estudio quÍmico cuÁntico de la desprotonaciÓn de...
TRANSCRIPT
XXV CONGRESO DE LA SOCIEDAD MEXICANA DE ELECTROQUÍMICA
3RD MEETING OF THE MEXICAN SECTION ECS
1400 31 DE MAYO – 4 DE JUNIO, 2010
ZACATECAS, MÉXICO
ESTUDIO QUÍMICO CUÁNTICO DE LA DESPROTONACIÓN DE LA ADRENALINA
V.G. Gámez García 1, A. Cuán1*, M. E. Palomar-Pardavé1*, M. T. Ramirez Silva2, C. M. Cortés-
Romero3, M. A. Romero- Romo1.
1 Universidad Autónoma Metropolitana-Azcapotzalco, Departamento de Materiales, Av. San Pablo No. 180, Col. Reynosa, C.P. 02200 D.F. México.
2 Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa. Departamento de Química, Av. Michoacán y Purísima s/n Col. Vicentina, C.P. 09340 D.F. México.
3IATC, 76802 San Juan del Río, Querétaro. México *Tel (55)55318-9082, Fax (55)5553189577, [email protected] y
RESUMEN
Se presenta el estudio químico cuántico de la adrenalina y las diferentes estructuras
probables que se pueden formar a lo largo de la escala de pH. Se presenta algunas de las
propiedades electrónicas como es la distribución de carga atómica, distribución orbital del
HOMO y LUMO, energías orbitales para algunas de las especies calculadas. Se obtiene que
durante el proceso de desprotonación, la perdida de protones es más factible primero en el grupo
amino, seguida de los protones pertenecientes al grupo catecol, el –OH de la cadena alifática es el
último en perderse dando lugar a un producto inestable. Al pH de interés biológico, en donde la
adrenalina se encuentra predominantemente protonada, se obtiene que el protón ligado al grupo
amino, protege a este grupo de reacciones de oxido-reducción y por tanto el anillo del grupo
catecol se vuelve más vulnerable a este tipo de reacciones. En la distribución de las isosuperficies
del HOMO y LUMO para cada una de las especies estudiadas, se encuentra una redistribución
electrónica para las diferentes especies.
Palabras Clave: Neurotransmisores, Adrenalina, Propiedades Electrónicas, DFT.
EM140 1400 – 1412
XXV CONGRESO DE LA SOCIEDAD MEXICANA DE ELECTROQUÍMICA
3RD MEETING OF THE MEXICAN SECTION ECS
140131 DE MAYO – 4 DE JUNIO, 2010
ZACATECAS, MÉXICO
1. INTRODUCCIÓN
La adrenalina (AD), es un neurotransmisor del sistema nervioso simpático que pertenece al
grupo de las catecolaminas, ya que contiene un grupo catecol y un grupo amino en su estructura
molecular. La AD está presente en el organismo humano, es secretada por las glándulas
suprarrenales del riñón cuando existen situaciones de alerta, preparando al organismo para la
acción a través un aumento de concentración de glucosa en la sangre, así como, del ritmo
cardíaco y de la velocidad de respiración, también se produce la dilatación de las pupilas y
estimula al cerebro para que genere dopamina [1]. Dada la importancia de la adrenalina,
actualmente es de gran utilidad contar con una confiable caracterización fisicoquímica de la
molécula, para entender mejor los mecanismos de interacción de la AD con otras sustancias
presentes en el organismo [2]. Por otra parte, debido a que el grupo amino y los grupos hidroxilos
que componen la AD (ver Figura 1), reaccionan fácilmente en distintos ambientes de pH,
causando una oxidación o reducción de la molécula y aunado a su sensibilidad a la luz y a la
presencia de oxígeno, que también promueve su auto-oxidación, muchos grupos se han avocado
la tarea de estudiarla abarcando áreas diferentes. Recientemente, han realizado el análisis
experimental, por ejemplo, de las zonas de predominio de la AD en medio acuoso y la
determinación de los pKa´s en sus diferentes zonas de predominio [3], lo cual incluye el pH de
interés biológico (pH=7), ver Figura 2. Como se puede ver en esta Figura 2, a éste pH la AD se
encuentra totalmente protonada, H4AD+. En este sentido y desde el punto de vista molecular, las
estructuras probables y propiedades electrónicas de esta molécula, aún no han sido del todo
explorados. Por lo cual el presente estudio se basa en la aplicación de la química cuántica
computacional a través de la Teoría de Funcionales de la Densidad (DFT), para obtener
diferencias y geometrías probables involucradas de acuerdo al pH aplicado, así como,
distribución electrónica de la molécula y zonas susceptibles a oxidación, al pH de interés
biológico y comparándola con la especie en su estado neutro.
