ACTIVIDAD ANTIVIRAL DE ENGYSTOL: UN ANALISIS IN VITRO

Urías Hernández, Linda Rios, Amilkar Rodríguez

INTRODUCCION

Influenza VRS Rinovir

us

Tratamiento

Amandatina

Inh de la neuraminid

asaAnálogos

de nucleosido

sEngystol ®

INTRODUCCION

OBJETIVO: Estudiar los efectos de la preparación homeopática Engystol® en un panel de virus

patógenos humanos in vitro.

INTRODUCCION

Presentación: Comprimidos y solución inyectable.

Ingredientes activos: Vincetoxicum hirundinaria y azufre.

Otros estudios: asociado con estimulación del sistema inmunitario en términos de la actividad fagocítica, la función de granulocitos, y una mejor respuesta humoral. Sin embargo, todavía no está claro si estos efectos son mediada por las propiedades inmunoestimulantes de Engystol o si Engystol por sí mismo tiene actividad antiviral directa.

Presente estudio investigo una actividad antiviral de engystol en

un panel de virus patógenos humanos

ARN Y ADN

Rinovirus, influenza A, VRS, Herpes simple tipo 1,

adenovirus

Estimulación potencial

de la actividad antiviral

celular por inducción

del sistema de

interferón por

Engystol.

ENGYSTOL ®

MATERIALES Y METODOSSustancia de ensayo • Formulaciones comercialmente disponibles de

Engystol®• Se suministran de forma gratuita por el fabricante

como ampollas estériles

Fármacos de referencia • Aciclovir, ribavirina, y clorhidrato de amantadina

fueron utilizados como controles positivos.

Células y virus • Rinovirus humano se obtuvo del instituto de virología

de la universidad de Friedrich Schiller de Jena, Alemania

• VSR, Influenza, H1N1, VHS, Adenovirus se obtuvieron del instituto de higiene de la Universidad de Tubingen Alemania

MATERIALES Y METODOS

Ensayos del virusInmunoensa

yos

Ensayo de placa

Titulaciones del virus

Ensayo de citotoxicid

adInvitro: ensayo

enzimático

Microscopio: cultivos celulares

Ensayos para

actividad antiviralReducción de placas

Cultivo celulares

MATERIALES Y METODOSDeterminación de la infectividad de los virus recién sintetizado Controles Elisa y titulaciones del

virus para dosis infecciosa en cultivo: Cuando las dosis de infección fueron demasiado alta para permitir la evaluación de los títulos de virus mediante ensayo de reducción de placa

1. Control de células2. Control del virus

¿EN RESUMEN?Preparación homeopática• Vincetoxicum hirundinaria • AzufreMenos EA y eficaz en el Tto de infecciones virales y respiratorias.

¿¿Estimulación la actividad fagocítica, la

función de granulocitos, y una

mejor respuesta humoral VS antiviral??

• RVH• V. influenza A• VSR• Adenovirus 5• VHS 1

Panel de VH patógenos: ARN y ADN con y sin

envoltura.

¿EN RESUMEN?HEPVSR

Adenovirus 5VHS 1

HeLa

RVH

Células Canine Kidney Madin Darby

V. influenza A

CITOTOXICIDAD

• Ensayo enzimático

• Microscopio: Cultivos

ANTIVIRAL• Reducción

de placa.• Casos y

controles

TITULACIÓN DE VIRUS• Ensayos de

placa• ELISA• TCID 50

LA CUANTIFICACIÓN DE INTERFERÓN DE TIPO I EN EL

CULTIVO CELULAR DE CÉLULAS TRATADAS CON

ENGYSTOL.

Engystol se añadió en un sistema libre de células en diluciones de 1: 2, 1: 4, 1: 8, 1:16, 1:32, 1:64, 1: 640, y 1: 6,400 a un alto título de adenovirus suspensión durante 120 minutos a 34 ° C y 5% de CO2.

Engystol se añadió en diluciones de 1: 2, 1: 4, 1: 8, 1:16, 1:32, y 1: 320 a las células sensibles de virus.

ANÁLISIS DE LA INFLUENCIA ANTIVIRAL

DIRECTA DE ENGYSTOL EN ADENOVIRUS.

RESULTADOS Citotoxicidad de HEP y células MDCK fue baja. No hubo citotoxicidad con Engystol, ya sea en ensayos de MTT o en

exámenes microscópicos a una dilución de 1: 2 para las células HEP y dilución de 1: 4 para las células MDCK.

Morfología celular: HEP y MDCK no se vio afectada por el tratamiento. Células HeLa tratadas con las sustancias de ensayo diluidas mostraron

viabilidad similar a los controles no tratados.

RESULTADOS Reducción de placa 22%: HRV 14 Alta concentración de Engystol reducción de 37% en placas de VSR. No hubo efecto de Engystol en virus de influenza A, ni en el ensayo de

reducción de placas, ni en el ensayo de titulación de punto final

RESULTADOS Adenovirus Ensayo de placa Inhibición del 73% de las proteínas

adenovirales TCID50: Disminución del 57% en la infectividad de la

descendencia de adenovirus.

HSV-1 Ensayo de placa: Dilución de 1: 2 se asoció con una

reducción del 80% en las proteínas virales. Dilución de 1:16: Reducción de 28%.

TCID50: La dilución más baja de Engystol condujo a una inhibición de 64% y una dilución de 1:16 dio lugar a una reducción de 20%

DISCUSIÓN Se indica actividad antiviral específica dosis-

dependiente de Engystol, evaluada por ensayos de reducción de placa y análisis de infectividad.

Inhibición ~80%

Adenovirus

Virus herpes simple-1

MAYORES EFECTOS

Inhibición 20-30%

Virus sincitial respiratorio

A ALTAS CONCENTRACIONES

EXPLICACIONES ALTERNATIVASUna posible heterogeneidad entre las preparaciones (un riesgo con los preparados homeopáticos y herbales)

Una dosis muy baja de virus en los ensayosUna interacción directa de Engystol con ADN-virusUn efecto antiviral indirecto de Engystol por inducción del sistema antiviral celular de Interferón

DISCUSIÓNLos resultados fueron muy similares con dos lotes diferentes de Engystol, lo que indica la homogeneidad entre las preparaciones. Los diferentes títulos de virus mostraron resultados similares para los ensayos de punto final de titulación, y en ELISA, lo que indica que el efecto no es dependiente de la dosis de virus.La preincubación de adenovirus con Engystol produjo una inhibición de la proteína de la cápside en ELISA, sin reducir infectividad del virus.

Se necesita un análisis detallado para aclarar la naturaleza de los cambios en la cápside por el agente homeopático.

DISCUSIÓNEs una cuestión abierta en qué medida los efectos antivirales

directos observados pueden ser responsables de los beneficios

clínicos. Las concentraciones de los

componentes activos de Engystol en los experimentos actuales no son directamente comparables

con los del agente usado clínicamente.

¿El grado de inhibición observado es suficiente para

dar cuenta de los efectos clínicos de la infección viral?

CONCLUSIÓNSi se puede demostrar de manera concluyente que Engystol, tiene

efectos antivirales, esto sería una adición bienvenida a las opciones de

tratamiento para las infecciones virales.Este trabajo apoya un efecto directo

del agente homeopático Engystol en una variedad de virus humanos,

evaluado en ensayos específicos. Se necesita más trabajo para

establecer una explicación de los efectos a nivel molecular y evaluar la relevancia de los resultados in vitro

en la práctica clínica.