lineamientos para la vigilancia epidemiológica del ... · toma, manejo y envÍo de muestras ......

Dirección General de Epidemiología

Instituto de Diagnóstico y referencia Epidemiológicos“Dr. Manuel Martínez Báez”

lineamientos para la vigilancia epidemiológicadel rotavirus por laboratorio

Rotavirus Página 1 de 43 Versión No.01 InDRE-RNLSP

LINEAMIENTOS PARA LA VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA DEL ROTAVIRUS POR LABORATORIO

DGE-InDRE–RNLSP 2015

Fotografía de la portada propiedad de HKS Arquitectos


PRIMERA EDICIÓN, 2015 ROTAVIRUS–RNLSP ESTE DOCUMENTO FUE AVALADO POR LOS REPRESENTANTES DE LAS INSTITUCIONES QUE

CONFORMAN EL GRUPO TÉCNICO INTERINSTITUCIONAL DEL COMITÉ NACIONAL PARA LA

VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA (CONAVE). TODOS LOS DERECHOS RESERVADOS CONFORME A LA LEY, © INDRE-SECRETARÍA DE SALUD SE PERMITE LA REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL SI SE CITA LA FUENTE: “LINEAMIENTOS

PARA LA VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA DE ROTAVIRUS POR LABORATORIO” VERSIÓN NO. 01. INDRE, 2015. COLECCIÓN PUBLICACIONES TÉCNICAS DEL INDRE: ISBN: EN PROCESO INSTITUTO DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLÓGICOS “DR. MANUEL MARTÍNEZ

BÁEZ” FRANCISCO P MIRANDA 177, COL. LOMAS DE PLATEROS DEL. ÁLVARO OBREGÓN, C. P. 01480, MÉXICO, D. F. WWW.INDRE.SALUD.GOB.MX TEL. (55)53-42-75-50 LA EDICIÓN ESTUVO A CARGO DE: DR. JOSÉ ALBERTO DÍAZ QUIÑÓNEZ EL DISEÑO ESTUVO A CARGO DE: LIC. BRENDA ESCOBEDO LÓPEZ IMPRESO EN MÉXICO. PRINTED IN MEXICO

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SECRETARÍA DE SALUD

DRA. MERCEDES JUAN LÓPEZ SECRETARIA DE SALUD

DR. EDUARDO GONZÁLEZ PIER

SUBSECRETARIO DE INTEGRACIÓN Y DESARROLLO DEL SECTOR SALUD

DR. PABLO ANTONIO KURI MORALES SUBSECRETARIO DE PREVENCIÓN Y PROMOCIÓN DE LA SALUD

LIC. MARCELA GUILLERMINA VELASCO GONZÁLEZ

SUBSECRETARIA DE ADMINISTRACIÓN Y FINANZAS

DR. GABRIEL O´SHEA CUEVAS COMISIONADO NACIONAL DE PROTECCIÓN SOCIAL EN SALUD

LIC. MIKEL ARRIOLA PEÑALOZA

COMISIONADO FEDERAL DE PROTECCIÓN CONTRA RIESGOS SANITARIOS

DR. JOSÉ MELJEM MOCTEZUMA COMISIONADO NACIONAL DE ARBITRAJE MÉDICO

DR. GUILLERMO MIGUEL RUIZ-PALACIOS Y SANTOS

TITULAR DE LA COMISIÓN COORDINADORA DE INSTITUTOS NACIONALES DE SALUD Y

HOSPITALES DE ALTA ESPECIALIDAD

LIC. RODRIGO REINA LICEAGA TITULAR DE LA UNIDAD COORDINADORA DE VINCULACIÓN Y PARTICIPACIÓN SOCIAL

DR. NELLY AGUILERA ABURTO

TITULAR DE LA UNIDAD DE ANÁLISIS ECONÓMICO

LIC. CARLOS SANDOVAL LEYVA DIRECTOR GENERAL DE COMUNICACIÓN SOCIAL

DR. JESÚS FELIPE GONZÁLEZ ROLDAN

DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE PROGRAMAS PREVENTIVOS Y CONTROL

DE ENFERMEDADES

DR. EDUARDO JARAMILLO NAVARRETE DIRECTOR GENERAL DE PROMOCIÓN DE LA SALUD

DR. CUITLÁHUAC RUIZ MATUS

DIRECTOR GENERAL DE EPIDEMIOLOGÍA


LIC. JUAN CARLOS REYES OROPEZA DIRECTOR GENERAL DE INFORMACIÓN EN SALUD


INSTITUTO DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLÓGICOS DR. MANUEL MARTÍNEZ BÁEZ

DR. JOSÉ ALBERTO DÍAZ QUIÑÓNEZ

DIRECTOR GENERAL ADJUNTO

BIOL. IRMA LÓPEZ MARTÍNEZ DIRECTORA DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA

QFB. LUCÍA HERNÁNDEZ RIVAS

DIRECTORA DE SERVICIOS Y APOYO TÉCNICO

LIC. ADRIANA CASTRO CABRERA SUBDIRECTORA DE OPERACIÓN

QBP. IRMA HERNÁNDEZ MONROY

ASESORA TÉCNICA DE LA DIRECCIÓN

BIOL. NORMA ANGÉLICA MONTES COLIMA JEFA DEL DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGÍA

M. EN C. BELÉN TORRES LONGORIA

JEFA DEL DEPARTAMENTO DE VIROLOGÍA

QFB. ROBERTO VÁZQUEZ CAMPUZANO JEFE DEL DEPARTAMENTO DE ENFERMEDADES EMERGENTES Y URGENCIAS

M. EN C. JUAN CARLOS CARPIO PEDROZA JEFE DEL DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGÍA

DRA. CLARA GORODEZKY LAUFERMAN

JEFA DEL DEPARTAMENTO DE INMUNOLOGÍA

M. EN C. JUDITH ESTEVEZ RAMÍREZ JEFA DEL DEPARTAMENTO DE CONTROL DE MUESTRAS Y SERVICIOS

DR. JOSÉ ERNESTO RAMÍREZ GONZÁLEZ

JEFE DEL DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y VALIDACIÓN DE TÉCNICAS

DRA. HERLINDA GARCÍA LOZANO JEFA DEL LABORATORIO DE VIRUS GASTROINTESTINALES

COORDINADORA DE LA RED DE ROTAVIRUS


GRUPO DE TRABAJO

DRA. HERLINDA GARCÍA LOZANO JEFA DEL LABORATORIO DE VIRUS GASTROINTESTINALES

COORDINADORA DE LA RED DE ROTAVIRUS

QFB. HEIDI LIZBETH TERÁN VEGA ADSCRITA AL LABORATORIO DE VIRUS GASTROINTESTINALES

BIOL. IRMA LÓPEZ MARTÍNEZ

DIRECTORA DE DIAGNÓSTICO Y REFERENCIA

DR. HUGO MARTÍNEZ ROJANO ASESOR TÉCNICO DE LA DIRECCIÓN GENERAL ADJUNTA DEL INDRE

COORDINADOR DE MEDICINA LABORAL

DR. JOSÉ ALBERTO DÍAZ QUIÑÓNEZ DIRECTOR GENERAL ADJUNTO


LINEAMIENTOS PARA LA VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA DEL ROTAVIRUS

POR LABORATORIO

DGE-InDRE–RNLSP 2015


ÍNDICE

INTRODUCCIÓN ................................................................................................................... 9

ANTECEDENTES DE LA RED PARA EL DIAGNÓSTICO DE ROTAVIRUS ...................... 10

MARCO LEGAL DEL LABORATORIO ................................................................................ 12

DEFINICIONES OPERATIVAS ........................................................................................... 12

OBJETIVOS .......................................................................................................................... 13

Objetivo general ................................................................................................................ 13

Objetivos específicos ......................................................................................................... 13

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PÚBLICA PARA EL DIAGNÓSTICO DE ROTAVIRUS ................................................................................................................... 14

ORGANIZACIÓN DE LA RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE ROTAVIRUS ..........15

Laboratorio de Virus Gastrointestinales: Laboratorio Nacional de Referencia, el cual realiza las siguientes técnicas diagnósticas: .......................................................................15

