PRCTICA N 05CURVA DE CRECIMIENTO DEL VIRUS

I. INTRODUCCINPrcticamente la totalidad de las clulas procariotas (bacterias) pueden servir de husped a virus denominados bacterifagos o fagos. Como todos los virus, contienen un solo tipo de cido nucleico, que generalmente es DNA de doble hlice, aunque tambin existen fagos RNA. Casi todos los bacterifagos poseen una cpside polidrica que contiene el material gentico y en muchos casos una estructura helicoidal proteica denominada cola o tallo, que acta como rgano de adsorcin e inyeccin del material gentico a la bacteria. Los bacterifagos al penetrar en la bacteria husped se multiplican activamente, liberndose posteriormente al exterior mediante lisis bacteriana para infectar a otras bacterias (ciclo ltico). Algunos bacterifagos son capaces de una conducta alternativa; tras inyectar su genoma a la bacteria, ste no se replica sino que permanece en el citoplasma o integrado al genoma bacteriano, dividindose sincrnicamente con la bacteria.La formacin de las placas de lisis se ha descrito como el resultado de varios ciclos de crecimiento del fago (Idea DHrelle). La demostracin concurrente de que la progenie aparece abruptamente, una vez transcurrido cierto tiempo despus de la adsorcin de las partculas infecciosas, se debe a Ellis M.del Bruck en 1939.Debido a que las condiciones del experimento impiden la iniciacin a un nuevo ciclo, el titulo alcanzado, se mantiene por un largo tiempo. El lapso de tiempo inicial durante el cual el titulo se mantiene constante se denomina, periodo latente y el tiempo que me dio despus de la adsorcin y el momento de la lisis de las primeras clulas infectadas. La razn entre el ttulo y el titulo inicial de bacterias infectadas se denomina taza de eclosin, que corresponde al nmero promedio de fago producido por bacteria infectada.

II. OBJETIVOS

Determinar la curva de crecimiento de los bacterifagos. Calcular las relaciones porcentuales de crecimiento del bacterifago.

III. MATERIALMaterial biolgico Inculo viral. Cepa problema.Material y equipo de laboratorio Agar triptosa. Caldo triptosa. Agar agua 8 Placas estriles. Tubos de ensayo estriles (24 30 pequeos y 6 tubos grandes) Jeringas de tuberculina Gradilla Mechero

IV. PROCEDIMIENTOPreparacin de la cepa Sembrar la cepa problema en un tubo con grande con caldo nutritivo. Esto un da antes de realizar la prctica. El cultivo debe parecerse al tubo N 3 de Mac Farland.

Procedimiento de la curva de crecimiento Rotular cuatro grupos de seis tubos cada uno y agregar 2.7 mL de caldo triptosa. En un tubo colocar 2mL de fago a ttulo conocido y 2mL de cepa. Luego llevarlo a bao mara a 37C por 8 minutos.

Pasado el tiempo retirar el tubo y rotular con la letra A (absorbidos). Tomar 1 ml del contenido del tubo A y colocarlos en 2 mL de cloroformo. A este tubo rotular con las letras FNA (fago no absorbido).

Del tubo A coger 0.3mL y lo llevamos al primer tubo de la primera serie y procedemos a hacer diluciones (de 10-1 a 10-6).

De la ltima dilucin (10-6) tomar 0.1 mL y proceder a titular y llevar a la placa de este a estufa por 8 dentro del bao mara. Luego efectuar una dilucin ms (10-7) y titular (placa N 1) Enseguida llevar el tubo 10-6 nuevamente a estufa por 12, para luego realizar dos diluciones ms (10-7 y 10-8), de la dilucin 10-8, hacer una titulacin (placa N 2) Volver al tubo 10-6 llevar a bao Mara por espacio de 20. Transcurrido este tiempo hacer tres dilucin ms (10-7 -10-9) y titular la dilucin 10-8 y 10-9, a esta placa rotularle con FNP (fago de nueva produccin) Por otro lado del segundo grupo de tubos, colocar 1 mL de inculo viral y 0.5 mL de cloroformo. A este tubo rotular con las iniciales F.I. (Fago inoculado).

Tomar del tubo F. I. coger 0.3 mL diluir en la segunda de serie de tubos (de 10-1 a 10-6, estos tubos contienen 2.7 mL de caldo triptosa). De la ltima dilucin (10-6) tomar 0.1 mL y proceder a titular. A la placa de esta titulacin rotularle con las letras F.I. Tomar del tubo F.N.A 0.3 mL diluir en la tercera serie de tubos (de 10-1 a 10-6). De la ltima dilucin (10-6) tomar 0.1 mL y proceder a titular. A la placa de esta titulacin rotularle con las letras F.N.A. A las bacterias diluir (de 10-1 a 10-6). Y de la dilucin 10-6 titular y rotular a la placa con el nombre de CEPA.

TITULAMOS PARA CADA MUESTRA

V. RESULTADOS

FRMULAS

DESPUES DE INCUBAR

VI. CONCLUSIONES

No se obtuvieron los resultados esperados debido a errores al realizar la prctica ya que al momento de realizar el conteo de calvas no se pudo visualizar correctamente.

VII.REFERENCIAS Acton, J. 1967. Virologa. 1ra ed. Edit. Interamericana. Mexico Davis B. 1980. Tratado de Microbiologa. 2da ed. Edit. Salvat Editores S. A. Jawetz E., J. Melnick, E. Sdelberg. 1996. 15va ed. Edit. El Manual Moderno, S. A. de C. V. Mexico