intereaccion del sistema nitridergico en el mecanismo de accion del piroxicam y parecoxib

7/24/2019 Intereaccion Del Sistema Nitridergico en El Mecanismo de Accion Del Piroxicam y Parecoxib

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Universidad de Chile

Facultad de MedicinaEscuela de Kinesiologa

INTERACCIN DEL SISTEMA NITRIDRGICO ENEL MECANISMO DE ACCIN DEL PIROXICAM Y

PARECOXIB

RODRIGO LVAREZ IBARRACLAUDIO OLMOS GONZLEZ

DIRECTOR DE TESISPROF.ASIST.FERNANDO SIERRALTA GARCA,DD.

2006


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INTERACCIN DEL SISTEMA NITRIDRGICO EN EL MECANISMO DE

ACCIN DEL PIROXICAM Y PARECOXIB

Tesis

Entregada a la

UNIVERSIDAD DE CHILE

En cumplimiento parcial de los requisitos

para optar al grado de

LICENCIADO EN KINESIOLOGA

FACULTAD DE MEDICINA

por

RODRIGO ALEJANDRO LVAREZ IBARRA

CLAUDIO ROBERTO OLMOS GONZLEZ

2006

DIRECTOR DE TESIS

PROF. ASIST. DR. FERNANDO SIERRALTA G., DD.


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PATROCINANTE DE TESIS

DRA. SILVIA ORTIZ ZIGA

FACULTAD DE MEDICINA

UNIVERSIDAD DE CHILE

INFORME DE APROBACIN

TESIS DE LICENCIATURA

Se informa a la Escuela de Kinesiologa de la Facultad de Medicina que la Tesis de

Licenciatura presentada por los candidatos:

RODRIGO ALEJANDRO LVAREZ IBARRA

CLAUDIO ROBERTO OLMOS GONZLEZ

Ha sido aprobada por la Comisin Informante de Tesis como requisito de Tesis para optar

al grado de Licenciado en Kinesiologa, en el examen de defensa de Tesis rendido el

Viernes 15 de Diciembre de 2006

DIRECTOR DE TESIS

PROF. ASIST. DR. FERNANDO SIERRALTA GARCA, DD.

FIRMA

COMISION INFORMANTE DE TESIS

DRA. SILVIA ORTIZ ZIGA

FIRMA

DRA. MARTA ALISTE SILVA

FIRMA

KLGO. MARCELO CANO CAPPELLACCI

FIRMA


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DEDICATORIA

Rodrigo lvarez Ibarra

A mi madre por aguantarme y ensearme, gracias por la ayuda todos estos aos, no cabeen una vida mi gratitud.

A mi padre, gracias por la confianza y de una u otra forma guiar mi camino. A pesar de losproblemas.

A mi amigo Claudio, por los lindos momentos vividos estos cuatro aos, gracias por tu

apoyo sin pedir nada a cambio.

A todos aquellos que han estado a lo largo de mi camino y se sienten parte de m.

Claudio Olmos Gonzlez

A mi padre por mostrarme que no importa cuan alta sea la montaa, si se est decidido aalcanzar la cima.

A mi madre por entregarme su inmensa luz cada da.

A mi hermano por ensearme desde pequeo, el valor de la Superacin.

A mi amigo Rodrigo por acompaarme sin condicin en nuestro viaje fraternal.


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AGRADECIMIENTOS

Claudio y Rodrigo

A Don Jos Lpez y Alejandro Correa por su constante apoyo ycolaboracin desinteresada.

Al Dr. Gianni Pinardi por compartir su experiencia y conocimientoscon nosotros

Al Dr. Fernando Sierralta por compartir su enorme riqueza comoeducador y como persona, desde que tom la decisin de encabezar

este trabajo.

A todos quienes conforman el Laboratorio de Neurofarmacologa,por hacer posible este estudio.


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LISTA DE FIGURAS

FIGURA 1 Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p. en el ensayo

algesiomtrico de la formalina, primera fase (5 primeros minutos). ..............................36

FIGURA 2 Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p. en el ensayo

algesiomtrico de la formalina, segunda fase (10 minutos finales). .......................... 36

FIGURA 3 Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p. en el ensayo

algesiomtrico de la formalina,. primera fase (5 primeros minutos) ............................. 37

FIGURA 4 Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p. en el ensayo

algesiomtrico de la formalina, segunda fase (10 minutos finales)................................ 37

FIGURA 5 Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p./ L-NAME

en el ensayo algesiomtrico de la formalina ,. primera fase (5 primeros min.).. 38FIGURA 6 Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p./ L-NAME

en el ensayo algesiomtrico de la formalina, segunda fase (10 min. finales)..38

FIGURA 7 Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p./ L-NAME

en el ensayo algesiomtrico de la formalina ,. primera fase (5 primeros min.)........39

FIGURA 8 Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p./ L-NAME

en el ensayo algesiomtrico de la formalina, segunda fase (10 min. finales)....................39

FIGURA 9 Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p./ 7-Nitroindazol

en el ensayo algesiomtrico de la formalina ,. primera fase (5 primeros min.)..........40

FIGURA 10 Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p./ 7-Nitroindazol

en el ensayo algesiomtrico de la formalina, segunda fase (10 min. finales).............40

FIGURA 11 Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p./ 7-Nitroindazol

en el ensayo algesiomtrico de la formalina ,. primera fase (5 primeros min.)...............41

FIGURA 12 Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p./ 7-Nitroindazol

en el ensayo algesiomtrico de la formalina, segunda fase (10 min. finales).41


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NDICE

ABREVIATURAS.................iRESUMEN.....iiABSTRACT..........iv

INTRODUCCIN.................................................................................................................1DEFINICIN DEL PROBLEMA EN ESTUDIO ................................................................1IMPORTANCIA DEL PROBLEMA EN ESTUDIO Y POSIBLESLIMITACIONES...............................................................................................................1MARCO TEORICO...............................................................................................................3FISIOPATOLOGA DEL DOLOR........................................................................................31. Nociceptores.......................................................................................................................42. Vas y Sinpsis....................................................................................................................53. Vas ascendentes.....64. Neurotransmisores..............................................................................................................7FRMACOS UTILIZADOS EN ANALGESIA...................................................................7ANTI-INFLAMATORIOS NO ESTEROIDALES...............................................................8Caractersticas Generales.......................................................................................................8Parecoxib..13Piroxicam..14SISTEMA NITRIDRGICO................................................................................................14Nos15Regulacin.15Nos y su interaccin con los receptores NMDA...16Mecanismo de accin del NO...16NO y el SNC.17Interaccin con frmacos..17HIPTESIS...........................................................................................................................19OBJETIVO GENERAL........................................................................................................19OBJETIVOS ESPECFICOS............................................................................................. ..19MATERIALES Y METODOS.............................................................................................20TEST DE LA FORMALINA................................................................................................20ESTADISTICAS...22TIPO DE INVESTIGACIN...22OBTENCIN DE LA MUESTRA.......................................................................................22VARIABLES........................................................................................................................23PRESENTACIN Y ANLISIS DE RESULTADOS........................................................24DISCUSIN.........................................................................................................................29PROYECCIONES................................................................................................................31CONCLUSIN.....................................................................................................................31REFERENCIAS....................................................................................................................32ANEXO 1 .............................................................................................................................36ANEXO 2 .............................................................................................................................42ANEXO 3..44


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ABREVIATURAS

7 Ni: 7- Nitroindazol

AINEs: Antiinflamatorios no esferoidales

ATP: Trifosfato de adenosina

Ca: Calcio

cGMP: GMP cclico

CO: Monxido de carbono

COX: Ciclooxigenasa

COX-1: Ciclooxigenasa 1



eNOS: xido ntrico sintasa endotelial

GABA: cido gaba amino butrico

iNOS: xido ntrico sintasa inducible

IP: Intraperiotoneal

Kg: Kilo

Mg: Miligramo

NMDA: N- metil- D AspartatonNOS: xido ntrico sintasa neuronal

NO: xido ntrico

NOS: xido ntrico sintasa

NT: Neurotransmisores

PGs: Prostaglandinas

SC: Subcutnea

sGC: Guanidil ciclasa

SNC: Sistema nervioso central

Va NO-GMP: va nitridergica


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RESUMEN

El objetivo de este estudio es evaluar el efecto antinociceptivo de los antiinflamatorios no-

esteroidales parecoxib y piroxicam, y su interaccin con el sistema nitridrgico. Para este

estudio se utiliz ratones de la cepa CF/1 en el test algesiomtrico de la formalina,

midindose el tiempo de lamido que realiza el ratn en su pata izquierda, sitio de inyeccin

de la formalina subcutnea, los primeros 5 minutos (primera fase) y los 10 ltimos minutos,

de 30 que dura el test (segunda fase). Para la evaluacin de las interacciones, se

construyeron curvas dosis-respuesta de los frmacos administrados con un mnimo de 6

animales por cada una de las dosis en estudio, primero individualmente, luego con L-

NAME, inhibidor no selectivo de la xido ntrico sintasa (NOS) y despus con 7-

Nitroindazol (7-NI), inhibidor selectivo de la NOS neuronal. La evaluacin de los grupos

control fue idntica a la del resto de los animales tratados. Se les inyect por va

intraperitoneal, parecoxib o piroxicam, 30 minutos antes de la administracin de la

formalina. Para estudiar la participacin del sistema nitridrgico, se administr, por la

misma va, el inhibidor L-NAME o 7-NI, 45 minutos antes de la inyeccin de formalina.

