““Los mejores hombres Los mejores hombres son productoson producto

de sus propios de sus propios errores”errores”

Laboratorio # 3Laboratorio # 3

BacterioloBacteriologíagía

Objetivos del laboratorio

Entender la clasificación de las bacterias de Entender la clasificación de las bacterias de acuerdo a sus característicasacuerdo a sus características

Describir las estructuras y morfología de las Describir las estructuras y morfología de las bacteriasbacterias

Prácticar técnicas de cultivos de bacteriasPrácticar técnicas de cultivos de bacterias

LA CLA CÉÉLULALULA

Unidad básica de los organismos

Unicelular

Características de los seres vivos:

•Movimiento

•Respiración

•Metabolismo

•Reproducción

•Responden a estímulos Pluricelular

LA CLA CÉÉLULALULA Dos tipos de células: Eucariótica Procariótica

CCÉÉLULA EUCARILULA EUCARIÓÓTICATICA

Eu = verdadero Karios = núcleo

Organelos definidos

Grande y

compleja

CCÉÉLULA PROCARILULA PROCARIÓÓTICATICA Pro = Antes

Karios = núcleo Pequeña y simple

Reinos Categoría

taxonómica formada por fila o divisiones relacionados

Considerada la categoría más alta hasta finales del s. XX

ClasificaciónClasificación

Se reconocen cinco reinos en la actualidad Prokaryotae: organismos unicelulares, bacterias

y algas llamadas cianobacterias. Célula procariótica

Protista: organismos que solo tienen una célula eucariótica

Fungi: (hongos) descomponedores, parásitos (patógenos)

Plantae: organismos que usan clorofila para captar la energía lumínica y convertirla en alimento (fotosíntesis). Son autótrofos

Animalia: organismos heterótrofos

ClasificaciónClasificación

Nivel taxonómico más altoDominiDominioo

Dominio ArchaeaDominio ArchaeaArqueas:

•Halogeometricum borinquensis

•Haloterrigena thermotolerans

Dominio BacteriaDominio Bacteria

•Células procariotas (estructura simple)

•Carecen de núcleo u organelos

limitados por una membrana

•Tienen importancia positiva y negativa

CianobacteriasCianobacterias•Eran conocidas como algas azul-verdosas

•Organismos fijadores de nitrógeno

•Abundantes en charcas y lagos

Dominio EukaryaDominio Eukarya

•Se encuentran los diferentes reinos

•Organismos con núcleo verdadero

BacteriasBacterias

BacteriasBacterias•Descubiertas por Anton Van Leeuwenhoek (1674)•Células microscópicas que se miden en micras (u)•Mayoría presentan pared celular compuesta de peptidoglucano (polimero de proteínas y carbohidratos)•Reproducción por fisión binaria (asexual)•Material genético encontrado en plásmidos•Algunas poseen cápsula•Pueden formar colonias

BacteriasBacterias•Crecimiento de las colonias

•Su morfología y tamaño se utilizan para identificar las especies de bacterias

Formas comunes

Márgenes comunes

Características de la superficie

Tinción BacterianaTinción Bacteriana•Utilización de tintes para identificar bacterias

•Tinción Gram•Células responden al tinte de acuerdo a la complejidad y composición de su pared celular (pared delgada o gruesa)•Bacterias Gram +•Gram –•Gram variable (menos común)

Tinción GramTinción GramBacteria Gram + Bacteria Gram -

Pared celular simple Pared celular compleja

Capa de peptidoglucano gruesa Capa de peptidoglucano fina

No capa externa de lipopolisacáridos

Capa externa de lipopolisacáridos

Retienen cristal violeta/iodo-color azul/violeta

Retienen safranina-color rojo/rosado

Parte experimentalParte experimental

Técnicas de asepsia Técnicas de asepsia Contaminación de cultivos Trabajamos con posibles patógenos Limpiar mesas con Lysol Lavarse las manos Utilizar zafacón Utilizar guantes Utilizar bata

Ejercicio # 1: Ejercicio # 1: Preparación de laminilla Preparación de laminilla Preparar laminilla con muestra de sarro

Procedimiento: Gota de agua en laminilla Raspar sarro con palillo Pasar palillo en gota de agua Secar la laminilla utilizando lámpara de alcohol Derramar cristal violeta a la laminilla (2-3 gotas) Lavar exceso de tinte Secar con papel especial Observar preparación a través del microscopio Dibujar lo observado.

Ejercicio # 2: Ejercicio # 2: Observación de Observación de

laminillaslaminillas Observar laminillas Bacterias - tinción gram Bacilos Cocos Otras morfologías

Dibujar lo observado

Ejercicio # 3: Ejercicio # 3: MorfologMorfología ía bacterianabacteriana

Observar bajo estereoscopio las placas Petri para identificar la morfología de las colonias

Ejercicio # 4:Ejercicio # 4: Exposición de platosExposición de platos Tomar muestra de aire, agua, suelo, entre otros, utilizando la técnica a explicarse en el laboratorio

Colocarla en las placas Petri conteniendo un medio de cultivo (TSA) utilizando las técnicas asépticas correspondientes

Cerrar con parafina y rotular las placas: nombre, sección, clave, instructor.

Incubar a 25°C por 48 hrs Anotar y dibujar los resultados

Tomar en consideración a las bacterias, no a los hongos

Ejercicio # 5:Ejercicio # 5: Control de Control de crecimiento Bacterianocrecimiento Bacteriano

Utilizar antibióticos, desinfectantes y/o antisépticos para determinar su eficacia inhibiendo el crecimiento de bacterias Inocular de forma estriada la muestra de bacterias en el

medio de cultivo Colocar 3 discos, impregnados con 3 diferentes

sustancias químicas, sobre el agar y un disco con agua (control)

Rotular las placas Incubar a 37°C, observar en 24 hrs y anotar/dibujar los

resultados (medir la zona de inhibición-cm)

Informe Escrito (40 Informe Escrito (40 pts)pts)

Será solo del ejercicio de control de crecimiento bacteriano Página presentación Introducción (incluir objetivos) Materiales y métodos Análisis de resultados (incluir gráficas, dibujos y/o

tablas) Conclusión Bibliografía (mínimo cinco)