CONTROL DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Se puede ejercer el control limitando el crecimiento microbiano Se puede ejercer el control limitando el crecimiento microbiano por un proceso de inhibiciónpor un proceso de inhibición

Efecto bacteriostático :Efecto bacteriostático : es aquel que aunque no produce la es aquel que aunque no produce la muerte microbiana impide su reproducción; la bacteria envejece muerte microbiana impide su reproducción; la bacteria envejece y muere sin dejar descendenciay muere sin dejar descendencia

O bien, destruyendo los organismos porO bien, destruyendo los organismos por esterilizaciónesterilización que es que es la muerte o eliminación de los microorganismos viables de un la muerte o eliminación de los microorganismos viables de un medio de cultivo o productomedio de cultivo o producto

Efecto bactericida:Efecto bactericida: es aquel que produce la muerte del es aquel que produce la muerte del microorganismo en forma irreversible microorganismo en forma irreversible

El método más extendido para controlar el crecimiento El método más extendido para controlar el crecimiento microbiano es el calentamiento y según su naturaleza podrá sermicrobiano es el calentamiento y según su naturaleza podrá ser porpor calor húmedocalor húmedo oo calor secocalor seco

La efectividadLa efectividad del calor como método de esterilización depende del calor como método de esterilización depende de: la de: la temperaturatemperatura y el y el tiempo de exposicióntiempo de exposición

AGENTES ESTERILIZANTESAGENTES ESTERILIZANTES

AGENTES FISICOSAGENTES FISICOS

AGENTES QUIMICOSAGENTES QUIMICOS

CALOR ( HUMEDO, SECO)

RADIACIONES ( UV)

ANTISÉPTICOS

DESINFECTANTESESTERILIZANTES

CINETICA DE LA ESTERILIZACIONCINETICA DE LA ESTERILIZACION La muerte por calentamiento es un La muerte por calentamiento es un función función

exponencial exponencial de primer orden y la tasa de muerte es de primer orden y la tasa de muerte es proporcional sólo a la concentración de proporcional sólo a la concentración de microorganismosmicroorganismos

El tiempo requerido para reducir a la décima parte la El tiempo requerido para reducir a la décima parte la densidad de la población microbiana a una densidad de la población microbiana a una determinada temperatura se llama determinada temperatura se llama tiempo de tiempo de reducción decimal reducción decimal (D), cuando el logaritmo de D se (D), cuando el logaritmo de D se representa frente a la temperatura se obtiene una representa frente a la temperatura se obtiene una línea rectalínea recta

El El tiempo de muerte térmica tiempo de muerte térmica es el tiempo en el que es el tiempo en el que mueren todas las células a una temperatura mueren todas las células a una temperatura determinadadeterminada

CONTROL DEL CRECIMIENTO MICROBIANO Las células vegetativas y las endosporas bacterianas de

un mismo organismo varían en cuanto a su resistencia al calor

Las endosporasendosporas en un autoclave a la temperatura de 121° C necesitan 4-5 minutos para reducirse a su décima parte

En cambio, las células vegetativascélulas vegetativas pueden necesitar sólo 0.1-0.5 minutos a 65 ° C para una reducción decimal

Las endosporas bacterianas son las estructuras más resistentes al calor que se conocen un factor importante en su resistencia al calor es la cantidad y el estado del agua dentro de la endospora

Durante la formación el protoplasma se reduce a un volumen mínimo como resultado de la acumulación de CaCa y ácido dipicolínicoácido dipicolínico que forman una estructura parecida a un gel formándose luego el grueso cortex que da como resultado un protoplasto encogido y deshidratado

No es la impermeabilidad de la corteza la que excluye el agua sino el material de tipo gel del protoplasto

CALOR HCALOR HUUMEDOMEDO El El calor húmedocalor húmedo produce desnaturalización y coagulación de produce desnaturalización y coagulación de

proteínas y sus efectos se deben:proteínas y sus efectos se deben: El agua es una especie muy reactiva y muchas estructuras El agua es una especie muy reactiva y muchas estructuras

biológicas (DNA, RNA, proteínas, etc) se forman por reacciones biológicas (DNA, RNA, proteínas, etc) se forman por reacciones que eliminan agua, las estructuras secundarias y terciarias de las que eliminan agua, las estructuras secundarias y terciarias de las proteínas se estabilizan mediante puentes de hidrógeno proteínas se estabilizan mediante puentes de hidrógeno intramoleculares que pueden ser reemplazados y rotos por el intramoleculares que pueden ser reemplazados y rotos por el agua a altas temperaturasagua a altas temperaturas