Los resultados obtenidos en este estudio muestran que no hubo diferencias significativas

entre los grupos L-NAME/Parecoxib o Piroxicam y Parecoxib o Piroxicam slo, mientras

que los resultados obtenidos con 7-NI suprimieron por completo la respuesta nociceptiva de

formalina, probablemente debido a lo potente que result ser la dosis empleada (5 mg/kg).

Por esta razn, no podemos concluir si la antinocicepcin mostrada por la interaccin del 7-

NI/Parecoxib o Piroxicam, se debe a un efecto sinrgico entre este inhibidor de la NOS

central y los AINEs en estudio, o solamente a la accin potente del 7-NI, sinergia que fue


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ms marcada con el parecoxib, llevando los valores prcticamente a un tiempo de lamido

igual a cero.

Como conclusin, podemos afirmar que los frmacos empleados en este estudio, parecoxib

y piroxicam, no presentaron una interaccin en la accin antinociceptiva con el sistema

nitridrgico en el ensayo algesiomtrico de la formalina.


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ABSTRACT

The objective of this study is the evaluation of the antinociceptive effect of the NSAIDs

parecoxib and piroxicam, and his interaction with the nitridergic system. For this study CF-

1 mice in the algesiometric test of formalin, were used in this test, after administration of

formalin the time of licked treated mouse did in his left leg the first 5 minutes (first phase)

and the last ten minutes of this test (second phase). To evaluate interactions, dose-response

curves were built with a minimal of 6 animals per dose, before and after injection of L-

NAME, non-selective inhibitor of nitric oxide sintase enzyme (NOS) and 7-Nitroindazol,

selective inhibitor of neural nitric oxide sintase enzyme (nNOS) pretreatment. The

evaluations of control groups were identical to the other study groups. The mice were

injected intraperitoneally with, parecoxib or piroxicam, 30 minutes before the formalin

shot. To evaluate the participation of nitridergic system, doses of L-NAME and 7-

Nitroindazol were injected intraperitoneally, 45 minutes before the formalin shot.

The results obtained in this study were, showed no significative differences among groups

injected with parecoxib or piroxicam/L-NAME and parecoxib or piroxicam alone, whereas

the results obtained with 7-NI suppress completely the nociceptive effect of formalin,

probably due to the great dose used (5 mg/kg). For this reason, we cannot conclude if the

antinocicepcin showed by the interaction of 7-NI and parecoxib and piroxicam, is caused

by a synergist effect between this nNOS inhibitor and the NSAIDs in study, or just to the

powerful action of 7-NI, synergy that was more marked with the parecoxib, taking the

values practically to a licking time equally to zero.


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In conclusion, these results are not categorical in affirming that the nitridergic system

modulates the antinociceptive effect from the NSAIDs in study, on the algesiometric test

of formalin.


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1

INTRODUCCIN

DEFINICIN DEL PROBLEMA EN ESTUDIO

En el efecto antinociceptivo del piroxicam y parecoxib, interviene el sistema nitridrgico

modulando esta accin?

IMPORTANCIA DEL PROBLEMA EN ESTUDIO Y POSIBLESLIMITACIONES

Desde que la raza humana existe, el dolor nos ha acompaado como una sensacin

desagradable, molesta y muchas veces invalidante. Sin embargo, pese a la sensacin

dolorosa frente a determinada injuria, es un mecanismo de defensa y/o de proteccin

fundamental para evitar que se dae ms el tejido u rgano afectado por esta noxa. La IASP

(Asociacin Internacional para el Estudio del Dolor) define el dolor como una experiencia

sensorial y emocional desagradable, asociada a un dao tisular actual o potencial. Por esta

razn, probablemente el dolor debe ser uno de los temas ms investigados a nivel mundial y

uno de los que ms preocupa a los cientficos.

Los mecanismos neuromoduladores espinales del dolor se pueden estudiar mediantela administracin de frmacos analgsicos, ya sean centrales o perifricos, y de los posibles

neurotransmisores, as como neuromoduladores que puedan intervenir en su accin, ya sean

agonistas o antagonistas, as como inhibidores de su sntesis y/o recaptacin de ellos.

Aunque existe una gran cantidad de drogas que producen analgesia, no se ha

identificado en forma completa y detallada el mecanismo de accin farmacolgico

responsable del efecto analgsico. La transmisin del impulso doloroso hacia el SNC

puede estar modulada por una o varias de las siguientes sustancias: neuropptidos

(sustancia P, neuroquininas, etc.), aminocidos (l-aspartato, l-glutamato, etc.),

neurotransmisores (adenosinrgicos, adrenrgicos, colinrgicos, serotonrgicos, opioides),

y neuromediadores (prostaglandinas, citoquinas, oxido ntrico, etc.) (Miranda, 1998).


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2

Los frmacos que ms se emplean en la prctica clnica, tanto mdica como

kinesiolgica, son los denominados analgsicos perifricos (por su principal mecanismo de

accin a nivel de la gnesis del dolor), o tambin analgsicos antiinflamatorios no-

esteroidales (AINEs), por sus acciones principales y estructura qumica diferente a los

corticoides, los cuales tiene una industria gigantesca en la que se reconocen diferentes

frmacos ya sea por su naturaleza, como por su accin relativamente especfica.

El presente trabajo intenta contribuir a un mayor conocimiento con respecto a la

participacin del sistema nitridrgico, en la modulacin de la expresin del dolor y cmo se

relaciona ste con los frmacos antiinflamatorios no-esteroidales.


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3

MARCO TEORICO

FISIOPATOLOGA DEL DOLOR

Luego de realizar un diagnstico preciso, el tratamiento del dolor, es sin lugar a

dudas un importante aspecto a considerar para contribuir al bienestar del paciente;

preocupacin importante en la prctica clnica. El enfoque teraputico que se utilizar ser

ms adecuado si se conocen los mecanismos, neuromoduladores y neurotransmisores

involucrados en la conduccin del estmulo doloroso.

Como esquema general, se puede decir que para percibir un dolor es necesario:

a) Una estructura perifrica que acte como receptorb) Una sinapsis en la mdula espinal

c) Vas de conduccin desde la mdula espinal hasta los centros superiores como

bulbo, diencfalo y corteza

d) Vas descendentes desde los centros superiores: corteza, tlamo y ncleos

reticulares, que acten como mecanismos principalmente inhibitorios, pero tambin

pueden ser facilitadores y provocar dolor.(Paeile, 2005)

En condiciones normales, las seales nociceptivas son producidas por un intenso

estmulo de las fibras terminales sensoriales aferentes Ay C, por noxas qumicas, presin

y fro o calor (Chizh y cols., 2000). Las neuronas sensoriales se dividen basndose en su

histologa (tamao de la fibra, grado de mielinizacin, conexiones post sinpticas en la

mdula espinal), caractersticas histoqumicas (presencia de pptidos, canales de iones,

receptores y otros neurotransmisores) segn modalidades sensoriales y velocidad de

conduccin, que no es el objetivo detallar en este trabajo (Christie y cols., 2000). La

nocicepcin es un mecanismo a travs del cual, estmulos nocivos son transmitidos al

sistema nervioso central (SNC)(Paeile, 2005).

La sensacin del dolor que se experimenta llega al SNC el cual discrimina y analiza

la naturaleza, localizacin, intensidad y duracin de la noxa, adems recontribuir a la


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4

evaluacin cualitativa del dolor, gracias a los diferentes haces anatmicos tales como el haz

paleoespinotalmico, el haz neoespinotalmico y haz espinoreticulotalmico (Milln,

1999).