Figura 1. Molécula de adrenalina en estado neutro (H3AD), α: ángulo diedro.
α
XXV CONGRESO DE LA SOCIEDAD MEXICANA DE ELECTROQUÍMICA
3RD MEETING OF THE MEXICAN SECTION ECS
140231 DE MAYO – 4 DE JUNIO, 2010
ZACATECAS, MÉXICO
Figura 2. Diagrama de zona de predominio para la AD reportada por Corona-Avendaño et al. [3].
2. METODOLOGÍA EXPERIMENTAL
En este estudio se emplea el método semi-empírico AM1 y la Teoría de Funcionales de la
Densidad (DFT) implementada en el programa Gaussian 2003 [4]. Para el cálculo de la superficie
de energía potencial (PES) de la rotación del ángulo diedro α, se utilizó el método semi-empírico
AM1. Las geometrías obtenidas en los mínimos del PES, fueron optimizadas nuevamente al nivel
de teoría DFT, utilizando el funcional híbrido B3LYP [5]con base 6-311G más dos funciones
polarizadas (d,p), con sus respectivos cálculos de frecuencia para asegurar que las geometrías
corresponden a mínimos en PES. El estudio se realizó en fase gas. Los cálculos de estructura
electrónica se realizaron tomando en cuenta todos los electrones y el análisis de la distribución de
carga atómica se realizó bajo el esquema de proyección del potencial electroestático en la
molécula (ESP) [6].
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El esquema propuesto para la desprotonación de la molécula de AD es el mostrado en la
Figura 3.
Como se puede ver en la Figura 2 al pH fisiológico menor de 7.0, la especie predominante
es la adrenalina protonada y solo puede existir una especie en esta primera etapa, pues la adición
de un protón acido a la estructura solo tiene la disposición del átomo de nitrógeno en este caso.
Esta especie es la que estaría preferencialmente en el organismo humano. En la segunda etapa,
cuando el pH se encuentra alredor de 8.0 la primera perdida del protón puede darse de diferente
manera (especies H3AD-I a la H3AD-IV), está pérdida involucra 4 especies diferentes. En la
tercera etapa a pH mayor de 8.6 se encuentra la segunda desprotonación de la molécula y para
esta etapa se proponen 7 especies diferentes a formarse. La cuarta etapa corresponde a la pérdida
de 3 protones de la estructura y se proponen 4 especies diferentes, donde el pH debe ser mayor de
9.7. La última etapa corresponde a la molécula de AD completamente desprotonada en la cual
XXV CONGRESO DE LA SOCIEDAD MEXICANA DE ELECTROQUÍMICA
3RD MEETING OF THE MEXICAN SECTION ECS
140331 DE MAYO – 4 DE JUNIO, 2010
ZACATECAS, MÉXICO
solo una especie química podría formarse. La idea es establecer el mecanismo de desprotonación
que se lleva a cabo de acuerdo a las diferencias de energía entre las diferentes especies formadas
para cada etapa. De esta manera, se obtendría el mecanismo de la perdida de protones en la
molécula de AD y el sitio probable de desprotonación de acuerdo al valor de pH de trabajo. Hasta
este momento, solo se tiene la primeras dos etapas completas y parte de la tercera. Sin embargo,
algunas conclusiones importantes pueden ya ser extraídas de este estudio, como a continuación se
discutirán.
Figura 3. Diagrama esquemático propuesto de la desprotonación de la adrenalina (AD) de acuerdo al de diagrama
zona de predominio mostrado en la Figura 2 y reportado por Corona-Avendaño et al. [3].
En la primera parte del estudio, se realizó una búsqueda de las diferentes conformaciones
para la molécula de AD en su estado neutro, esto se hizo a nivel semi-empírico AM1. Se realizó
la rotación del ángulo diedro α que se forma entre los siguientes átomos: 9H, 7C, 5N y 6H, ver
Figura 1. La rotación del ángulo generó conformaciones de mínima y máxima energía en PES,
como puede verse en la Figura 4. Las barreras rotacionales encontradas a este nivel de teoría
muestran que los confórmeros Mín1 y Mín2, pueden coexistir en el medio y que para llegar a la
conformación Mín3, se requiere de un mayor suministro de energía.