El El vapor de aguavapor de agua posee un coeficiente de trasferencia de calor posee un coeficiente de trasferencia de calor más elevado que el aire, los materiales húmedos conducen el más elevado que el aire, los materiales húmedos conducen el calor mucho más rápidamente que los materiales secoscalor mucho más rápidamente que los materiales secos

El El autoclaveautoclave es el aparato mas usado en los laboratorios para es el aparato mas usado en los laboratorios para esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua o no se alteren con temperaturas > a 100 °Cagua o no se alteren con temperaturas > a 100 °C

Es un aparato hermético que permite la entrada de vapor de Es un aparato hermético que permite la entrada de vapor de agua a presión, el agua se caliente a temperaturas por encima agua a presión, el agua se caliente a temperaturas por encima del punto de ebullición del agua, la más usada es del punto de ebullición del agua, la más usada es 121 °C121 °C a a 1 1 atmósfera de presiónatmósfera de presión durante durante 10 a 20 minutos10 a 20 minutos o 30 minutos o 30 minutos para materiales para decontaminación o material de vidriopara materiales para decontaminación o material de vidrio

CALOR HCALOR HUUMEDOMEDO

Ventajas:Ventajas: ofrece un rápido calentamiento y alto poder de ofrece un rápido calentamiento y alto poder de penetración, permite la destrucción de bacterias y esporas en penetración, permite la destrucción de bacterias y esporas en corto tiempo, no deja residuos tóxicos, hay un bajo deterioro de corto tiempo, no deja residuos tóxicos, hay un bajo deterioro de los materiales que son expuestos, es económicolos materiales que son expuestos, es económico

Desventajas:Desventajas: no permite esterilizar soluciones que formen no permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua y es corrosivo sobre ciertos emulsiones con el agua y es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicosinstrumentos metálicos

AUTOCLAVEAUTOCLAVE

CICLO DE ESTERILIZACIONCICLO DE ESTERILIZACION

CALOR SECOCALOR SECO El El calor secocalor seco produce desecación de la célula, efectos tóxicos produce desecación de la célula, efectos tóxicos

por altos niveles de electrolitos, procesos oxidativos en las por altos niveles de electrolitos, procesos oxidativos en las membranasmembranas

El aire es mal conductor del calor y el aire caliente penetra más El aire es mal conductor del calor y el aire caliente penetra más lentamente que el vapor en los materiales porosos, los puentes lentamente que el vapor en los materiales porosos, los puentes de las proteínas son más difíciles de romper por el calor seco de las proteínas son más difíciles de romper por el calor seco

La La estufa de esterilizaciónestufa de esterilización es el aparato usado y se necesita es el aparato usado y se necesita mayor temperatura y tiempo de exposición varía entre 140 a mayor temperatura y tiempo de exposición varía entre 140 a 160° C , 160° C , a 140° Ca 140° C se necesitan se necesitan 5 horas5 horas mientras que a mientras que a 160° 160° C 2 horasC 2 horas

Sirve para esterilizar material de vidrio, el algodón y papel no Sirve para esterilizar material de vidrio, el algodón y papel no puede ser esterilizado a más de 160puede ser esterilizado a más de 160 ° C° C

Ventajas:Ventajas: no es corrosivo para metales e instrumental y no es corrosivo para metales e instrumental y permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas y permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas y sustancias viscosas no volátilessustancias viscosas no volátiles

Desventajas:Desventajas: requiere mayor tiempo de esterilización que el requiere mayor tiempo de esterilización que el calor húmedo debido al menor poder de penetracióncalor húmedo debido al menor poder de penetración

CONTROL DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Pasteurización:Pasteurización: es un proceso que reduce las poblaciones microbianas de la leche y otros alimentos sensibles al calor

No es sinónimo de esterilización porque no mata todos los microorganismos

Se utilizó originalmente para matar patógenos causantes de la tuberculosis, fiebre tifoidea, brucelosis, fiebre Q

Hoy en día se utiliza porque alarga el período de almacenamiento

Métodos:Métodos: Pasteurización en flashPasteurización en flash: se pasa la leche por un tubo en contacto con la fuente de calor (71 ° C durante 15 segundos) y se enfría rápidamente. Altera menos el aroma y mata más eficazmente los microorganismos