La agresin de una noxa genera en el tejido una serie de cambios bioqumicos, los

cuales desencadenan los mecanismos del dolor. Cuando un estmulo agresor de cualquier

origen daa las membranas celulares, se inicia la sntesis en cascada de una serie de

eicosanoides (prostaglandinas, tromboxanos, prostaciclinas y leucotrienos que se sintetizan

en la zona lesionada), a partir del cido araquidnico. Este es un cido poliinsaturado que

ingresa por la dieta y pasa a formar parte de los fosfolpidos de la membrana celular. Al

hidrolizarse por la fosfolipasa A2 genera diferentes prostaglandinas y leucotrienos, por

accin de las ciclo-oxigenesas o de las lipo-oxigenasas. Las prostaglandinas (PGs) alromper el ATP, producen cambios en el potencial de membrana, disminuyendo el umbral

de excitacin de los nociceptores y sensibilizando las terminaciones nerviosas aferentes, a

estmulos qumicos o mecnicos. Por otro lado, hay una accin directa de la prostaglandina

E y de la bradicinina sobre los nociceptores y adems hay alteracin de la micro circulacin

de leucocitos, al estimular la circulacin sangunea en la regin inflamada (Ortega, 1995).

Nociceptores

El trmino nociceptor es til para diferenciar las fibras Ab de las A y C que

corresponden a los nociceptores propiamente tales. Cuya caracterstica ms destacada es

poseer un umbral de estimulacin mas alto, en comparacin a las fibras de grueso calibre

que son de umbral muy bajo, ya que ellas transmiten el tacto suave o ligero.

La neurona perifrica o neurona en T presenta en la periferia una arborizacin

plexiforme carente de mielina llamada terminacin libre, estas no presentan especificidad

frente a un estmulo nociceptivo sino que tambin trasmiten tacto leve y presin (Dennis y

Melzak, 1977).

Se encuentran distribuidas en todo el organismo: en la piel y el tejido celular

subcutneo, vsceras, msculos y articulaciones. Son muy abundantes en el humano; en


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5

efecto, se calcula un promedio de 200 por cm2, generalmente en torno a arteriolas y vnulas

(Paeile, 2005). Se diferencian de otros receptores, en que su adaptabilidad es muy baja. Y

cualquier estmulo (tacto, presin, calor, etc.) puede constituirse en una sensacin dolorosa.

En general, los agentes que activan a estos receptores se denominan sustancias

alggenas. Se distinguen dos tipos de nociceptores: nociceptores mecnicos de umbral

alto o nociceptores mecano termales, que se relacionan con el dolor agudo, breve, bien

localizado y que dura slo lo que dura el estmulo; y nociceptores polimodales o mixtos,

que se relacionan con el dolor crnico, quemante, sordo, y mal localizado (Vidal y cols.,

2004; Caterina y Julius, 1999).

Es interesante destacar que entre las neuronas perifricas existe un grupo importante

que normalmente no participa constantemente en el procesamiento de la informacin hacia

la segunda neurona, estos nociceptores son llamados silentes y se activarn

fundamentalmente en procesos inflamatorios crnicos (Vidal y cols., 2004)

Vas y Sinpsis

Un estmulo doloroso se sentir primero como dolor agudo, bien localizado,

transmitido por fibras A, seguido despus de un pequeo retardo por un dolor ondulante,

quemante, sordo, mal definido, transmitido por fibras C. Se produce aqu la transmisin

sinptica, desde la primera a la segunda neurona, que puede ser de dos tipos: a) una que es

activada por estmulos nociceptivos propiamente tal y que se llama neurona especfica

(NE); y b) otra que no presenta especificidad, neurona de rango dinmico amplio(ARD)

es multirreceptiva o de segundo orden. Esta primera sinapsis est mediada por la sustancia

P, y aminocidos, como el glutamato, entre otras sustancias (Chizh y cols., 2000).

Muchas fibras nociceptivas, antes de su ingreso a la sustancia gris de la mdula

espinal, emiten colaterales descendentes y ascendentes, constituyendo la parte ms medial

del haz de Lissauer. Estas colaterales tienen la posibilidad de formar sinapsis hasta dos

segmentos medulares superiores o inferiores al del ingreso, lo que significa que la

transmisin de una neurona primaria puede propagarse a varias races vecinas. Esta

interrelacin es de importancia pues la informacin de una neurona en T puede propagarse


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6

a races vecinas, hecho que podra explicar en parte el dolor irradiado y el referido (La

Motte, 1977).

De importancia es tambin la sustancia gelatinosa de Rolando, que corresponde a

la lmina II de Rexed, porque existen pequeas neuronas y de alta densidad caractersticas:

las interneuronas, que de alguna manera modulan estas sinapsis. Estos hechos tienen

importancia, ya que dan una relacin anatomofisiolgica a fenmenos como el dolor

referido y a la modulacin suprasegmentaria, que pueden ejercer centros superiores sobre la

transmisin nerviosa (Paeile, 2005).

Vas ascendentes

Las segundas neuronas dan origen a tres haces ascendentes de ubicacin contra

lateral: a) el neoespinotalmico y b) el paleoespinotalmico, que conforman la va

espinotalmica y c) el espinoreticulotalmico.

El tracto neoespinotalmico de especial desarrollo en los monos sin cola y en el

hombre, es el encargado de conducir el dolor agudo bien localizado. Produce de

inmediato, el reflejo de retirada. El tracto paleoespinotalmico, que como su nombre lo

indica es el ms antiguo, es el responsable de los dolores difusos crnicos. Transportadopor receptores polimodales, con axones C, no producen reflejo de retirada, sino ms bien

una inmovilizacin por contraccin muscular (Pinardi, 1993).

El haz neoespinotalmico, proyecta la informacin nociceptiva hacia las reas SI y

SII de la corteza parietal somestsica para elaborar la ubicacin topogrfica del dolor

A su vez, el haz paleoespinotalmico lleva la informacin a zonas de la corteza

frontal no especfica, para efectuar la evaluacin cualitativa del dolor. El hazespinoreticulotalmico, es el que aporta el componente emocional y afectivo del dolor, por

sus abundantes relaciones sinpticas con la formacin reticular (Paeile, 2005).


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7

Neurotransmisores

La transmisin de informacin nociceptiva entre neuronas se realiza mediante seales

qumicas, mediadas por aminocidos y neuropptidos excitatorios e inhibitorios, los cuales son

producidos, almacenados y liberados en los terminales de aferencias primarias, entre neuronas

del asta dorsal y terminales de fibras descendentes del sistema supraespinal. Los agentes, en los

terminales centrales de aferencias primarias, incluyen aminocidos como aspartato y glutamato

los que excitan los terminales nerviosos de grandes fibras mielnicas, adems estas terminales

primarias liberan sustancias consideradas como neuromoduladores, entre los que se pueden

mencionar la somatostatina, pptido vasoactivo intestinal, galanina, angiotensina,

colecistocinina, ocitocina, etc. En las neuronas propias del asta dorsal de la mdula espinal se

encuentran neuroqumicos excitatorios de nociceptores tales como sustancia P y neurotensina,como tambin algunas sustancias inhibitorias de nociceptores como GABA, encefalinas,

endorfinas, somatostatina, y muchos otros (Chizh y cols., 2000).

Tradicionalmente, el asta dorsal medular era considerada como una simple estacin de

relevo, sin embargo hoy se postula como una compleja estructura que contiene una gran variedad

de neuronas y dispositivos sinpticos que no solo permiten la recepcin y transmisin de

aferencias sensitivas, sino que tambin un alto grado de procesamiento sensitivo que incluye la

abstraccin local, integracin, seleccin y una apropiada dispersin de impulsos sensitivos

(Herrero y cols, 2003).

FRMACOS UTILIZADOS EN ANALGESIA

Dentro del plano de la analgesia, podemos encontrar una gran variedad de frmacos

capaces de producir un efecto en la inhibicin de la transmisin dolorosa, tanto a nivel

preclnico, en animales, como a nivel clnico, en el hombre. Dentro de esos se hallan los

frmacos antidepresivos, antiepilpticos, antiinflamatorios no-esteroidales, -adrenrgicos,

serotonrgicos, nitridrgicos, colinrgicos, anestsicos locales, cannabinoides y opioides

(Christie y cols., 2000).


