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CARACTERÍSTICAS DEL USO DE PLASMA COMO REACTIVO
La inducción de depósitos de C5b9 se inhibe mediante:
Marta Palomo1,2, Miquel Blasco3, Patricia Molina2, Ginés Escolar2, Josep M Campistol3, Maribel Diaz-Ricart2
1 Instituto de Investigación de la leucemia Josep Carreras, Servicio de Hemoterapia-Hemostasia, Hospital Clínico / Universidad de Barcelona Campus2 Servicio de Hemoterapia-Hemostasia, Instituto de Investigaciones Biomédicas August Pi i Sunyer (IDIBAPS), Hospital Clínico, Universidad de Barcelona, España.
3 Servicio de Nefrología y trasplante renal, Hospital Clínico, Universidad de Barcelona, España.
INDUCCIÓN EX VIVO DE DEPÓSITOS DE C5B9 SOBRE CÉLULAS ENDOTELIALES
COMO TÉCNICA PARA LA EVALUACIÓN DE LA ACTIVACIÓN DEL SISTEMA DEL
COMPLEMENTO Y MONITORIZACIÓN DEL TRATAMIENTO CON ECULIZUMAB EN EL
SHUa
INTRODUCCIÓN
El Síndrome Hemolítico Urémico atípico (SHUa) es una enfermedad
ultrarrara, de naturaleza sistémica y elevada morbi-mortalidad asociada.
Esta patología está causada por una pérdida de regulación de la vía
alternativa del complemento que conduce a la formación del complejo de
ataque a la membrana (C5b9) y la lisis celular del endotelio1.
En los años 80 se inició su tratamiento con terapia plasmática y en el año
2011 se aprobó el eculizumab, un fármaco que bloquea la fase final del
complemento2.
Pese a que este último tratamiento ha supuesto un cambio en la historia
natural del SHUa, en la actualidad no existen marcadores que sirvan para
detectar aquellos pacientes que puedan estar sobre- o infra-tratados.
OBJETIVOS
Desarrollar una nueva técnica ex vivo para medir la fase final
de la activación del sistema complemento en el plasma de
pacientes con SHUa, sobre células endoteliales (CE).
SETH - MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO Y MARCADORES
COMPARACIÓN CON LA TÉCNICA DE NORIS et al. 3 APLICACIÓN DIAGNÓSTICA Y VALORACIÓN DEL TRATAMIENTO
Control P1 Debut P1 Post Ecu
SU
ER
OP
LA
SM
A
La exposición de CE a suero y plasma depacientes con SHUa resulta en un aumentode los depósitos de C5b9.
Los depósitos de C5b9 disminuyen tras eltratamiento con eculizumab.
El plasma como reactivo produce unosresultados mucho más concluyentes,reproducibles y objetivos que el suero.
Control P2 Debut P2 Post RP P2 Post Ecu
RESULTADOS
VALIDACIÓN PARA LA MONITORIZACCIÓN DEL TRATAMIENTO
0
1
2
3
4
5
6
P1 P2 P3
CONCLUSIONES
C5b
9
Contacto: Marta Palomo mpalomo@carrerasresearch.org
MATERIAL Y MÉTODOS
INDUCCIÓN EX VIVO DE DEPÓSITOS DE C5B9 SOBRE CE
C5
b9
Fib
rin
a
DA
PI
Ov
erl
ay
Los resultados obtenidos apuntan a que esta técnica podría
consolidarse como una herramienta asistencial tanto para
determinar cuándo es necesario el tratamiento con
eculizumab, como para ajustar la dosis del fármaco y sus
intervalos de administración.
0
0,5
1
1,5
2
2,5
P4 P5 P6 P7 P8 P9
REFERENCIAS
HMEC-1 activadas con ADP
SUERO
Paciente
(4h 37ºC)
PLASMA
Paciente
+
SUERO
Control
C5b
9D
AP
I
PFA 3%
Anticuerpo primario (C5b9)
Anticuerpo secundario (Alexa 590)
DAPI
DA
PI
Control + eculizumab
C5
b9
0
0,5
1
1,5
2
2,5
Control SHUadebut
SHUa enremisión
Fo
ld in
cre
ase
C5b9
C5b9
C5b9
Fo
ld in
cre
ase
Fo
ld in
cre
ase
*
* *
*
*
*#
Suero Plasma
Debut RP Remisión
Los depósitos de C5b9 co-localizan con las fibras de fibrina
• Eculizumab
• Heparina litio
• Quelantes de calcio
1. Loirat C. et al. Management of hemolytic uremic syndrome. Presse Med. 2012; 41:e115-35. 2. Rother RP et al. Discovery and development of the complement inhibitor eculizumab for the treatment of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Nat Biotechnol. 2007;25:1256-64. 3. Noris M et al. Dynamics of complement activation in aHUS and how to monitor eculizumab in therapy. Blood. 2014:124:1715-26
0
0,4
0,8
1,2
Debut Post-RP Post Ecu
Hb [120-170 g/L] 74 ± 26 68 126 ± 10
Plq [130-400 x109] 77 ± 35 248 198 ± 13
LDH [250-450 U/L] 2389 ± 948 460 364 ± 88
Hapto [0.320-1 U/L] 0.019 ± 0.018 0.664 1.12 ± 0.18
Esquistocitos 10 ± 5 3 - 4 0
Media ± DS de los parámetros de hemólisis de los tres
pacientes con SHUa incluídos en el estudio.
Los parámetros de hemólisis eran negativos en 5 de
los 6 pacientes tratados con eculizumab. P9
presentaba hemólisis activa, proteinuria y pérdida
progresiva de función renal. (*, p<0.05 vs. Control)
459--PMarta Palomo de Udaeta DOI: 10.3252/pso.es.58SEHH.2016
SETH - MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO Y MARCADORES
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