XXV CONGRESO DE LA SOCIEDAD MEXICANA DE ELECTROQUÍMICA
3RD MEETING OF THE MEXICAN SECTION ECS
140431 DE MAYO – 4 DE JUNIO, 2010
ZACATECAS, MÉXICO
Para poder comparar las diferencias de energía entre los mínimos y las barreras rotacionales
obtenidas con la teoría AM1, se re-optimizaron las geometrías mínimas (Mín1, Mín2 y Mín3) y
los máximos (Barr1, Barr2 y Barr3), al nivel de teoría B3LYP/6311G (d,p). Los resultados
obtenidos se muestran en la Tabla I. Así como, la diferencia de energía entre el HOMO (orbital
más alto ocupado) y el LUMO (orbital más bajo desocupado), y sus correspondientes momentos
dipolares. De ésta Tabla I, se puede ver que la geometría mínima global corresponde a la
molécula en una conformación completamente alargada (Mín1) y que existen dos
conformaciones más que se estabilizan a energías más altas Mín2 y Mín3, éstas últimas están a
1.70 y 13.73 kJ mol-1 por arriba de Mín1. Como nuestro propósito es determinar las estructuras
geométricas formadas de acuerdo a la zona de predominio del pH, partiremos de la geometría de
mínima energía encontrada de acuerdo a PES, esto es la geometría Mín 1.
Figura 4. Diagrama esquemático, para la AD neutra, de la superficie de energía potencial (PES) con respecto a la variación del ángulo diedro α formado entre los átomos 9H , 7C, 5N y 6H, ver Figura 1. Nivel calculo AM1.
Es de hacer notar, que las geometrías Mín1 y Mín2 se encuentran alargadas, mientras que
en la geometría Mín3, la cadena lineal que contiene al grupo amino ha sufrido cierta torsión,
tendiendo hacia una conformación cíclica. Esta conformación, Mín3, tal vez corresponde al
precursor de la oxidación y la ciclización de esa parte de la molécula hacia la formación del
adrenocromo [7]. En tanto, las barreras rotacionales muestran la posible coexistencia de las dos
conformaciones Mín1 y Mín2 con una barrera de 4.30 a 5.84 kJ mol-1 entre una conformación u
otra, éstas muestran cambios estructurales mínimos entre ellas. Los cambios conformacionales
adquiridos en la molécula de AD conllevan a cambios a nivel electrónico, como se puede ver en
XXV CONGRESO DE LA SOCIEDAD MEXICANA DE ELECTROQUÍMICA
3RD MEETING OF THE MEXICAN SECTION ECS
140531 DE MAYO – 4 DE JUNIO, 2010
ZACATECAS, MÉXICO
la Tabla I. Con respecto a la diferencia en la energía HOMO (EH) y LUMO (EL), éstas se ven
afectadas, así como también su momento dipolar.
Tabla I. Estructuras de mínima energía para la AD neutra y diferencias de energía (ΔE) respecto al mínimo global, ΔEa corresponde a las barreras rotacionales, ΔΕH-L corresponde a la diferencia en energía entre los
orbitales HOMO y LUMO; y µ corresponde al momento dipolar. Las diferencias de energía fueron calculadas al nivel B3LYP/6311G (d,p).
De esta manera, la diferencia |EH-EL| menos pronunciada corresponde a la geometría Min3
si se compara con las geometrías Mín2 y Mín1. Mientras que en éstas dos últimas no hay un
cambio considerable en el valor de ΔΕH-L. Por lo que, de acuerdo a los valores obtenidos para
ΔΕH-L sugeriría que una vez alcanzada la conformación Mín3, la molécula puede volverse más
reactiva, tendiendo a ciclarse más fácilmente, si las condiciones son favorables. El momento
dipolar también se ve afectado por la geometría conformacional de la AD, siendo mayor,
mientras más alongado se encuentre la cadena perteneciente al grupo amino.Con respecto a la
diferencia en la energía HOMO (EH) y LUMO (EL), éstas se ven afectadas, así como también su
momento dipolar. De esta manera, la diferencia |EH-EL| menos pronunciada corresponde a la
XXV CONGRESO DE LA SOCIEDAD MEXICANA DE ELECTROQUÍMICA
3RD MEETING OF THE MEXICAN SECTION ECS
140631 DE MAYO – 4 DE JUNIO, 2010
ZACATECAS, MÉXICO
geometría Min3 si se compara con las geometrías Mín2 y Mín1. Mientras que en éstas dos
últimas no hay un cambio considerable en el valor de ΔΕH-L. Por lo que, de acuerdo a los valores
obtenidos para ΔΕH-L sugeriría que una vez alcanzada la conformación Mín3, la molécula puede
volverse más reactiva, tendiendo a ciclarse más fácilmente, si las condiciones son favorables. El
momento dipolar también se ve afectado por la geometría conformacional de la AD, siendo
mayor, mientras más alongado se encuentre la cadena perteneciente al grupo amino.
