9 genotecas-1
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GENOTECAS
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Genotecas
Colección de Genes ADN cADN
Tipos Genómica Expresión
Vectores Bacteriofagos Plasmidos
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Ciclo de Vida de Lambda
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Fago Lambda
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Ensamblaje del Fago Lambda
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Plasmidos
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Genoteca de Expresión
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Genoteca de Expresión
Purificar mARN maduro (Cromatografia de Afinidad) Sintesis de la Primera Cadena de ADN
Primer oligo dT y Transcriptasa Reversa Sintesis de la Segunda Cadena de ADN
Degradación ARN (Alcali o Enzima) Adicion de poliG Adicion primer poliC ADN polimerasa
Proteger con EcoRI metilasa Adicionar EcoRI linkers (ligadores) Cortar con EcoRI
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Purificar mARN
Cromatografía de Afinidad
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Síntesis de la Primera Cadena ADN
Primer Oligo dT y Transcriptasa Reversa
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Síntesis de la Segunda Cadena de ADN
Degaradación ARN - Adición poliG - Adición del Primer poliC
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Síntesis de la Segunda Cadena de ADN
DNA Polimerasa y Metilación
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EcoRI Linkers
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Clivaje con EcoRI
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Enzimas de Restricción
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Enzimas de Restricción
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Enzimas de Restricción
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Corte y Ligación
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Ligación a Lambda y Empaquetamiento in vitro
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Ligación a Brazos de Lambda
Fosfatasa Alcalina
Brazos de Lambda
Ligasa
cADN
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Ligación cADN con brazos de lambda gt11.
Promotor lac
5’ 3’B-Galactosidasa
EcoRI
Digestión con EcoRI
Proteína Fusión
EcoRI
EcoRI
cDNA
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Empaquetamiento in-vitro Infección a E. coli
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Síntesis del cADN
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Corte y Ligación
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Infección a E. coli
Tubo que
contiene
fagos y la
bacteria E. coli
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Infección a E. coli
Siembra en Agar LB
IPTG + X-gal
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Infección a E. coli
Incubación
A 37 °C.
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Lambda gt11
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Cuestionario
Que es una genoteca de expresión? Por que el material de partida debe ser mARN? Como se sintetiza el cADN:
La primera cadena? La segunda cadena? Que se usa como polimerasa y como primer en cada
reacción de síntesis Además de polimerasa y primer que otras sustancias
cree Ud deben estar en los tubos donde se realizan las síntesis?
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Cuestionario
Para que se metila?
Que son los linkers?
Por que se digieren con EcoRI?
Que es un empaquetamiento in vitro?
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Clonación en un Vector Plasmídico
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Plásmidos en el Extracto Celular
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Plasmidos en el Extracto Celular
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Características de un Plásmido
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Sitio de Restricción
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Corte Enzimático
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Plásmidos Cortados
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Introducción de los Fragmentos
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Inserción del Fragmento de ADN
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Ligación
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Ligación
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ADN Recombinante
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Plásmidos Recombinantes
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Transformación
Tubo que
contiene
Plásmidos y la
Bacteria E. coli
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Transformación
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Algunas Células Incorporan un Plásmido
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Selección
Siembra en
LB-Agar más
Ampicilina
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Siembra
Siembra en Caja
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Incubación
Incubación a 37°C
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Transformación
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Selección
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Selección
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Replicación del Plásmido
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Plásmido Replicado
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Replicación del Cromosoma Bacteriana
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Mitosis de la Célula Bacteriana
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Colonias Bacterianas
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Clonación
Colonias Celulares
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Librería Genómica
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Librería Genómica
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Librería Genómica en Plásmidos
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Corte y Ligación