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8

De todos los grupos de frmacos antes citados, los antiinflamatorios no esteroidales

(AINEs) son de los ms usados por la mayora de las especialidades mdicas, tanto en dolor

agudo como crnico, y por lo tanto, tambin los ms estudiados. Sin embargo,

independientemente de su eficacia, presentan una serie de reacciones adversas que limitan

su uso.

Los AINEs, producen varias acciones teraputicas, entre los cuales la analgsia y su

capacidad antiinflamatoria son las de mayor relevancia clnica. En este estudio se evalu la

actividad analgsica de parecoxib y piroxicam. Para ello se utilizar un mtodo

algesiomtrico agudo: el test de la formalina en ratones.

Aunque existe una gran cantidad de drogas que producen analgesia, no se ha

identificado en forma completa y detallada el mecanismo de accin farmacolgico

responsable del efecto analgsico. La transmisin del impulso doloroso hacia el SNCpuede estar modulada por una o varias de las siguientes sustancias: neuropptidos

(sustancia P, neuroquininas, etc.), aminocidos (l-aspartato, l-glutamato, etc.),

neurotransmisores (adenosinrgicos, adrenrgicos, colinrgicos, serotonrgicos, opioides),

y neuromediadores (prostaglandinas, citoquinas, oxido ntrico, etc.).

ANTIINFLAMATORIOS NO- ESTEROIDALES

Son un grupo de frmacos con estructura qumica diferente, pero con acciones en comn:

analgsicos, antipirticos, antiinflamatorios y en algunos casos uricosricos, adems de ser

antiagregantes plaquetarios (cido acetil saliclico).

Caractersticas Generales

1.- Propiedades Diferenciales

Aunque la mayora de los componentes de este grupo comparten las tres acciones

que los definen (analgsico, antiinflamatorio y antipirtico), su eficacia relativa es diferente


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9

en cada uno de ellos. A su vez la toxicidad puede coincidir con la del grupo o ser ms o

menos especfica. De ah que su uso clnico dependa tanto de su eficacia clnica as como

del grado de reacciones adversas que produzca.

2.- Mecanismo General de Accin

Los efectos teraputicos y muchas de las reacciones adversas de los AINEs se

relacionan con el efecto inhibidor de las ciclooxigenasas (COX), enzimas que convierten el

cido araquidnico en endoperxidos y luego en prostaglandinas y tromboxanos. Algunos

de estos eicosanoides participan en el proceso de la inflamacin, la fiebre y el dolor por lo

que la inhibicin de su sntesis por los AINEs es responsable de su actividad teraputica,

aunque dada su participacin en determinados procesos fisiolgicos, dicha inhibicin es

tambin la causa de diversas reacciones adversas caractersticas de estos frmacos (Florez y

cols., 2003).

Los AINEs inhiben las COXs, y actualmente se describen la existencia de tres

isoformas de estas enzimas: COX-1, COX-2 y COX-3. La COX-1 es de expresin

constitutiva, producto de un gen que transcribe en forma estable y continua y estando

adems implicada en los procesos de proteccin de la mucosa gstrica, funciones renales y

activacin plaquetaria. La COX-2, de expresin inductibley que resulta de un gen con un

elevado nivel de regulacin, y cataliza la produccin local de prostaglandinas en

situaciones tanto fisiolgicas como patolgicas, basalmente su expresin est restringida,

aunque se detectan niveles elevados en sistema nervioso central y corteza renal. Adems, la

expresin de COX-2 es inducida por diversos mediadores asociados con la inflamacin y

crecimiento celular, desempeando un rol esencial en la inflamacin, fiebre, dolor yproliferacin celular (Florez y cols., 2003). La COX-3 es codificada del mismo gen de la

COX-1. En el hombre es abundante en el tejido cardaco y la corteza cerebral. En estudios

con canes se comprob que la COX-3 es inhibida selectivamente por dipirona y

acetaminofeno, y es potencialmente inhibida por algunos otros AINEs. Se sugiere que esta


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10

tercera forma de COX aparece 48 horas despus de iniciado el proceso inflamatorio y esta

involucrada en la biosntesis de mediadores antiinflamatorios endgenos (Gonzlez y cols.,

2002).

La mayora de los AINEs actualmente disponibles inhiben, a concentraciones

teraputicas, ambas isoformas de COX. Algunos AINEs, como el parecoxib y nimesulida

exhiben una selectividad preferencial por la COX-2. Se ha sugerido que el rofecoxib y el

celecoxib parecen inhibir exclusivamente la COX-2 (Florez y cols., 2003).

3.- Acciones farmacolgicas

3.1.- Accin Analgsica

La actividad analgsica de los AINEs es de intensidad baja a moderada, con un

techo analgsico inferior al de los opioides, no producen alteracin de la percepcin o

sensacin. Los AINEs se prescriben para dolores caracterizados por una participacin

destacada de inflamacin aguda o crnica, como los dolores articulares, musculares,

dentarios y cefaleas. La accin analgsica de los AINEs tiene lugar tanto en tejidos

perifricos, con la inhibicin la sntesis de prostaglandinas, y a nivel central en el SNC,

inhibiendo preferentemente la COX-3.

3.2.- Accin antipirtica

La fiebre es una respuesta autnoma, conductual compleja y coordinada que se

desencadena ante la existencia de una lesin, inflamacin, infeccin, tumores, rechazo de

tejidos, etc., y tienen dos objetivos: alertar sobre una situacin anmala y potencialmente

lesiva, y poner en marcha una serie de mecanismos fisiolgicos para la defensa del

organismo. Su signo cardinal es la elevacin de la temperatura corporal del orden de 1 a 4

C (Florez y cols., 2003). Aunque todos los AINEs tiene la capacidad de ser antipirticos,

por inhibir la PG E2, el ibuprofeno y el paracetamol son los que se utilizan en clnica para

esos propsitos.


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3.3.- Accin Antiinflamatoria

La inflamacin es una respuesta fisiopatolgica con que cuenta el organismo para

defenderse frente a agresiones producidas por una gran variedad de estmulos (p. ej.,

infecciones, procesos isqumicos, traumas de diverso ndole, etc.) aunque, en ocasiones, suaumento y permanencia en el tiempo son lesivos para el organismo. La respuesta

inflamatoria se puede dividir en tres fases en las que intervienen mecanismos diferentes:

una Fase aguda, cuyos signos principales son la vasodilatacin local y el aumento de la

permeabilidad capilar; una Fase sub-aguda, en la que se produce infiltracin de clulas

fagocticas y leucocitarias; una Fase crnica, en la cual hay signos de degeneracin y

fibrosis de tejidos afectados (Florez y cols., 2003).

La capacidad de los AINEs para reducir la inflamacin es diferente entre un AINE y

otro, son ms eficaces frente a inflamaciones agudas que crnicas. Al inhibir la sntesis de

PG y tromboxanos, los AINEs reducen su actividad sensibilizadora de la terminaciones

sensitivas, as como la actividad vasodilatadora y quimiotctica, interfiriendo as en uno de

los mecanismos principales de la inflamacin (Florez y cols., 2003).

3.4.- Accin Antiagregante Plaquetaria

No es propia de todos los AINEs. Es producida fundamentalmente por la aspirina

(cido acetilsaliclico) inhibiendo la COX-1 de manera irreversible (Handin y Loscalzo,

1992). Por otra parte la aspirina en bajas dosis tiene un efecto positivo en la profilaxis de

fenmenos tromboemblicos coronarios y cerebro vasculares (Paeile, 2005)

3.5.- Accin Uricosrica

Es consecuencia de la inhibicin del transporte de cido rico desde de la luz del tbulorenal hasta el espacio intersticial, es un proceso apreciable slo con algunos AINEs y a

dosis elevadas.


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4.- Reacciones Adversas comunes

4.1.- Gastrointestinales

El mecanismo involucrado es el de la inhibicin en la sntesis de PGE 1y PGE2, las

cuales inhiben la secrecin gstrica y promueven la secrecin de mucus en el aparatodigestivo. Son frecuentes los efectos menores (15-25%) como diarrea, dispepsia, pirosis,

gastritis, o estreimiento. Tambin producen lcera pptica y duodenal.

4.2.- Renales

Los AINEs, debido al bloqueo de la sntesis de PGs, pueden disminuir el flujo renal

y la filtracin glomerular, tambin producen retencin de sodio, agua y potasio, causando

problemas por desbalances de electrolitos. La complicacin ms importante es lainsuficiencia renal aguda.