Red de Laboratorios Estatales de Salud Pública ................................................................15

FUNCIONES DE LOS INTEGRANTES DE LA RED ........................................................... 16

Funciones del laboratorio de virus gastrointestinales. Laboratorio Nacional de Referencia.......................................................................................................................... 16

Funciones de los Laboratorios Estatales de Salud Pública (LESP). ................................. 16

TOMA, MANEJO Y ENVÍO DE MUESTRAS ....................................................................... 18

ALMACENAMIENTO Y ENVÍO DE MUESTRAS ................................................................ 19

ALGORITMOS DE DIAGNÓSTICO DE TIPIFICACIÓN Y SECUENCIACIÓN PARA ROTAVIRUS Y OTROS VIRUS GASTROINTESTINALES .................................................. 22

ESTÁNDARES DE CALIDAD ............................................................................................... 23

CAPTURA DE DATOS Y RESULTADOS .............................................................................. 25

PROGRAMA DE EVALUACIÓN EXTERNA DEL DESEMPEÑO (PEED) .......................... 26

BANCO DE MATERIAL BIOLÓGICO .................................................................................. 27

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES PARA LA RED DE ROTAVIRUS ............................... 29

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ..................................................................................... 30

ANEXO I: DISPOSITIVOS MÉDICOS ................................................................................. 32

ANEXO II: PREPARACIÓN DE REACTIVOS...................................................................... 33

ANEXO III: ESPECIFICACIONES DE LOS REACTIVOS PARA ROTAFORESIS .............. 37

ANEXO IV: ALMACENAMIENTO Y CONSERVACIÓN DE REACTIVOS PARA PAGE. .... 39

ANEXO V: LINEAMIENTOS PARA LA SOLICITUD DE INSUMOS .................................. 41

ANEXO VII: FORMATO PARA LA VIGILANCIA DE LA ENFERMEDAD DIARREICA AGUDA (EDA) POR ROTAVIRUS ....................................................................................... 43


INTRODUCCIÓN

La enfermedad diarreica aguda (EDA) es un problema de salud pública y la

segunda causa de mortalidad y morbilidad en la población infantil a nivel mundial.

Los rotavirus humanos del grupo A son los principales agentes virales causantes de

cuadros diarreicos con deshidratación severa. Anualmente en América Latina y el

Caribe se presentan 15000 muertes, 75000 hospitalizaciones, 2 millones de visitas

clínicas y 10 millones de casos de cuadros diarreicos. La EDA es causada por

diferentes agentes etiológicos entre los que se incluyen bacterias, parásitos y virus.

Los rotavirus humanos son la principal causa de episodios diarreicos en niños

menores de 5 años ocasionando aproximadamente el 70% de estos casos. Los niños

de 6 a 24 meses de edad tienen mayor riesgo de adquirir la infección y se estima

que estos grupos etarios, por lo menos, cursan de uno a tres eventos de

gastroenteritis en su vida.

La gastroenteritis puede transmitirse por diferentes rutas, el principal mecanismo

es la vía fecal-oral debido al consumo de alimentos o contacto de manos y objetos

contaminados con materia fecal. Además existen evidencias de propagación a

través de aerosoles y secreciones.

En países industrializados, los niños menores de tres años presentan en promedio

tres episodios de diarrea al año, en los países en vías de desarrollo los individuos

presentan un mayor número de eventos diarreicos. Esto hace necesario que estén

sujetos a la vigilancia epidemiológica para identificar de forma oportuna los

eventos que signifiquen un riesgo para la salud de la población y con base en los

hallazgos, se tomen decisiones para las acciones de planeación, control y

prevención de las enfermedades sujetas a vigilancia.

En México las acciones de vigilancia se apoyan en el Sistema Nacional de Vigilancia

Epidemiológica (SiNaVE), el cual cuenta con el subsistema de laboratorio para

llevar a cabo las actividades de manera oportuna y uniforme para el diagnóstico de

rotavirus, y otros virus gastrointestinales como son los Norovirus, Sapovirus,

Astrovirus y Adenovirus entéricos asociados a la enfermedad diarreica aguda.

El presente documento establece los lineamientos de operación que debe realizar la

Red Nacional de Laboratorios Estatales de Salud Pública (RNLSP) para la

vigilancia basada en el laboratorio de la gastroenteritis viral incluyendo las

funciones por niveles; la toma, manejo y envío de muestras; la metodología para el

análisis de muestras (métodos convencionales y métodos moleculares); la

evaluación del desempeño así como, los estándares de calidad.


ANTECEDENTES DE LA RED NACIONAL

Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública

La Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública (RNLSP) es el conjunto de

laboratorios de vigilancia epidemiológica con objetivos específicos que le han

permitido unificar métodos de diagnóstico, criterios de interpretación de

resultados, transferencia tecnológica, generación de conocimiento y formación de

recursos humanos. Es el soporte técnico-científico útil para la vigilancia

epidemiológica, que genera información de calidad para la toma oportuna de

decisiones a través de la confirmación de diagnósticos mediante estudios de

laboratorio en muestras biológicas.

La RNLSP depende de la Secretaría de Salud y es el Instituto de Diagnóstico y

Referencia Epidemiológicos (InDRE) su órgano rector en el área de vigilancia

epidemiológica. Tiene fundamento legal en la Norma Oficial Mexicana NOM-017-

SSA2-2012, para la vigilancia epidemiológica y está conformada por 31

Laboratorios Estatales de Salud Pública (LESP) de las 32 entidades federativas del

país (el Distrito Federal envía sus muestras al InDRE).

El Marco Analítico Básico de la RNLSP consta de 27 diagnósticos, distribuidos en

16 redes de vigilancia específica.

ANTECEDENTES DE LA RED PARA EL DIAGNÓSTICO DE ROTAVIRUS

Desde 1994, que fue integrada esta red de diagnóstico, el laboratorio de virus

gastrointestinales del InDRE ha ofrecido a sus integrantes cursos de capacitación y

actualización, capacitación en servicio, supervisión, asesoría, apoyo con equipo e

insumos en caso de emergencia y desastres así como el envío de reactivos para

realizar el proceso del método de electroforesis en geles de poliacrilamida (PAGE).

Posteriormente se inició el Programa de control de calidad en el que se les solicitó a

los integrantes de la red enviaran el 100% de las muestras diarreicas positivas y

50% de las negativas a rotavirus para la evaluación inicial de la red.

En el año 2002 la RNLSP se incorporó al Programa Caminando a la Excelencia

para evaluar el desempeño técnico del personal de la RNLSP respecto a los

programas prioritarios de la salud y fomentar su desarrollo.

Durante los años 2002 a 2004 se utilizaron cinco indicadores para la evaluación

del Boletín Caminando a la Excelencia: capacidad analítica, muestras enviadas para

control de calidad, calidad de las muestras, concordancia-cumplimiento e

independencia diagnóstica, con los que se garantizó la calidad de los diagnósticos

emitidos por los LESP.

Sin embargo, este último año 2013, se planteó la necesidad de contar con una

herramienta que de manera más confiable, permitiera entre otros aspectos evaluar


la capacidad técnica, detectar las necesidades de capacitación y mantener una

mejora continua de los miembros de la red de diagnóstico por lo que se re-

evaluaron los indicadores para el Boletín Caminando a la Excelencia quedando

incluidos los parámetros de concordancia, cumplimiento y evaluación del

desempeño.

A partir del año 2005 y hasta la fecha, se preparan y envían anualmente a toda la

red, paneles de eficiencia para medir el indicador de evaluación al desempeño.

Estos paneles contienen 10 muestras de evacuaciones diarreicas previamente

caracterizadas en el laboratorio de virus gastrointestinales del InDRE.

La conformación de la red de diagnóstico ha cambiado a través de los años de la

siguiente manera:

Durante el año 2007

La red de Rotavirus estaba constituida por 20 LESP.

Enviaban el 50% de muestras positivas y el 10% de negativas.

Se inició por parte de los LESP el envío de muestras para referencia

(constitución del banco).

