UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLOFACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL BIOLOGÍA

FROTIS SANGUINEO

CURSO: LABORATORIO DE ANALISIS BIOLOGICOS

ALUMNA: PELAEZ BAILON, ELVIERA

DOCENTES: Dr. PADILLA SAGASTEGUI, SANTOS ENRIQUE Dr. BELTRAN ORBEGOSO, RAUL ANTONIO

CICLO: IX

Trujillo– Perú2014

FROTIS SANGUÍNEO

Introducción

La sangre es un tejido conjuntivo que circula a través de la sangre del aparato cardiovascular, está formado por células y un componente extracelular cuyo volumen supera el de las células. El volumen total de sangre es de alrededor de 5 litros lo que equivale al 7 a 8% de peso corporal total (Rodak, 2005).

Se define como frote, frotis o extendido, a la preparación microscópica delgada y transparente, extendida entre dos cristales (porta o cubreobjetos), obtenida de un líquido orgánico espeso o tejido semilíquido o pastoso (sangre, aspirados, secreciones, exudados, etc.) (Rodak, 2005).

El frotis sanguíneo es realizado en forma rutinaria en todo hemograma, ya sea que se realice en forma manual o automatizada (2).

El frotis sanguíneo se utiliza para el estudio de las características citológicas de las células de la sangre, lo cual permite valorar el funcionamiento general de la médula ósea a través de sus componentes celulares, lo cual implica la evaluación de las líneas eritrocíticas, leucocitaria y megacariocítica, determinando anormalidades en forma, tamaño, color e inclusiones citoplasmáticas, dando una medida cuantitativa y cualitativa de los elementos que lo conforman (Sans, 2001).

La importancia de un buen extendido y su correcta tinción son fundamentales a la hora de la observación al microscopio, ya que un frotis mal hecho entrega muy poca información acerca de la morfología celular, y en algunos casos es esta observación la que entrega al Clínico la información que requiere para realizar su diagnóstico (Sans, 2001).

El objetivo de esta práctica es realizar un frotis sanguíneo con sangre del alumno y analizarlo y conocer los componentes celulares del tejido sanguíneo

Material

- Lanceta para punción digital.- Torundas de algodón.- Alcohol 70°.- Dos portaobjetos.- Guantes y bata.- Tinción con colorante Giemsa (formado por una mezcla de eosina, azul metileno y azures en solución acuosa).- Microscopio de laboratorio.- Aceite de inmersión

Causas de error en la tinción del frotis sanguíneo:

- Coloración excesivamente azul: Frotis muy grueso, lavado insuficiente, Tinción muy prolongada, colorante demasiado alcalino.

- Coloración muy rosada: El agua del lavado, el colorante o el tampón demasiado ácidos.

- Aparición de artefactos debido a suciedad, deterioro o presencia de grasa en portaobjetos.

- Hidratación de los hematíes: Fijación inadecuada por uso de alcohol metílico no absoluto.

Metodología

1. Preparamos el material que vamos a utilizar y nos colocamos los guantes.2. Procedemos a desinfectar el dedo del cual extraeremos la sangre que se

utilizara en el frotis sanguíneo.3. Pinchamos con lanceta en el dedo, una vez hecho esto, apretamos el dedo para

bombear sangre hacía afuera. Una vez se haya formado una gota la acercamos al portaobjetos poco a poco hasta que la sangre pase a éste.

4. Realizamos la extensión del frotis sanguíneo.

Tras realizar la extensión, se obtienen tres partes de la muestra:

- Cabeza (con demasiados eritrocitos).- Cuerpo (zona óptima para la observación, existe un reparto equilibrado de células).- Cola (eritrocitos en escaso número)

Frotis incorrectos:

5.- Se deja secar la muestra al aire6.- Colocar el frotis sobre una rejilla para tinción.

7.- Cubrir completamente el portaobjetos con colorante de Wright gota a gota, si el colorante se comienza a evaporar deberá agregarse más. Dejar el colorante sobre el frotis 5 minutos.8.- Agregar un buffer para evitar una coloración débil, este buffer puede ser agua destilada, y dejarlo 5 minutos.

9.- Pasados los 5 minutos se enjuaga el excedo de colorante con agua destilada y se deja secar10.- Ya seca la muestra se procede a observar en el microscopio.Para una mejor observación del componente celular se puede usar el objetivo de100 X el vual también es llamado objetivo de inmersión. Ya que en este se utiliza liquido de inmersión para poder utilizarlo

Agregando colorante

Microscopio

Glóbulos rojos

Descripción de células sanguíneas

Eritrocitos (Glóbulos rojos)

Los Glóbulos rojos son las células enucleadas carentes de los gránulos típicos. Contienen hemoglobina la cual se fija al oxígeno y al dióxido de carbono. Actúan solo dentro del torrente circulatorio, donde se fijan al oxígeno para entregarlo a los tejidos y fijan dióxido de carbono en los tejidos para llevarlo a los pulmones.

