NUEVO MARCADOR TUMORAL:

Zappa Santiago Andres.Zappa Santiago Andres.

Practicanato Profesional, Bioquímica.Practicanato Profesional, Bioquímica.

CLUSTERINCLUSTERIN

Importancia clínica de la determinación de Clusterin sérica como un biomarcador para Importancia clínica de la determinación de Clusterin sérica como un biomarcador para evaluar el diagnóstico y potencial metástasis de hepatocarcinoma relacionados a virusevaluar el diagnóstico y potencial metástasis de hepatocarcinoma relacionados a virus

¿Qué es Clusterin?¿Qué es Clusterin?Glicoproteína multifuncional altamente conservadaGlicoproteína multifuncional altamente conservada

presente en todos los tejidos y fluidos corporalespresente en todos los tejidos y fluidos corporales

TRANSPORTE DE LIPIDOS

REGULACIÓN DEL COMPLEMENTO

RESPUESTA AL ESTRES

REMODELADO TISULAR

APOPTOSIS

INTERACCIÓN CELULAR

TUMORIGENESIS

PROLIFERACIÓN CELULAR

CLUSTERINCLUSTERIN• Gen de copia única• Localizado en el Cromosoma 8 (p21-p12)• Expresión altamente regulada

• Causa agregación (clustering) de Globulos Rojos In Vitro• Anti-apoptotica y anti-proliferativa• Diversas isoformas con funciones opuestas

Schematic representation of the structure of human clusterin.

The precursor polypeptide chain (top) is cleaved proteolytically toremove the 22-mer secretory signal peptide (magenta) and subsequently

between residues 227/228 to generate the (orange)- and (light blue)-chains. These are assembled in anti-parallel to give a heterodimeric

molecule (bottom) in which the cysteine-rich centers (red) are linked by five disulfide bridges (red ellipses) and are flanked by two predicted

coiled-coil -helices (green) and three predicted amphipathic-helices (dark blue). The six sites of N-linked glycosylation are indicated as yellow spots.

El rol de Clusterin en el cáncer

• Aún no se conoce completamente su acción fisiopatológica

Niveles aumentadosNiveles aumentados

•Cáncer de pulmón

•Cáncer de colon

•Cáncer de mama

•Cáncer de vejiga

•Cáncer de hígado

Niveles disminuídosNiveles disminuídos

•Cáncer de piel (no-melanoma)

•Cáncer de esófago

•Cáncer de prostata

HEPATOCARCINOMAHEPATOCARCINOMA• Sexto tipo de cáncer más común a nivel Mundial• Incidencia mundial: 5.9%• Mortalidad mundial: 9.2%.• Incidencia en Argentina: 1.8%• Mortalidad en Argentina: 3.0%

• Mayor prevalencia en adultos mayores de 40 años

• Principales causas:• Hepatitis B

• Hepatitis C

• Alcoholismo90% de los casos

(Globocan, 2008)

HEPATOCARCINOMAHEPATOCARCINOMA• Generalmente asintomático en los estadíos iniciales.

• A medida que el tumor va creciendo:• Fiebre• Pérdida progresiva de peso• Pérdida del apetito• Debilidad y cansancio• Dificultades con la digestión, vómitos.

• En pacientes con Cirrosis - La descompensación o el deterioro clínico pueden ser la forma de manifestar un HCC:

• Encefalopatía• Ascitis• Ictericia• Hemorragia digestiva

S C R E E N I N GS C R E E N I N GEcografía

+

Serología alfa-fetoproteína

D I A G N Ó S T I C OD I A G N Ó S T I C ORadiología

Tomografía computarizadaImágenes (resonancia magnética)

BiopsiaSerología alfa-fetoproteína

Clusterin como biomarcadorClusterin como biomarcador

• Grupo 1Grupo 1 Hepatocarcinoma (n=80)• Estadío I (n=40)

• Estadío II (n=10)

• Estadío III (n=18)

• Estadío IV (n=12)