De acuerdo a la escala de pH y la zona de predominio para cada especie reportada en [3],
encontramos que al pH de interés fisiológico, pH=7, la AD se encuentra totalmente protonada
(ver Figura 2), por lo que es de interés estudiar a la H4AD+ y ver sus diferencias con respecto a la
especie neutra, H3DA. A este respecto, se tomo como especie de referencia la AD neutra
correspondiente al mínimo global (Mín1) y se le agrego un protón al grupo amino, –NH, ya que
es el único lugar donde el protón podría alojarse debido al par electrónico libre en el átomo de
nitrógeno. Posteriormente se realizó la re-optimización de la adrenalina protonada al nivel de
teoría B3LYP/6-311G(d,p), para obtener una mejor descripción energética, la geometría mínima
se muestra en la Figura 5.
Figura 5. Estructura optimizada para la adrenalina protonada H4AD+.
Energéticamente no se pueden comparar las especies de AD neutra (H3AD) y protonada
(H4AD+), pero si podemos comparar algunas diferencias en sus propiedades electrónicas, por lo
que en las Figuras 6 y 7, se muestra las energías orbitales y la distribución de la isosuperficie
HOMO y LUMO para ambas especies. Haciendo el análisis de resultados, a este respecto, se
obtiene una redistribución drástica en la que la cantidad de niveles desocupados que se
encuentran por abajo del nivel de Fermi para la AD se protonada, si se compara con la AD
neutra, ver Figura 6c y 7c.
Ahora bien, si vemos como es la distribución de la isosuperficie, tanto del HOMO como
del LUMO en ambas moléculas (Figura 6(a),(b) y 7 (a), (b)), podemos ver que también, éstas se
ven afectada por la presencia del protón. De esta manera, para la AD neutra, la distribución del
XXV CONGRESO DE LA SOCIEDAD MEXICANA DE ELECTROQUÍMICA
3RD MEETING OF THE MEXICAN SECTION ECS
140731 DE MAYO – 4 DE JUNIO, 2010
ZACATECAS, MÉXICO
HOMO se localiza principalmente en la región cercana al grupo amino, mientras el LUMO está
localizado en la región perteneciente al grupo catecol. Curiosamente, la presencia del protón en la
AD, invierte esta distribución, localizándose ahora el HOMO en la región del grupo catecol y el
LUMO en la región del grupo amino, como puede verse en las Figuras 6 y 7.
En la Figuras 8 y 9 se muestra las cargas atómicas calculadas para ambas especies H3AD y
H4AD+. Las cargas atómicas calculadas se realizaron bajo el esquema ESP, el cual se obtiene a
través de la proyección del potencial electroestático en la molécula [6]. Se utilizó este esquema
porque ha demostrado mínima dependencia con respecto a la base empleada. Haciendo el análisis
de las cargas atómicas para la molécula de adrenalina neutra y protonada se puede observar que
la región afectada por la presencia del protón (H4AD+) en mayor proporción es justamente la
cercana al grupo amino, tornándose más ácido el átomo de hidrógeno 6H (de 0.176 e- en la AD
neutra a 0.287 e- en la protonada) y con una menor densidad de carga electrónica el átomo de
nitrógeno 5N (-0.386 e- en la AD neutra a -0.347 e- en la protonada), ver Figuras 8 y 9, y la carga
electrónica correspondiente al protón en H4AD+ es 0.301 e- y es el hidrógeno más ácido de todos
en la molécula.
Al pH fisiológico se puede prever que la adrenalina se encontraría siempre protonada con
una pequeña contribución de la AD neutra por la cercanía de pKa. Los resultados químico-
XXV CONGRESO DE LA SOCIEDAD MEXICANA DE ELECTROQUÍMICA
3RD MEETING OF THE MEXICAN SECTION ECS
140831 DE MAYO – 4 DE JUNIO, 2010
ZACATECAS, MÉXICO
cuánticos obtenidos al nivel de teoría B3LYP/6311G (d,p) muestran que cuando la AD se
encuentra protonada la distribución electrónica cambia con respecto a la especie neutra,
localizándose el HOMO principalmente en el grupo catecol, si el proceso de oxidación lo
relacionamos con la perdida de electrones de una especie y en cuanto a energía, el orbital más
vulnerable a esta pérdida de electrones es el HOMO, entonces el proceso de oxidación se daría
justo en la región donde éste se encuentra ubicado, siendo en este caso el grupo catecol el
afectado, ya que el grupo amino se protege por la presencia del protón ligado a su para
electrónico libre.