4.3.- Hematolgicos

Aunque su frecuencia es baja, el amplio uso de los AINEs y la gravedad de alguna

de ellas como la anemia aplsica obliga a tenerlas en cuenta. Alguna de estas reacciones

estn en relacin con las propiedades mencionadas anteriormente, como un efecto en

exceso de la actividad antiagregante plaquetaria. Tambin pueden ocurrir reaccionesadversas de hipersensibilidad (Florez y cols., 2003).

4.4.- Hipersensibilidad

Aparecen en alrededor del 1 a 2% de los pacientes bajo tratamiento con AINEs este

tipo de reacciones (como rinitis alrgica, asma bronquial, hipotensin). Pueden ser de

carcter alrgico, de mecanismo inmunolgico con anticuerpos, o seudo alrgico, que son

ms frecuentes y relacionado con la inhibicin de la sntesis de PGs en conexin con una

sensibilidad individual especial.


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Parecoxib

Dentro de los AINEs, ste frmaco pertenece al grupo de los inhibidores selectivos de la

COX-2, estos producen a concentraciones teraputicas, una inhibicin selectiva de la

COX-2, con lo que se evitan los efectos secundarios ms frecuentes e importantes de losAINEs (toxicidad gastrointestinal, renal y problemas hemorrgicos) relacionados con la

inhibicin de la COX-1. (Florez y cols., 2003)

Poseen actividad analgsica, antiinflamatoria y antipirtica comparable a la de los AINEs

convencionales. No poseen efecto antiagregante plaquetario, al no inhibir la sntesis del

tromboxano dependiente de la COX-1 y s la de prostaciclina, dependiente de la COX-2.

Tampoco poseen efecto uricosrico.

Son claramente menos lesivos que otros AINEs para la mucosa gastrointestinal, pero no son

totalmente inocuos. En ocasiones en su administracin crnica se han descrito gastritis,

lceras y hemorragias. Su uso est limitado, con preferencia sobre el resto de los AINEs a

los pacientes con riesgo elevado de padecer reacciones adversas gastrointestinales serias.

Los efectos adversos ms frecuentes son: prurito, dolor abdominal, diarrea, dispepsia,

flatulencia, ostetis alveolar, mareo, insomnio, faringitis, rinitis, sinusitis, infeccin deltracto respiratorio superior, edemas.

Presentan hipersensibilidad cruzada con otros AINEs. Est contraindicado su uso en

pacientes con alergia a sulfonamidas o a salicilatos o AINEs. Tambin en pacientes que

hayan experimentado asma, rinitis aguda, plipos nasales, edema angioneurtico, urticaria

u otras reacciones de tipo alrgico despus de tomar AINEs. En pacientes afectos de lcera

pptica activa o hemorragia gastrointestinal, enfermedad inflamatoria intestinal,

insuficiencia cardiaca grave (por la posible retencin de lquidos y edemas), insuficiencia

heptica grave, o insuficiencia renal grave.


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Piroxicam

Pertenece al grupo de los oxicams que son cidos enlicos que se introdujeron a finales de

los aos setenta como AINEs de vida media larga que permitan slo una dosis diaria, esto

es ventajoso para el tratamiento de procesos inflamatorios y en dolores crnicos. Dentro de

este grupo el ms usado y el primero en ser introducido en la teraputica es el piroxicam.

(Florez y cols., 2003)

El piroxicam posee actividad antiinflamatoria, analgsica, antipirtica y antiagregante

plaquetaria. Sufre una importante recirculacin entero heptica que condiciona una

semivida de eliminacin prolongada de aproximadamente 50 horas. Se metaboliza

ampliamente por medio de reacciones de hidroxilacin, de manera que tan slo el 5-10 porciento de la dosis administrada se elimina sin metabolizar.

Las reacciones adversas ms frecuentes son las de localizacin gastrointestinal.

Ocasionalmente puede producir edema, prurito, erupciones exantemticas, incremento de

los valores de creatinina srica y de los valores de nitrgeno ureico en sangre, disminucin

de hemoglobina, cefalea, mareos, malestar general y somnolencia.

Est indicado para el tratamiento de enfermedades reumticas como artritis reumatoide,

artritis y espondilitis anquilosante, con slo una dosis de 20 mg/da. Tambin se emplea en

la inflamacin no reumtica (bursitis, capsulitis, tendinitis), en la dismenorrea primaria y en

el ataque agudo de gota. En tratamientos agudos llegan a emplearse 40 mg/da durante 3-4

das. Debe administrarse conjuntamente con las comidas para paliar la posible irritacin

gstrica.

SISTEMA NITRIDRGICO

El xido ntrico (NO) es una pequea molcula que se sintetiza en las clulas del

organismo a partir del aminocido L-arginina y participa como neurotransmisor en el SNC


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y perifrico entre otras acciones, por lo que tendra una accin neuromoduladora

(Esplugues, 2002). Esta molcula es sintetizada por la xido ntrico sintasa (NOS)

NOS

Esta enzima presenta 2 dominios, un dominio reductasa, con un lugar reconocido por la

calmodulina; y un dominio oxigenasa, con un lugar de unin para L-Arginina (Florez y

cols., 2003).

Existen 3 isoenzimas de la NOS, las cuales presentan diferente localizacin y regulacin:

- NOS neuronal(nNOS): localizada en neuronas del SNC y perifrico, productora de

un NO neurotransmisor.

- NOS endotelial (eNOS): presente en las clulas endoteliales, clulas mesangiales

renales y plaquetas, por lo tanto relacionada con la regulacin de la hemostasia

vascular.

- NOS inducible (iNOS): se expresa en muchas clulas cuando entran en contacto

con citoquinas y/o endotoxinas que sintetizan gran cantidad de NO con efecto

citotxico (Florez y cols., 2003).

Regulacin

La isoforma nNOS que ser intervenida en la presente investigacin, se expresa de

forma constitutiva respondiendo a diversos estmulos y producen cantidades pequeas de

NO. Se han identificado 5 tipos de nNOS, de los cuales la nNOSa es la que tiene ms

accin en el SNC (Esplugues, 2002).

El regulador ms importante de la nNOS es el Ca2+citoslico, el cual se asocia a la

calmodulina, estimula el nNOS, a diferencia de la iNOS que es independiente del Ca2+, la

separacin del Ca2+con la calmodulina inactiva a la nNOS (Florez y cols., 2003).

Se describe tambin que existe una estimulacin postsinptica de los receptores de

NMDA por un neurotransmisor excitatorio, como el glutamato. Por ltimo el NO efecta

una retroalimentacin negativa que disminuye la accin de esta enzima, actuando sobre los

receptores NMDA (Esplugues, 2002).


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NOS y su interaccin con los Receptores NMDA

Dentro de las neuronas, la enzima NOS se puede encontrar en el citosol, pero

tambin integrada en diferentes membranas celulares. Parece ser que durante la liberacin

del xido ntrico la enzima se localiza en la membrana plasmtica (por translocacin de laenzima citoslica a la membrana), en ntima asociacin con receptores de glutamato del

tipo NMDA (estos receptores forman canales inicos permeables al calcio, de manera que

cuando unen glutamato y la neurona est despolarizada, se produce la apertura del canal

con el consiguiente influjo de calcio). Esta estrecha asociacin permite una va directa del

calcio a travs del receptor NMDA hasta la enzima NOS y la liberacin rpida del xido

ntrico (Herman y cols., 1995).

Mecanismo de Accin del NO

El NO slo se sintetiza en respuesta a estmulos, difunde a travs de las membranas

biolgicas ah reacciona con metales de transicin, amina, grupos tiol, radicales libres como

oxgeno y sper xido. Su accin depende principalmente de la disponibilidad de radicales

libres donde acte. Su principal regulador es el mismo NO el cual activa principalmente la

guanidil ciclasa (sGC), la que aumenta los niveles de GMP cclico (cGMP). Esta

distribucin de sGC y cGMP es complementaria a la de nNOS. (Esplugues, 2002).Nuevas investigaciones demuestran que el NO regula el consumo de O2

mitocondrial inhibiendo a la citocromo oxidasa. Este efecto es competitivo con el oxgeno y

reversible, por lo que sera un regulador crucial en la generacin de energa (Esplugues,

2002). Adems se relaciona con varios NT, entre los cuales se destacan: opioides,

acetilcolina, noradrenalina, serotonina, glutamato, GABA, ATP, dopamina, CO, y

endotelina. Los mecanismos responsables no estn claros, pero la S-nitrosilacin de los

receptores gatillan la cascada de fosforilacin de la protena GMP-dependiente, la cual

regula la energa neuronal y el efecto modulador de transporte de los neurotransmisores

(Esplugues, 2002).