• Grupo 2Grupo 2 Cirrosis de origen viral (n=30)

• Grupo 3Grupo 3 Hepatitis crónica viral (n=30)

• Grupo 4Grupo 4 Control (n=30)

Sistema TNM

Según American Joint Committee on Cancer

Muestra: sueroMuestra: suero

Determinaciones:

TGP

TGO

Albúmina

FAL

Bilirrubina

Creatinina

Alfa-fetoproteína

HBsAg

Anti-HCV

Métodos Métodos enzimáticos de enzimáticos de

rutinarutina

ELISAELISA

Determinación de la concentración Determinación de la concentración de Clusterinde Clusterin

ELISA SandwichELISA Sandwich SUSTRATO

PRODUCTO

Estreptavidina unida a peroxidasa

Ac. Monoclonal anti-clusterin biotinilado

CLUSTERIN

Ac. Monoclonal anti-clusterin

RESULTADOSRESULTADOS

ParámetrosParámetros ControlControl Hepatitis Hepatitis CrónicaCrónica CirrosisCirrosis HCCHCC

HCVHCV - 27 (90%) 25 (83%) 64 (80%)

HBVHBV - 2 (7%) 3 (10%) 12 (15%)

HCV+HBVHCV+HBV - 1 (3%) 2 (7%) 4 (5%)

TGOTGO (U/L) 24.9 ± 6.6 75.2 ± 24.5 69.2 ± 19.5 73.2 ± 23.5

TGPTGP (U/L) 26.4 ± 7.8 70.5 ± 22.5 68.6 ± 17.5 71.1 ± 21.5

FALFAL (U/L) 45.1 ± 8.1 73.1 ± 11.3 133.2 ± 34.2 300.3 ± 20.3

AlbúminaAlbúmina (g/L) 4.5 ± 1.1 4.1 ± 1.4 3.4 ± 1.3 3.5 ± 1.1

BilirrubinaBilirrubina (mg/dL) 1.0 ± 0.3 1.2 ± 0.4 1.9 ± 0.5 2.5 ± 0.8

CreatininaCreatinina (mg/dL) 0.80 ± 0.20 0.90 ± 0.27 1.00 ± 0.45 1.10 ± 0.34

Clusterin vs. Clusterin vs. α-FPNα-FPN

GRUPOGRUPOClusterin sérica

(µg/mL)

Media ± DS

α-FPN sérica

(ng/mL)

Media (rango)

HCCHCC 198.5 ± 55.8 209 (10-570)

CIRROSISCIRROSIS 44.5 ± 7.1 35 (4-210)

H. CRÓNICAH. CRÓNICA 117.0 ± 18.8 10 (1.7-135.1)

CONTROLCONTROL 109.0 ± 18.3 2.3 (1.5-5.1)

(p<0.001) (p<0.001)

(0 ug/mL) (280 ug/mL)

CIRROSIS

NORMAL

H. CRÓNICA HCC

CLUSTERINCLUSTERIN

(0 ng/mL) (200 ng/mL)

NORMAL

H. CRÓNICA

CIRROSIS

HCC

α-FPNα-FPN

SensibilidadSensibilidad

ClínicaClínica

EspecificidadEspecificidad

ClínicaClínicaVPPVPP VPNVPN

ClusterinClusterin(128 (128 µg/mLµg/mL))

90% 87% 87.8% 89.7%

α-FPNα-FPN(100 ng/mL)(100 ng/mL)

75% 80% 76.9% 78.2%

En ArgentinaEn Argentina Prevalencia = 0.8%Prevalencia = 0.8%

VPP (Bayes)VPP (Bayes) = Prev x Sc

(Prev x Sc) + (1 – Prev) x (1 – Ec)VPP = 5%

(α-FPN = 3%)

VPN (Bayes)VPN (Bayes) = (1 – Prev) x Ec

(1 – Prev x Ec) + Prev x (1 – Sc)VPN = 87%

(α-FPN 79%)