Siguiendo el esquema presentado en la Figura 3, en la segunda etapa del proceso de
desprotonación , se pueden también formar otras especies a la par de la AD neutra, discutida
previamente, en la Tabla II, se muestra las diferencias de energía en entre las diferentes especies
propuestas. De la Tabla II se puede ver que efectivamente, la primera desprotonación de la
molécula a pH mayores de 7, será la del protón ligado al grupo amino.
Las reacciones de óxido-reducción se dan de manera natural en el organismo humano y
dadas las condiciones de pH y de algunos estudios realizados experimentalmente, se sabe que la
oxidación de los neurotransmisores, en este caso especial de la AD, se lleva a cabo justamente en
el grupo catecol y no por el grupo amino [8], por lo que nuestros resultados están de acuerdo con
lo observado experimentalmente.
En la Figuras 10 a 12, se muestran la distribución del HOMO y LUMO obtenida para las
especie H3AD-IV y H3AD-III, en donde si la comparamos con la H3AD-I (Figura 6), podemos
XXV CONGRESO DE LA SOCIEDAD MEXICANA DE ELECTROQUÍMICA
3RD MEETING OF THE MEXICAN SECTION ECS
140931 DE MAYO – 4 DE JUNIO, 2010
ZACATECAS, MÉXICO
ver que existe una redistribución tanto de los orbitales como de las energías orbitales. En la
Figura 11, se presenta la distribución de carga atómica bajo el esquema ESP, para las especies
H3AD-IV. Entonces, de acuerdo a las diferencias de energías obtenidas para la primera
desprotonación, ver Tabla II, la estabilización de la molécula en orden creciente quedaría, H3AD-
I > H3AD-IV > H3AD-III > H3AD-II. Por tanto, la pérdida del protón que causaría una mayor
energía es la del ligado al grupo –OH de la cadena alifática, de hecho, partiendo de la geometría
mostrada para esta especie H3AD-II durante el proceso de optimización se obtiene una migración
del protón del grupo amino al oxígeno, dando como geometría óptima la especie H3AD-I. Con lo
cual se corrobora que efectivamente esta especie es la de menor energía.
Tabla II. Diferencias de energía () en Kcal mol-1, entre las diferentes especies propuestas en cada proceso de desprotonación de la molécula de adrenalina. El cero de energía es la especie tomada como referencia, por ser la de
menor energía del grupo.
Diferencia de energía ()
B3LYP/6-311G(d,p) (Kcal/mol)
H3AD-I H3AD-II H3AD-III H3AD-IV
0.00 55.61 55.30 39.80
H2AD--I H2AD--II H2AD—III H2AD--IV H2AD--V H2AD--VI
33.26 16.31 0.00 85.15 84.71 81.57
HAD2--I HAD2—II HAD2--III HAD2--IV
35.77 37.02 0.00 74.67
Para la segunda desprotonación de la molécula, se puede ver en la Tabla II, que la
geometría de menor energía es la que corresponde a la especie H2AD- - III (ver Figura 3),
quedando en orden creciente la estabilización como sigue: H2AD--III > H2AD-II > H2AD-I >
H2AD--VI > H2AD--V > H2AD-IV. Nuevamente, la pérdida del protón del –OH de la cadena
alifática sería el de mayor energía y la de menor energía el protón del –OH de grupo catecol
localizado en la posición para con respecto a la cadena alifática. En la optimización de especie
H2AD- -V y H2AD- -VI, nuevamente ocurre la migración del protón ligado al grupo amino
generando nuevamente la especie H2AD- -II y H2AD- -III respectivamente, como en el caso
anterior. La especie H2AD- -V es de mayor energía con respecto a las mencionadas anteriormente
con una energía de 84.71 kcal mol-1 con respecto a la H2AD- -III, mientras que la H2AD- -VI está
XXV CONGRESO DE LA SOCIEDAD MEXICANA DE ELECTROQUÍMICA
3RD MEETING OF THE MEXICAN SECTION ECS
141031 DE MAYO – 4 DE JUNIO, 2010
ZACATECAS, MÉXICO
a 81.57, lo cual indica que es poco probable dichas especies se formen. Con respecto a la tercera
desprotonación la especie HAD2-III resulto la más estable quedando en orden creciente de
estabilización como sigue: HAD2-III > HAD2-I > HAD2-II > HAD2-IV.