En el año 2008

La red se constituyó de 25 LESP debido a la inclusión de Durango, Tlaxcala,

Oaxaca y Querétaro los cuales participaron en la evaluación de los dos paneles

de ese año.

A mediados de este año se incluyó Sonora participando únicamente en el

segundo panel de evaluación.

Los LESP enviaban el 10% de muestras positivas y el 5% de negativas

De los 25 LESP, casi la mitad de ellos (12) enviaban muestras para el banco

general de Rotavirus.

En el año 2009

Se integran Aguascalientes y Sinaloa a la red de diagnóstico, los cuales enviaban

muestras para la conformación del banco general de Rotavirus conforme lo

dispuesto para toda la red.

En el año 2010

La red estaba constituida por 29 LESP. Este año se integraron Baja California y

Guanajuato, quienes participaron en la evaluación del segundo panel del 2010.

En el año 2012

Durante este año se cumplió con la implementación de la red de Rotavirus en todo

el país, a partir de ese año la RNLSP cuenta con equipo y personal de laboratorio,

previamente capacitado en el InDRE.


MARCO LEGAL DEL LABORATORIO

1. Constitución Política de los Estados Unidos Mexicanos. Artículo 4. DOF

05/02/1917, Última Reforma D.O.F. 15/02/2012.

2. Ley General de Salud. Artículo 3, XV; 59; 64, III; 133; 134, I; 136, 138, 139 y

141. DOF 7/02/1984, Última Reforma DOF 07/06/2012.

3. Norma Oficial Mexicana NOM-017-SSA2-, Para la vigilancia epidemiológica.

DOF: 19/02/2013.

4. Norma Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002. Protección

ambiental-salud ambiental-residuos peligrosos biológico-infecciosos-

clasificación y especificaciones de manejo.

5. Norma Oficial Mexicana NOM-052-SEMARNAT-2005, Que establece las

características, el procedimiento de identificación, clasificación y los listados

de los residuos peligrosos. DOF: 23/06/2006.

6. Norma Oficial Mexicana NOM-031-SSA2-1999, Para la atención a la salud

del niño.

7. Secretaría de Salud. Programa Sectorial de Salud 2013-2018. Diario Oficial

de la Federación DOF: 12/12/2013.

8. Plan Nacional de Desarrollo 2013-2018. Diario Oficial de la Federación,

DOF: 20/05/2013, www.dof.gob.mx

9. Secretaría de Salud. Programa de Acción Específico 2013-2018. Sistema

Nacional de Vigilancia Epidemiológica, primera edición 2014.

10. Lineamientos para programas de evaluación externa del desempeño de la

Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública, InDRE- Secretaría de Salud,

México 2014.

11. Criterios de Operación para la Red Nacional de Laboratorios de Salud

Pública, InDRE-Secretaría de Salud, México 2014.

12. Norma Oficial Mexicana NOM-007-SSA3-2011. Para la organización y

funcionamiento de los laboratorios clínicos. D.O.F. 27-03-2012.

DEFINICIONES OPERATIVAS

Definición de casos

Caso sospechoso

Todo niño menor de 5 años hospitalizado por diarrea aguda.

Se define como:

Niño menor de 5 años: todo niño de cero a cuatro años, 11 meses y 29 días de

edad.

Hospitalizado: niño ingresado a la sala de rehidratación o a la de hospitalización.

En los hospitales donde no existe una sala de rehidratación, se considera

http://www.dof.gob.mx/


hospitalizado todo niño que reciba rehidratación oral o parenteral en el ambiente

hospitalario, aunque no sea ingresado en la sala de hospitalización.

Diarrea aguda: tres o más evacuaciones líquidas o semilíquidas en las últimas 24

horas, con hasta 14 días de duración. Si bien la consistencia de las heces es más

importante que el número de evacuaciones, considerar que los niños con lactancia

materna exclusiva suelen presentar heces líquidas.

Deben ser considerados los siguientes criterios de exclusión de caso:

—Tener 5 años de edad cumplidos o más.

—Presentar diarrea prolongada (más de 14 días de duración).

—Haber sido hospitalizado por otra razón, aunque presente diarrea.

—Haber tomado la muestra de heces después de 48 horas post-ingreso

hospitalario, por el riesgo de tratarse de una infección intrahospitalaria sin

embargo, en el caso de EDA en adultos puede ser considerado para la realización

de estudios de laboratorio.

Caso confirmado

Caso sospechoso que tiene una muestra de heces oportuna cuyo resultado de

laboratorio es positivo para Rotavirus. En el caso de estudio de brote, se confirma

en aquellos en los que se establezca el nexo epidemiológico con un caso confirmado

por laboratorio.

OBJETIVOS

Objetivo general

Establecer los criterios y procedimientos adecuados para la aplicación del

algoritmo del diagnóstico y tipificación de Rotavirus, y del algoritmo diferencial

para el diagnóstico de otros virus gastrointestinales; así como analizar la

información generada por la RNLSP para proporcionar información

epidemiológica convencional y de vigilancia basada en el laboratorio.

Objetivos específicos

Determinar el panorama epidemiológico de las diarreas por Rotavirus en

México.

Disponer de datos para generar información sobre el índice de morbilidad y

mortalidad de la enfermedad diarreica aguda (EDA).

Determinar la circulación de los diferentes genotipos de Rotavirus en el país.

Identificar los genotipos emergentes y re-emergentes de Rotavirus asociados

con la EDA.


Fortalecer la red de laboratorios para el diagnóstico oportuno de Rotavirus.

Proporcionar información epidemiológica convencional y vigilancia basada en

el laboratorio.

Identificar los agentes virales asociados con EDA a través del servicio de

NuTraVE-EDA, a través del algoritmo diferencial para otros agentes virales.

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PÚBLICA PARA EL

DIAGNÓSTICO DE ROTAVIRUS

Figura. 1.- Conformación de la red para el diagnóstico de rotavirus en México, 2014


ORGANIZACIÓN DE LA RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE

ROTAVIRUS

La RNLSP para el diagnóstico de Rotavirus está basada en los siguientes niveles de

organización:

Laboratorio de Virus Gastrointestinales: Laboratorio Nacional de

Referencia, el cual realiza las siguientes técnicas diagnósticas:

Electroforesis en Geles de Poliacrilamida (PAGE) para el diagnóstico y control

de calidad de Rotavirus.

RT-PCR punto final para la tipificación a VP7 y VP4 de las cepas de Rotavirus

grupo A, para el servicio de referencia solicitado por los LESP (Técnica del CDC,

Atlanta, GA) (Manual of Rotavirus detection and Characterization Methods).

World Health Organization, 2009 y en apoyo a la vigilancia epidemiológica.

Diagnóstico diferencial para otros virus gastrointestinales mediante Ensayo Inmunoenzimático (ELISA) para la identificación de cada uno de los siguientes virus: Rotavirus, Norovirus, Astrovirus, Adenovirus entéricos 40 y 41 a partir de heces, para el servicio de referencia solicitado por la RNLSP.

Técnica de RT-PCR punto final para la identificación y tipificación de otros virus gastrointestinales: Norovirus, Sapovirus, Astrovirus, Adenovirus entéricos 40 y 41, para el servicio de referencia solicitado por los LESP (Técnica del CDC, Atlanta, GA) (Manual of Rotavirus Detection and Characterization Methods). World Health Organization, 2009.

Propagación de las cepas prototipo de Rotavirus: Wa, DS-1, Price, ST3 a través del cultivo de células MA-104 (Técnica del CDC, Atlanta, GA) para la obtención de controles positivos y complementar el envío de Kits y paneles de eficiencia.

Análisis filogenético de los productos obtenidos de cADN de las cepas de Rotavirus circulantes para el estudio de la epidemiología molecular de estos agentes virales en apoyo a la vigilancia epidemiológica de la EDA por Rotavirus así como el monitoreo de las cepas emergentes y re-emergentes en el país.