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NO y el SNC

El NO es un mensajero intercelular que eleva los niveles de cGMP y tambin activa

los receptores de glutamato. Se encuentra en casi todas las zonas del SNC. Por su parte, la

nNOS tambin se encuentra en una gran cantidad de zonas del SNC pre y post sinpticas y

est relacionada con la plasticidad sinptica, neurotoxicidad, excitacin neural, y

modulacin del dolor (Esplugues, 2002).

En relacin a la percepcin del dolor, el NO est implicado en varias vas tanto

perifricas como centrales. Los reflejos nociceptivos involucran la interaccin del NO con

los receptores NMDA antes mencionados y establece que la sntesis de NO aumenta la

facilitacin espinal de los input aferentes de los comportamientos de respuesta. La

inhibicin del NO tiene un efecto antinociceptivo cuando se estimulan los terminalesnerviosos perifricos qumicos y en modelos de hiperalgesia o dolor visceral. A la inversa,

el bloqueo de la sntesis de NO exacerba el dolor en problemas de hiperalgesia mecnica

(Hernandez, 2005).

Interaccin con frmacos

El NO puede ser inhibido o inducida su sntesis con diversos frmacos:

- Inhibidores de la NOS: actan en diferentes sitios de unin de la enzima.

1. Existe una familia del L-NAME, el cual compite con la L-arginina por el

sitio de unin y produce inhibicin. Actan preferentemente en procesos con

gran cantidad de NO inhibiendo la iNOS. Al no ser inhibidores especficos

causan gran cantidad de efectos colaterales como por ejemplo el aumento de

la presin arterial (Florez y cols., 2003).

2. El 7-nitroindazoles un inhibidor selectivo de la nNOS. El desarrollo de este

ha permitido explorar in vivo los posibles roles que cumple el NO liberado

por las neuronas, evitando la respuesta hipertensiva que mostraban los

inhibidores inespecficos. Para el presente estudio se utilizar dicho

inhibidor (Nanri y cols., 1998).


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- Donantes de NO: conjunto de sustancias que son capaces de liberar NO tras su

administracin en sistemas biolgicos (Florez y cols., 2003).


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HIPTESIS

La actividad analgsica producida por parecoxib y/o piroxicam en sus diferentes

dosis, est relacionada con el sistema nitridrgico en el ensayo algesiomtrico agudo

experimental de la formalina en ratones de la cepa CF/1.

OBJETIVO GENERAL

Evaluar la relacin de la actividad antinociceptiva de parecoxib y piroxicam en elsistema de la va NO-GMP cclico, en el ensayo algesiomtrico agudo experimental de la

formalina.

OBJETIVOS ESPECFICOS

- Evaluar el componente de la va NO-GMP cclico, por el pretratamiento con L-

NAME, en la actividad de parecoxib y piroxicam, mediante el test de la formalina

en ratones de la cepa CF/1.

- Evaluar el componente de la va NO-GMP cclico, por el pretratamiento con 7-

Nitroindazol, en la actividad de parecoxib y piroxicam, mediante el test de la

formalina en ratones de la cepa CF/1.


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MATERIALES Y MTODOS

Se usaron ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) machos y hembras, de 28 a 30

gramos de peso, los cuales fueron criados de acuerdo a las condiciones estndar

internacionales de experimentacin, a temperatura, presin y humedad adecuados,

sometidos a 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad, procurando no sobrepasar el numero

de 9 cras. (Sufra, 1998). Luego fueron habituados al ambiente del laboratorio al menos dos

horas antes del experimento, teniendo libre acceso a comida y agua durante ese lapso de

tiempo, para evitar ansiedad y conductas de exploracin durante la realizacin del test. El

cual se realiz de acuerdo a un protocolo aprobado por la Comisin de tica de la Facultad

de Medicina (cada animal recibi solamente una dosis de las drogas, las observaciones

fueron efectuadas en forma ciega y randomizada). Los animales se sacrificaron despus delexperimento mediante dislocacin cervical.

TEST DE LA FORMALINA

Los animales controles fueron inyectados con solucin salina al 0.9 % y los

animales del grupo control/L-NAME y del control/7-Nitroindazol, con una concentracin

de 5 mg/kg de peso. Para estudiar la participacin del sistema del nitridrgico, se

administr, por va intraperitoneal 7-nitroindazol (5 mg/kg), un inhibidor selectivo de la

NOS, especficamente la nNOS, 45 minutos antes de la inyeccin de formalina, o L-

NAME (5mg/kg), un inhibidor no selectivo de la NOS, 45 minutos antes de la inyeccin de

formalina. Luego, los ratones fueron inyectados por va intraperitoneal (ip) con parecoxib

(0.3, 1, 3 y 10 mg/kg ) y con piroxicam (1, 3, 10 y 30 mg/kg), 30 minutos antes de la

administracin de la formalina, es decir 15 minutos despus de la inyeccin del inhibidor

nitridrgico.

Los frmacos se administraron por va intraperitoneal (ip) en un volumen constante

para todos los frmacos empleados, de 10 ml/kg y el ensayo de la formalina se realiz al

momento de obtenerse el efecto mximo de cada droga.


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La evaluacin de la actividad antinociceptiva se efectu utilizando el test

algesiomtrico de la formalina, induciendo el estmulo doloroso. Para ello se realiz una

inyeccin subcutnea de 20 L de una solucin de formalina (formaldehdo diluido al 5

%) en la superficie dorsal de la pata izquierda del animal (Abbott y cols, 1995).

Los ratones se colocaron en un cilindro diseado para la observacin y se cont el

tiempo total que ellos se laman la pata inyectada durante los 5 minutos inmediatos a la

inyeccin de formalina, cabe destacar que el evaluador contabiliza slo el lamido en la

pata izquierda del ratn en la zona sin vellos, indicador real de dolor. El lamido en la parte

superior con pelos de la pata y el resto del cuerpo no es contabilizado, debido a que no es

atribuible actividad nociceptiva, sino a conductas de higiene propias de la especie

(Huskaar y cols, 1985). . La conducta ms especfica de manifestacin de dolor es el

aumento de la incidencia de autotoma, en donde el animal rasca y muerde el miembrodenervado y anestesiado. Signos ms generales de dolor espontneo incluyen diferencias

en el patrn de sueo, conducta exploratoria, estado nutricional y conducta social

(Mandegary y cols, 2004).

Por medio de cronmetro digital, se contabiliz la fase algsica aguda (primera

fase). Posteriormente transcurren 15 minutos sin contabilizar, debido a que el ratn se

encuentra en un perodo de quietud. Luego se cont por 10 minutos, a partir de los 20

minutos de la inyeccin y hasta los 30 minutos, el tiempo total durante el cual los animales

se laman la pata inyectada, por medio de cronmetro digital y que corresponde a la fase

inflamatoria y que mide el dolor crnico (segunda fase) (Abbott y cols, 1995).

Para la evaluacin de las interacciones, se construyeron curvas dosis-respuesta de

los AINEs administrados por va intraperitoneal con un mnimo de 6 animales por cada una

de las curvas, de al menos 4 dosis logartmicas diferentes y crecientes, antes y despus del

pretratamiento con L-NAME y con 7-Nitroindazol de los animales.


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ESTADISTICAS

Para la evaluacin de las drogas, se compar el efecto del frmaco antes y despus

de la administracin tanto del L-NAME y del 7-Nitroindazol, y la significacin estadstica

fue determinada por pruebas t de Student y anlisis de varianza (ANOVA). La significacin

fue considerada a un nivel de 5%.

Para el anlisis estadstico, se utiliz el programa PRIMER, perteneciente al

Laboratorio de Neurofarmacologa Facultad de Medicina de la Universidad de Chile.

TIPO DE INVESTIGACIN

El proyecto utiliza un estudio del tipo explicativo con un diseo experimental de

laboratorio con post-prueba solamente y grupo control.

OBTENCION DE LA MUESTRA

La seleccin de los animales se realiz en forma randomizada y la muestra es del

tipo probabilstica.


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VARIABLES

PRIMERA VARIABLE

Definicin conceptual: expresada como la interaccin entre el tipo de inhibidor

nitridrgico utilizado y la actividad analgsica de parecoxib y de piroxicam, es decir, si la

inhibicin selectiva y no selectiva de la NOS, influye en el mecanismo de accin

antinociceptivo de los AINEs en estudio.

