aislamiento de dna
TRANSCRIPT
Integrantes:
Gutiérrez Ostos EuniceLedesma Angeles NallelyQuezada Rodríguez Elsa HerminiaRodríguez Rodríguez Angelica
Los ácidos nucleicos son sustancias que como su nombre lo indica, fueron aisladas en el núcleo celular, pero sean encontrado ácidos nucleicos en citoplasma así como en mitocondrias y en cloroplastos.
El Aislamiento del ADN es el principio de muchos métodos de:
Ingeniería genética
Medicina forense Bioinformática Nanotecnología de ADN Historia y antropología
Transformación Secuenciación Mapeo físico Mutagénesis
Donde se intenta realizar un proceso que retrase la separación.
Una mezcla uniforme de las sustancias con similares fases.
La lisis celular es la rotura de la membrana celular
MÉTODOS FÍSICOS
MÉTODOS QUÍMICOS
•Tratamiento con alcalis•Tratamiento con lisozima + EDTA•Empleo de detergentes
•Sonicación•Choque osmótico•Congelación/descongelación•Homogeneización con abrasivos•Cizalla liquida•Cizalla solida
La proteólisis es la
degradación de proteínas ya
sea mediante enzimas
específicas, llamadas
proteasas , o por medio de
digestión intramolecular , que
catalizan la ruptura de sólo
una o de pocas uniones
peptídicas.
Se utilizan enzimas proteolíticas como la pronasa, la
cual es activa contra un amplio espectro de proteínas
naturales. La pronasa se debe auto digerir a 37C por lo
menos una hora antes de utilizarla
Una vez concluida la digestión con
proteasa, se realiza una digestión
de Rnasa para eliminar la
presencia de RNA.
Se eliminan las proteínas de la muestra utilizando solventes orgánicos como el fenol.
El fenol utilizado en la extracción de las
proteínas debe ser bidestilado o ultra
puro , y se utiliza a una relación 1:1
volumen por volumen con la muestra que
se pretende limpiar.
Generalmente se
recomienda realizar 1
extracción con fenol seguida
de 1 extracción de
fenol:cloroformo (1:1), y por
lo ultimo una ultima
extracción con cloroformo
para limpiar toda traza de
fenol.
Para poder concentrar el ADN después
de la eliminación de las proteínas, se
utiliza una serie de sales entre las que
se encuentra el acetato de sodio,
acetato de potasio acetato de amonio y
cloruro de litio entre las mas usadas .
Una vez que el ADN ha estado en
contacto con los cationes seleccionados
se precipita con 2 volumenes de etanol
absoluto o 1 volumen de isopropanol
bajo las siguientes condiciones :mayor a
2 h a 20 centígrados de 15 a 30 min a
menos 70 centígrados, o 10 o 15 min en
hielo seco con etanol.
Se re suspende en un Tapon que puede ser de tris-EDTA
El EDTA ayuda al agotamiento de iones que se
utiliza comúnmente para inactivar enzimas
dependientes de metal que podrían dañar el
ADN o las proteínas