Leucocitos

Los leucocitos se subclasifican en dos grandes grupos granulocitos y agranulocitos, el fundamento de esta división es la presencia de los gránulos específicos prominentes en el citoplasma.

Granulocitos

Neutrófilos

Constituyen la variedad predominante de los granulocitos. Los neutrófilos maduros son almacenados en la medula ósea antes de ser liberados a la circulación durante 5 días, una vez en la sangre su permanencia en ella es fugaz ya que pasan rápidamente a los tejidos donde llevan a cabo su función.

Los neutrófilos maduros van a contener 3 tipos de gránulos.

o Gránulos específicos: son pequeños y más abundantes que los azurófilos. Estos contienen varias enzimas como la colagenasa tipo IV, activadores del complemento y otros agentes bactericidas.

o Gránulos azurófilos: surgen al principio de la granulospoyesis y se encuentran en todos los granulocitos su contenido más importante es la mieloperoxidasa, la cual es un bactericida muy potente.

o Gránulos terciarios: hay dos tipos en los neutrófilos los que contienen fosfatasas y los que contienen metal o proteinasas.

Eosinófilos

También tienen una actividad bactericida pero es mucho menor a la de los neutrófilos. En sus gránulos almacenan proteínas con funciones citotóxicas para paracitos y contiene dos tipos de gránulos:

Gránulos específicos: contienen proteínas principales como la proteína básica mayor, la peróxidasa de neutrófilo, etc.

Gránulos azurófilos: son lisosomas con una variedad de hidrolasas acidas lisosomas y otras enzimas hidrolíticas.

BasófilosConstituyen una muy pequeña porción de los leucocitos, ya que tienden a ubicarse en los tejidos en donde existe inflamación relacionada con hipersensibilidad a proteínas, alergia de contacto o rechazo de injerto contra huésped. Contiene dos tipos de gránulos:

Gránulos específicos: estos gránulos contienen heparina, histamina, heparan sulfato y leucotrienos, los cuales tienen actividades vasoactivas.

Gránulos inespecíficos: contienen enzimas hidrolasas.

Agranulocitos

Linfocitos

Son el componente principal del sistema inmunitario. En el organismo hay tres tipos de linfocitos distintos desde el punto de cita funcional:

Linfocitos T: se diferencian en el timo, tienen una semivida prolongada, expresan en su superficie proteínas marcadoras, y se subclacifican en linfocitos CD4 y CD8. Los linfocitos T CD4 poseen el marcador CD4 y reconocen a los antígenos del complejo mayor de histocompatibilidad II.

Los linfocitos T CD8 expresan el marcador CD8 y reconocen a los antígenos unidos al complejo mayor de histocompatibilidad I.

Linfocitos B: participan en la producción de anticuerpos circulante. En la sangre los linfocitos maduros expresan IgM e IgG en su superficie, lo mismo que las moléculas del MHC II.

Linfocitos NK: tienen actividad destructora sobre células infectadas por virus o células tumorales

Monocitos

Son los leucocitos ms grandes. Se movilizan desde la medula osea hacia los demás tejidos, donde se diferencian a macrófagos y reciben un nombre diferente a según en el tejido donde estén como osteoclastos en los huesos, células de kupffer en el hígado etc.

Plaquetas

Son pequeños fragmentos citoplasmáticos que provienen de los megacariocitos.Las plaquetas actúan en la vigilancia continua de los vasos sanguíneos, la formación de coágulos y la reparación del tejido lesionado.

ConclusiónEsta práctica nos ayudó a aprender cómo realizar un estudio de laboratorio muy básico pero muy importan, también nos ayudó a conocer la morfología microscópica de los componentes celulares de la sangre.

El frotis sanguíneo es un estudio muy fácil de realizar pero muy importante ya que ayuda a la diagnosticación de diversos trastornos que pueden afectar a las células sanguíneas y por consecuencia al organismo, estas enfermedades pueden incluir anemias, leucemias, trastornos plaquetarios, trastornos inmunes, etc.

Referencias Bibliográficas

Rodak, B. 2005. Hematología: Fundamentos y aplicaciones Clínicas. Segunda Edición. Ed. Médica Panamericana.

Sans Sabrafen J., 2001. Hematología Clínica. Cuarta Edición, Editorial Harcourt, Barcelona, España.