Red de Laboratorios Estatales de Salud Pública

En la actualidad la red está conformada por 31 LESP (Aguascalientes, Baja California Sur, Baja California, Campeche, Chiapas, Chihuahua, Coahuila, Colima, Durango, Estado de México, Guanajuato, Guerrero, Hidalgo, Jalisco, Michoacán, Morelos, Nayarit, Nuevo León, Oaxaca, Puebla, Querétaro, Quintana Roo, San Luis Potosí, Sinaloa, Sonora, Tabasco, Tlaxcala Tamaulipas, Veracruz, Yucatán y Zacatecas):

Todos ellos utilizan el método de prueba que consiste en la Electroforesis en Geles de Poliacrilamida (PAGE) para la identificación del virus (Manual de Vigilancia de la Diarrea para Rotavirus, OPS. 2009).


FUNCIONES DE LOS INTEGRANTES DE LA RED

Funciones del laboratorio de virus gastrointestinales. Laboratorio Nacional de Referencia

Coordinar la red para el diagnóstico de rotavirus, que es fundamental para la vigilancia epidemiológica de la diarrea por Rotavirus.

Tipificar los VP7 y VP4 de las cepas de Rotavirus circulantes en el país.

Preparar y enviar los reactivos que conforman el Kit de Rotaforesis para los LESP.

Preparar y enviar los paneles de eficiencia para la red de rotavirus.

Evaluar los métodos de prueba para transferirlos a la red de rotavirus.

Implementar las metodologías de punta para el diagnóstico de virus gastrointestinales.

Capacitar y apoyar al personal de salud involucrado en el diagnóstico de rotavirus para el fortalecimiento de la red.

Actualizar el diagnóstico de rotavirus y otros virus gastrointestinales a través de cursos.

Proporcionar información para la vigilancia epidemiológica basada en el laboratorio de las diferentes cepas circulantes en el país.

Realizar el diagnóstico diferencial a través de NuTraVE-EDA para otros virus gastrointestinales asociados con la enfermedad diarreica aguda mediante pruebas de biología molecular.

Realizar análisis filogenético de las cepas virales circulantes en el país.

Realizar control de calidad a través de una evaluación del desempeño. Con base a la calificación final se definirá el porcentaje de muestras a enviar al InDRE si el desempeño es satisfactorio se continuará con este tipo de evaluación.

Realizar la captura y emisión de resultados en la plataforma de Infolab y de NuTraVE-EDA del InDRE así como la información completa de las muestras que lleguen directamente al laboratorio.

Proporcionar los resultados en forma oportuna y confiable a los usuarios de la red.

Promover la investigación aplicada en apoyo a la vigilancia, para los programas prioritarios de salud.

Funciones de los Laboratorios Estatales de Salud Pública (LESP).

Los laboratorios estales (Aguascalientes, Baja California Sur, Baja California, Campeche, Chiapas, Chihuahua, Coahuila, Colima, Durango, Estado de México, Guanajuato, Guerrero, Hidalgo, Jalisco, Michoacán, Morelos, Nayarit, Nuevo León, Oaxaca, Puebla, Querétaro, Quintana Roo, San Luis Potosí, Sinaloa, Sonora, Tabasco, Tlaxcala, Tamaulipas, Veracruz, Yucatán y Zacatecas) con capacidad instalada para el diagnóstico de rotavirus por PAGE llevan a cabo las siguientes funciones:


Realizar el diagnóstico de rotavirus por la técnica de PAGE con la metodología estandarizada que es proporcionada en la capacitación en el InDRE.

Participar en el Programa Externo de Evaluación del Desempeño a través de los paneles de eficiencia para la evaluación del desempeño, dos veces por año y obtener una calificación aprobatoria.

Solicitar un nuevo panel de evaluación y enviar las acciones de mejoras, en el caso de haber obtenido una calificación no aprobatoria.

Enviar al laboratorio de virus gastrointestinales el 10% de las muestras positivas de casos de EDA para control de calidad al InDRE en apoyo a la vigilancia epidemiológica convencional.

Enviar al laboratorio de virus gastrointestinales el 5% de muestras negativas de casos de EDA para control de calidad al InDRE.

Enviar al laboratorio de virus gastrointestinales el resto de las muestras positivas y negativas para conformación del banco general de Rotavirus y la tipificación de los genotipos circulantes en el país, en apoyo a la vigilancia basada en el laboratorio.

Tener la capacidad instalada para procesar 50 muestras semanales, según la infraestructura del laboratorio y contar con personal de salud capacitado para realizar el diagnóstico.

Almacenar y conservar de forma adecuada los reactivos que se utilizan en la técnica de PAGE (anexo IV).

Solicitar al InDRE los reactivos para la técnica de PAGE de acuerdo a la calendarización programada (anexo V).

Asistencia del personal responsable a los cursos anuales de actualización, de diagnóstico de rotavirus y otros virus gastrointestinales, impartidos por el InDRE.

Solicitar al InDRE capacitación en servicio para el personal de nuevo ingreso o bien cuando exista una nueva asignación de analista, que será el responsable del diagnóstico.

Enviar muestras negativas a Rotavirus por la técnica de PAGE al servicio de NuTraVE-EDA en apoyo a la vigilancia basada en el laboratorio.

Estandarización del servicio de envío de muestras de control de calidad al InDRE, que a partir de la fecha de ser recibida en el LESP es de 15 días, (no almacenar en refrigeración las muestras, por períodos mayores a un mes).

Proporcionar al personal de otras instituciones de salud los formatos y lineamientos vigentes establecidos por el InDRE para la toma y envío de muestras al LESP.

Cumplir con los requerimientos establecidos en el Manual para la Toma, Envío, Almacenamiento y Recepción de muestras (REMU-MA-01/1); así como el uso del Formato Único de Muestras (REMU F-05) vigente para el caso de la vigilancia convencional. En el caso de NuTraVE-EDA utilizar el formato impreso directamente de la plataforma que contiene el número de folio completo.

Proporcionar los resultados en forma oportuna y confiable a sus usuarios a través del informe de prueba.


Cumplir con el envío de muestras clínicas al InDRE para fortalecer la vigilancia convencional y la vigilancia basada en el laboratorio.

TOMA, MANEJO Y ENVÍO DE MUESTRAS Criterios de aceptación de muestra

1. Se aceptarán las muestras que cumplan con la definición operacional de

EDA.

2. Muestras registradas en la plataforma del InDRE.

3. Muestras con volumen suficiente (5.0–20 mL), y perfectamente etiquetadas.

4. Muestras que hayan sido tomadas en frasco de plástico con tapón de rosca.

5. Muestras que hayan sido tomadas dentro de las primeras 24 horas de haber

iniciado los síntomas en el paciente.

6. Muestras almacenadas a una temperatura de 4 a 8 °C

7. Muestras que cumplan los lineamientos del manual de toma y envío de

muestras editado por el InDRE (REMU-MA-01).

Tipos de muestras En los casos de EDA, se tomará muestra de materia fecal dentro de las primeras 24 horas de iniciados los síntomas en los pacientes que cumplan con los criterios inclusión. Criterios de rechazo de muestra

1. Se rechazarán las muestras que no cumplan con la definición operacional de

EDA.

2. Muestras sin formato único de muestras del InDRE, ni solicitud de oficio.

3. Muestras de referencia y control de calidad que no tengan resultado en

formato.

4. Muestras con volumen insuficiente (<5.0 mL) aun cuando estén

perfectamente etiquetadas.

5. Muestras que sean tomadas con hisopo rectal.

6. Muestras que excedan los 5 días de tránsito en áreas locales y 7 días en áreas

foráneas.

7. Muestras derramadas.

8. Muestras no etiquetadas.

9. Muestras que no sean enviadas con refrigerantes.

10. Muestras de referencia o control de calidad que no cuenten con formatos de

envío ver anexo VII.

11. Muestras de referencia o control de calidad con datos incompletos en

formatos de envío.


Toma de la muestra clínica

Colocar al paciente un pañal desechable puesto al revés y vaciar la muestra en un frasco recolector de polipropileno graduado con una capacidad de 20 mL.

Si la muestra es líquida vaciar en un vaso recolector de 5.0 a 10 mL de la muestra diarreica directamente en un frasco limpio con tapa de rosca. Si la muestra es sólida, utilizar un abatelenguas y colocar en un frasco recolector (ver figura 2).