XXV CONGRESO DE LA SOCIEDAD MEXICANA DE ELECTROQUÍMICA
3RD MEETING OF THE MEXICAN SECTION ECS
141131 DE MAYO – 4 DE JUNIO, 2010
ZACATECAS, MÉXICO
Hasta ahora se ha estudiado el proceso a vacío o en fase gas, falta tomar en cuenta el efecto
de disolvente, pues en las reacciones de óxido-reducción y en el cuerpo humano sabemos que el
medio puede también influir en el proceso, en este caso se considerará al agua. Sin embargo, los
resultados hasta ahora obtenidos en fase gas para la adrenalina neutra, protonada y algunas
especies asociadas al proceso de desprotonación, nos ha brindado un panorama general de cómo
se encuentra la adrenalina en los diferentes intervalos de pH y las posibles diferencias a nivel
electrónico de acuerdo a la especie formada.
4. CONCLUSIONES
Se realizó el estudio teórico de las propiedades electrónicas de la AD neutra, protonada y de
las especies propuestas durante el mecanismo de desprotonción. Se determino la existencia de
tres conformaciones mínimas a lo largo de PES, siendo la especie más extendida la de menor
energía con respecto a las otras dos para la AD neutra. La conformación de mínima energía fue
considerada para estudiar a las restantes especies. Al pH fisiológico la AD se encuentra protonada
y de acuerdo a los resultados obtenidos, la presencia del protón en la estructura de la AD protege
al grupo amino de posibles reacciones de óxido-reducción y más aún, ocurre una redistribución
electrónica, en la cual, el grupo catecol es el afectado en mayor proporción. Se encontraron los
siguientes ordenes de desprotonación en orden creciente de estabilización de las diferentes
especies propuestas por etapas, primera desprotonación: H3AD-I > H3AD-IV > H3AD-III >
H3AD-II. Segunda desprotonación: H2AD--III > H2AD-II > H2AD-I > H2AD--VI > H2AD--V >
H2AD-IV y para la segunda desprotonación, H2AD- -III > H2AD- -II > H2AD- -I > H2AD- -V.
tercera desprotonación: HAD2-III > HAD2-I > HAD2-II > HAD2-IV.
5. AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen a CONACYT el soporte financiero a través de los diferentes
proyectos 58541, 49775-Y (24658) y SEP-CONACYT (80361).
XXV CONGRESO DE LA SOCIEDAD MEXICANA DE ELECTROQUÍMICA
3RD MEETING OF THE MEXICAN SECTION ECS
141231 DE MAYO – 4 DE JUNIO, 2010
ZACATECAS, MÉXICO
6. REFERENCIAS
[1] C.A. Burtis, Tietz Texbook of Clinical Chemistry, Ashwood (Eds.), third ed. W. B. Sanders,
Philadelphia, 1998, pp. 15, 1572, (1998).
[2] S. Corona-Avendaño, G. Alarcón-Ángeles, M. T. Ramírez-Silva, M. Romero-Romo, Á.Cuán,
M. Palomar-Pardavé, J. Electrochemical Soc. 156. J375, (2009).
[3] S. Corona-Avendaño, G. Alarcón-Ángeles, A. Rojas-Hernández, M. A Romero-Romo, M. T.
Ramírez-Silva, Spectrochimica Acta, Part A. 61 305, (2005).
[4] M. J. Frish, et al. Gaussian 03, Revision B.3; Gaussian, Inc. Pittsburg, PA (2003).
[5] B. H. Besler, K.M. Jr Merz., and P.A. Kollman, J. Comp. Chem. 11, 431, (1990).
[5] a) A. D. Becke, J. Chem. Phys. 98, 5648, (1993). b) C. Lee, W. Yang, R. G. Parr, Phys. Rev.
B 37, 785, (1988).
[6] B.H. Besler, K.M. Jr. Merz, and P. A. Kollman, J, Comp. Chem. 11, 431, (1990).
[7] S. B. Mattehews, A. H. Henderson, and A. K. Campbell, J Mol Cell Cardiol, 17, 339, (1985).
[8] A. Bindoli, D.J. Deeble, L. Galzigna Biochimica et Biobhysica Acta, 1016, 431, (1990).