Parámetros ClusterinClusterin α-FPNα-FPN

A mayor tamaño del nódulo No varía ↑↑

A mayor Nº de nódulos No varía ↑↑

Con infiltración capsular ↑↑ No varía

Con invasión de la vena portal ↑↑ No varía

Con metástasis en ganglios linfáticos ↑↑ No varía

A mayor grado de indiferenciación ↑↑ No varía

Clusterin vs. Clusterin vs. α-FPNα-FPN

CONCLUSIONESCONCLUSIONES

• Los niveles séricos de Clusterin están significativamente elevados en pacientes con Hepatocarcinoma

• Los niveles de Clusterin están significativamente disminuídos en pacientes con Cirrosis

Permitiría diferenciar entre Cirrosis y Hepatocarcinoma

CONCLUSIONESCONCLUSIONES

• Los niveles de Clusterin no varían con el Número de nódulos ni con el tamaño de los nódulos

Serviría para detectar nódulos muy pequeños en donde la α-FPN no estaría

significativamente aumentada

permite distinguir de una cirrosis

CONCLUSIONESCONCLUSIONES

• Clusterin tiene un VPN elevado

Podría ser utilizada como una determinación para el screening de HCC, especialmente en pacientes con

Cirrosis

• Clusterin sería un mejor Marcador tumoral que la α-Fetoproteína

PUEDO USAR UN MÉTODO

MENOS SENSIBLE

CON MAYOR LÍMITE DE DETECCIÓN

CONCLUSIONESCONCLUSIONES• Clusterin está sobreexpresada en

pacientes con infiltración capsular, invasión de la vena portal, infiltración de ganglios y tumores más indiferenciados

Elevado valor

PRONOSTICOPRONOSTICO

Sería un mejor marcador para el seguimiento

Permitiría saber en qué estadío de la patología se encuentra el paciente

Pacientes con cirrosis hepática serían la población ideal para la

vigilancia-screening de HCC

Al poder diferenciardiferenciar entre Hepatocarcinoma y cirrosis hepática, la probabilidad de supervivenciasupervivencia de los

pacientes con HCC aumentaría significativamente

BibliografíaBibliografía• Nafee M, Pasha H, Abd S, Mostafa N. Clinical significance of serum clusterin as a biomarker for evaluating

diagnosis and metastasis potential of viral-related hepatocelular carcinoma. Clinical Biochimestry 45 (2012) 1070-1074.

• Wang Y, Liu YH, Mai SJ, He LJ, Liao YJ, Deng HX. Evaluation of serum clusterin as a surveillance tool for human hepatocellular carcinoma with hepatitis B virus related cirrhosis. J Gastroenterol Hepatol 2010:1123–8.

• Collier J, Sherman M. Screening for hepatocellular carcinoma. Hepatology 1998; 27: 273–8.• Jones SE, Jomary C. Clusterin. Int J Biochem Cell Biol 2002;34:427–43.• Kang YK, Hong SW, Lee H, Kim WH. Overexpression of clusterin in human hepatocellular carcinoma. Hum

Pathol 2004;35:1340–6.• 1 Yuen MF, Lai CL. Serological markers of liver cancer. Best Pract. Res. Clin. Gastroenterol. 2005; 19: 91–9.• Zhou W, Park I. A novel anti-proliferative property of clusterin in prostate cancer cells. Life Sciences 72 (2002) 11-

21.• Sherman M. Alphafetoprotein: an obituary. J. Hepatol. 2001; 34: 603–5.

• Sellés Juana. Marcadores tumorales. Cátedra de Bioquímica Clínica II, Universidad Nacional del Sur, Argentina.• Fundación Argentina Cáncer de Hígado. http://cancerdehigado.org.ar/index.html • American Association for the study of Liver diseases practice guideline. Management of hepatocellular

carcinoma: an update. 2012.• GLOBOCAN 2008. Agencia internacional para la investigación del cáncer. OMS.

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