Pasteurización en masaPasteurización en masa: la leche se calienta en grandes tanques a 63-66 ° C durante 30 minutos, siendo un proceso más lento y permaneciendo a altas temperaturas más tiempo

RADIACIONESRADIACIONES Su acción depende de: el tipo de radiación, tiempo de Su acción depende de: el tipo de radiación, tiempo de

exposición y de la dosisexposición y de la dosis Ionizantes:Ionizantes: es una radiación electromagnética con suficiente es una radiación electromagnética con suficiente

energía para producir iones y otras especies reactivas energía para producir iones y otras especies reactivas (electrones, radicales hidroxilo e hidruro) que alteran las bases (electrones, radicales hidroxilo e hidruro) que alteran las bases de los ácidos nucleicos, estructuras proteicas y lipídicas de los ácidos nucleicos, estructuras proteicas y lipídicas esenciales para la viabilidad del organismoesenciales para la viabilidad del organismo

El estándar para las aplicaciones biológicas es la dosis de El estándar para las aplicaciones biológicas es la dosis de radiación absorbida (rad o gray), la D10 o valor de la radiación absorbida (rad o gray), la D10 o valor de la reducción decimal ofrece una información semejante a la dada reducción decimal ofrece una información semejante a la dada para la esterilización por calor para la esterilización por calor

Usos: tiene gran penetrabilidad y se las usa para esterilizar Usos: tiene gran penetrabilidad y se las usa para esterilizar materiales termolábiles como jeringas descartables, sondas y materiales termolábiles como jeringas descartables, sondas y se usa a escala industrial por sus costosse usa a escala industrial por sus costos

No se las emplea para medios de cultivo o soluciones No se las emplea para medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen alteraciones en sus componentesproteicas porque producen alteraciones en sus componentes

RADIACIONESRADIACIONES

Ultravioleta:Ultravioleta: normalmente se considera entre 200 y 300 nm normalmente se considera entre 200 y 300 nm y actúa por otro mecanismoy actúa por otro mecanismo

La luz UV afecta a las moléculas de DNA de los La luz UV afecta a las moléculas de DNA de los microorganismos debido a que forman dímeros de pirimidinas microorganismos debido a que forman dímeros de pirimidinas conduciendo a errores en la copia del DNA y por lo tanto, la conduciendo a errores en la copia del DNA y por lo tanto, la pérdida de la viabilidad de la célulapérdida de la viabilidad de la célula

Esta luz casi visible es útil para desinfectar superficies, aire y Esta luz casi visible es útil para desinfectar superficies, aire y otros materiales como el agua que no absorben las ondas UVotros materiales como el agua que no absorben las ondas UV

Las campanas que usan en los laboratorios biológicos vienen Las campanas que usan en los laboratorios biológicos vienen equipadas con luz UV microbiocida para decontaminar las equipadas con luz UV microbiocida para decontaminar las superficies luego de su usosuperficies luego de su uso

La radicación UV no puede penetrar superficies sólidas opacas La radicación UV no puede penetrar superficies sólidas opacas que absorben la luz y por eso su utilidad se limita a la que absorben la luz y por eso su utilidad se limita a la desinfección de las superficies expuestasdesinfección de las superficies expuestas

AGENTES QUIMICOSAGENTES QUIMICOS La La efectividadefectividad de estos agentes depende de las condiciones de estos agentes depende de las condiciones

bajo las que actúan.bajo las que actúan. ConcentraciónConcentración: varía con el tipo de agente y del microorganismo: varía con el tipo de agente y del microorganismo TiempoTiempo: no todos los microorganismos mueren al mismo tiempo: no todos los microorganismos mueren al mismo tiempo pHpH: afecta tanto a los agente químicos como a los : afecta tanto a los agente químicos como a los

microorganismos, el pH determina el grado de disociación y la microorganismos, el pH determina el grado de disociación y la efectividad del agente químico, a menor disociación mayor efectividad del agente químico, a menor disociación mayor permeabilidad y mayor efectividadpermeabilidad y mayor efectividad

Esterilizante:Esterilizante: eliminación total en forma irreversible de todos eliminación total en forma irreversible de todos los MO presentes en un objeto o sustancialos MO presentes en un objeto o sustancia

