetoprim demasiado pequea.1. Exceso de timidina en el medio.1. Probar el medio con Enterococcus faecalis ATCC 33186.

CONTROL DE CALIDADMedio de cultivoCada lote de Mueller-Hinton se debe evaluar utilizando una serie de cepas de control de calidad. Uno de los problemas que pueden plantearse con el caldo de Mueller-Hinton es el contenido en timidina que puede inducir a errores en la determinacin de la CMI de sulfamidas y de trimetoprim. Con la cepa control de Enterococcus faecalis ATCC 29212 los valores de CMI deben ser, respectivamente,

manual clinico.docx

Documents