Definicin operacional: esta variable se medir a travs de un anlisis de las curvas dosis

respuesta de los frmacos administrados va ip.

SEGUNDA VARAIBLE

Definicin conceptual: est expresada como el efecto antinociceptivo del parecoxib y

piroxicam, entendindose por efecto antinociceptivo, a la disminucin de la actividad

dolorosa, expresada por el animal por su lamido de la extremidad inyectada por la solucin

alggena de formalina va sc. La escala de medicin de la variable es de razn y

proporcin.

Definicin operacional: Este efecto se evaluar utilizando el test algesiomtrico de la

formalina.


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PRESENTACION Y ANALISIS DE RESULTADOS

Para la comparacin de los grupos de estudio con el grupo control salino, se utiliz la

Prueba T (P value < 0,05). Los resultados obtenidos de las mediciones, se acompaan de su

respectivo Error Estndar (ES). Los mismos son presentados en el Anexo 3.

NS: resultados estadsticamente no significativos

p


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Grupo Parecoxib

(Resultados comparados con respecto al Control Salino)

En la dosis de 0.3 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue

de 84.5 16.72 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 117.25 13.2 segundos

(p


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En la dosis de 10 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue

de 71.33 19.98 segundos (p


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Grupo Parecoxib- 7-Nitroindazol

(Resultados comparados con respecto al Grupo Parecoxib)

Cabe recordar que en este grupo se inyect previamente una dosis de 5 mg/kg de 7-

Nitroindazol.

En la dosis de 0.3 mg/kg, el tiempo promedio de lamidos durante la primera fase fue

de 2 1.60 segundos (p


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de 78.83 5.92 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 47 12.72 segundos (NS).


de 61 11.41 segundos (NS) y en la segunda fase fue de 42 19.06 segundos (NS).

Grupo Piroxicam 7 Nitroindazol

(Resultados comparados con respecto al Grupo Piroxicam)

Cabe recordar que en este grupo se inyect previamente una dosis de 5 mg/kg de 7-Nitroindazol.


de 37 4,78 segundos (p


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DISCUSIN

Los principales efectos teraputicos, as como los efectos adversos de los AINEs se

pueden explicar por su efecto inhibidor de las ciclooxigenasas (COX), enzimas que

convierten el acido araquidnico en prostaglandinas (PG) y tromboxanos. Actualmente se

ha demostrado la existencia de tres isoformas de COX, 1, 2 y 3, con funciones fisiolgicas,

patolgicas y ubicacin bien definidas (Chandrasekharan, 2002, Florez, 2003).

La mayora de los AINEs actualmente disponibles inhiben a concentraciones teraputicas,

en forma no-selectiva ambas isoformas de COX, la 1 y la 2, como lo hace el piroxicam,

pero existen AINEs selectivos en su accin sobre las COX-2, como el parecoxib.

El comportamiento de los AINEs en estudio, piroxicam y parecoxib, demostraron

por la curva dosis-respuesta obtenida, su claro efecto analgsico en el test algesiomtrico dela formalina, corroborando un sinnmero de estudios al respecto. Cabe hacer notar que a

dosis equimolares, la accin antinociceptiva del parecoxib es casi el doble de efectiva que

la accin del piroxicam. Esta diferencia en efectividad antinociceptiva, se explica en parte

por su accin selectiva a nivel de la isoforma COX-2, frente a una noxa de tipo

inflamatorio, como sera el caso de la sustancia alggena utilizada en este test

algesiomtrico (formalina subcutnea).

Por otro lado, es sabido que el oxido ntrico se sintetiza por tres isoformas de oxido

ntrico sintasa (NOS) con funciones y ubicaciones diferentes, y que participa como

neurotransmisor en el SNC y perifrico, siendo la nNOS (neuronal) la mas involucrada en

el proceso de neurotransmisin del dolor a nivel central, interactuando con los receptores de

NMDA y facilitando los input aferentes espinales sobre los reflejos nociceptivos (Espluges,

2002).

Al utilizar L-NAME, un inhibidor no especifico de la NOS, la inhibicin del NO

tiene un efecto antinociceptivo cuando se estimulan los terminales nerviosos perifricos

qumicos y en modelos de hiperalgesia o dolor visceral, pero en cambio exacerba el dolor

en problemas de hiperalgesia mecnica (Hernandez, 2005). En este estudio el L-NAME no

produjo un efecto antinociceptivo, pese a que el test usa un estimulo qumico perifrico

(formalina), y solo logra un cambio significativo en la segunda fase (inflamatoria del test)

revirtiendo el efecto algsico.


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Con respecto a la interaccin de L-NAME con los AINEs, no se obtuvo ningn cambio

significativo, ni antagonismo ni sinergismo, en la accin antinociceptiva de piroxicam, y

una tendencia significativa a revertir el efecto de la segunda fase en el accionar del

parecoxib, de lo cual se deduce que la inhibicin no selectiva no induce cambios en el

mecanismo de accin de los AINEs en estudio.

El 7-NI es un potente inhibidor mas selectivo para la NOS, accin ejercida sobre la

NOS cerebral y sin afectar las otras dos isoformas perifricas (Wangensteen et al., 2006).

Por otra parte la interaccin entre COX y NO ha sido estudiada en numerosos trabajos,

muchos de los cuales con resultados contradictorios. Algunos estudios indican que el NO

estimula la sntesis de PGs por la COX, mientras que otros observan inhibicin de la

enzima ante el NO (Goodwin y cols., 1999). Otros estudios han demostrado que la

exposicin a NO produce una activacin de la COX-1 y una inhibicin de la COX-2,explicando los resultados contradictorios de la literatura, a que el NO afectaba a distintas

isoformas de la COX (Clancy y cols., 2000).

Los resultados obtenidos con 7-NI suprimieron por completo la respuesta

nociceptiva de formalina, tanto en la fase algsica, como en la fase inflamatoria, resultado

que est en concordancia con la accin del NO en la respuesta hiperalgsica visceral y en

estmulos perifricos qumicos, y debido a la dosis empleada (5 mg/kg) que result ser muy

potente. Por esta misma razn, en cuanto a la interaccin entre este inhibidor de la NOS

central con los AINEs en estudio, no podemos concluir si la antinocicepcin se debe a la

sinergia entre ambas sustancias, o solamente a la accin potente del 7-NI, sinergia que fue

mas marcada con el parecoxib, llevando los valores prcticamente a un tiempo de lamido

igual a cero.

Por estas razones, nuestra hiptesis es rechazada, aunque los resultados obtenidos

no son categricos ni para afirmar que el sistema nitridrgico modula el efecto

antinociceptivo de los AINEs en estudio, parecoxib y piroxicam, ni tampoco en postular

que el NO no participa modulando la accin de las PG en el mecanismo de accin

antinociceptivo de dichos AINEs. Recientemente, otras investigaciones han propuesto que

el efecto final de la actividad modulatoria del NO en las COXs no es nico, puesto que el

NO endgeno, as como dadores de NO, inician y detienen la va de las COXs,

dependiendo de los niveles basales de NO liberado, de los tipos celulares en los cuales se


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produce la biosntesis de PGs y de la intensidad del estmulo utilizado para liberar las PGs

(Mollace y cols., 2005).

CONCLUSIN

Tal como ya se ha demostrado antes, corroboramos que Parecoxib y

piroxicam son frmacos que poseen actividad antinociceptiva al ser

administrados por va i.p. lo que demuestra una accin segmentaria.

El efecto antinociceptivo de parecoxib y piroxicam es del tipo dosis-

dependiente en el test de la formalina, confirmando lo que se ha dicho en un

sinnmero de investigaciones anteriores.

En el efecto antinociceptivo de parecoxib y piroxicam no es posible

demostrar la accin neuromoduladora nitridrgica empleando el test de la

formalina, en las dosis empleadas.

PROYECCIONES

Estudiar la posible interaccin utilizando un antiinflamatorio no-esteroidal

inhibidor especfico de COX-3, para ver si existe relacin en la modulacin del

dolor con L-NAME y con 7-nitroindazol, en el test de la formalina.

Utilizar frmacos inhibidores de COX-1, COX-2 o COX-3, pero con diferentesensayos algesiomtricos y as conocer si tienen alguna relacin con el sistema

nitridrgico, utilizando inhibidores de la oxido nitrico sintasa no selectivos y

selectivos. Luego, los resultados entre cada test se pueden comparar para

conocer la especificidad de cada uno de ellos.