Sanitizante:Sanitizante: agente que disminuye la carga microbiana total a agente que disminuye la carga microbiana total a un nivel inocuo para la salud, sólo aplicable a objetos inanimadosun nivel inocuo para la salud, sólo aplicable a objetos inanimados

Desinfectante:Desinfectante: agente que elimina la carga microbiana total en agente que elimina la carga microbiana total en superficies inanimadas tales como habitaciones, quirófanossuperficies inanimadas tales como habitaciones, quirófanos

Antiséptico:Antiséptico: agente que controla y reduce la presencia de MO agente que controla y reduce la presencia de MO potencialmente patógenos en los tejidos vivos como piel, potencialmente patógenos en los tejidos vivos como piel, mucosas, sólo puede aplicarse en forma externamucosas, sólo puede aplicarse en forma externa

ANTISEPTICOSANTISEPTICOS Sepsis: es la contaminación de tejido vivo

Alcoholes: lesionan la membrana celular de los microorganismos y desnaturalizan proteínas, desorganizan estructuras lipídicas. No destruyen esporas y tiene una acción germicida lenta. Se utilizan a concentraciones del 50 al 70%. Ejemplos: etanol y alcohol isopropílico (más activos los de cadena corta)

Yodo: agente oxidante de los grupos –SH a S-S de proteínas y ácidos nucleicos, ejemplos: se usa como desinfectante de piel la tintura de yodo al 2%, iodopovidona (pervinox), son efectivos contra esporas

Organo -Mercuriales : se unen a grupos –SH, inactivando a las proteínas inactivando enzimas. Ejemplos: thimerosal (merthiolate)

DESINFECTANTESDESINFECTANTES Cloro, los hipocloritos y las cloraminasCloro, los hipocloritos y las cloraminas: son desinfectantes : son desinfectantes

que actúan sobre proteínas y ácidos nucleicos de los que actúan sobre proteínas y ácidos nucleicos de los microorganismos, oxidando grupos –SH y grupos amino. El más microorganismos, oxidando grupos –SH y grupos amino. El más utilizado comercialmente es el hipoclorito de sodio (agua utilizado comercialmente es el hipoclorito de sodio (agua lavandina) en cc de 50-100 g/l de cloro activo a pH alcalino, en lavandina) en cc de 50-100 g/l de cloro activo a pH alcalino, en combinación con el agua se utilizan soluciones de 0.1 a 0.5 % combinación con el agua se utilizan soluciones de 0.1 a 0.5 % de cloro activo. Es bactericida y efectivo contra esporas. de cloro activo. Es bactericida y efectivo contra esporas.

La La actividad bactericidaactividad bactericida se debe al ácido hipocloroso (HCLO) se debe al ácido hipocloroso (HCLO) y al Cly al Cl22 que se forman cuando el hipoclorito es diluido en agua que se forman cuando el hipoclorito es diluido en agua al ser neutro penetra fácilmente en la célula al ser neutro penetra fácilmente en la célula

AldehídosAldehídos: son agentes alquilantes que modifican enzimas : son agentes alquilantes que modifican enzimas tienen acción desinfectante y esterilizante destruyen también a tienen acción desinfectante y esterilizante destruyen también a las esporas. Ejemplos: el formaldehído puede actuar en forma las esporas. Ejemplos: el formaldehído puede actuar en forma gaseosa se usa para decontaminar edificios, ambientes y/ o en gaseosa se usa para decontaminar edificios, ambientes y/ o en forma líquida como conservanteforma líquida como conservante

DESINFECTANTESDESINFECTANTES Compuestos fenólicosCompuestos fenólicos : provocan lesión en la membrana : provocan lesión en la membrana

citoplasmática porque desordenan la disposición de las citoplasmática porque desordenan la disposición de las proteínas y fosfolípidos provocando filtración de compuestos proteínas y fosfolípidos provocando filtración de compuestos celulares, inactivación de enzimas y finalmente lisis celular. No celulares, inactivación de enzimas y finalmente lisis celular. No es usado a menudo como desinfectante por su olor es usado a menudo como desinfectante por su olor desagradable , por ser irritante y por el residuo que deja luego desagradable , por ser irritante y por el residuo que deja luego de tratar las superficies. El derivado sintético del fenol más de tratar las superficies. El derivado sintético del fenol más utilizado es el Hexaclorofenol (Espadol) que es efectivo a muy utilizado es el Hexaclorofenol (Espadol) que es efectivo a muy bajas concentraciones. No destruye esporasbajas concentraciones. No destruye esporas

