aislamiento de dna

Integrantes:

Gutiérrez Ostos EuniceLedesma Angeles NallelyQuezada Rodríguez Elsa HerminiaRodríguez Rodríguez Angelica

Los ácidos nucleicos son sustancias que como su nombre lo indica, fueron aisladas en el núcleo celular, pero sean encontrado ácidos nucleicos en citoplasma así como en mitocondrias y en cloroplastos.

El Aislamiento del ADN es el principio de muchos métodos de:

Ingeniería genética

Medicina forense Bioinformática Nanotecnología de ADN Historia y antropología

Transformación Secuenciación Mapeo físico Mutagénesis

Donde se intenta realizar un proceso que retrase la separación.

Una mezcla uniforme de las sustancias con similares fases.

La lisis celular es la rotura de la membrana celular

MÉTODOS FÍSICOS

MÉTODOS QUÍMICOS

•Tratamiento con alcalis•Tratamiento con lisozima + EDTA•Empleo de detergentes

•Sonicación•Choque osmótico•Congelación/descongelación•Homogeneización con abrasivos•Cizalla liquida•Cizalla solida

La proteólisis es la

degradación de proteínas ya

sea mediante enzimas

específicas, llamadas

proteasas , o por medio de

digestión intramolecular , que

catalizan la ruptura de sólo

una o de pocas uniones

peptídicas.

Se utilizan enzimas proteolíticas como la pronasa, la

cual es activa contra un amplio espectro de proteínas

naturales. La pronasa se debe auto digerir a 37C por lo

menos una hora antes de utilizarla

Una vez concluida la digestión con

proteasa, se realiza una digestión

de Rnasa para eliminar la

presencia de RNA.

Se eliminan las proteínas de la muestra utilizando solventes orgánicos como el fenol.

El fenol utilizado en la extracción de las

proteínas debe ser bidestilado o ultra

puro , y se utiliza a una relación 1:1

volumen por volumen con la muestra que

se pretende limpiar.

Generalmente se

recomienda realizar 1

extracción con fenol seguida

de 1 extracción de

fenol:cloroformo (1:1), y por

lo ultimo una ultima

extracción con cloroformo

para limpiar toda traza de

fenol.

Para poder concentrar el ADN después

de la eliminación de las proteínas, se

utiliza una serie de sales entre las que

se encuentra el acetato de sodio,

acetato de potasio acetato de amonio y

cloruro de litio entre las mas usadas .

Una vez que el ADN ha estado en

contacto con los cationes seleccionados

se precipita con 2 volumenes de etanol

absoluto o 1 volumen de isopropanol

bajo las siguientes condiciones :mayor a

2 h a 20 centígrados de 15 a 30 min a

menos 70 centígrados, o 10 o 15 min en

hielo seco con etanol.

Se re suspende en un Tapon que puede ser de tris-EDTA

El EDTA ayuda al agotamiento de iones que se

utiliza comúnmente para inactivar enzimas

dependientes de metal que podrían dañar el

ADN o las proteínas