Identificar el frasco con el nombre del paciente y fecha de la toma de muestra.

Introducir el frasco en una bolsa de plástico individual para evitar el derrame accidental de la muestra.

Llenar el formato adecuadamente.

Enviar la muestra al laboratorio, adjuntando solicitud de oficio y relación de nombres de los pacientes en caso de ser varios.

Figura 2. Toma y recolección de la muestra clínica para Rotavirus y otros virus

gastrointestinales ALMACENAMIENTO Y ENVÍO DE MUESTRAS

La muestra debe ser almacenada, por un máximo de siete días, en el refrigerador entre 4 a 8 °C hasta su envío al laboratorio. Una vez almacenadas las muestras clínicas deberán ser enviadas al laboratorio de referencia [1] en cajas de unicel acompañadas de refrigerantes y en un sobre, colocar

1 El sistema básico de triple embalaje consiste en la utilización de un recipiente primario, en el cual está contenida la muestra biológica (exudado faríngeo, exudado nasofaríngeo, lavado bronquio alveolar, biopsia, suero, etc.), el recipiente primario (p. ej. criotubos, tubos o frascos con tapa de rosca) debe ser hermético para evitar que la muestra se derrame y tiene que estar perfectamente etiquetado con el nombre o número de


el oficio de solicitud y formatos debidamente completados (pegado en el interior de la tapa superior), ver la figura 3 y 4.

muestra del paciente. El recipiente primario deberá rodearse de material absorbente como gasa o papel absorbente y colocarse en un recipiente secundario hermético a prueba de derrames y golpes. Si se colocan varios recipientes primarios dentro de un recipiente secundario se deberá usar una gradilla y material absorbente para evitar algún derrame. Es importante mencionar que dentro del recipiente secundario (hielera) tiene que haber suficientes refrigerantes para mantener una temperatura de 4 a 8 °C. Los recipientes secundarios deberán llevar las etiquetas de riesgo biológico y señal de orientación del recipiente, a su vez el recipiente secundario deberá ir contenido en un paquete externo de envío (caja de cartón o hielera) que proteja el contenido de elementos externos del ambiente y debe estar etiquetado con los datos del remitente, destinatario y señal de orientación. La documentación que se integre al triple embalaje deberá colocarse en la parte interior del paquete.

MUESTRA

Sólida: 5-10 g

Líquida: 5-20 ml

nombreedadfechaprocedencia

Llenar

la encuesta

Almacenar a 4ºC

Etiquetar

Caja de envío

ENCUESTA

Lista de

nombres y

resultados

OFICIO

DirectorDx.Técnica


TOMA Y ENVIO

DE MUESTRAS

MUESTRA

Sólida: 5-10 g

Líquida: 5-20 ml



Llenar

la encuesta

Almacenar a 4ºC

Etiquetar

Caja de envío

ENCUESTAENCUESTA

Lista de

nombres y

resultados

Lista de

nombres y

resultados

OFICIO

DirectorDx.Técnica

OFICIO

DirectorDx.Técnica



TOMA Y ENVIO

DE MUESTRAS

REMU-F-12

NuTraVE-EDA

No. Folio


Figura. 3. Toma y envío de muestras para gastroenteritis viral.

Figura.4. Logística de trabajo (desde la toma de muestra, hasta la difusión del informe).


ALGORITMOS DE DIAGNÓSTICO DE TIPIFICACIÓN Y SECUENCIACIÓN PARA ROTAVIRUS Y OTROS VIRUS

GASTROINTESTINALES

Figura. 5. Algoritmo ampliado para NuTraVE-EDA. Clave de tabulador:

1A2510004, 1A2510005, 1A2510101, 1A2510302, 1A2510304, 1A2510006, 1A2510201, 1A2510301, 1A2510303


Figura. 6. Algoritmo para control de calidad y tipificación de Rotavirus. Clave de

tabulador: 1A251000, 1A2510004, 1A2510005 ESTÁNDARES DE CALIDAD La funcionalidad de una red de diagnóstico para la vigilancia epidemiológica de Rotavirus puede evaluarse en tres fases: 1) pre-analítica, 2) analítica y 3) post-analítica. 1) Fase pre-analítica

En la fase pre-analítica se evalúa la oportunidad de la toma de la muestra y la calidad de la misma. Se habla de una muestra adecuada si el paciente a quien se la toman cumple con la definición de caso, el tipo de muestra de acuerdo al diagnóstico presuntivo de gastroenteritis viral y que la cantidad de muestra sea suficiente, que se haya cumplido el protocolo para la toma de la muestra, el material, la temperatura, el embalaje y el transporte sean los adecuados. Esta fase ocurre entre el inicio de los síntomas y el momento de la toma de la muestra. El primer indicador para evaluar esta fase, es el índice de rechazo de muestras inadecuadas. El punto de corte del mismo es que no rebase el 10%. La construcción del indicador es el siguiente:


ÍNDICE DE RECHAZO = Número de muestras rechazadas

N° de muestras que llegan a la institución para diagnóstico El segundo indicador de la fase pre-analítica es la oportunidad de la toma de la muestra. Este indicador mide el tiempo óptimo de la toma de la muestra con respecto al inicio de los síntomas de la enfermedad. El cumplimiento de este indicador es indispensable para mantener la adecuada sensibilidad de la prueba. Oportunidad Resultados de diagnóstico informados en tiempo estándar entre el número de muestras recibidas para diagnóstico por 100. Meta Cumplir con la emisión de los resultados de diagnóstico en tiempo estándar por lo menos el 90% de las muestras procesadas mensualmente. 2) Fase analítica

Comprende todo el flujo de muestra dentro del proceso analítico y se utilizarán dos indicadores: a) Desempeño técnico b) Oportunidad del proceso analítico El indicador de desempeño técnico será obtenido a través de paneles de eficiencia dos veces por año, cumplimiento de cédula de verificación en visitas de supervisión (una vez al año), concordancia con las muestras enviadas para cultivo viral y el 10% de negativas y cumplimiento con las bases del sistema vectorial de caminando a la excelencia.

Índice de desempeño técnico Confiabilidad Paneles aprobados con el 90% o más sobre paneles recibidos por 100. Meta Cumplir con el 85% o más del programa de evaluación del desempeño para cada diagnóstico.

3) Fase post-analítica El indicador de la fase post-analítica es la emisión de resultado, el cual medirá el tiempo transcurrido entre el término del análisis de PAGE y la llegada de la información a la base de datos (plataforma de vigilancia epidemiológica). Todos los laboratorios que realizan el diagnóstico para esta red deben informar los resultados por día de proceso y no acumular los resultados para capturar resultados en el sistema de información general. Tiempo entre procesamiento, captura y envío de información dentro de las primeras 24 horas de terminado el proceso:


La fuente de información de los indicadores, será la plataforma Infolab y la de NuTraVE-EDA actual, y la plataforma SiNaVE a partir del 19 de octubre de 2012. El seguimiento de los indicadores en el InDRE se efectúa por el personal de la Dirección de Servicios de Apoyo, en combinación con el área de coordinación de la RNLSP y son revisados semanalmente, excepto el de desempeño técnico que se evalúa trimestralmente. CAPTURA DE DATOS Y RESULTADOS

La captura de los datos en la plataforma de Infolab del InDRE y de NuTraVE-EDA se realizará de acuerdo al manual de uso de las plataformas. PANELES DE EFICIENCIA

Los laboratorios de la red Rotavirus reciben semestralmente en fechas previamente establecidas un panel de eficiencia, y con base en los resultados obtenidos, se evalúa su desempeño y se define si se continua con el diagnóstico liberado (debe obtenerse al menos el 80% de calificación aprobatoria).

Concordancia entre 80 y 100%. Se mantiene este tipo de evaluación.

Concordancia menor al 70%. Se requiere comprar un nuevo panel y enviar las oportunidades de mejora.

Concordancia no aceptable en el segundo panel. Se requiere de capacitación del personal y establecer nuevamente el envío de muestras para realizar el diagnóstico en el InDRE.