Oxido de etilenoOxido de etileno: es un agente alquilante que se une a : es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrógenos lábiles de grupos carboxilos, compuestos con hidrógenos lábiles de grupos carboxilos, amino, sulfhídricos, hidroxilos, etc. Es usado en la amino, sulfhídricos, hidroxilos, etc. Es usado en la esterilización gaseosa en la industria farmacéutica. Sirve para esterilización gaseosa en la industria farmacéutica. Sirve para esterilizar materiales de plástico termosensibles , equipos esterilizar materiales de plástico termosensibles , equipos electrónicos, bombas cardiorrespiratorias. Es muy peligroso electrónicos, bombas cardiorrespiratorias. Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo y además por ser altamente inflamable y explosivo y además cancerígenocancerígeno

CICLOS DE ESTERILIZACIONCICLOS DE ESTERILIZACION

Ciclo de 15´ a 121°C a 1.03 atm:Ciclo de 15´ a 121°C a 1.03 atm: Empleado para Empleado para medios de cultivo o soluciones. En caldos o medios medios de cultivo o soluciones. En caldos o medios lactosados para evitar la caramelización de los lactosados para evitar la caramelización de los mismos y la degradación de los azúcaresmismos y la degradación de los azúcares

Ciclo de 30´ a 121° C a 1 atm:Ciclo de 30´ a 121° C a 1 atm: Para frascos de Para frascos de toma de muestras, o bien para descontaminación de toma de muestras, o bien para descontaminación de material. material.

Ciclo de 3´a 99°C:Ciclo de 3´a 99°C: para agar ENDO LES (medio para agar ENDO LES (medio para para Coliformes totalesColiformes totales) autoclave especial para ) autoclave especial para medios de cultivo (autopreparador de medios de medios de cultivo (autopreparador de medios de cultivo)cultivo)

CONTROLES DE ESTERILIZACIONCONTROLES DE ESTERILIZACION Sirven para monitorear que el proceso de esterilización funcione Sirven para monitorear que el proceso de esterilización funcione

correctamente: correctamente:

Controles Físico-Químicos:Controles Físico-Químicos: se emplean tiras mezcladas con un se emplean tiras mezcladas con un colorante que tiene un punto de fusión similar a la temperatura de colorante que tiene un punto de fusión similar a la temperatura de esterilización , al fundir indica si se alcanzó la temperatura y esterilización , al fundir indica si se alcanzó la temperatura y tiempo de esterilización. Las termocupla son métodos directos que tiempo de esterilización. Las termocupla son métodos directos que registran la temperatura a la que se desarrolla la esterilizaciónregistran la temperatura a la que se desarrolla la esterilización

Controles Biológicos:Controles Biológicos: utiliza indicadores biológicos que son utiliza indicadores biológicos que son preparaciones estandarizadas de microorganismos (formadores de preparaciones estandarizadas de microorganismos (formadores de esporas) resistentes al proceso de esterilización que se emplea, y esporas) resistentes al proceso de esterilización que se emplea, y se procesan en forma conjunta con el material a esterilizar y su se procesan en forma conjunta con el material a esterilizar y su número es mayor que el que se encuentra en el material. número es mayor que el que se encuentra en el material.

Finalizado el ciclo se rompe la ampolla y entra en contacto con un Finalizado el ciclo se rompe la ampolla y entra en contacto con un medio de cultivo , se las incuba por 48hs a 57° C , luego se medio de cultivo , se las incuba por 48hs a 57° C , luego se observa si cambia de color o no la ampolla, si permanece azul sin observa si cambia de color o no la ampolla, si permanece azul sin crecimiento el proceso de esterilización fue correcto y si se vuelve crecimiento el proceso de esterilización fue correcto y si se vuelve rosa con crecimiento del MO indica que la esterilización fue rosa con crecimiento del MO indica que la esterilización fue incorrecta. En general se usan Microorganismos del género incorrecta. En general se usan Microorganismos del género BacillusBacillus especie especie stearotermophilus stearotermophilus

REGISTRO DE CONTROL DE REGISTRO DE CONTROL DE ESTERILIZACIONESTERILIZACION