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REFERENCIAS

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48/57

36

ANEXO 1: PRESENTACIN DE RESULTADOS

Grfico 1. Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p. en el ensayo algesiomtrico de laformalina. Primera fase.

Grfico 2. Curva dosis-respuesta del Piroxicam i.p. en el ensayo algesiomtrico de laformalina. Segunda fase.

Curva Dosis-Respuesta Piroxicam

20-30 minutos

0

30

60

90

120

150

180

Control 1 3 10 30

Dosis (mg/kg)

TiempodeLamidos(seg)

Curva Dosis-Respuesta Piroxicam

0-5 minutos

0

30

60

90

120

150

Control 1 3 10 30

Dosis (mg/kg)

tiempoLamidos(seg)

ControlSalino

p


49/57

37

Grfico 3. Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p. en el ensayo algesiomtrico de laformalina. Primera fase.

Grfico 4. Curva dosis-respuesta del Parecoxib i.p. en el ensayo algesiomtrico de laformalina. Segunda fase.

Curva Dosis-Respuesta Parecoxib

20-30 minutos

0

30

60

90

120

150

180

210

Control 0,3 1 3 10

Dosis (mg/kg)

TiempoLamid

os(seg)

Curva Dosis-Respuesta Parecoxib

0-5 minutos

0

30

60

90

120

150

Control 0,3 1 3 10

Dosis (mg/kg)

TiempoLamidos

(seg)

ControlSalino

ControlSalino

p


50/57

38

Grfico 5. Curva dosis-respuesta del Piroxicam/L-Name i.p. en el ensayoalgesiomtrico de la formalina. Primera fase.

Grfico 6. Curva dosis-respuesta del Piroxicam/L-Name i.p. en el ensayoalgesiomtrico de la formalina. Segunda fase.

0

50

100

150

200

0-5min

TiempodeLam

ido,s

C 1 3 10 30 A

Piroxicam/L-NAME, 0-5 min

0

50

100

150

200

20-30min

TiempodeLamid

o,s

C 1 3 10 30 A

Piroxicam/L-NAME, 20-30 min

p


51/57

39

Grfico 7. Curva dosis-respuesta del Parecoxib/L-Name i.p. en el ensayoalgesiomtrico de la formalina. Primera fase.

Grfico 8. Curva dosis-respuesta del Parecoxib/L-Name i.p. en el ensayoalgesiomtrico de la formalina. Segunda fase.

0

50

100

150

200

0-5min

TiempodeLamido

,s

Parecoxib/L-NAME, 0-5 min

C 0,3 1 3 10 A

0

50

100

150

200

20-30min

TiempodeLamido,s

C 0,3 1 3 10 A

Parecoxib/L-NAME, 20-30 min

p


52/57

40

Grfico 9. Curva dosis-respuesta del Piroxicam/7-Nitroindazol i.p. en el ensayoalgesiomtrico de la formalina. Primera fase.

Grfico 10. Curva dosis-respuesta del Piroxicam/7-Nitroindazol i.p. en el ensayoalgesiomtrico de la formalina. Segunda fase.

0

50

100

150

200

0-5min

Tiempodelam

ido,s

C 1 3 10 30 A

Piroxicam/7-Nitro, 0-5 min

0

50

100

150

200

20-30min

Tiempodelamido,s

C 1 3 10 30 A

Piroxicam/7-Nitro, 20-30 min

p


53/57

41

Grfico 11. Curva dosis-respuesta del Parecoxib/7-Nitroindazol i.p. en el ensayoalgesiomtrico de la formalina. Primera fase.

Grfico 12. Curva dosis-respuesta del Parecoxib/7-Nitroindazol i.p. en el ensayoalgesiomtrico de la formalina. Segunda fase.

0

50

100

150

200

0-5min

TiempodeLamido,s

C 0,3 1 3 10 A

Parecoxib/7-Nitro, 0-5 min

0

50

100

150

200

20-30min

TiempodeLamido,s

C 0,3 1 3 10 A

Parecoxib/7-Nitro, 20-30 min

p


54/57

42

ANEXO 2 : PROTOCOLO EXPERIMENTAL TEST DE LA

FORMALINA

- Grupo Control Salino

Grupo de 6 ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) inyectados con una solucin

salina al 0.9%. total de 6 ratones.

- Grupo Control/L-NAME

Grupo de 6 ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) inyectados con 5 mg/Kg. de L-

NAME previa a la administracin de formalina. Total de 6 ratones.

- Grupo Control/7- Nitroindazol

Grupo de 6 ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) inyectados con 5 mg/Kg. de 7-

nitroindazol previa a la administracin de formalina. Total de 6 ratones

- Grupo Piroxicam/L-NAME

Grupo de 6 ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) con dosis de 5 mg/kg de L-

NAME y dosis de 1, 3, 10 y 30 mg/kg de piroxicam. Total de 24 ratones.

- Grupo Parecoxib/L-NAME

Grupo de 6 ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) con dosis de 5 mg/kg de L-

NAME y dosis de 0.3, 1, 3 y 10 mg/kg de parecoxib. Total de 24 ratones.


55/57

43

- Grupo Piroxicam/7- Nitroindazol

Grupo de 6 ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) con dosis de 5mg/kg 7-

nitroindazol y dosis de piroxicam de 1, 3, 10 y 30 mg/kg. Total de 24 ratones.

- Grupo Parecoxib/ 7- Nitroindazol

Grupo de 6 ratones de la cepa CF/1 (Mus musculus) con dosis de 5mg/kg 7-

nitroindazol y dosis de parecoxib de 0.3, 1, 3 y 10 mg/kg. Total de 24 ratones.


56/57

44

ANEXO 3:Tabla 1. Evaluacin del dolor en el ensayo algesiomtrico utilizandoParecoxib y Piroxicam en presencia o ausencia de L-NAME y 7-Nitro

Grupos Dosis Primera Fase de 0 a 5 minutos Segunda fase de 20 a 30 minutos

(mg/Kg) Promedio de Lamidos (seg) ES P Promedio de Lamidos (seg) ES P

Control Salino 126,38 8.48 155,65 10,20

Control L-NAME 113,5 15,41 NS 94 12,91 p < 0.05

(c/r al Control Salino)

Control 7 - Nitro-

indazol 1,67 1,09 p < 0.05 0 00 p < 0.05

(c/r al Control Salino)

0,3 84,50 16.72 NS 117,25 13,20 p < 0.05

Parecoxib 1 55,83 12,82 p < 0.05 126,00 12,66 p < 0.05

(c/r al Control Salino) 3 36,40 15,64 p < 0.05 119,33 12,50 p < 0.05

10 30,00 10,02 p < 0.05 81,83 27,88 p < 0.05

1 92,30 9,61 p < 0.05 99,50 14,85 NS

Piroxicam 3 81,83 16,71 p < 0.05 103,75 20,25 NS

(c/r al Control Salino) 10 71,33 19,98 p < 0.05 94,86 16,36 p < 0.05

30 33,20 18,58 p < 0.05 96,20 23,44 p < 0.05

0,3 87,5 10,10 NS 101,2 17,05 NS

Parecoxib/L-NAME 1 68 12,94 NS 47,17 14,07 p < 0.05(c/r al Grupo Parecoxib) 3 64,33 12,40 NS 41,67 13,77 p < 0.05

10 78 12,64 p < 0.05 40,16 20,26 NS

Parecoxib/ 7-Nitro- 0,3 2 1,60 p < 0.05 0 00 p < 0.05

indazol 1 2 1,50 p < 0.05 0 00 p < 0.05

(c/r al Grupo Parecoxib) 3 3,17 1,45 NS 0 00 p < 0.05

10 2,5 12,64 NS 0 00 p < 0.05

1 83,00 12,06 NS 77,25 14,80 NS

Piroxicam/ L-NAME 3 89,83 8,15 NS 69,75 19,78 NS

(c/r al Grupo Piroxicam) 10 78,83 5,92 NS 47,00 12,72 NS30 61,00 11,41 NS 42,00 19,06 NS

Piroxicam/ 7-Nitro- 1 37 4,78 p < 0.05 17,17 17,10 p < 0.05

indazol 3 17 6,68 p < 0.05 0,001 16,89 p < 0.05

(c/r al Grupo Piroxicam) 10 11,2 4,68 NS 0,6 0,6 p < 0.05

30 2,4 1,47 NS 4 2,73 p < 0.05


57/57

intereaccion del sistema nitridergico en el mecanismo de accion del piroxicam y parecoxib

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