ENVÍO DE PANELES DE EFICIENCIA

Se envían semestralmente dos paneles de evaluación a la red con 10 muestras cada uno de ellos y dos controles positivos: e-tipo “largo” y e-tipo “corto”.

El envío de los paneles se realiza a través de las guías pre-pagadas por el LESP.

Con cada panel se envía el oficio específico, el formato para el informe de resultados y el formato para que los laboratorios notifiquen la recepción del mismo.

Las muestras clínicas enviadas en los diferentes paneles son codificadas para cada región geográfica. Se notifica vía electrónica a través de la coordinación de la RNLSP el envío de paneles de eficiencia.

RESULTADOS DE LOS PANELES DE EFICIENCIA

La RNLSP informa al laboratorio a través de la coordinación de la RNLSP los resultados obtenidos del análisis, 7 días hábiles posteriores a la recepción del panel.

Se informa a cada uno de los LESP correspondientes, de los resultados obtenidos del panel con la clave previamente asignada por el InDRE.


Se notifica a la RNLPS vía electrónica y por oficio los resultados obtenidos por el InDRE, 10 días hábiles después de haber recibido la información del LESP.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Es importante mencionar que el análisis de los resultados va enfocado a identificar oportunidades de mejora en la RNLSP. Los criterios de evaluación que deben identificar los analistas del LESP son los siguientes:

Muestra positiva: la prueba de Rotavirus se considera positiva cuando se

observa la presencia de los 11 segmentos de ARN viral o cualquiera de los

segmentos que conforman el primer bloque (bloque I, 4 bandas).

Muestra negativa: la prueba se considera negativa cuando hay ausencia de los 11

segmentos de ARN viral o bien de la observación de segmentos inespecíficos no

correspondientes al genoma de Rotavirus.

Rotavirus.- detección mayor del RNA viral en heces

Rotavirus.- detección menor del RNA viral en heces

Rotavirus.- detección escasa del RNA viral en heces

Rotavirus.- detección mínima del RNA viral en heces Todo lo anterior para alcanzar la mayor ponderación en cada caso. PROGRAMA DE EVALUACIÓN EXTERNA DEL DESEMPEÑO (PEED) El análisis de los indicadores que a la fecha se utilizan en la evaluación del Boletín Caminando a la Excelencia, cumplimiento, concordancia y el desempeño obtenido por los LESP en los paneles de eficiencia, permite contar con un panorama general y determinar el diagnóstico situacional de esta red. Considerando los resultados obtenidos por la RNLSP en el boletín y PEED para el diagnóstico de rotavirus, se han propuesto modificaciones al esquema actual, con la finalidad de privilegiar el envío de los paneles de eficiencia como una herramienta más eficaz para la evaluación del desempeño, considerando para ello los siguientes criterios: 1. Aquellos LESP que hayan obtenido 90% o más de concordancia en el boletín

(rotavirus) y PEED, se clasificarán como sobresalientes. 2. Aquellos LESP que hayan obtenido menos de 90% y más de 70% de

concordancia en el boletín (rotavirus) y PEED, se clasificarán como

satisfactorio.


3. Aquellos que obtengan 70% o menos de concordancia en el boletín (rotavirus) y

PEED, se clasificarán como mínimo.

Con base en la evaluación se propone modificar el porcentaje de muestras que

actualmente envían los LESP para aseguramiento de la calidad como se muestra a

continuación:

Cuadro 1. Evaluación del PEED

Clasificación de

laboratorio Porcentaje para aseguramiento de la calidad

Sobresaliente

Enviarán el 10% de muestras positivas y 5% de las

negativas a rotavirus y se les enviará panel de eficiencia

dos veces por año.

Satisfactorio


negativas a rotavirus y se les enviará panel de eficiencia

dos veces por año.

Mínimo


negativas a rotavirus, se deberá solicitar un nuevo panel y

enviar medidas correctivas y plan de acción, y se les

enviará panel de eficiencia dos veces por año.

BANCO DE MATERIAL BIOLÓGICO

Los LESP deberán enviar el 100% de sus muestras positivas y negativas a

rotavirus para conformar el banco general de Rotavirus del InDRE, que

servirá para la vigilancia en nuestro país. Esta solicitud se deberá enviar y notificar

con otro oficio diferente al de control de calidad (no existe costo alguno para este

envío). El laboratorio de virus gastrointestinales del InDRE, seleccionará sólo el

25% de las muestras positivas a Rotavirus del banco, para la vigilancia basada en el

laboratorio, de las cuales se proporcionará resultado al LESP.

En el caso de las muestras enviadas para control de calidad, se realizará la

identificación o tipificación de rotavirus por RT-PCR.

Estudios de brotes de enfermedad diarreica aguda (EDA) asociados con

rotavirus

En caso de brotes por EDA asociados con rotavirus, se enviará al laboratorio de

virus gastrointestinales del InDRE el 50% de las muestras positivas a Rotavirus

para su tipificación de cepas a VP7 y VP4 y 100% negativas para el diagnóstico

diferencial de otros agentes virales: Norovirus, Sapovirus, Astrovirus y Adenovirus


entéricos 40 y 41. En el caso de brotes, se realizará el algoritmo ampliado para

brotes y NuTraVE-EDA.

Secuenciación en apoyo al análisis filogenético de las cepas circulantes

para Rotavirus y otros virus gastrointestinales.

La secuenciación de ampliaciones de cADN se realiza con el apoyo del laboratorio

de genoma de patógenos del InDRE, para lo cual el laboratorio de virus

gastrointestinales lo solicita vía memorándum acompañado de la lista de productos

de cADN y sus respectivos oligonucleótidos.

Se realizará el 10% de la secuenciación a los productos de cADN de las

diferentes cepas a sus genotipos G y P circulantes durante la epidemia rotaviral

anual para la confirmación de cepas emergentes o re-emergentes.

Se realizará el 15% de la secuenciación a los productos de cADN de los

diferentes genotipos G y P circulantes de Rotavirus sólo en caso de brotes

asociados con Enfermedad Diarreica Aguda (EDA) para la confirmación de

cepas emergentes o re-emergentes.

Se realizará el 5% de la secuenciación a los productos de cADN de las cepas

circulantes para otros virus gastrointestinales sólo en caso de brotes asociados

con EDA.

Se enviarán las muestras para NuTraVE: El envío de muestras clínicas para la

solicitud del estudio por NuTraVE, se realiza por oficio específico acompañado

de la encuesta correspondiente de NuTraVE y muestra física diferente a la de

control de calidad, así como de su captura previa en la plataforma de NuTraVE.


CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES PARA LA RED DE ROTAVIRUS

ACTIVIDAD

EN

E

FE

B

MA

R

AB

R

MA

Y

JU

N

JU

L

AG

O

SE

P

OC

T

NO

V

DIC

Envío del primer panel

a la RNLSP xx

Recepción de

resultados en el InDRE xx

Envío de resultados a la

RNLSP xx

Recepción del Plan de

acciones de los LESP xx

Fecha límite de

cumplimiento al Plan

de Acción

xx

Curso de actualización

para el diagnóstico de

Rotavirus:

ELISA para

Diagnóstico de

Rotavirus y

preparación de

reactivos para

Rotaforesis, InDRE

xx

Envío del segundo

panel a la RNLSP xx

Recepción de

resultados en el InDRE xx

Envío de resultados a la

RNLSP xx

Nota: Las fechas del cronograma pueden estar sujetas a cambio de día.

Si algún día coincide con fin de semana o día de asueto, la fecha se

mueve al día hábil siguiente.


REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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15. F. Raúl Velázquez, Herlinda García-Lozano, Esteban Rodríguez, Yolanda

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21. Miller MJ, et al. Guidelines for safe work practices in human and animal

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22. Guidelines for Biosafety Laboratory Competency. MMWR. Supplement / Vol.

60; 2011.

23. World Health Organization. Guidance on regulations for the Transport of

Infectious Substances 2013-2014; Geneva: WHO Press; 2012.

24. Chosewood C & Wilson DE. Biosafety in Microbiological and Biomedical

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WHO Press; 2004.

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http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22217667


ANEXO I: DISPOSITIVOS MÉDICOS

1. Lindberg Termoagitador con temperatura y agitación regulable

2. Potenciómetro digital

3. Fuente de poder marca Bio Rad

4. Cámara de electroforesis Mini protean II marca Bio Rad

5. Agitador tipo vortex

6. Microcentrífuga para tubos eppendorf de 3,000 – 10,000 rpm


ANEXO II: PREPARACIÓN DE REACTIVOS

REACTIVOS PARA ROTAFORESIS

Solución A 5X (Solución de lisis)

Procedimiento:

1. Pesar: Tris base 1.6 g; EDTA 1.4 g; SDS 0.65 g y NaCl 2.0 g.

2. Disolver cada uno en 20 mL de agua bidestilada estéril con agitación constante,

hasta la completa disolución.

3. Agregar 0.65 mL de -mercaptoetanol.

4. Llevar al volumen en un matraz aforado de 50 mL con agua bidestilada estéril.

5. Guardar en una botella de vidrio o plástico.

6. Conservar a temperatura ambiente.

Solución B 1X (Fenol saturado)

Procedimiento:

1. Tomar el frasco (s) del fenol ultra puro presentación en cristales.

2. Poner a baño María (60 °C) el frasco hasta disolver todos los cristales.

3. Preparar solución reguladora 1(B1) Tris-Base, 1M, pH 7.6

4. Preparar solución reguladora 2 (B2) Tris-base, 0.1M, pH 7.6

5. Hacer 4 lavados con 500 mL cada uno, con solución reguladora 1 (B1). Por cada

lavado dejar en agitación 24 h.

6. Cuando transcurran 24 h, dejar reposar 30 min y retirar la solución reguladora

(fase superior).

7. Hacer dos lavados de 400 mL con solución reguladora, dos por cada lavado

dejar en agitación por 24 h.

8. Cuando hayan pasado las 24 h, dejar reposar 30 min y retirar la solución

reguladora.

9. Al volumen restante de la solución B2, adicionar 0.2 mL de -mercaptoetanol

por cada 100 mL. Mezclar en un termoagitador durante 30 min.

10. Poner en un termoagitador y adicionar 0.5 g de 8-hidroxiquinoleína en

cristales. Revisar la coloración cada 5 min, hasta obtener el color deseado

(amarillo paja).

11. Dejar reposar el fenol con la solución reguladora por dos días a 4 °C.

12. Poner alícuotas de 35 mL de fenol fase de color amarillo y de 5 a 10 mL de

solución reguladora fase transparente con un pipeteador automático en tubos

cónicos de polipropileno (Corning) de 50 mL de capacidad.

13. Cubrir los tubos con papel aluminio y etiquetarlos.

14. Guardar el fenol en refrigeración.


Solución reguladora 1 Tris-Base, 1M, pH 7.6

Procedimiento:

1. Pesar 121.1 g de Tris-base

2. Disolver en 600 mL de agua bidestilada y ajustar el pH a 7.6 (si el pH queda

muy básico, bajarlo con ácido clorhídrico concentrado).

3. Aforar con agua bidestilada en un matraz volumétrico de 1.0 L.

Solución reguladora 2 Tris-base, 0.1M, pH 7.6

Procedimiento:

1. Pesar 12.11 g de Tris-base.

2. Disolver en 700 mL de agua destilada y ajustar el pH a 7.6 (si el pH queda muy

básico, bajarlo con ácido clorhídrico concentrado).

3. Aforar con agua bidestilada en un matraz volumétrico de 1.0 L

Cloroformo

1. Utilizar el reactivo directamente como viene en su presentación comercial.

2. Guardar a temperatura ambiente.

Solución C 1X (Solución de colorante xilen-cianol)

Procedimiento:

1. Pesar 0.5 g de Agarosa ultrapura.

2. Disolver la agarosa en 33 mL de agua bidestilada estéril con ayuda de un

termoagitador.

3. Agregar 0.2 mL de Xilen-Cianol (50 mg/mL).

4. Dejar enfriar, tapar y etiquetar.

5. Guardar a temperatura ambiente.

Xilen-cianol 50 mg/mL

Procedimiento

1. Pesar 1.0 g de Xilen–cianol.

2. Disolverlo en 20 mL de agua bidestilada estéril.

Solución Acrilamida 30%/Bisacrilamida 0.8%

(Solución de acrilamida-bisacrilamida)

Procedimiento


1. Pesar 30 g de acrilamida y disolver en agua bidestilada estéril con ayuda de un

termoagitador. Posteriormente, adicionar 0.8 g de bisacrilamida y continuar la

agitación hasta la disolución completa de los polímeros.

2. Aforar con agua bidestilada estéril en un matraz volumétrico para preparar 100

mL.

3. Cubrir los tubos con papel aluminio y etiquetar.

4. Almacenar la solución en refrigeración.

Solución de Tris Abajo pH 8.8 (4X)

Procedimiento:

1. Pesar 18.17 g de tris base.

2. Disolver en 60 mL de agua bidestilada estéril.

3. Agregar 4.0 mL de Dimetilsulfóxido (DMSO) 10% a la solución anterior.

4. Medir el pH de la solución. El pH final debe ser de 8.8 (sí el pH queda muy

básico, ajustarlo con ácido clorhídrico concentrado).

5. Llevar el volumen con agua bidestilada estéril en un matraz volumétrico de 100

mL.

6. Almacenar en refrigeración.

SDS 10%

Procedimiento:

1. Pesar 5.0 g de dodecil sulfato de sodio.


TEMED

1. Tetra-metil-etilen-diamino. Utilizar el reactivo directamente como viene en su

presentación comercial.

2. Almacenar a 4 °C.

Solución de Persulfato de Amonio al 2%

Procedimiento

1. Pesar 0.4 g de persulfato de amonio.


3. Almacenar en refrigeración.

Nota: para este reactivo se recomienda preparar poca cantidad ya que

su capacidad de polimerización disminuye en tres meses.


SOLUCIÓN D 10X (Solución de corrimiento para electroforesis)

Procedimiento:

1. Pesar 12 g de Tris-base y 57.6 g de Glicina.

2. Disolver en agua bidestilada estéril y completar el volumen con agua bidestilada

estéril en un matraz volumétrico hasta 500 mL.

3. Almacenar a temperatura ambiente.

SOLUCIÓN E 10X (Solución de etanol para fijación)

Procedimiento:

1. Agregar 3.0 mL de ácido acético glacial en 287 mL de etanol absoluto.


SOLUCIÓN F 100X (Solución de nitrato de plata para la tinción)

Procedimiento:

1. Disolver 3.66 g de nitrato de plata en 20 mL de agua bidestilada estéril.


SOLUCIÓN G 125X (Solución de revelado)

1. Formaldehído al 38%. Utilizar el reactivo directamente como viene en su

presentación comercial.


SOLUCIÓN DE HIDRÓXIDO DE SODIO 3% (Solución de revelado)

Procedimiento:

1. Pesar 3.0 g de NaOH

2. Disolver lentamente en 100 mL de agua bidestilada estéril. Precaución: el

contenedor puede calentarse mientras se prepara la solución.


SOLUCIÓN H (Solución de paro)

1. Ácido acético glacial grado reactivo. Utilizar el reactivo directamente como

viene en su presentación comercial.


Nota: para la preparación de los reactivos antes descritos deberá

utilizarse agua bidestilada de calidad certificada y estéril.


ANEXO III: ESPECIFICACIONES DE LOS REACTIVOS PARA

ROTAFORESIS

SOLUCIÓN A 5X

Tris, Tris-Base, Trizma-Base, cristales, peso molecular 121.1 (Roche, Promega,

Sigma).

EDTA, Ácido Etilen Diamino tetracético, peso molecular 372.26 (Bio-Rad,

Gibco, Boehringer-Manheim).

SDS, Dodecil Sulfato de Sodio, reactivo para electroforesis, peso molecular

288.38 (Bio-Rad).

NaCl, Cloruro de sodio, peso molecular 58.44 (Sigma).

-mercaptoetanol (Sigma).

SOLUCIÓN B 1X

Fenol, ultra puro, cristales, (Sigma, Invitrogen, Fluka-Biochemika).

Tris, Tris-Base, Trizma-Base, cristales, peso molecular 121.1 (Roche, Promega).

Ácido clorhídrico (Hycel, Reproqifin).

-mercaptoetanol, 2-mercaptoetanol (Sigma).

8-Hidroxiquinoleina, cristales, peso molecular 145.2, (Sigma).

CLOROFORMO

Cloroformo, grado analítico A.C.S., peso molecular 119.38, (Hycel, Fermont).

ACRILAMIDA

Acrilamida, grado electroforesis o biología molecular, peso molecular 71.08,

(Sigma, Boehringer).

BIS-ACRILAMIDA

Bis-acrilamida, N, N, Metilen Bis acrilamida, grado electroforesis o grado

biología molecular, peso molecular 154.2 (Sigma, MP Biomedicals, Bio-Rad).

PERSULFATO DE AMONIIO

Persulfato de amonio, grado electroforesis, (Gibco, ICN, Sigma).

TEMED

Temed, N, N, N, N, Tetra metil etilen diamino, grado electroforesis (Sigma,

Research-Organic, Bio-Rad).


SOLUCIÓN C 1X

Agarosa, ultra pura, grado analítico (Sigma).

Xilen-Cianol, grado electroforesis (Sigma, Bio-Rad).

SOLUCIÓN D 10X

Tris, Tris-Base, Trizma-Base, grado molecular cristales, peso molecular 121.1

(Roche, Promega).

Glicina, Glicina ultra pura, grado electroforesis, peso molecular 75.07 (Sigma,

Gibco, Research-Organic).

SOLUCIÓN E 10X

Ácido acético glacial, grado reactivo A.C.S. (Merck, Golen Bell)

Etanol absoluto (Hycel, Golen Bell)

SOLUCIÓN F 100X

Nitrato de plata, reactivo A.C.S. (Sigma, Fermont)

SOLUCIÓN G 125X

Formaldehído, (J.T. Baker, Golen Bell)

Hidróxido de sodio, reactivo analítico, grado U.S.P., peso molecular 40.00

(Reproquifin, Quiromed, Fermont, J.T. Baker)

SOLUCIÓN H

Ácido acético glacial, grado reactivo A.C.S. (Merck, Golen Bell)


ANEXO IV: ALMACENAMIENTO Y CONSERVACIÓN DE REACTIVOS PARA PAGE.

Cuadro 2. Almacenamiento y conservación de los reactivos para el diagnóstico de Rotavirus

Reactivos Temperatura de

conservación Caducidad

Tipo de almacenamiento

Solución A 1X Temperatura

ambiente 6 meses Frasco con tapón de rosca

Solución B Refrigeración 6 meses Tubo cónico tapón de rosca de policarbonato de 50 mL (Corning)

Solución C Temperatura

ambiente 6 meses

Frasco de vidrio transparente con tapón de rosca

Solución D 10X Temperatura

ambiente 6 meses Frasco con tapón de rosca

Solución E 10X Temperatura

ambiente 6 meses


Solución F 100X Temperatura

ambiente 6 meses

Frasco con tapón de rosca protegido de la luz

Solución G 125X Temperatura

ambiente 6 meses


Solución H Temperatura

ambiente No aplica


Cloroformo Temperatura

ambiente No aplica

Frasco de vidrio con tapón de rosca. Cubrir con papel aluminio

Solución de hidróxido de sodio al 3%

Temperatura ambiente

6 meses Frasco de vidrio transparente con tapón de rosca

Acrilamida/Bisacrilamida Refrigeración 3 meses Frasco de vidrio con tapón


de rosca. Cubrir con papel aluminio

Persulfato de amonio 2% Refrigeración 3 meses Frasco con tapón de rosca protegido de la luz

TEMED Refrigeración No aplica Frasco de vidrio ámbar con tapón de rosca

Solución tris Abajo Refrigeración 3 meses Frasco de vidrio transparente con tapón de rosca


ANEXO V: LINEAMIENTOS PARA LA SOLICITUD DE INSUMOS

Política para la solicitud de insumos para el diagnóstico de rotavirus

por rotaforesis

La Coordinación de la RNLSP del InDRE, tiene como política, proporcionar un

servicio de calidad y respuestas oportunas para los laboratorios integrantes de

la red, la cual está integrada dentro del sistema de gestión de calidad y observa

los procedimientos vigentes y busca la mejora continua de su servicio. Para

cumplir con este propósito se requerirá observar los siguientes lineamientos.

Los laboratorios estatales de salud pública

Solicitar sus insumos para el diagnóstico de Rotavirus a través de un oficio

escrito dirigido al Director General Adjunto del InDRE; con atención a la

coordinación de la RNLSP.

Enviar su solicitud el día lunes de la semana anterior al envío.

Deberán enviar su solicitud por correo normal, para poder darle trámite de

forma oficial, sin embargo, para asegurar una respuesta oportuna se les

solicita hacer el envío de sus oficios de solicitud escaneados (con número de

folios ya asignados y rubricados) por E-mail al correo

[email protected] con atención a Dra. Herlinda García Lozano o

bien por vía fax al (01 55) 53420670 o bien al correo

[email protected].

En caso de que no procese muestras o tenga problemas con el diagnóstico

implementado deberá informarlo vía correo electrónico para justificar el no

uso de los reactivos.

Especificar en el oficio de solicitud, el número de kit que necesite (kit1, kit 2

o kit 3). No se proporcionan reactivos individuales.

Contar con fondos para cubrir su solicitud en la coordinación de la RNLSP

del InDRE.

Asegurar que sus servicios de mensajerías tengan un tiempo de entrega de

24 horas para las solicitudes de reactivos.

Considerar que si el envío se planea en miércoles y no lo recolectan, este se

hará hasta la semana siguiente.

Considerar las solicitudes de reactivos dos semanas antes de la fecha

estipulada del envío de paneles de evaluación (ver cronograma). No se

suministrará peticiones de reactivos durante estas fechas.

En caso de tener solicitudes expeditas justificadas y que planee venir por los

insumos al instituto debido a la premura de tenerlos en existencia en su

estado; deberá enviar su solicitud, con 48 horas de antelación y en horario

mailto:[email protected]


laboral, en el InDRE es de 8:00 a 16:00 horas, para que se puedan gestionar

sus requerimientos.

Será responsabilidad del LESP sancionar a la mensajería contratada y si

fuera el caso recuperar el costo de los daños ocasionados, en caso de retraso

y/o extravío del insumo solicitado.

El LESP deberá informar a la coordinación de la RNLSP, a través de correo

electrónico de las siguientes situaciones relacionadas con el sistema de

diagnóstico implementado, descompostura de equipo, reactivos caducos, y

derrame de reactivos durante el envío con la finalidad de darle seguimiento

a su problemática.

Es responsabilidad del LESP, solicitar al área de laboratorio de virus

gastrointestinales su Kit de reactivos, con un mes de anticipación a las

fechas previamente programadas al envío de sus paneles de evaluación.

Área técnica: laboratorio de virus gastrointestinales

El tiempo de respuesta será no mayor a 48 horas, una vez que se ha recibido

la solicitud de insumos por parte de la coordinación de la RNLSP, considerar

que sólo los días de entrega de mensajería son lunes, martes y miércoles.

Los insumos previamente autorizados de las solicitudes respectivas, deberán

estar debidamente embalados en cajas de cartón.

Se rotularán las cajas de envío con los datos de la persona a quien se envía y

el lugar, señalando con flechas la orientación/posición en que debe

manejarse la caja durante el envío.

Entregar los paquetes a la coordinación de la RNLSP a la hora acordada, la

cual dependerá de cada mensajería.

Los envíos de reactivos se colocarán en caja de cartón para asegurar la

integridad de la misma y por tanto de los insumos.


ANEXO VII: FORMATO PARA LA VIGILANCIA DE LA ENFERMEDAD DIARREICA AGUDA (EDA) POR ROTAVIRUS

lineamientos para la vigilancia epidemiológica del ... · toma, manejo y envÍo de muestras ......

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